Санпин для детей сирот: Библиотека государственных стандартов

Разное

Содержание

С 1 сентября 2015 года вводятся в действие новые СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей».

07 Сентября 2021 09:27

22 Июля 2021 13:49

09 Июля 2021 08:35

31 Марта 2021 10:43

09 Марта 2021 08:49

26 Января 2021 11:16

13 Января 2021 17:00

Прокуратура Ярославской области провела конкурс социальной антикоррупционной рекламы «Молодежь против коррупции», на который межрайонной прокуратурой направлено 20 работ учащихся общеобразовательных учреждений нашего городского округа.

20 Января 2021 13:22

12 Января 2021 09:21

Второго декабря в 14:00  в администрации города Переславля-Залесского (Народная пл., д.1, эт.3) состоится прием предпринимателей заместителем Переславского межрайонного прокурора Виктором Александровичем Годиным. Приём пройдёт в формате видео-конференц-связи.

01 Декабря 2020 09:11

24 Сентября 2020 09:41

24 Сентября 2020 09:39

24 Сентября 2020 09:37

24 Сентября 2020 09:34

24 Сентября 2020 09:31

24 Сентября 2020 09:27

24 Сентября 2020 09:21

24 Сентября 2020 09:18

24 Сентября 2020 09:15

24 Сентября 2020 09:14

Указом Президента РФ от 28 августа 2020 года № 531 «О внесении изменений в Указ Президента Российской Федерации от 25 июля 2006 года № 765 «О единовременном поощрении лиц, проходящих (проходивших) федеральную государственную службу» установлено, в частности, что в случае гибели (смерти) лица, проходящего (проходившего) федеральную государственную службу, поощренного Президентом РФ, Правительством РФ или награжденного государственной наградой РФ, а также в случае награждения лица, проходившего федеральную государственную службу, государственной наградой РФ посмертно выплата единовременного поощрения производится членам семей этих лиц в соответствии с федеральными законами.

23 Сентября 2020 11:57

Просим жителей городского округа оказать содействие в получении информации об Анатолии Петровиче Уткине, работавшем прокурором в г. Переславле с 1935 по 1951 год. 

13 Августа 2020 10:40

27 ноября 2019 года начнет работу открытый межрегиональный форум, организованный Волжской межрегиональной природоохранной прокуратурой и прокуратурой Костромской области

26 Ноября 2019 08:50

В связи с открытием на территории Ярославской области с 20 апреля 2019 г. навигации Ярославская межрайонная природоохранная прокуратура информирует об особенностях передвижения маломерных судов на водных объектах, имеющих особый природоохранный статус.

23 Апреля 2019 14:03

В пятницу, 22 марта, межрайонный прокурор Андрей Фольц провёл встречу с представителями переславских средств массовой информации, на которой рассказал об итогах работы прокуратуры за первые два месяца текущего года.

25 Марта 2019 13:01

В понедельник, 18 февраля, ярославский межрайонный природоохранный прокурор Дмитрий Сергеевич Павлов проведёт выездной личный приём граждан.

15 Февраля 2019 14:53

Сегодня, 10 декабря, в конференц-зале администрации города состоялось заседание круглого стола, организованное прокуратурой.

10 Декабря 2018 20:19

Переславская межрайонная прокуратура совместно с администрацией городского округа города Переславля-Залесского в июле текущего года провела проверку исполнения законодательства о теплоснабжении и подготовки к отопительному периоду.

25 Июля 2018 15:19

В большом конференц-зале администрации города по инициативе Переславской межрайонной прокуратуры совместно с администрацией городского округа состоялось совещание с предпринимателями и потенциальными инвесторами.

06 Июля 2018 23:25

В июне Переславской межрайонной прокуратурой проведена проверка по сообщению ИП Алябьева А.Н., осуществляющего сбор и вывоз твёрдых коммунальных отходов с территории городского округа на полигон ТКО Ростовского муниципального района, по факту расторжении договоров на оказание услуг по вывозу твёрдых коммунальных отходов с управляющими компаниями городского округа Переславль-Залесский.

05 Июля 2018 09:37

Сегодня, 14 июня, в переславском суде прошло заседание, на котором был частично удовлетворён иск межрайонного прокурора.

14 Июня 2018 21:12

Межрайонной прокуратурой проведена проверка по поступившим обращениям о нарушении ООО «УК Ремкос» жилищного законодательства при расчетах с поставщиком ресурсов.

25 Мая 2018 18:30

Межрайонная прокуратура провела проверку по факту прекращения поставки газа на котельную в микрорайоне Чкаловский, эксплуатируемую ООО «МЭС». В ходе проверки установлено следующее.

23 Мая 2018 20:51

В связи с многочисленными обращениями и жалобами граждан по вопросам правомерности сноса зеленых насаждений в населенных пунктах Ярославская межрайонная природоохранная прокуратура разъясняет.

13 Февраля 2018 16:05

9 августа Андрей Юрьевич Фольц, прокурор Переславля-Залесского провёл круглый стол с представителями местных СМИ. Главными темами на повестке дня стали результаты работы прокуратуры за первое полугодие 2017 года.

09 Августа 2017 19:10

Муниципальное казенное учреждение “Социальный приют для детей и подростков”

2.4.3259-15 от 09.02.2015

↓ Приложения

Об утверждении СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей»

 

ГЛАВНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ САНИТАРНЫЙ ВРАЧ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

 

ПОСТАНОВЛЕНИЕ

от 9 февраля 2015 года N 8

      

Об утверждении СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей»

 

В соответствии с Федеральным законом от 30.03.99 N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 14, ст.1650; 2002, N 1 (ч.1), ст.2; 2003, N 2, ст.167; N 27 (ч.1), ст.2700; 2004, N 35, ст.3607; 2005, N 19, ст.1752; 2006, N 1, ст.10; N 52 (ч.1) ст.5498; 2007 N 1 (ч.1) ст.21; ст.29; N 27, ст.3213; N 46, ст.5554; N 49, ст.6070; 2008, N 24, ст.2801; N 29 (ч.1), ст.3418; N 30 (ч.2), ст.3616; N 44, ст.4984; N 52 (ч.1), ст.6223; 2009, N 1, ст.17; 2010, N 40, ст.4969; 2011, N 1, ст.6; N 30 (ч.1), ст.4563, ст.4590, ст.4591, ст.4596; N 50, ст.7359; 2012, N 24, ст.3069; N 26, ст.3446; 2013, N 27, ст.3477; N 30 (ч.1), ст.4079; N 48, ст.6165; 2014, N 26 (ч.1), ст.3366, ст.3377; 2015, N 1 (часть I), ст.11), Федеральным законом от 24.06.99 N 120-ФЗ «Об основах системы профилактики безнадзорности и правонарушений несовершеннолетних» (Собрание законодательства Российской Федерации, 1999, N 26, ст.3177; 2001, N 3, ст.216; 2003, N 28, ст.2880; 2004, N 27, ст.2711; N 35, ст.3607; N 49, ст.4849; 2005, N 1 (часть 1), ст.25; N 17, ст.1485; 2006, N 2, ст.174; 2007, N 27, ст.3215; N 30, ст.3808; N 31, ст.4011; N 49, ст.6070; 2008, N 30 (ч.2), ст.3616; 2009, N 42, ст.4861; 2011, N 1, ст.39; N 7, ст.901; N 49 (ч.5), ст.7056; 2012, N 53 (ч.1), ст.7622; N 53 (ч.1), ст.7644; 2013, N 19, ст.2331; N 23, ст.2878, N 27, ст.3477; N 48, ст.6165; N 52 (часть I), ст.7000; 2014, N 14, ст.1554; N 23, ст.2930; N 42, ст.5609; 2015, N 1 (часть I), ст.42), постановлением Правительства Российской Федерации от 24.05.2014 «О деятельности организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей, и об устройстве в них детей, оставшихся без попечения родителей» (Собрание законодательства Российской Федерации, 2014, N 22, ст.2887) и постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.2000 N 554 «Об утверждении Положения о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственном санитарно-эпидемиологическом нормировании» (Собрание законодательства Российской Федерации, 2000, N 31, ст.3295; 2004, N 8, ст.663; 2004, N 47, ст.4666; 2005, N 39, ст.3953) 

Полный документ в приложении…

СанПин 2.4.3259-15

Дата создания материала: 22-11-2015. История изменений

НОРМЫ ПИТАНИЯ ВОСПИТАННИКОВ ДЕТСКИХ ДОМОВ И ШКОЛ-ИНТЕРНАТОВ ДЛЯ ДЕТЕЙ-СИРОТ И ДЕТЕЙ, ОСТАВШИХСЯ БЕЗ ПОПЕЧЕНИЯ РОДИТЕЛЕЙ (НА ОДНОГО ЧЕЛОВЕКА В ГРАММАХ В ДЕНЬ) ПОСТАНОВЛЕНИЕ Главного государственного санитарного врача РФ от 11.03.2003 N 13 (ред. от 28.04.2007) «О ВВЕДЕНИИ В ДЕЙСТВИЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИХ ПРАВИЛ И НОРМАТИВОВ САНПИН 2.4.1201-03» (вместе с «ГИГИЕНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ К УСТРОЙСТВУ, СОДЕРЖАНИЮ, ОБОРУДОВАНИЮ И РЕЖИМУ РАБОТЫ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ УЧРЕЖДЕНИЙ ДЛЯ НЕСОВЕРШЕННОЛЕТНИХ, НУЖДАЮЩИХСЯ В СОЦИАЛЬНОЙ РЕАБИЛИТАЦИИ. САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРАВИЛА И НОРМАТИВЫ. СанПиН 2.4.1201-03»)

действует Редакция от 28.04.2007 Подробная информация
Наименование документПОСТАНОВЛЕНИЕ Главного государственного санитарного врача РФ от 11.03.2003 N 13 (ред. от 28.04.2007) «О ВВЕДЕНИИ В ДЕЙСТВИЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИХ ПРАВИЛ И НОРМАТИВОВ САНПИН 2.4.1201-03» (вместе с «ГИГИЕНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ К УСТРОЙСТВУ, СОДЕРЖАНИЮ, ОБОРУДОВАНИЮ И РЕЖИМУ РАБОТЫ СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫХ УЧРЕЖДЕНИЙ ДЛЯ НЕСОВЕРШЕННОЛЕТНИХ, НУЖДАЮЩИХСЯ В СОЦИАЛЬНОЙ РЕАБИЛИТАЦИИ. САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРАВИЛА И НОРМАТИВЫ. СанПиН 2.4.1201-03»)
Вид документапостановление, перечень, правила
Принявший органглавный государственный санитарный врач рф, минздрав рф
Номер документа13
Дата принятия01.01.1970
Дата редакции28.04.2007
Номер регистрации в Минюсте4304
Дата регистрации в Минюсте21.03.2003
Статусдействует
Публикация
  • «Российская газета», N 63, 03.04.2003
  • «Бюллетень нормативных актов федеральных органов исполнительной власти», N 22, 02.06.2003
НавигаторПримечания

НОРМЫ ПИТАНИЯ ВОСПИТАННИКОВ ДЕТСКИХ ДОМОВ И ШКОЛ-ИНТЕРНАТОВ ДЛЯ ДЕТЕЙ-СИРОТ И ДЕТЕЙ, ОСТАВШИХСЯ БЕЗ ПОПЕЧЕНИЯ РОДИТЕЛЕЙ (НА ОДНОГО ЧЕЛОВЕКА В ГРАММАХ В ДЕНЬ)

Возраст детей
от 3 до 6 лет Школьники
Хлеб ржаной 60 150
Хлеб пшеничный 100 200
Мука пшеничная 35 35
Мука картофельная 3 3
Крупа, бобовые, макаронные изделия 45 75
Картофель 300 400
Овощи, зелень 400 470
Фрукты свежие 260 250
Соки 200 200
Фрукты сухие 10 15
Сахар 60 75
Кондитерские изделия 25 25
Кофе (кофейный напиток) 2 4
Какао 1 2
Чай 0,2 0,2
Мясо 95 105
Птица 25 70
Рыба (сельдь) 60 110
Колбасные изделия 10 25
Молоко, кисломолочные продукты 550 550
Творог 50 70
Сметана 10 10
Сыр 10 12
Масло сливочное 35 50
Масло растительное 12 18
Яйцо (штук) 1 1
Специи 2 2
Соль 8 8
Дрожжи 1 1
Продукты специального назначения
(ЭНПИТ белковый и ЭНПИТ противоанемический)

Примечания. 1. В летний оздоровительный период (до 90 дней), в воскресенье, праздничные и каникулярные дни сложившаяся норма расходов на питание увеличивается на 10% в день на каждого человека.

2. Разрешается производить замену отдельных продуктов питания в соответствии с таблицей замены продуктов, по основным пищевым веществам.

3. Разрешается выдавать продукты питания или денежную компенсацию на время пребывания детей в семьях родственников или других граждан во время каникул, в праздничные и выходные дни.

Приложение 7
к СанПиН 2.4.1201-03

Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 09.02.2015 № 8 утверждены СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот

30.06.2015 17:51

Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 09.02.2015 № 8 утверждены СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций

 для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей»,

которые вступят в силу 1 сентября 2015 года. 

Данные правила направлены на охрану здоровья детей при осуществлении деятельности по воспитанию, обучению, физическому развитию, оздоровлению, абилитации и реабилитации, а также уходу и присмотру в организациях для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей, а также в организациях, обеспечивающих временное проживание и социальную реабилитацию несовершеннолетних, оказавшихся в трудной жизненной ситуации и нуждающихся в социальной помощи государства.

СанПиН 2.4.3259-15 не распространяются на семьи, воспитывающие детей в различных формах семейного устройства (опека, попечительство, семейные детские дома, патронатные семьи).

Указанные санитарные правила устанавливают санитарно-эпидемиологические требования к:

— условиям размещения организаций для детей-сирот;

— условиям пребывания и проживания детей в организации для детей-сирот;

— оборудованию и содержанию территории организации для детей-сирот;

— зданию и оборудованию помещений организации для детей-сирот;

— воздушно-тепловому режиму;

— естественному и искусственному освещению;

— водоснабжению и канализации;

— режиму дня и организации учебно-воспитательного процесса, процессу социальной адаптации;

— организации питания;

— медицинскому обеспечению;

— физическому воспитанию;

— санитарному состоянию и содержанию помещений и территории организации для детей-сирот;

— соблюдению личной гигиены персоналом организации для детей-сирот.

С момента вступления указанных правил в силу 01.09.2015 утратившими силу признаются СанПиН 2.4.1201-03 «Гигиенические требования к устройству, содержанию, оборудованию и режиму работы специализированных учреждений для несовершеннолетних, нуждающихся в социальной реабилитации», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 11.03.2003, № 13, с изменениями от 28.04.2007 и от 04.03.2011.

 

Заместитель Солнечногорского

городского прокурора                                                                            А.Н.Чечин


Братский детский дом Росток — Детский дом «Росток»

№  п/п

Мероприятия по устранению выявленных нарушений

Срок   исполнения

Ответственные исполнители

Подпись ответственного исполнителя

1.       

Обеспечить полотенцами  в группе девочек (2 этажа 3 корпуса),   восстановить работу   2 унитазов отделении 2 корпуса 2 этажа,  в  отделении милосердия  для тяжелых больных установить   раковину  с локтевым смесителем.( , 4 корпус 1 этаж), согласно  п.    4.14. СанПиН 2.4.3259-15

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по МЧ Михайлова Л.В.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

2.       

Обеспечить индивидуальное хранение одежды в   раздевальне  в 3 корпусе (девочки) согласно п. 4.15  СанПиН 2.4.3259-15

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

3.       

 Заменить  линолеум в помещении спальни №6 корпуса№2 , согласно 8.3. СанПиН 2.4.3259-15.

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

4.       

Провести промывку систем водопользования, предоставить протокол лабораторных испытаний   согласно п. 3.5 таблица 2:  по показателю Мутность  (по коалину) п. 3.4.3 табл. №2 СанПиН 2.1.4.1074-01 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества. Гигиенические требования к обеспечению  безопасности систем горячего водоснабжения» СанПиН 2.1.4.2496-09 изменения к СанПиН 2.1.4.1074-01. 

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

5.       

Для контроля за температурным режимом  установить термометры в каждой комнате, согласно п.10.4 СанПиН 2.4.3259-15.

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.Старшая медицинская сестра Ремпенинг Н.А.

 

6.       

 Провести уборку помещений с применением  моющих средств, обеспечить сквозное проветривание помещений игровой комнате №2 в спальне №11 , в процедурном кабинете п. 10.7 СанПиН 2.4.3259-15, ГН 2.1.6.1338-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) загрязняющих веществ в атмосферном воздухе населенных мест».

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Зам. по медицинской части Л.В. Михайлова

 

Старшая медицинская сестра Ремпенинг Н.А.

 

7.       

Выполнить остекление окон из цельногостеклополотна,  согласно  п.11.3 СанПиН 2.4.3259-15

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

8.       

Установить дополнительные светильники для обеспечения уровня искусственной освещенности  в игровой комнате №2 ,В процедурном кабинете  4 корпуса  в игровой 2 корпуса группы №16   ,в игровой  17 группы, в 3 корпусе 2 этажа  в игровой комнате 23 группы согласно  требований п. 3.3.1 таблицы № 2 СанПиН 2.2.1/2.1.1.1278-03 «Гигиенические требования к естественному, искусственному и совмещенному  освещению жилых и общественных зданий», п. 11.4СанПиН 2.4.3259-15, приложению №5  СаНПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические  требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность».

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

9.       

Осветительные приборы (люминесцентные)  в помещениях  2 спален 2 этажа (мальчики) и помещения пищеблока (овощной цех)  обеспечить  защитной светорассеивающей арматуры для обеспечения равномерного освещения, согласно п. 11.8 СанПиН 2.4.3259-15

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

10.   

 Приобрести мебель, выполненную по ГОСТу, согласно  п. 6.1СанПиН 2.4.1.3049-13 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы дошкольных образовательных организаций»

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по РВР Рыкова О.А. (составление заявки)

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

11.   

Обеспечить выполнение фактического рациона питания утвержденному меню, исключить в меню повторение соусов ежедневно, напитков (чай с сахаром) согласно   6.9. СанПиН 2.4.3259-15

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Мед.сестра диетическая 

Долинина В.Н.

 

 

12.   

Обеспечить выполнение норм питания, утвержденным приказом министерства социального развития, опеки и попечительства Иркутской области от 28 ноября 2014 года N 184-мпр, установлено, согласно   п. 6.9 СанПиН 2.4.5.2409-08 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации питания обучающихся в общеобразовательных учреждениях, учреждениях начального и среднего профессионального образования»

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Мед.сестра диетическая 

Долинина В.Н.

 

Заместитель по МЧ

Михайлова Л.В.

 

 

13.   

Обеспечить объемно-планировочные и конструкторские решения помещений предусматривающих последовательность (поточность) технологических процессов, исключающих встречные потоки сырья, сырых полуфабрикатов и готовой продукции, а именно исключить в цехе первичной обработки овощейизготовление холодных блюд, согласно требованиям п.6.1 СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей», п. 8.1 СанПиН 2.4.5.2409-08 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации питания обучающихся в общеобразовательных учреждениях, учреждениях начального и среднего профессионального образования», п. 5.1 СП 2.3.6.1079-01 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям общественного питания, изготовлению и обороту в них пищевых продуктов и продовольственного сырья».

 

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.Мед.сестра диетическая 

Долинина В.Н.

 

 

 

 

14.   

Обеспечить установку раковин для обработки рук в овощном, мясо-рыбном цехах, согласно требованийп.6.1 СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей», п.3.3 СанПиН 2.4.5.2409-08 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации питания обучающихся в общеобразовательных учреждениях, учреждениях начального и среднего профессионального образования».

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

15.   

Предоставить документ о проведении ежегодного перед началом нового учебного 2016 года технического контроля о соответствии технологического и холодильного оборудования паспортным характеристикам,  согласно  требований п.6.1 СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей», п. 4.3 СанПиН 2.4.5.2409-08 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации питания обучающихся в общеобразовательных учреждениях, учреждениях начального и среднего профессионального образования».

 

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.Мед.сестра диетическая 

Долинина В.Н.

 

 

 

16.   

Обеспечить целостность сетки на окнах в помещениях пищеблока согласно требованиям п.6.1 СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей», п. 5. 23 СанПиН 2.4.5.2409-08 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации питания обучающихся в общеобразовательных учреждениях, учреждениях начального и среднего профессионального образования».

 

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

17.   

В  моечных отделениях в инструкциях о правилах мытья посуды и инвентаря указать концентрации и объемы применяемых моющих средств согласно требований п.6.14 СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей», п. 5.4 СанПиН 2.4.5.2409-08 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации питания обучающихся в общеобразовательных учреждениях, учреждениях начального и среднего профессионального образования».

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель по МЧ

Михайлова Л.В.

 

Старшая медицинская сестра Ремпенинг Н.А.

 

18.   

   Обеспечить вложение вит. «С» согласно норм, таблицы №1 приложения №4 СанПиН 2.4.5.2409-08 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации питания обучающихся в общеобразовательных учреждениях, учреждениях начального и среднего профессионального образования»

 

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель по МЧ

Михайлова Л.В.

 

Мед.сестра диетическая 

Долинина В.Н.

 

 

 

19.   

В соответствии с ч.I п.5.6 СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность», п.4.16 СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей» обеспечить локтевыми кранами все процедурные кабинеты и прививочный кабинет.  

 

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель директора по ХЧ Соловьева О.В.

 

20.   

В соответствии с п.4.17.2 СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей», с целью предупреждения распространения инфекционных заболеваний, детей, поступающих в учреждение, помещать в приемно-карантинное отделения на период установления у них наличия или отсутствия инфекционных заболеваний.

 

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель по МЧ

Михайлова Л.В.

 

 

21.   

В соответствии с п.15.1СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей» пройти санитарно-гигиеническую аттестацию всем сотрудникам учреждения, не имеющих её.

 

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель по МЧ

Михайлова Л.В.

(составление заявки).

 

Главный бухгалтер Свиридова О.Н.

 

Начальник КПС

Тимофеева О.Н. (заключение  договора).

 

 

22.   

В соответствии с п. ст. 35 Федерального закона № 52-ФЗ от 30.03.1999 г. «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения»;  ст. 11 п.4; ст 9 Федерального закона №157 ФЗ от 17.09.1998г. «Об иммунопрофилактике инфекционных болезней»; п.12 Постановления правительства РФ от15 июля 1999 г. № 825 «Об утверждении перечня работ, выполнение которых связано с высоким риском заболевания инфекционными болезнями и требует обязательного проведения профилактических прививок»; Приказа МЗ РФ от 21.03.2014 г. № 125н «Об утверждении Национального календаря профилактических прививок и Календаря профилактических прививок по эпидемическим показаниям», п.15.1 СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей» всем сотрудникам учреждения привиться против гриппа, сотрудникам до 55 лет- против кори, сотрудникам не имеющим  ревакцинацию против дифтерии обеспечить вакцинацию.

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель по МЧ

Михайлова Л.В.

 

Старшая медицинская сестра Ремпенинг Н.А.

 

23.   

В соответствии сч.II п.2.2 СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность» переходники для забора крови в вакутайнеры использовать только однократно.

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель по МЧ

Михайлова Л.В.

 

 

24.   

В соответствиис п.5.6 ч.1 СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям, осуществляющим медицинскую деятельность», п.4.16 СанПиН 2.4.3259-15 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей-сирот и детей, оставшихся без попечения родителей» обеспечить все кожные антисептики для обработки рук дозаторами.

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Заместитель по МЧ

Михайлова Л.В.

 

Старшая медицинская сестра Ремпенинг Н.А.

 

 

 

25.   

В соответствии с п. 6.11. СП 3.3.2.3332-16 – «Условия транспортирования и хранения  иммунобиологических лекарственных препаратов» в  системе «холодовой цепи» при хранении МИБП в холодильнике использовать термоиндикаторы.

 

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Зам. по медицинской части Л.В. Михайлова.

 

Старшая медицинская сестра Ремпенинг Н.А.

 

26.   

В соответствии с п.2.3 СП 3.3.2342-08 – «Обеспечение безопасности иммунизации» в медицинских картах воспитанников, от которых отказались родители, иметь согласие опекуна  на проведение прививок.

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Зам. по медицинской части Л.В. Михайлова

 

27.   

В соответствии с п.5.5 СП 3.1.5.2826-10  «Профилактика ВИЧ-инфекции» освидетельствование на ВИЧ-инфекцию у детей с  диагнозом ВИЧ-инфекция  проводить с информированного согласия законного представителя.

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Зам. по медицинской части Л.В. Михайлова

 

28.   

В соответствии с п.5.2 СП 3.1.5.2826-10  «Профилактика ВИЧ-инфекции» проводить обязательное освидетельствование на ВИЧ-инфекцию персонала учреждения (медицинские сестры, санитарки), занятого непосредственным обследованием, диагностикой,  обслуживанием детей, инфицированных вирусом иммунодефицита человека, имеющих с ними непосредственный контакт.

17.11.2016г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Зам. по медицинской части Л.В. Михайлова

 

29.   

Обеспечить приемку молока и молочной продукции при наличии обязательной информации, установленной законодательством РФ.

 

17.11.2016 г.

Отчет об исполнении

Соловьевой О.В.,

Тимофеевой О.Н.

Зав.складом

Чупина  И.А.

 

Страница 13: ДСаНПіН 2.4.990-00. СП 2.4.990-00 ГИГИЕНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ К УСТРОЙСТВУ, СОДЕРЖАНИЮ, ОРГАНИЗАЦИИ РЕЖИМА РАБОТЫ В ДЕТСКИХ ДОМАХ И ШКОЛАХ


16. «Санитарные правила устройства и содержания детских дошкольных учреждений», утв. Минздравом СССР 20.03.85 N 3231-85.

17. СанПиН 2.1.4.559-96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества», утв. Минздравом РФ.

18. СанПиН 42-123-4117-86 «Условия, сроки хранения особо скоропортящихся продуктов», утв. Минздравом СССР.

19. СП 2.3.6.959-00 «Санитарно — эпидемиологические требования к организациям общественного питания, изготовлению и оборотоспособности в них продовольственного сырья и пищевых продуктов», утв. Минздравом РФ.

20. Санитарные правила устройства и содержания мест занятий по физической культуре и спорту. М., 1978.

21. СанПиН 4630-88 «Санитарные правила и нормы охраны поверхностных вод от загрязнения», утв. Минздравом СССР.

22. СанПиН 2.1.2.729-99 «Полимерные и полимерсодержащие строительные материалы, изделия и конструкции. Гигиенические требования безопасности», утв. Минздравом РФ.

23. СанПиН N 42-125-4216-86 «Санитарно — гигиенические нормы и правила по организации обучения детей шестилетнего возраста», утв. Минздравом СССР.

24. СанПиН 2.2.2.542-96 «Гигиенические требования к видеодисплейным терминалам, персональным электронно — вычислительным машинам и организации работы», утв. Минздравом РФ.

25. СанПиН 2.4.6.664-97 «Гигиенические критерии допустимых условий и видов работ для профессионального обучения и труда подростков», утв. Минздравом РФ.

26. СанПиН 3.5.2.541-96 «Требования к организации и проведению мероприятий по уничтожению бытовых насекомых и комаров подвальных помещений».

27. СанПиН 3.2.569-96 «Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации».

28. Нормы питания воспитанников детских домов, детских домов семейного типа, детей — сирот и детей, оставшихся без попечения родителей, находящихся в школах — интернатах всех типов, утв. Постановлением Правительства РФ 20.06.92 N 409 (письмо Минобразования РФ от 22.09.93 N 164-М).

29. Нормы физиологических потребностей в пищевых веществах и энергии для детей и подростков (в день), утв. Главным государственным врачом Минздрава РФ 29.05.91 N 5786-91.

30. СНиП 2.04.03-85 «Канализация. Наружные сети и сооружения».

31. СНиП 3.05.04-85 «Наружные сети и сооружения водоснабжения и канализации».

32. СНиП 2.04.05-86 «Отопление, вентиляция и кондиционирование воздуха».

33. СНиП 2.07.01-89 «Градостроительство, планировка и застройка городских и сельских поселений».

34. СНиП 0.2.08-89 «Общественные здания и сооружения».

35. СНиП 23-05-95 «Естественное и искусственное освещение».

36. Перечень документации детского дошкольного учреждения. Приказ Госкомитета СССР по народному образованию и Минздрава СССР от 04.10.88 N 369/745.

37. Перечень новых отечественных дезинфекционных средств и зарубежных препаратов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации, утв. Госкомсанэпиднадзором РФ 17.02.92 N 0001-92; 09.07.93 N 0012-93; 20.12.93 N 0015-93; 11.07.94 N 0019-94.

38. Методические рекомендации «Методические подходы к оценке влияния физического воспитания на организм школьников», утв. Минздравом СССР (1990).

39. Методические рекомендации «Организация лечебно — профилактической помощи в школах — интернатах и детских домах», утв. Минздравом СССР 06.04.88 N 11-10/6-29.

40. Методические рекомендации «Проведение физкультурных занятий на открытом воздухе с детьми 5 — 7 лет в дошкольных учреждениях», утв. Минздравом СССР 29.10.84 N 11-14/26-6.

41. Методические рекомендации «Эпидемиология, диагностика, клиника, лечение и профилактика чесотки», утв. Минздравом СССР 29.08.84 N 06-14/15.

42. Методические рекомендации «Медико — педагогический контроль за физическим воспитанием детей дошкольного возраста», утв. Минздравом СССР 29.12.82 N 08-14/12.

43. Методические рекомендации «Использование физической культуры и спорта для подростков в оздоровительных целях», утв. Минздравом СССР 09.12.86 N 10-11/127.

44. Медицинские рекомендации «Основные принципы организации питания детей раннего и дошкольного возраста». Бюллетень Госкомитета СССР по народному образованию, 1990, N 8 — 10; 1991, N 1 — 12.

45. Рекомендации по проектированию детских домов и домов ребенка. М., 1988.

46. Рекомендации по проектированию зданий школ — интернатов для детей — сирот и детей, оставшихся без попечения родителей. М., 1989.

47. Комплексная программа физического воспитания учащихся I — XI классов общеобразовательной школы. М., 1992.

48. Информационное письмо Министерства здравоохранения РФ «Профилактическая витаминизация детей дошкольных, школьных, лечебно — профилактических учреждений и в домашних условиях», 1994.

49. Положение о психологической службе в системе народного образования Госкомитета СССР по народному образованию, 19.09.90.

50. Унифицированная методика изучения физиолого — гигиенических аспектов профессиональной ориентации и профессионального отбора молодежи. М., 1985.

51. Учебно — методический кабинет профессиональной ориентации. М.: Просвещение, 1986.

Изменены требования к содержанию и организации режима работы организаций для детей – сирот и детей, оставшихся без попечения родителей

07.05.2015г.

Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 09.02.2015 № 8 утверждены новые санитарно – эпидемиологические правила и нормативы  СанПиН 2.4.3259-15 к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей – сирот и детей, оставшихся без попечения родителей.

Правила вводятся в действие с 1 сентября 2015 года и устанавливают требования, в частности, к условиям размещения организаций для детей-сирот, условиям пребывания и проживания в них детей-сирот, воздушно-тепловому режиму, естественному и искусственному освещению, водоснабжению и канализации, режиму дня, организации учебно-воспитательного процесса, процессу адаптации, организации питания, медицинскому обеспечению, физическому воспитанию, санитарному состоянию и содержанию помещений и территории организации для детей-сирот.

Новые санитарные правила являются обязательными для исполнения всеми гражданами, юридическими лицами и индивидуальными предпринимателями, деятельность которых связана с проектированием, строительством, реконструкцией, капитальным ремонтом и эксплуатацией объектов для детей-сирот: образовательных организаций, медицинских организаций и организаций, оказывающих социальные услуги, в которые помещаются под надзор дети-сироты и дети, оставшиеся без попечения родителей.

Правила не распространяются на семьи, воспитывающие детей в различных формах семейного устройства (опека, попечительство, семейные детские дома, патронатные семьи).

Ранее построенные здания организаций для детей-сирот эксплуатируются в соответствии с проектами, по которым они были построены.

С введением в действие новых санитарно – эпидемиологических требований к устройству, содержанию и организации режима работы организаций для детей – сирот и детей, оставшихся без попечения родителей, утратившими силу признаются: СанПиН 2.4.1201-03, утв. постановлением Главного государственного санитарного врача России от 11.03.2003 N 13, СанПиН 2.4.2200-07, утв. постановлением Главного государственного санитарного врача России от 28.04.2007 N 23, СанПиН 2.4.2840-11, утв. постановлением Главного государственного санитарного врача России от 04.03.2011 N 16.



Санпин по питанию для школ-интернатов 15. II. Требования к размещению в организации для детей-сирот. Размещение и территория

Он потратил на это много времени и, покинув Италию в зрелом возрасте, взял с собой во Францию, среди некоторых других избранных картин. Да Винчи испытывал особую привязанность к этому портрету и много думал в процессе его создания.

Масляная живопись — самая популярная и любимая техника многих всемирно известных художников, как прошлых веков, так и нашего времени. Благодаря пластичной структуре масляные краски долго сохнут, что дает возможность долго корректировать рисунок.

Вы решили посетить Украину? В этом нет ничего странного, ведь здесь можно найти все для отличного отдыха. Великолепные горнолыжные курорты и завораживающие пейзажи Карпат, уникальный город Одесса, который отличается неповторимым менталитетом и прекрасными пляжами,

Что такое художественная литература? В чем его особенности, почему литература считается искусством? Огромное количество книг в домашней библиотеке большинства людей говорит о том, что чтение и восприятие играют важную роль в нашей жизни.Предлагаем знакомый

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

«Подавляющее большинство теперь понимает, что такое Pro Bono и почему оно необходимо» — Форум гражданского общества Россия-ЕС

Смотрите интервью на YouTube

Дмитрий, спасибо за согласие дать интервью для Форума гражданского общества Россия-ЕС.Вы представляете ассоциацию PILnet. Расскажите, пожалуйста, подробнее о его работе?
Конечно. Мы — относительно небольшая международная некоммерческая организация, которая была создана более 20 лет назад — первоначально как проект в Колумбийской юридической школе в Нью-Йорке, а теперь действует как независимая ассоциация. На данный момент у нас есть офисы в Нью-Йорке, Будапеште, Москве, Гонконге и Пекине. PIL расшифровывается как «Закон об общественных интересах», то есть работа юристов и юридических институтов на благо общества.Наша организация разными способами помогает юристам и юридическим учреждениям в этом. Мы исторически много занимались вопросами субсидированной юридической помощи и развития этого института в разных странах. Другими словами, это юридическая помощь, которую государство гарантирует малообеспеченным и другим социально незащищенным слоям населения. Мы занимались различными вопросами юридического образования, помогая сделать его более практичным и социально ориентированным. За последние 12 лет мы интенсивно развивали pro bono услуги , когда коммерческие юридические компании, часто практикующие юристы, консультанты и т. Д.оказание бесплатной юридической помощи на общественных началах.
Зарекомендовала себя эта практика в России?
Я считаю, что это доказало свою эффективность, хотя, конечно, я не могу сказать, что все юристы и консультанты в России оказывают pro bono юридическую помощь. Однако по сравнению с тем, что было десять лет назад, в 2007 году, когда мы только начали развивать эту тему в России, подавляющее большинство теперь понимает, что такое pro bono и зачем оно нужно.Не все это делают, но те, кто не понимает, почему предпочитают не вмешиваться. В общем, осведомленность по этой теме есть даже на уровне правоохранительных органов, в регионах и на уровне Федеральной палаты адвокатов. С 2007 года мы реализуем проект «Расчетная палата Pro Bono». По сути, это виртуальная биржа, где встречаются спрос и предложение — те, кому нужна помощь, и те, кто готов ее предоставить. Как показывает практика — и не только в России — этим двум группам порой довольно сложно найти друг друга.Я вижу в их сотрудничестве определенную ценность. Речь идет не только о том, чтобы коммерческие юристы помогали некоммерческим организациям, но и о том, чтобы они вовлекались в работу гражданского общества. Таким образом, ценен не только результат, но и сам процесс.
Расскажите о каком-нибудь интересном успешном кейсе?
Поделюсь довольно старым корпусом, который мне до сих пор нравится больше всего. Несколько лет назад в России был принят так называемый «Закон Димы Яковлева», запрещающий усыновление российских детей-сирот иностранцами.Вокруг этого в прессе разразился большой скандал. К сожалению, закон был принят, но одним из неожиданных положительных последствий этой истории стало то, что правительство России решило заняться решением вопросов, связанных с этой сферой. Это, во-первых, упрощение определенных процедур усыновления и опеки российскими приемными семьями. Во-вторых, государство решило посмотреть на все, что происходит в этой сфере. В какой-то момент дошли до СанПиНов — очень подробных документов, регламентирующих самые разные санитарно-гигиенические нормы, по сути, всю жизнь в учреждениях, где есть несовершеннолетние дети-сироты — от государственных до небольших семейных детских домов.На тот момент действующие СанПиНы были приняты еще в советское время. Несмотря на то, что в них были внесены поправки, это был довольно бесполезный документ. Минздрав решил внедрить новые СанПиНы и обратился к самой известной организации, занимающейся сиротами и социальным сиротством, — «Волонтерам в помощь детям-сиротам», или «Отказники.ру». В Минздраве объявили, что проведут круглый стол и хотели бы услышать предложения о том, что нужно включить в новые СанПиНы.Тогда в этой организации не было юристов, и, хотя сотрудники понимали, что нужно было сделать и что они хотели видеть в результате, они не знали, как выразить это на таком языке, который можно было бы скопировать напрямую. из своих предложений в законопроект. Они обратились ко мне, и одна юридическая фирма решила помочь. Мне сказали, что 80% того, что они разработали, вошло в принятый документ. Часто можно найти примеры ценной помощи, относящейся к повседневной работе НПО — трудовые отношения, налоги, контракты, регистрация, недвижимость, интеллектуальная собственность, личные данные и т. Д.Такие дела, безусловно, тоже ценны, но приведенный мною пример как раз иллюстрирует совместную работу НПО и профессиональных юристов, не имеющих отношения к этой сфере, по достижению важной социальной цели.
PILnet, по крайней мере, на данный момент, не является членом Форума гражданского общества Россия-ЕС. Тем не менее, мы говорим прямо перед началом Генеральной ассамблеи Форума в Софии. Вы пришли сюда как редактор журнала «Правовой диалог». Расскажите, пожалуйста, о вашей работе с этой программой.
Я редактирую журнал «Правовой диалог», хотя сейчас было бы не совсем правильно называть его журналом, потому что мы отошли от модели периодических изданий. Прямо сейчас, во время Генеральной Ассамблеи, мы перезапускаем журнал. Мы уже изменили дизайн и некоторые подходы. Например, теперь журнал будет более активно продвигаться через социальные сети. У журнала довольно интересная целевая аудитория, которую мы сами не смогли сразу определить: с одной стороны, понятно, что мы пишем не для профессиональных юристов, а для обычных людей; с другой стороны, мы пытаемся писать о том, что происходит в гражданском обществе и как некоммерческие организации и юристы в этой области реагируют на происходящее.Тем не менее, поскольку это онлайн-издание Форума, мы находим темы, которые были бы интересны всем: каждый из наших материалов публикуется одновременно на русском и английском языках. В настоящий момент мы сталкиваемся с тем, что неприятные темы для некоммерческого сектора становятся обычным явлением. Раньше можно было сказать, что у ЕС были свои проблемы, а у России — другие, но теперь проблемы становятся все более распространенными. Это касается не только сокращающегося пространства для гражданского общества, но и беженцев или людей, ищущих убежища от конфликтов или войн.Это во многом относится к свободе слова, в том числе к цифровым свободам.
Какие ваши любимые произведения, опубликованные в этом году?
Моя любимая работа вышла буквально вчера. Речь идет о четырех беженцах из разных стран. Из-за стечения случайных обстоятельств и действий властей Российской Федерации они оказались в ловушке в транзитной зоне аэропорта Шереметьево в Москве и пробыли там несколько месяцев.Один из них пробыл там 23 месяца! Кроме того, у этих людей не было доступа к душевым и другим удобствам, и их кормило Управление Верховного комиссара ООН по делам беженцев. Этим людям помогали российские юристы проекта «Право на убежище» Элеонора Давидян и Дарья Тренина. Сначала они попытались подать апелляцию на отрицательное решение о предоставлении убежища, а затем от имени беженцев подали апелляцию в Европейский суд по правам человека и выиграли дело. В результате было признано, в частности, что эти граждане были незаконно лишены свободы: с одной стороны, им не разрешили покинуть аэровокзал Шереметьево; с другой стороны, они не могли никуда вылететь.EctHR признал, что их права были нарушены, но Российская Федерация попросила суд пересмотреть дело в Большой палате. Слушания прошли недавно. Окончательного решения пока нет, но общественные слушания, в которых приняли участие юристы и представители российского государства, были достаточно интересными. В целом меня волнуют все темы, которыми мы занимаемся, но, прежде всего, свобода слова, особенно когда это касается истории и ее интерпретации. Опять же, какое-то время мне казалось, что эти проблемы более типичны для постсоветских стран, но теперь мы видим, что происходит в Польше, и я думаю, что такой поворот в Венгрии, скорее всего, не за горами. .
Каким Вы видите развитие Интернет-портала «Правовой диалог»?
У нас нет цели сделать «Правовой диалог» сверхинтерактивным. Кроме того, в редакции работают всего три человека, и для всех нас эта деятельность — лишь часть нашей работы. Однако нам удалось найти интересную аудиторию и свою нишу. Несмотря на то, что существует множество журналов и ресурсов в этой области, наша разница заключается в том, что мы стараемся не писать на официальном языке, а говорим о сути и практических вещах.В частности, мы публикуем много интервью с разными людьми, работающими в этой сфере, размещаем нетривиальную аналитику… Надеюсь, мы продолжим двигаться в данном направлении.
Что бы вы хотели пожелать участникам и сторонникам Форума?
Оптимизм. Сомневаюсь, что внезапный «рассвет» не за горами, скорее, появятся еще более консервативные инициативы, направленные против гражданского общества. Но хотелось бы, чтобы это не приводило к депрессии, а, наоборот, способствовало нашему творчеству.По крайней мере, это то, что я вижу сейчас.

Интервью было снято 15 мая 2018 года Секретариатом Форума гражданского общества Россия-ЕС на Генеральной Ассамблее в Софии, Болгария.

Повышенная экспрессия COUP-TFII во взрослых сердцах вызывает митохондриальную дисфункцию, приводящую к сердечной недостаточности

Повышенная экспрессия COUP-TFII в стрессовых сердцах

Когда мы проанализировали доступные наборы данных DCM человека, мы обнаружили значительное увеличение уровней экспрессии COUP-TFII (3.2 раза) в 13 тканях миокарда терминальной стадии неишемического DCM 16 (рис. 1а). Во второй группе пациентов в сердце 86 пациентов с идиопатическим DCM (GSE5406) ​​ 18 также наблюдалось повышение в среднем в 1,8 раза на уровне COUP-TFII . Результаты этих двух независимых групп пациентов предполагают связь между желудочковыми уровнями COUP-TFII и DCM у человека.

Рисунок 1. Экспрессия COUP-TFII в миокарде вызывает дилатационную кардиомиопатию (DCM).

( a ) COUP-TFII Уровни мРНК в сердечных тканях человека безотказного (NF, n = 6) и идиопатического DCM ( n = 13) из GSE1869. ( b ) Стратегия индуцируемой экспрессии COUP-TFII в миокарде взрослой мыши. ( c ) Общий вид сердца 16-го дня. Масштаб линейки под всеми изображениями монтировок — 1 мм. ( d , e ) Временная эхокардиограмма. День 0 указывает день перед индукцией экспрессии COUP-TFII.LVIDd, внутренний размер левого желудочка в диастолу. N = 5 (CTRL) и 7 (OE). ( f ) Выживаемость девяти мышей CTRL и восьми мышей OE с течением времени. ( г, ) Проявление сигнатуры гена COUP-TFII в образцах сердца человека (GSE1869). COUP-TFII Сигнатура гена курируется из всех нижестоящих мишеней COUP-TFII в сердцах мышей, которые идентифицированы с помощью анализа микрочипов. ( h ) Основные биологические процессы, измененные сверхэкспрессией COUP-TFII, идентифицированные анализом пути изобретательности.*** P <0,001 ( t -тест) между CTRL и OE. Планки погрешностей обозначают стандартную ошибку среднего (s.e.m.).

Мы обнаружили, что в ответ на стресс, вызванный трансаортальным сужением (ТАС), у мышей индуцировалась экспрессия желудочковой мРНК COUP-TFII (дополнительный рис. 1а). Этот результат согласуется с предыдущими данными о повышенных уровнях белка COUP-TFII в этой модели 17 . Точно так же желудочки трансгенных мышей calcineurin (CnTg), у которых развивается гипертрофия и последующий DCM, также демонстрируют повышенную экспрессию гена COUP-TFII (дополнительный рис.1б). Кроме того, уровни белка COUP-TFII были увеличены в изолированных кардиомиоцитах мышей CnTg (дополнительный рис. 1c). Вместе эти результаты указывают на сильную связь повышенной экспрессии COUP-TFII с кардиомиопатией у мышей и людей.

COUP-TFII индуцирует DCM

Возможная связь с кардиомиопатией побудила нас исследовать, может ли повышенная экспрессия COUP-TFII у мышей влиять на развитие сократительной дисфункции. С этой целью мы скрестили ранее установленный аллель сверхэкспрессии COUP-TFII CAG-S-COUP-TFII с cre-драйвером Myh6-MerCreMer ( Myh6-MCM ) с линией 14,19 для сверхэкспрессии COUP. -TFII, особенно в кардиомиоцитах после завершения развития сердца, при введении тамоксифена (рис.1б). Функционально сверхэкспрессия COUP-TFII (OE, Myh6-MCM; CAG-S-COUP-TFII ) у 2-месячных мышей приводила к значительному увеличению сердца по сравнению с мышами CTRL ( Myh6-MCM ) ( Фиг.1c) через 16 дней после индукции трансгена COUP-TFII (D16). Эхокардиография также показала, что мыши OE демонстрируют характеристики DCM, включая увеличенный внутренний размер левого желудочка (рис. 1d и дополнительный рис. 1e), уменьшение фракционного укорочения (рис. 1e) и уменьшение относительной толщины стенок (RWT; дополнительный рис.1е, правая панель). Прогрессивное нарушение сердечной функции привело к увеличению смертности мышей OE после активации экспрессии COUP-TFII (рис. 1f). Примечательно, что сердца OE на 16 день также имели 5,3-кратное увеличение уровней мРНК COUP-TFII по сравнению с CTRL (дополнительный рис. 1g). К этому времени в OE-сердцах наблюдалась серьезная дилатация и сократительная дисфункция, аналогичная терминальной стадии DCM у пациентов-людей. Уровни сверхэкспрессии мРНК COUP-TFII между образцами человека (3,2X, рис.1a) и OE сердца (5.3X, Supplementary Fig. 1g) не слишком далеко друг от друга, предполагая, что модель мыши актуальна. Наиболее важно то, что активированный трансген COUP-TFII увеличивает уровни белка COUP-TFII в кардиомиоцитах (дополнительный рисунок 1d) в той же степени, что и CnTg (дополнительный рисунок 1c), что дает нам уверенность в использовании этой модели для анализа роль COUP-TFII в кардиомиопатии. Таким образом, наша модель на животных показывает, что повышенная экспрессия COUP-TFII в сердце достаточна для индукции DCM с высоким уровнем смертности.

На молекулярном уровне в желудочках OE наблюдались пониженная αMHC , повышенная βMHC и пониженная SERCA2a экспрессия гена (дополнительный рис. 1h), аналогично молекулярным изменениям, наблюдаемым у пациентов с DCM человека и других моделей мышей. Чтобы получить представление об эффекте COUP-TFII на сердце, мы определили молекулярный профиль сердца OE на 16 день с помощью анализа микроматриц с использованием желудочковых компартментов. Беспристрастный анализ генной онтологии профиля OE показал значительное обогащение категории «DCM» в Киотской энциклопедии генов и геномов ( P = 2.2 × 10 −4 ), дополнительно подтверждая ключевую роль COUP-TFII в DCM. Более того, используя профиль OE в качестве транскриптомной сигнатуры активности COUP-TFII, мы обнаружили, что сигнатура COUP-TFII значительно выше у пациентов с DCM, чем у группы CTRL (рис. 1g). Это открытие предполагает более сильное присутствие активности COUP-TFII в сердцах DCM в результате более высоких уровней экспрессии COUP-TFII (рис. 1a). В совокупности наши данные показывают, что передача сигналов COUP-TFII также существует в человеческих сердцах и положительно коррелирует с патологическим профилем DCM.

Механически анализ пути изобретательности показывает «митохондриальную дисфункцию», «β-окисление жирных кислот» и «гликолиз» как наиболее важные пути, на которые влияет избыточная экспрессия COUP-TFII в кардиомиоцитах (рис. 1h). Этот результат предполагает, что COUP-TFII изменяет гомеостаз сердечной энергии посредством модуляции экспрессии генов, важных для производства энергии, использования топлива и функции митохондрий.

Нарушение использования сердечного топлива

Профиль OE показывает значительно сниженную экспрессию многих генов, контролирующих использование топлива.Количественный анализ обратной транскрипции-ПЦР (qRT-PCR) показал, что гены захвата, связывания, доставки в митохондрии и окисления жирных кислот все проявляют пониженную экспрессию в OE-сердцах уже на 4-й день (Рис. 2a). Эти данные позволяют предположить, что использование жирных кислот в сердце OE может быть ограничено. Действительно, OE сердца демонстрируют более низкую скорость окисления олеата ex vivo (Fig. 2b), как предсказано молекулярным профилем OE сердец.

Рисунок 2: Нарушение использования топлива в желудочках COUP-TFII OE.

( a ) Относительные уровни мРНК по данным qRT – PCR в желудочки 4, 9 и 16 дней. N = 5 (CTRL) и 7 (OE). Цветовая кодировка уровней мРНК отображает относительные складки OE по сравнению с контрольными сердцами. ( b d ) Измерение скорости окисления олеата ( b ), окисления глюкозы ( c ) и потребления кислорода ( d ) в изолированных цельных сердцах на 9 день с помощью препарата Лангендорфа. N = 5 (CTRL) и 7 (OE). ( e ) Анализ ChIP-qPCR на сердце 4 дня. N = 3 для каждого генотипа. На диаграмме справа показаны гены утилизации топлива, на которые влияет COUP-TFII OE. Зеленым отмечены гены с пониженной регуляцией, а красными метками — гены с повышенной регуляцией в ответ на повышенную экспрессию COUP-TFII. Экспрессия генов с белым фоном не изменяется COUP-TFII. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001 ( t -тест) между CTRL и OE. Планки погрешностей обозначают s.e.m.

Всесторонний анализ генов, участвующих в использовании глюкозы в OE-сердцах, показал снижение уровней мРНК Glut4 , Hk2 и Pfkm (рис.2а) гены, необходимые для захвата глюкозы, фосфорилирования и последующего гликолиза соответственно. Эти данные свидетельствуют о том, что сердца OE также имеют дефект в использовании глюкозы. Это было подтверждено сниженной скоростью окисления глюкозы в ex vivo OE сердцах (рис. 2c). Интересно, что мы также наблюдали увеличение экспрессии подмножества генов гликолитических путей (рис. 2а). Однако эти изменения, которые могут быть компенсирующим эффектом, не смогли компенсировать ухудшение утилизации глюкозы.Снижение скорости окисления жирных кислот и глюкозы сопровождается снижением скорости потребления кислорода (OCR) в OE-сердцах (рис. 2d), что свидетельствует о дефекте окислительного фосфорилирования для производства энергии.

Сеть PGC-1 критически важна для регуляции генов, необходимых для сердечного метаболизма 10,13 . Поскольку экспрессия PGC-1α повышается в жировой ткани гетерозиготных мутантных мышей COUP-TFII 20 , вероятно, что экспрессия PGC-1α также изменяется, когда сверхэкспрессия COUP-TFII в сердцах .В самом деле, экспрессия PGC-1α снижается, когда COUP-TFII сверхэкспрессируется (Fig. 2a). Более того, уровни других членов сети PGC-1 , включая PGC-1β , ERRα , ERRγ и PPARα , все снижены в сердечных тканях в OE-сердцах (Fig. 2a). Представление о том, что COUP-TFII подавляет сеть PGC-1 , подтверждается обратной зависимостью COUP-TFII и PGC-1α / β 11 , ERRα 21 и PPARα 22 подписи (дополнительный рис.2). Эти результаты показывают, что COUP-TFII является основным метаболическим регулятором, который играет центральную роль в управлении метаболизмом сердечного топлива.

Поскольку PGC-1α является прямой нижестоящей мишенью COUP-TFII в адипоцитах 20 , вполне вероятно, что тот же регуляторный механизм действует и в сердце. Используя иммунопреципитацию хроматина (ChIP) -количественную ПЦР (qPCR), мы обнаружили, что COUP-TFII действительно связывается с ранее идентифицированным интронным сайтом связывания COUP-TFII в адипоцитах (рис.2д) 20 . Этот результат подтверждает, что PGC-1α , вероятно, является прямой мишенью COUP-TFII в сердце и что механизм действия, с помощью которого COUP-TFII регулирует PGC-1α , сохраняется среди различных типов клеток. В дополнение к PGC-1α , COUP-TFII также напрямую связывается с генами ERRα , ERRγ и PPARα в анализах ChIP (рис. 2e). В совокупности наши результаты указывают на прямую регулирующую роль COUP-TFII для этих основных метаболических регуляторов.

Развитие митохондриальной дисфункции

Далее мы исследуем, являются ли митохондрии дисфункциональными в OE-сердцах, основываясь на подавлении экспрессии многих генов, которые кодируют компоненты в комплексах I, II, III и IV митохондриальной ETC (рис. 3a). . Анализ транскриптов дополнительно подтвердил подавление экспрессии гена ETC через 9 дней после индукции экспрессии COUP-TFII, когда сердца OE находятся на ранней стадии сердечной недостаточности (дополнительный рис. 3a). Эффект измененной экспрессии гена ETC проявляется в снижении активности ферментов комплексов I, II, III и IV в изолированных митохондриях желудочков OE (рис.3б). Этот дефект ферментных комплексов ETC может вызывать чрезмерное производство ROS и увеличивать окислительный стресс. Кроме того, сниженная экспрессия митохондриального гена мусорщика ROS Sod2 в OE-сердцах (рис. 3a и дополнительный рис. 3a) может снижать способность к детоксикации ROS и способствовать увеличению уровней ROS. В соответствии с этим профилем экспрессии генов более высокие уровни окисленных белков наблюдались в митохондриях сердец на 9-е сутки OE в анализе Oxyblot (рис. 3c). В результате функция митохондриальных белков нарушается в сердце OE, что отражается в снижении активности митохондриальной аконитазы, которая очень чувствительна к окислительному стрессу (рис.3d). Контрольные эксперименты, проведенные в восстановленном состоянии, показывают, что без воздействия окисления общие активности аконитазы сопоставимы у мышей CTRL и OE, что свидетельствует о чрезмерном окислении как основной причине снижения активности ферментов. Последствия повышенного окислительного стресса проявляются в снижении митохондриального OCR (рис. 3e) и более низком содержании митохондриального АТФ (дополнительный рис. 3b), что свидетельствует о снижении способности окислительного фосфорилирования и продукции АТФ в митохондриях сердец 9-го дня OE.Примечательно, что количество и плотность митохондрий сопоставимы между OE и CTRL сердцами, на что указывает сходное содержание митохондриальной ДНК и объемная плотность (дополнительные рис. 3c, d, соответственно). Неудивительно, что количество и плотность митохондрий не изменяются в ответ на снижение уровней PGC-1α и PGC-1β , поскольку Martin et al. уже сообщил о подобных наблюдениях у взрослых PGC-1α / β DKO сердца 11 . Возможно, скорость биогенеза митохондрий замедляется на взрослой стадии, делая эффект потери PGC-1α / β менее выраженным по сравнению с перинатальным периодом, когда митохондрии быстро размножаются.Таким образом, наши результаты показывают, что снижение производства АТФ в митохондриях из-за повышенного окислительного стресса, а не из-за изменения количества митохондрий, является одним из основных факторов нарушения метаболизма энергии, наблюдаемого в сердце OE.

Рис. 3: Повышенная продукция АФК и нарушение функций митохондрий.

( a ) Профиль экспрессии пораженных митохондриальных генов в сердце на 16 день. Синие отметки отрицательно регулируются, а красный цвет обозначает активированные гены.( b e ) Сердца 9-го дня. ( b ) Активность митохондриальных ферментов ETC, нормализованная до активности цитрат-синтазы (CS). ( c ) Оксиблот-анализ статуса окисления митохондрийных белков. Hsp60 служит для контроля загрузки. ( d ) Активность митохондриальной аконитазы в нативной и восстановленной формах, нормализованная к общему уровню митохондриального белка. N = 3 для каждого генотипа. ( e ) Скорость потребления кислорода митохондриями. ( f , g ) День 4 сердца.( f ) Уровни экспрессии ключевых митохондриальных генов-поглотителей ETC и ROS. N = 6 (CTRL) и 10 (OE). ( г ) Результаты ChIP-qPCR связывания COUP-TFII в геномных локусах генов ETC и скавенджеров ROS. N = 3 для каждого генотипа. RCR, коэффициент респираторного контроля. Олиго, эффект олигомицина. N = 3 для каждого генотипа. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001 ( t -тест) между CTRL и OE. Планки погрешностей обозначают букву s.Эм.

Чтобы подтвердить, что наблюдаемые изменения митохондриального метаболизма в сердце вызваны сверхэкспрессией COUP-TFII и не являются вторичными по отношению к сердечной недостаточности, мы исследуем экспрессию генов-мишеней COUP-TFII в более ранний момент времени до начала сердечной недостаточности. День 4, вероятно, является самой ранней точкой времени для индукции экспрессии COUP-TFII после 3-дневного лечения тамоксифеном перед проявлением дефектов функции сердца. Как и ожидалось, результаты эхокардиограммы действительно не показывают значительной разницы в размере желудочковой камеры, толщине стенки и фракции выброса между CTRL и OE сердцами (дополнительный рис.3e – g), указывая на то, что на 4-й день OE сердца структурно и функционально сопоставимы с CTRL. Результаты анализа qRT – PCR на 4-й день сердца подтверждают, что подавление экспрессии генов с помощью COUP-TFII предшествует развитию грубых различий между генотипами (рис. 3f). Более того, мы также обнаружили усиленное привлечение COUP-TFII в геномные локусы генов Ndufs1 , Ndufs6 , Ndufaf4 , Sdha и Sod2 с помощью анализов ChIP в 4-е сутки сердца OE (рис.3g), подтверждая мнение о том, что COUP-TFII, вероятно, напрямую регулирует экспрессию этих генов. Важно отметить, что частота дыхания митохондрий также ниже в сердцах на 4-й день OE, чем у CTRL (дополнительный рис. 3h), что согласуется с зависимыми от COUP-TFII изменениями экспрессии генов. Взятые вместе, наши данные демонстрируют, что регуляция экспрессии и функции митохондриальных генов с помощью COUP-TFII происходит в то время, когда сердца OE структурно и функционально сходны с сердцами CTRL.Эти данные свидетельствуют о том, что нарушение регуляции функции митохондрий у мышей OE является результатом передачи сигналов COUP-TFII, а не вторичным следствием сердечной недостаточности.

Интересно, что мы обнаружили, что митохондрии сердец 9-го дня OE имеют округлую форму с пониженной электронной плотностью и увеличенным расстоянием между кристами (рис. 4a), что указывает на накопление нездоровых митохондрий. В соответствии с морфологическими данными, мы наблюдали снижение экспрессии ключевых генов митохондриальной динамики в OE-сердцах, в том числе Pink1 для удаления поврежденных митохондрий и Opa1 , Mfn1, и Mfn2 для слияния и регенерации здоровых митохондрий. (Инжир.4b и дополнительный рис. 4a), тогда как не наблюдали изменений в экспрессии генов деления Fis1 , Mff и Dnm1l (дополнительный рис. 4a). Кроме того, уровни белка Pink1, Mfn1 и Mfn2 были снижены в изолированных кардиомиоцитах сердца OE на ранней стадии отказа (день 9, дополнительный рис. 4b), что указывает на то, что COUP-TFII может напрямую контролировать экспрессию этих генов. Сниженная экспрессия Pink1 и Mfn2 , двух из трех основных участников пути контроля качества митохондрий 23,24 , в OE-сердцах может нарушить митохондриальную динамику и способствовать накоплению поврежденных митохондрий, как видно на электронная микрофотография (рис.4а). В совокупности эти находки предполагают, что увеличение COUP-TFII нарушает митохондриальный гомеостаз за счет подавления экспрессии генов митохондриальной динамики.

Рисунок 4: Дефекты митохондриальной динамики.

( a ) Репрезентативные электронные микрофотографии желудочков 9-го дня от обозначенных генотипов. Шкала 0,5 мкм. ( b ) Относительные уровни мРНК основных генов динамики митохондрий в изолированных кардиомиоцитах на 9 день. N = 3 для каждого генотипа.( c ) Результаты ChIP-qPCR связывания COUP-TFII в геномных локусах митохондриальных динамических генов. N = 3 для каждого генотипа. ( d ) Диаграмма обогащенной COUP-TFII-связывающей области в локусе мыши Pink1 , идентифицированном с помощью ChIP-qPCR, показана в c , на которой гиперчувствительность к DNaseI является результатом 8-недельных сердец (из браузера генома UCSC , mm9) и консервативной последовательности связывания COUP-TFII. ( e ) Анализ репортера люциферазы иллюстрирует относительную активность сайтов связывания COUP-TFII дикого типа (WT) и мутантных (mu) в клетках C2C12.* P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001 ( t -Test) между CTRL и OE. Планки погрешностей обозначают s.e.m.

Результаты анализа ChIP-qPCR дополнительно показывают in vivo связывание COUP-TFII на геномных локусах генов митохондриальной динамики Pink1 , Opa1 и Mfn2 взрослых сердец (рис. 4c), что позволяет предположить, что эти гены являются прямыми мишенями COUP-TFII. Затем мы использовали консервативный сайт связывания COUP-TFII гена Pink1 в качестве примера, чтобы продемонстрировать прямую регуляцию Pink1 с помощью COUP-TFII через эти цис -действующих элементов.Этот сайт связывания COUP-TFII расположен между 93 и 105 парами оснований перед сайтом начала транскрипции, в пределах участка высококонсервативных нуклеотидов между человеком и мышью. Этот сайт окружен открытым хроматином, о чем свидетельствует высокая чувствительность ДНКазыI (рис. 4d). Участок консервативных нуклеотидов из этой области, которые содержат сайты связывания COUP-TFII дикого типа (Pink1_WT) или мутантные (Pink1_mu), клонировали перед репортером люциферазы, управляемым TATA-промотором, для анализа люциферазы в клетках C2C12.Сайт связывания COUP-TFII демонстрирует пониженную репортерную активность по сравнению с активностью мутантного сайта (фиг. 4e), предполагая репрессивную роль в регуляции экспрессии гена Pink1 . Взятые вместе, результаты показывают, что связывание COUP-TFII в геномных локусах подавляет экспрессию генов митохондриальной динамики.

Регуляторная сеть COUP-TFII у человека

Ключевая роль COUP-TFII в регуляции митохондриальных и метаболических генов, наблюдаемых у мышей, здесь также встречается у человека, что подтверждается общедоступными данными из образцов пациентов (рис.5). Активность COUP-TFII оценивали и ранжировали в профилях РНК 102 желудочков человека (GSE5406) ​​на основе сигнатуры гена COUP-TFII мыши (фиг. 5, верхняя панель). Более высокая сигнатура COUP-TFII указывает на более сильную активность COUP-TFII в образце. Сначала мы наблюдали положительную и значимую корреляцию между уровнями COUP-TFII и активностями в этих образцах от человека (рис. 5). Этот результат подтверждает мнение о том, что регуляторная сеть COUP-TFII, идентифицированная у мышей, также действует в сердце человека.Кроме того, существует положительная корреляция между активностью COUP-TFII и уровнями маркера сердечного стресса Nppb (рис. 5), что позволяет предположить, что усиление передачи сигналов COUP-TFII может быть связано с сердечным стрессом в сердцах человека, что согласуется с тем, что мы наблюдается на нескольких моделях мышей.

Рисунок 5: COUP-TFII-зависимая регуляторная сеть в образцах сердца человека.

(Верхняя панель) Данные массива экспрессии 86 отказов и 16 исправных миокарда левого желудочка человека из GSE5406 для генов в сигнатуре транскрипции COUP-TFII, с образцами, упорядоченными на основе проявления сигнатуры.(Нижняя панель) Тепловая карта показывает уровни интересующих генов в отдельных образцах в соответствии с порядком на верхней панели. Направление и статистическая значимость корреляции между экспрессией интересующих генов и сигнатурой COUP-TFII указаны сбоку. Красный цвет означает положительную корреляцию ( P, <0,05, показатель Пирсона), а синий цвет означает отрицательную корреляцию.

Сравнивая активности COUP-TFII и уровни экспрессии интересующих генов, мы обнаружили значительную и обратную корреляцию между активностями COUP-TFII и уровнями многих митохондриальных генов, которые кодируют ферменты ETC, включая 23 комплекса I, 4 комплекса II и 6 комплексных. III гены (рис.5). Более того, уровни митохондриальных динамических генов MFN2, OPA1 и PINK1 также отрицательно коррелируют с активностями COUP-TFII (Рис. 5). Эти данные согласуются с важной ролью COUP-TFII в подавлении митохондриальных функций и гомеостаза у пациентов.

Аналогичным образом были обнаружены обратные корреляции между активностями COUP-TFII и уровнями генов энергетического метаболизма, включая гены катаболизма жирных кислот FABP3, MLYCD, ACADVL, ACADM, ACADS и ACAA2 , гены метаболизма глюкозы SLC2A4, PF , LDHB и PDK2 , а также основные метаболические регуляторы ERRα, ERRγ и PPARα (рис.5). Компенсаторный эффект увеличения экспрессии гликолитического гена ENO1 также наблюдается в сердце человека (рис. 5), что дополнительно подтверждает наличие консервативного механизма регуляции сердечного метаболизма. Таким образом, экспрессия генов энергетического метаболизма подавляется, когда уровни COUP-TFII повышаются в человеческих сердцах.

Снижение COUP-TFII ослабляет прогрессирование заболевания

Трансгенные мыши calcineurin вырабатывают DCM 25 , и экспрессия COUP-TFII повышается у этих мышей (дополнительный рис.1б, в). Поэтому мы использовали эту модель, чтобы проверить, улучшает ли снижение дозы COUP-TFII прогрессирование заболевания. Аллели COUP-TFII floxed и Myh6-MerCreMer были скрещены с фоном CnTg , чтобы позволить генетическое удаление одной копии гена COUP-TFII в кардиомиоцитах у 7-недельных животных посредством индуцированного тамоксифеном , cre вырезание гена, опосредованное рекомбиназой (рис. 6а). Большинство мышей, несущих трансген кальциневрина на фоне COUP-TFII flox / + ( CnTg; COUP-TFII flox / + , CnTg / F + ) демонстрируют повышенный уровень внезапной смерти после 12-недельного возраста по сравнению с мышами из групп CTRL COUP-TFII flox / + ( F + ) и Myh6-MerCreMer; COUP-TFII flox / + ( Cre / F + ), показанный на рис.6б. Удаление одной копии гена COUP-TFII в кардиомиоцитах на трансгенном фоне calcineurin ( CnTg; Myh6-MerCreMer; COUP-TFII flox / + , CnTg / Cre / F + ). снижает уровни белка COUP-TFII (дополнительный рис. 5a) и приводит к увеличению общей выживаемости по сравнению с группой CnTg / F + в течение 20-недельного периода (рис. 6b). Это демонстрирует, что снижение дозы COUP-TFII продлевает выживаемость при интенсивном сердечном стрессе.

Фигура 6: COUP-TFII гаплонедостаточность частично спасает calcineurin трансгенных мышей.

( a ) Опытный образец. Эхо, эхокардиография. ( b ) Кривая Каплана-Мейера для мышей с обозначенными генотипами в течение 20-недельного периода наблюдения. ( c ) Внутренний размер левого желудочка в диастолу в указанные моменты времени. ( d ) Относительная толщина стенки левого желудочка. Генотипы указаны внизу. N = 10 (F + ), 10 ( Cre / F + ), 5 ( CnTg / F + ) и 11 ( CnTg / Cre / F + ).* P <0,05; NS, P > 0,05 ( t -тест) между обозначенными группами. Планки погрешностей обозначают s.e.m.

Эхокардиография перед удалением одной копии COUP-TFII (возраст 6 недель) и после удаления (возраст 12 недель) была выполнена для изучения структурных и функциональных изменений сердца. Выбор 12-недельной временной точки основан на предыдущих наблюдениях, что мыши CnTg проявляли DCM к 12 неделе 25 , и что кратковременное сердечное действие, оказываемое тамоксифеном, уменьшилось через 1 месяц после лечения 26 .У мышей, несущих трансген кальциневрина , уже развилась эксцентрическая гипертрофия за 6 недель до лечения (дополнительный рис. 5b, c), что согласуется с предыдущими данными 25 . Мыши CnTg / F + и CnTg / Cre / F + демонстрируют более толстые стенки левого желудочка (дополнительный рисунок 5b) и увеличенные внутренние размеры левого желудочка (дополнительный рисунок 5c) по сравнению с соответствующим F + и Cre / F + CTRL группы соответственно.В возрасте 12 недель у мышей CnTg / F + развивается DCM, демонстрируя значительно увеличенный размер внутренней камеры (рис. 6c) и сниженный RWT (рис. 6d) по сравнению с группами CTRL того же возраста или внутри. группа в возрасте 6 недель (рис. 6c, d и дополнительный рис. 5c). Напротив, удаление аллеля COUP-TFII у мышей CnTg / Cre / F + частично подавляет дилатацию (рис. 6c), и они поддерживают уровни RWT, аналогичные таковым у 6-недельных мышей. (Инжир.6г). Этот результат предполагает, что сердца трансгенных мышей calcineurin , у которых удалена одна копия COUP-TFII , все еще способны компенсировать стресс посредством гипертрофической реакции, а не прогрессировать в направлении DCM. Однако удаление только одной копии COUP-TFII не помогло спасти снижающуюся сократительную способность (дополнительный рис. 5d). Взятые вместе, наши результаты показывают, что уменьшение дозы COUP-TFII может улучшить выживаемость в стрессовых сердцах за счет частичного ослабления прогрессирования заболевания в сторону DCM.

Cool Kids — Языковой детский лагерь Cool Kids для детей 5-17 лет, г. Москва, ул. Санкт-Петербург, Санкт-Петербург (Санкт-Петербург), Россия детский лагерь

Лагерь Cool Kids — это волшебный мир, который организаторы хотят подарить каждому участнику программы. Попадая в лагерь, ребенок попадает в особую атмосферу, как в другую страну, где есть правила, при соблюдении которых он приобретет важный жизненный опыт. Здесь он научится общаться и строить отношения с новыми людьми не только на русском, но и на английском языке; найти друзей, раскрыть собственный потенциал и уметь расслабиться.
База:
Регион: Россия, Санкт-Петербург (Санкт-Петербург)
Ближайший город: Санкт-Петербург, 60 км
Возраст: для детей 5-17 лет
Адрес: 88732 Ленинградская обл., Приозерский р-он, пос.Петровское.
(посмотреть на карте адрес и как проехать)
Трансфер в сопровождении взрослого: из Санкт-Петербурга, включено в цену
Кол-во детей: 100
Год начала работы: 2008
Документы:

1. Медицинская справка (форма № 079-У), которую можно получить в последние дни учебы или в поликлинике по месту жительства.В справке должны быть указаны сведения о состоянии здоровья ребенка: группа здоровья, перенесенные инфекционные и хронические заболевания, сделанные профилактические прививки по возрасту, отсутствие карантина в классе и школе. Особенно важны прививки: от кори, свежей реакции Манту (действует 1 год), ADSM, гепатита B. Если вакцины нет, то в справке 079U укажите, по какой причине она отсутствует. В случае, если вакцинация не отражена в справке по форме 079, необходимо предоставить КОПИЮ сертификата вакцины по форме 063;

2.Результаты анализов: соскоб на энтеробиоз, яйца-глисты и простейшие (отрицательные). Действует 1 месяц

3. Копия свидетельства о рождении или паспорта;

4. Копия полиса медицинского страхования;

5. Справка об инфекционных контактах (для квартиры — берется в детской поликлинике). Помощь принимается за день до приезда!

Компания: ООО «Языковая школа»
Регистрационный номер компании: 7801346405
Лицензия на образование: #
Тебе нравится этот лагерь? Рассказать другу

Детский оздоровительный лагерь «Связист» расположен в уникальной природной зоне Ленинградской области на берегу озера в окружении соснового леса недалеко от поселка Петровский (Карельский перешеек).Удивительная природа и целебный лесной воздух создают идеальные условия для отдыха. К услугам детей новые современные коттеджи класса люкс, 3-х местные номера со всем необходимым для комфортного проживания. Коттеджи расположены в 2 минутах от Главного корпуса, где есть спортивно-оздоровительная секция с бассейном, настольным теннисом, многофункциональным спортивным залом и кинотеатром. 5-разовое питание со сбалансированным рационом.

Комнат: 3 человека в комнате
Удобства (туалет): общий, на этаже
Еда: 5-разовое питание
Площадь: 200 000 м 2
Инфраструктура:

концертный зал, детская площадка, спортивный зал, стадион, футбольное поле, баскетбольное поле, волейбольное поле, бассейн

Службы безопасности и здравоохранения:

Есть медпункт с педиатром, медсестрой.Медицинская помощь ребенку может быть оказана круглосуточно.

Питание детей в школе — ГБОУ Школа 255

РАСПИСАНИЕ СТОЛОВОЙ ШКОЛЫ

Условия льготной поставки

Бесплатное питание или питание по сниженной цене с компенсацией 100% его стоимость присуждается студентам следующих категорий:

  • проживающих в малообеспеченных семьях;
  • человек, проживающих в многодетных семьях;
  • Дети-сироты или дети, оставшиеся без попечения родителей;
  • в отключенном состоянии;
  • на учете в туберкулезном диспансере;
  • 9 930 хронических болезней, перечень утвержден (перечень хронических болезней ) ;
  • учеников 1-4 классов (завтрак).

Основания предоставления мощности:

Основанием для обеспечения вашего ребенка питанием является ваше заявление в образовательное учреждение (анкету можно получить у Калининой С.М., ответственной за питание в школе №255 (библиотека) по фонарному переулку. Д.4) и документы, которые определяется для каждой привилегированной категории (список документов, необходимых для установления привилегированной категории).

Питание по сниженной цене возможно, начиная с месяца, следующего за месяцем подачи заявки, если заявка подана на 20 текущий номер.

Предоставление полномочий для прекращения дел:

  • утрата студентами права на обеспечение питанием — с 1 числа месяца, следующего за месяцем, наступившим при соответствующих обстоятельствах;
  • об установлении недостоверности уведомления об изменении сведений, представленных заявителем, или несвоевременной указанной информации — с 1 числа месяца, следующего за месяцем, наступившим при соответствующих обстоятельствах;

Для обеспечения компенсационных выплат родителям (в случае домашнего обучения учеников) необходимо заполнить заявление на компенсационную выплату (бланк заявления можно получить у ответственного по питанию Калинина С.М.)

Ответственный за организацию питания в школе

Светлана Калинина
проволока.+ 7-951-656-55-86 (с 10.00 до 16.00) (библиотека школы №255)

Директор школы — Капитанова Екатерина Борисовна
провод. + 7-953-156-16-21 (с 10.00 до 19.00)

Кейтеринг, организованный ООО «Кулинарная компания Капитал»

  • Юр. адрес: 121596, г. Москва, ул. Горбунова, д.2, стр.3, этаж 8, пом. II, комн. 38Д, офис 11А
  • ИНН 7733797051
  • КПП 773101001
  • ОКПО 09172984
  • ОКОГУ 4210014
  • ОГРН 1127746212351

Генеральный директор: Шадрин Данила Витальевич

Информация о действующих нормативных документах, регулирующих организацию питания в ОС, размещена на сайтах:

  • Управление социального питания http: // www.gov.spb.ru
  • Социальное питание Санкт-Петербург http : // socpspitanie . спб . ру /

Телефоны контролирующих органов по защите прав потребителей:
  • +7 (812) 576-19-01 — Управление социальной защиты населения Адмиралтейского района
  • +7 (8120576-97-49 — отдел потребительского рынка администрации Адмиралтейского района
  • +7 (8120 571-62-00 — Управление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Адмиралтейскому району г. Санкт-Петербург).Санкт-Петербург (www.78.rospotrebnadzor.ru)

местные документы

Ядерный рецептор LRH-1 / NR5A2 необходим и нацелен на разрешение стресса эндоплазматического ретикулума печени

1) Основная идея документа о том, что это новая ветвь UPR, является преждевременной, не подтверждается этими данными и не отражает точное описание результатов. Крайне важно либо продемонстрировать, что предлагаемый путь является новым ответвлением UPR, либо просто изменить название и центральную предпосылку статьи на «определение роли LRH-1 в стрессе ER в печени».Между этими концепциями есть важное различие.

Мы полностью согласны с тем, что концепции совершенно разные, и в нашем первоначальном сообщении мы не намеревались утверждать, что этот инициируемый LRH-1 путь для разрешения стресса ER является четвертой ветвью UPR. У нас нет доказательств того, что он напрямую способствует восстановлению функции ER, например, способствуя сворачиванию белка, и мы не наблюдали дифференциальной экспрессии генов-мишеней UPR после агонизма LRH-1 (рис. 7C).Кроме того, LRH-1 не экспрессируется повсеместно. Таким образом, как теперь указывается в обсуждении, этот путь нельзя считать эквивалентным трем каноническим ветвям. Мы также добавили к заголовку « печень, разрешение стресса эндоплазматического ретикулума», как было предложено. Тем не менее, ось PLK3 / ATF2 довольно отделена от известных компонентов UPR, и мы считаем, что результаты убедительно подтверждают наш вывод о том, что этот путь «не зависит от UPR, но в равной степени необходим» для разрешения стресса.

Для более непосредственного решения проблемы функционального взаимодействия с каноническими путями мы использовали siRNA для нокдауна Ire1a , Perk и Atf6 в первичных гепатоцитах и ​​определили, является ли ER-стресс-чувствительная индукция генов-мишеней LRH-1. затронутый. Поскольку метаболические гены-мишени LRH-1 Cyp7A1 или Cyp8B1 не регулируются в культивируемых клетках, мы сосредоточились на Shp, и Plk3. Мы наблюдали, что оба являются индуцируемыми стрессом, но их индукция значительно снижается с потерей Ire1a (рис. 3E ) .Поскольку экспрессия Ire1a также является критической для индукции мРНК Lrh-1 (рис. 3E), однако возможно, что IRE1a в первую очередь влияет на экспрессию LRH-1, а не на его активность.

2) Практически во всех экспериментах, исследующих роль LRH-1 в UPR, авторы исследовали уровни XBP1, ATF6 и ATF4 и использовали эти измерения как прямое отражение стресса ER через канонические ветви. Доказательства, подтверждающие наличие неразрешенного ER-стресса, в первую очередь основаны на том факте, что после лечения туникамицином или гепатэктомии в печени мышей с нокаутом обнаруживается стеатоз.Важно охарактеризовать состояние ER дополнительными мерами, чтобы приблизиться к этой интерпретации. Важным аспектом этого является состояние проксимальных сенсоров, таких как фосфорилирование IRE1 и PERK, и доказательства появления дезадаптивных ответов, таких как апоптотические сигналы, активация JNK и др. В противном случае остается возможность, что этот ER находится в новом равновесии с усиленным UPR и что LRH-1 связан с метаболизмом липидов, а не представляет собой добросовестную новую ветвь UPR .

Мы получили новые данные, подтверждающие наш вывод о том, что стресс ER является устойчивым и токсичным у мышей, лишенных Lrh-1 . Хотя ранее мы показали, что мыши Lrh-1 LKO демонстрируют повышенную гибель клеток после туникамицина с помощью окрашивания TUNEL, теперь мы также исследовали активацию каспазы после стресса у наших мышей. Как и ожидалось, мы наблюдали большую вызванную стрессом активацию каспаз у мышей Lrh-1 LKO (рис. 1E).

Мы также использовали тиофлавин Т, который флуоресцирует при связывании с белковыми агрегатами (Beriault and Werstuck, 2013) в качестве дополнительного метода визуализации и количественной оценки ER стресса. В первичных гепатоцитах, обработанных туникамицином, от контрольных мышей и мышей Lrh-1 LKO мы наблюдали поразительно увеличенную флуоресценцию в более поздние моменты времени после обработки туникамицином у мышей Lrh-1 LKO (рис. 1F). Это указывает на то, что потеря Lrh-1 не только влияет на компоненты передачи сигналов UPR, но также вносит вклад в большую неправильную укладку белков.

Мы не считаем, что ER у мышей Lrh-1 LKO находится в новом равновесии после стресса по следующим причинам: 1) Окрашивание тиофлавином T указывает на гораздо большее количество белковых агрегатов в Lrh-1. LKO мышей после стресса ER (рисунок 1F). 2) Мы не наблюдаем какой-либо активации UPR у мышей Lrh-1 LKO до лечения стрессорами ER (рисунок 1G; рисунок 1 – рисунок в приложении 1).3. Мы наблюдаем больший апоптоз в ответ на широкий спектр стрессоров у мышей Lrh-1 LKO (рисунок 1C, D; рисунок 2B).

Хотя мы не можем исключить, что наблюдаемый стеатоз у мышей Lrh-1 LKO после стресса ER также мог быть причиной стресса ER, мы считаем важным отметить, что это накопление жира наблюдается только в более поздние моменты времени. (48 часов и позже) после лечения туникамицином (рис. 1A, B). UPR быстро (в течение нескольких часов) реагирует на неправильно свернутые белки, и мы показали, что наш путь максимально активируется в течение нескольких часов после лечения туникамицином.Следовательно, основная часть стрессового ответа ER (и, можно утверждать, разрешение) у нормальных мышей происходит задолго до накопления значительного количества жира у мышей, дефицитных по разрешению ER стресса. Хотя возможно, что LRH-1 имеет решающее значение для аспектов липидного метаболизма, также важно отметить, что уровень липидов не увеличивается значительно у мышей Lrh-1 LKO до стресса ER (рис. 1A, B). . Таким образом, мы утверждаем, что LRH-1 имеет решающее значение для разрешения стресса ER.

3) Приводит ли стресс ER к состоянию активации или субклеточной локализации LRH-1? Есть ли другие показания для прямой модификации этой молекулы стрессом ЭР? Если да, то передается ли такой эффект через IRE1 или PERK?

В новых результатах мы показываем, что стресс ER не влияет на субклеточную локализацию; LRH-1 является исключительно ядерным со стрессом ER или без него (Рисунок 3F). Таким образом, маловероятно, что LRH-1 непосредственно фосфорилируется или модифицируется связанными с ER факторами UPR.

Мы обнаружили, что индукция генов-мишеней LRH-1 увеличивается после стресса ER, что может быть связано с повышенной экспрессией мРНК Lrh-1 . Мы обнаружили (как подробно описано в пункте 1 выше), что IRE1a и ATF6 могут контролировать эту индукцию Lrh-1 . Однако более интригующий вопрос заключается в том, увеличивается ли транскрипционная активность LRH-1 после стресса ER, возможно, за счет индукции агонистического лиганда или посттрансляционной модификации. К сожалению, оба эти вопроса очень трудно решить, поскольку ничего не известно об эндогенных агонистах LRH-1, и мало что известно о регуляции активности LRH-1 в любом контексте.

4) Авторы утверждают, что дефектное разрешение стресса ER у мышей, специфичных для печени LRH-1, связано с потерей фосфорилирования ATF2 в ответ на стимулы стресса ER. Однако текущие данные не подтверждают, что фосфорилирование ATF2 важно для разрешения стресса ER. Могли ли авторы отключить ATF2 в печени мышей и исследовать, есть ли какие-либо дефекты в разрешении стресса ER после заражения? Альтернативно, пытались ли авторы исследовать, проявляет ли печень с дефицитом ATF2 или PLK3 гепатостеоз и / или изменения в стрессовых ответах ER ?

Мы согласны с тем, что данные о требованиях к ATF2 для устранения стресса ER укрепят нашу позицию.Чтобы решить эту проблему, мы создали аденовирусы, экспрессирующие конститутивно активный ATF2 или доминантно-отрицательный ATF2, который не может быть фосфорилирован по критическим остаткам. Мы наблюдали, что экспрессия конститутивно активного ATF2 в клетках Lrh-1 LKO увеличивает их способность преодолевать стресс ER; наоборот, экспрессия доминирующего отрицательного ATF2 в контрольных клетках снижает их способность преодолевать стресс ER (рис. 6E, G). Хотя возможно, что PLK3 не проявляет свой защитный эффект в разрешении стресса ER исключительно через ATF2, ясно, что ATF2 (и потенциально избыточные факторы транскрипции семейства ATF) действительно играют критическую роль в разрешении стресса ER.

В ответ на более поздние вопросы мы обнаружили, что печень с дефицитом Plk3 и демонстрирует устойчивую передачу сигналов UPR после лечения туникамицином (рис. 5J), что позволяет предположить, что они не могут справиться с ER-стрессом так же эффективно. Мы не наблюдали повышенного гепатостеатоза из-за того факта, что фон этой линии мышей более чувствителен к туникамицину, чем контрольные для мышей с дефицитом Lrh-1 , и, следовательно, даже мыши Plk3 дикого типа также проявляют повышенный гепатостеатоз после TM относительно мышей C57 / Bl6.Однако в базовых условиях нокауты PLK3 не проявляют ни активации UPR, ни значительного повышения уровня триглицеридов.

5) Доказательства, связывающие активацию ATF2 исключительно с ответом на стресс ER, неполны, поскольку PLK3 имеет много других взаимодействующих и связывающих партнеров. p53, HIF1A и C-Jun могут участвовать в опосредовании как клеточного стресса, так и стресса ER. Например, воздействие токсинов, таких как туникамицин, на гепатоциты, вызывает ER-стресс, который затем способствует клеточной реакции на окислительный стресс.В этом случае активация ATF2 потенциально является частью реакции на окислительно-восстановительный стресс. Существуют ли другие сигнальные каскады, кроме ATF2, с повышенной регуляцией у мышей, обработанных лигандом LRH-1 или экзогенными токсинами? Комментарии по этому поводу были бы полезны. Эти возможности должны быть рассмотрены либо путем дополнительных экспериментов, направленных на последующие цели PLK3, либо, по крайней мере, в разделе обсуждения статьи .

Это правда, что PLK3 имеет дополнительных партнеров по взаимодействию, включая другие факторы транскрипции.Мы дополнили нашу рукопись дополнительным анализом данных нашего массива, чтобы определить, могут ли гены, дифференциально индуцированные стрессом у мышей Lrh-1 LKO , быть мишенями дополнительных факторов транскрипции, которые, как известно, фосфорилируются PLK3. Эта информация обобщена в таблице 2 и подробно обсуждается в разделе «Результаты и обсуждение».

После этого дополнительного анализа наиболее значимое совпадение нашего набора генов (Таблица 1) с известным связыванием промотора фактора транскрипции осталось таковым для ATF2.Однако мы также наблюдали некоторое обогащение для генов-мишеней p53 и c-Jun (а также для LRH-1, но, как полагают, это не регулируется PLK3). Интересно, что гены в нашем наборе генов, которые являются прямыми мишенями для p53 или c-Jun, также являются прямыми мишенями для ATF2. Другими словами, мы не идентифицировали какие-либо гены, связанные с p53 или c-Jun, которые не связаны с ATF2 в той же области (данные не показаны в документе из соображений размера). Следовательно, эти исследования не могут показать доказательств критической роли p53 или c-Jun в индукции этих генов.Тот факт, что экспрессия конститутивно активного ATF2 в клетках Lrh-1 LKO способствует разрешению стресса ER (рис. 6E, G), свидетельствует о том, что ATF2 является основным функциональным продуктом PLK3 в разрешении стресса ER. Возможно, что p53 или c-Jun могут образовывать комплексы с ATF2 в контексте стресса ER, чтобы максимизировать индукцию гена. Тем не менее известно, что ATF2 связывает дополнительные гены в нашем списке, которые, по-видимому, не являются мишенями для p53 или c-Jun, что позволяет предположить, что ATF2 может работать самостоятельно (или, по крайней мере, без этих факторов транскрипции).Поскольку HIF1a фосфорилируется PLK3, но это фосфорилирование дестабилизирует (Xu D, Yao Y, Lu L, Costa M, Dai W. 2010. Plk3 функционирует как важный компонент пути регуляции гипоксии путем прямого фосфорилирования HIF-1alpha. Journal of Biological Chemistry 285: 38944–38950. doi: 10.1074 / jbc.M110.160325.), Мы не исследовали HIF1a в дальнейшем.

Мы также исследовали, индуцировалась ли реакция на окислительный стресс в нашем списке целевых генов. Нет известных факторов транскрипции окислительного стресса, которые фосфорилируются PLK3 (если вы не включаете p53), поэтому мы сравнили наш список генов с общегеномным связыванием NRF2.Мы не наблюдали значительного перекрытия. В более поздние моменты времени (например, 48 или 72 часа) после обработки туникамицином, мы могли бы ожидать наблюдения окислительного стресса у мышей Lrh-1 LKO в результате их неразрешенного ER-стресса. Однако мы можем сделать вывод, что LRH-1, по-видимому, не контролирует реакцию окислительного стресса на туникамицин в более ранние моменты времени, которые составляют первичную стрессовую реакцию ER.

Контролируются ли дополнительные, более широкие пути LRH-1 и / или PLK3 в ответ на стресс, остается открытым вопросом.Однако ранее мы выполнили ряд непредвзятых биоинформатических анализов (открытие мотивов, генная онтология и т. Д.) И не обнаружили ничего значительного, кроме факторов связывания CRE / ATF2 (значимые данные в бумаге, некоторые данные не показаны), которые предполагали бы дополнительные пути, зависящие от LRH-1, необходимы для разрешения стресса ER.

6) Влияет ли лиганд LRH-1 на фосфорилирование ATF2 в ответ на стрессовые стимулы ER?

К сожалению, мы не смогли решить эту проблему напрямую из-за трудностей с более поздними партиями антитела фосфо-ATF2 (Cell Signaling 9225S).Все показанные эксперименты были выполнены с использованием партии 3 этого антитела, которое обнаруживает одну чистую полосу. Однако теперь мы можем получить только пакет 4, который обнаруживает несколько полос без четкой полосы pATF2. Нам не удалось надежно обнаружить pATF2 с помощью других антител.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *