А ю попова роспотребнадзор: Правительство России

Роспотребнадзор

Содержание

надо готовить блестящих специалистов… — Профилактика — СЗГМУ им. И.И. Мечникова

А.Ю. Попова: надо готовить блестящих специалистов…

26 мая 2016 г. руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Анна Юрьевна Попова на базе Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова провела совещание по вопросам подготовки кадров для органов и организаций Роспотребнадзора по специальности «Медико-профилактическое дело».

Анна Юрьевна выступила с докладом перед широкой аудиторией участников совещания – перед теми, кто формирует кадровую политику, кто учит медико-профилактическому делу, кто определяет, как учить,  кто принимает на работу выпускников и кто уже сегодня успешно постигает профессию.

География представительства мероприятия – профессиональная общественность всей страны: 27 руководителей  управлений Роспотребнадзора в субъектах Российской Федерации, 20 главных врачей Центров гигиены и эпидемиологии регионов, 5 руководителей научных учреждений ведомства, 67 представителей образовательных организаций и порядка двух десятков самих обучающихся из числа кадрового резерва СЗГМУ им.

И.И. Мечникова. Всего – более 150 человек, для которых медико-профилактическое дело – дело жизни.

А жизнь не стоит на месте. Это подчеркнула в своем  докладе А.Ю. Попова.  Только за год в работе  Роспотребнадзора произошло столько изменений, что успевать за ведомством молодым специалистам становится все труднее.  «Мы крайне заинтересованы  в конечном результате  вашего труда,  — заявила  глава ведомства, обращаясь к преподавателям высшей школы, — благодарим за хороших специалистов, но вынуждены констатировать, что есть ряд вопросов,  требований и задач, которые нам надо решить для дальнейшего  движения вперед. Нам нужны практики и ученые, которые идут в ногу со временем. И это мы постарались изложить в профстандарте. Теперь — дело за его практической реализацией при подготовке выпускников, которые нам нужны».

Обсудить острые проблемы в образовании было решено в формате расширенного рабочего совещания. В своем докладе Анна Юрьевна подробно остановилась на том, чего не хватает нынешним выпускникам, какие дисциплины необходимо углубить, какими знаниями наполнить программы, отражающие принятый профстандарт. Для наглядности требований надзорного органа, она объяснила, с чем связаны эти  требования, какой этап мы сегодня проживаем. Речь шла о качестве жизни и здоровья, о демографии,  о снижении рисков здоровью,  об аспектах обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия. Особое внимание было уделено старым и новым вызовам и угрозам.  Усиления санитарно-карантинного контроля требуют новые  эпидемии – Зика, Эбола, коронавирус, желтая лихорадка.  От выпускников требуется знание новых  таможенных регламентов, а их только за прошлый год издано не меньше пятидесяти,  а также навыков, связанных с организацией противоэпидемиологических мероприятий.

А.Ю. Попова не обошла вниманием и вопросы гигиены, отдельно подчеркнув актуальность научного обоснования новых нормативов в гигиене детей и подростков и гигиене питания в условиях меняющейся окружающей среды.

Интереснейшей частью доклада  стал рассказ о масштабной  международной деятельности Роспотребнадзора, связанной с  согласованием технических   регламентов Таможенного союза по безопасности пищевой продукции. Анна Юрьевна выразила готовность привлечь к этой работе активных студентов, интересующихся данной тематикой и владеющих английским языком. А это открывает совершенно иные перспективы для будущих выпускников, для повышения их  профессионального уровня.  Пробный шар уже брошен. Несколько студентов нашего Университета в прошлом году  смогли принять участие

в международной встрече «Кодекс Алиментариус», которая состоялась в Петербурге,  и вникнуть в суть этой большой работы, обогатив  свой багаж знаний по специальности. 

Собственно, не было ни одного направления деятельности Роспотребнадзора, включая защиту прав потребителей и переход на риск-ориентированную модель надзора, которой бы не коснулась А.Ю. Попова, увязывая интересы службы и кадровые вопросы.

Роспотребнадзору есть чем гордиться, есть над чем работать, и в службе крайне заинтересованы  в хорошо подготовленных  специалистах со знанием иностранного языка, которые будут готовы ответить на все современные вызовы.

 

Ответом на многие вопросы, поставленные руководителем Роспотребнадзора, стал доклад проректора по медико-профилактическому направлению СЗГМУ им. И.И. Мечникова и сопредседателя Федерального учебно-методического объединения по укрупненной группе профессий, специальностей и направлений подготовки 32.00.00 «Науки о здоровье и профилактическая медицина» (ФУМО) Александра Виталиевича Мельцера «О практико-ориентированной подготовке кадров для органов и организаций Роспотребнадзора».

Александр Виталиевич рассказал о большой работе, которая ведется в рамках ФУМО, о реализации положений профстандарта в СЗГМУ им. И.И. Мечникова, по объективным причинам ставшего  флагманом этого процесса и центром,  где апробируются  новые идеи и предлагаются  новые решения. Ключевыми словами в докладе были «практика» и «возможности», а одним их основных вопросов — как преодолеть разрыв между теоретической и практической подготовкой.

 

Этот принцип был наглядно показан на секционной части совещания, где заведующая кафедрой медицинской микробиологии Н. В.Васильева продемонстрировала новый образовательный симулятор врача-бактериолога, что вызвало у всех участников совещания несомненный интерес.

Со своим видением проблем и возможностей их решения в подготовке кадров  выступили также декан медико-профилактического факультета ПМГМУ им. И.М. Сеченова

Ю.В.Несвижский, руководитель Управления Роспотребнадзора по Архангельской области Р.В.Бузинов, декан медико-профилактического факультета ОрГМУ А.С.Паньков, руководитель Управления Роспотребнадзора по Краснодарскому краю П.Н.Николаевич, главный врач ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Липецкой области С.И.Савельев. Состоялся живой разговор с аудиторией и обсуждение  проекта резолюции совещания. 

В совещании были активно задействованы студенты из состава кадрового резерва преподавательского состава медико-профилактического факультета СЗГМУ им. И.И.Мечникова. Ребята состояли в оргкомитете, помогая в организации мероприятия, а в процессе совещания задавали вопросы, участвовали в обсуждении. Участники совещания обратили внимание на то, что студенты «светлы», мотивированны и дисциплинированны. Благодаря принятой в СЗГМУ им. И.И. Мечникова стратегии, ребята из кадрового резерва приобретают дополнительные компетенции, начиная со студенческой скамьи, в частности, имея возможность принимать участие в совещаниях такого масштаба. И не напрасно. Ведь именно за ними – будущее!


Обнаружив в тексте ошибку, выделите ее и нажмите Ctrl + Enter

российский джаз развился благодаря «Тому и Джерри»

Билли Новик: российский джаз развился благодаря «Тому и Джерри»
НОВОСТИ ЧАСА

Президент Молдавии приветствовала российскую вакцину в республикеТихановская заявила, что Лукашенко уйдет веснойРоссийский боевой фрегат вошел в порт СуданаТурция готовится отправить ракету на ЛунуРоссийские лыжники завоевали бронзу в командном спринте на ЧМ

НСН

в эфире трёх радиостанций

Станция «Наше радио» 101,7 FM

НСН

в эфире трёх радиостанций

Станция Jazz FM 89,1 FM

НСН

в эфире трёх радиостанций

Станция Rock FM 95,2 FM

Билли Новик: российский джаз развился благодаря «Тому и Джерри»

25 февраля 202122:00

Татьяна Ладяева

Один из основателей группы «Billy’s Band» специально для НСН подготовил топ главных, на его взгляд, новостей уходящего дня.

1

Маккартни выпустит автобиографию

Британский музыкант, один из основателей группы The Beatles Пол Маккартни опубликует так называемую лирическую автобиографию, состоящую из 900 страниц. В двух томах книги появятся тексты песен и фрагменты из интервью.

Билли Новик: «Что-то мне подсказывает, что не только это. Во всей видимости, сэр Пол решил приоткрыть завесу таинственности и рассказать страждущим о самом сокровенном. Напомню, что в следующем году знаменитому Битлу исполнится 80 лет. И лично я от всей души желаю дорогому Полу Маккартни здоровья», – отметил в эфире НСН Билли Новик.

2

В прокат вышел полнометражный фильм «Том и Джерри»

Сегодня в прокат вышел полнометражный фильм «Том и Джерри». Персонажей поместили в реальный мир – в нью-йоркский отель – но оставили их двухмерными. Режиссёр фильма Тим Стори объяснил, что подобный ход — дань уважения классической анимации.

Билли Новик: «Это мультфильм, в котором всегда звучал хороший джаз.

Думаю, именно он незримо заложил основы восприятия джазовой музыки нашему поколению 90-х, когда американский контент стал широко доступен в России. Тогда дети подсознательно впитали всю музыкальную составляющую мультфильма, и, возможно, именно благодаря этому теперь российский джаз выглядит весьма конкурентоспособным», – поделился Билли Новик с НСН.

3

Тюмень и Петербург отнесли к лидерам по уборке снега

Лучше всего с уборкой снега этой зимой в России справляются коммунальщики Тюмени, Набережных Челнов и Санкт-Петербурга, хуже всего — Ярославля и Рязани. Таковы результаты опроса от сервиса SuperJob.

Билли Новик: «Увидев в списке Санкт-Петербург, я удивился и с ужасом представил себе города, в которых еще хуже. Вопросов много, но и коммунальщиков, наверное, можно тоже как-то понять. Хотя отказать себе в удовольствии кого-то поругать не так-то просто. А вообще, подождем, потерпим, и само все растает», – сказал он в интервью

НСН.

4

Большинство россиян хотят получать дополнительную пенсию от работодателей

Порядка 84 процентов россиян хотели бы получать корпоративную пенсию от своего работодателя в дополнение к государственной, пишет портал Работа.ру.

Билли Новик: «Неудивительно. В условиях развитого капитализма и массовых сокращений работник эксплуатируется все более нещадно, что никак не отражается на зарплате и налогах, зато существенно влияет на здоровье трудящегося в последующие годы. Но сама по себе постановка вопроса в таком виде выглядит пока крайне неубедительно», – прокомментировал он для НСН.

5

«Billy’s Band» отмечает 20-летие

В марте группа «Billy’s Band» отыграет юбилейные концерты в двух столицах.

Билли Новик: «И в завершение выпуска новостей хотел бы проанонсировать грядущие концерты моей группы. В этом году наш коллектив отмечает 20-летие, поэтому ждем всех на юбилейных концертах – 6 марта в Санкт-Петербурге и 13 марта в Москве», – пригласил слушателей НСН Билли Новик.

О проекте

«Авторские новости от НСН» — радиопрограмма НСН, которая выходит одновременно в эфире сразу трёх радиостанций (НАШЕ Радио, Rock FM, Радио JAZZ) с ежедневной аудиторией в 1,5 миллиона человек в Москве и четыре миллиона — в России. Ведущими «Авторских новостей от НСН» являются самые известные люди страны, имена которых хорошо знакомы радиослушателям. В настоящий момент в проекте участвуют 200 человек.

ФОТО: личный архив

Получайте свежие материалы на почту

Мы будем регулярно отправлять вам актуальные эксклюзивы и новости! Отписка доступна в письме

комментарии
Следите за новостями в социальных сетях

Получайте свежие материалы на почту

Информационное агентство «Национальная Служба Новостей (НСН)»: свидетельство о регистрации СМИ ИА № ФС77-53714 выдано Федеральной службой по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций (Роскомнадзор) 17 апреля 2013 года.

© 2021 ООО «НСН»ЗАО «Мультимедиа Холдинг», все права защищены

К сожалению, браузер, которым вы пользуйтесь, устарел и не позволяет корректно отображать сайт. Пожалуйста, установите любой из современных браузеров, например:

Google Chrome Firefox Safari

«Бывшие коллеги ведут себя в эфире омерзительно»

Режиссер Юлий Госман рассказал Михаилу Козыреву о том, как утихомиривал особо буйных в Госдуме и пришел на выручку Ельцину, будучи главой «Дома кино».

Юлий Соломонович, спасибо, что навестили. Девяностые ― это привязка расплывчатая и условная, такая нежесткая. Поэтому я бы начал наш разговор с абсолютно забытого словосочетания «Межрегиональная депутатская группа».

Если позволите, я бы начал раньше.

Давайте раньше.

Дело в том, что мне кажется, что все эти девяностые, ― и не важно, как их называть, лихими, или для кого-то золотыми, или для кого-то свободными, или для кого-то радостными, для кого-то горестными и несчастными, к сожалению, много было таких, ― но всё это начиналось в конце восьмидесятых.

Дело в том, что я тогда работал директором Центрального дома кинематографистов. Так случилось, что на V съезде, ― а собственно с V съезда кинематографистов, как считают некоторые, во многом началась вся эта перестройка.

У меня мама же кинорежиссер, документалист. Мы сидели и смотрели всё лайв просто вообще.

Да.

Мама, во-первых, испытывала дикую гордость, что именно кинематографисты всё замутили, но надо сейчас сегодняшнему зрителю объяснить, что это было.

Вы знаете, я не сторонник объяснений. Вот я сейчас смотрю иногда какие-то… Я не смотрю какие-то большие федеральные политические программы. Я регулярно Дождь смотрю, «Эхо» слушаю, еще какие-то там приятные, интересные источники, интернет.

Настолько возмутительно говорят о многом, настолько омерзительно, лживо и подло ведут себя некоторые господа, товарищи, коллеги и бывшие друзья в эфире, что спорить, опровергать, кричать «Да что вы! Он не убил, пожалейте, люди добрые!», мне кажется, даже просто как-то стыдно.

Потому что была эпоха, когда было страшно, в эту эпоху я не жил. Потом была эпоха, когда было стыдно. Сейчас я даже не могу что-то сказать.

Бесстыдно.

Просто у меня совершенно нет никакого желания…

А. Попова рассказала в Совете Федерации о национальной системе защиты прав потребителей

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека выступила в верхней палате в рамках «Правительственного часа».


Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Анна Попова рассказала сенаторам о национальной системе защиты прав потребителей. Она выступила на заседании верхней палаты парламента в рамках «Правительственного часа».

Смотрите также

«Одной из важных составляющих улучшения качества жизни остается должный уровень защиты прав потребителей», – отметила Анна Попова.

Она сообщила, что с 2005 года при непосредственном участии «Роспотребнадзора» было подготовлено двадцать девять изменений и уточняющих норм закона «О защите прав потребителей», а также более пятидесяти изменений в другие законодательные акты.

По словам руководителя «Роспотребнадзора», в соответствии с законом в России выстроена многоуровневая национальная система защиты прав потребителей, ежегодно растет сумма возмещения потребителям по судебным искам, связным с защитой их прав. По ее словам, в 2018 году рассмотрено более миллиона обращений граждан.

«С наступлением цифровой эпохи и развитием электронной коммерции, возникают новые риски. Чтобы отвечать новым вызовам, национальная система защиты прав потребителей требует постоянного развития и модернизации», — подчеркнула Анна Попова. Она сообщила о законах, принятых в этой области.

«Задачу обеспечения соблюдения прав и интересов потребителей на региональном уровне призваны решать принимаемые органами исполнительной власти субъектов Российской Федерации соответствующие региональные программы», — отметила руководитель «Роспотребнадзора».

«Реализация органами местного самоуправления установленных правил в целях защиты прав потребителей достаточно значима для населения, следовательно, необходимо развитие этого уровня системы для обеспечения оперативной защиты интересов граждан по месту жительства».

«Безусловно, достигнуть высокого уровня защищенности российских потребителей позволит только совместная деятельность всех звеньев национальной системы защиты прав, при условии реализации намеченных в региональных программах мероприятий и активном вовлечении муниципального уровня», — сказала Анна Попова.

В своем выступлении она затронула и вопросы качества питания школьников.

Также поднята тема методики выявления нового поколения ГМО, не прошедших регистрации в РФ.

Анна Попова отметила, что по темам, не затронутым в ее выступлении, подготовлены письменные ответы сенаторам.

Заместитель Председателя Счетной палаты РФ Галина Изотова остановилась на вопросах мониторинга объектов незавершенного строительства «Роспотребнадзора», рациона питания школьников в субъектах РФ, а также обеспечения населения качественной питьевой водой.

Первый заместитель председателя Комитета СФ по аграрно-продовольственной политике и природопользованию Сергей Митин высказался на тему качества питьевой бутилированной воды. Сенатор сообщил о работе, проводимой членами рабочей группы по противодействию незаконному обороту упакованной питьевой и минеральной воды.

Анна Попова ответила на заданные сенаторами вопросы, по таким темам, как правила производства и маркировки экологически чистой продукции, надзор и контроль за организаторами питания в образовательных организациях, маркировка пищевой продукции и другие.

По результатам обсуждения принято Постановление СФ, которое представил председатель Комитета СФ по Регламенту и организации парламентской деятельности Вячеслав Тимченко.

Влияние антигенов, полученных из рекомбинантного штамма Bacillus anthracis 55ΔTPA-1Spo — на органы и ткани иммунизированных животных

Штаммы

Рекомбинантный аспорогенный штамм B. anthracis 55ΔTPA-1Spo , который продуцирует патент № 2321629). Фенотипические характеристики и плазмидный состав штамма были следующими: Cap (pXO2 ), Tox (pXO1 ) и Km r (pUB110PA-1).Штамм предоставлен Государственной коллекцией патогенных бактерий (Всероссийский научно-исследовательский институт борьбы с зубным налётом микробов).

Лабораторные животные

Опыты проводились на мышах линии BALB / c (20 ± 2 г) и морских свинках (300 ± 20 г) из питомника Российского научно-исследовательского института против зубного налета микробов. Биомодели содержались на стандартной диете с достаточным количеством воды в соответствии с требованиями гуманного содержания и использования животных в экспериментальных исследованиях.

Питательные среды

Использовали агар Хоттингера и бульон (Российский научно-исследовательский институт борьбы с зубным налетом микробов). При необходимости добавляли канамицин (25 мкг / мл) (Sigma, США) и триптон (20 мг / мл) (Roeper, Германия).

Культивирование аспорогенного рекомбинантного штамма

Штамм B. anthracis 55ΔTPA-1Spo высевали из ампул на чашки с агаром Хоттингера (pH 7,2–7,4), содержащим селективный антибиотик (канамицин) в концентрации 25 мкг. / мл и инкубировали при 37 ° C в течение 18 часов.

Одну микробную петлю 18-часовой агаровой культуры штамма-продуцента добавляли в наклонные пробирки с агаром Хоттингера, содержащие канамицин (25 мкг / мл), и выращивали при 37 ° C в течение 8 часов для получения бактериальной культуры первого пассажа. . Биомассу дополнительно смывали 1 мл охлажденного раствора 0,85% хлорида натрия (pH 7,2), добавляемого в каждую пробирку.

Полученную микробную суспензию штамма B. anthracis 55ΔTPA-1Spo переносили в скошенные пробирки с агаром Хоттингера, содержащие канамицин (25 мкг / мл), и снова инкубировали при 37 ° C в течение 18 ч для получения бактериального культура второго прохождения.Затем микробную массу смывали с поверхности агара путем добавления 3 мл охлажденного 0,85% раствора хлорида натрия (pH 7,2) в каждый флакон. Суспензию клеток, собранную после обоих пассажей, переносили в один и тот же стерильный флакон и разбавляли 0,85% -ным раствором хлорида натрия (pH 7,2) до приблизительной концентрации 50 × 10 9 клеток / мл. В дальнейшем культура-продуцент использовалась в качестве инокулята для ферментера в количестве 10 мл суспензии клеток на 1 л среды.

Выращивание B.anthracis 55ΔTPA-1Spo проводили в больших объемах в экспериментальном ферментере с рабочим объемом 14 л и автоматическим поддержанием параметров окружающей среды. Перед выращиванием проводили стандартные процедуры подготовки биореактора, фильтров и системы очистки. Питательную среду (бульон Хоттингера, 5 л) вводили насосом при глубине вакуума 40–53 кПа. Стерилизацию проводили при 121 ° C и давлении 110 кПа в течение 30 мин.После стерилизации и установки в биореакторе температуры 37 ° C стерильный раствор триптона добавляли к питательной среде согласно правилам асептики до конечной концентрации не менее 20 мг / мл. Пока культура выращивалась при 37 ° C, бульон в реакторе непрерывно аэрировали путем перемешивания механической мешалкой со скоростью 150 об / мин. Количество подаваемого воздуха составляло 0,5–0,6 л / мин на 1 л питательной среды. Перемешивание и подачу воздуха прекращали через 16 ч и добавляли 2 мМ ЭДТА (Sigma, США) на 1 л среды, тем самым прекращая рост культуры.

Разделение и стерилизация клеточной биомассы фильтрата культуры

Небольшие объемы CL (до 1 л) стерилизовали с помощью фильтрационного устройства Nalgene объемом 500 мл (США) с фильтрующей мембраной 0,2 мкм и разделяли на фракцию фильтрата культуры, содержащую rPA и фракция клеточной массы, содержащая EA1 (супернатант, полученный из биомассы). Разделение биомассы клеток и одновременная стерилизация полученного фильтрата культуры проводились на приборе с 0.2 мкм мембрана для микрофильтрации Vivaflow 200 (Sartorius, Германия) при использовании больших объемов культуры штамма-продуцента. Для этого после прекращения культивирования ХЛ подавали в емкость фильтрационной установки, а процесс концентрирования (фильтрации) проводили при рабочем давлении 250 кПа до тех пор, пока объем обрабатываемого продукта, содержащий клеточную массу, не уменьшился не менее чем на десять раз. Отделенный стерильный фильтрат культуры, содержащий PA, и концентрат клеточной биомассы, содержащий EA1, подвергали дальнейшей обработке после специфического контроля стерильности.

Выделение и хроматографическая очистка Защитного антигена

Стерильный фильтрат культуры разводили в соотношении 1: 1 (об. / об.) буфером, содержащим: 50 мМ раствор хлорида натрия (Нева-Реактив, Россия), 25 мМ диэтаноламин (Sigma) и 2 мМ ЭДТА; pH 8,9. Затем раствор концентрировали приблизительно 20 раз фильтрацией (приблизительное рабочее давление 250 кПа) с помощью устройства Vivaflow 200 (Sartorius) с номинальной минимальной молекулярной массой 30 кДа. Диафильтрацию проводили на той же установке с десятикратным объемом указанного выше буфера, который добавляли в емкость с концентрированным продуктом.

Последующую очистку проводили на хроматографической системе BioLogic Duo Flow TM (BioRad, США). Хроматографическую колонку (90 × 90 мм) заполняли 100 мл смолы Macro Prep 50Q (BioRad), дегазировали и промывали равным объемом буфера, содержащего 1 М раствор хлорида натрия. Затем колонку уравновешивали пропусканием десяти последовательных объемов буфера (pH 8.9), содержащий 25 мМ диэтаноламина, 50 мМ хлорида натрия и 2 мМ EDTA и один объем того же буфера (pH 8,9) с добавлением 30 мМ раствора хлорида калия при скорости потока 10 мл / мин. Концентрированный фильтрат культуры после диализа (объем для связывания смолы) наносили на колонку с Macro Prep 50Q. Белки, которые не связались с носителем, были собраны. Затем смолу промывали буфером для диафильтрации, содержащим 30 мМ хлорида калия, в объеме, равном объему носителя.Обе фракции объединились.

Полученный препарат концентрировали десять раз, как описано выше. Диафильтрацию проводили последовательно с десятикратным объемом буфера (pH 8,9), содержащим 50 мМ хлорида натрия, 25 мМ диэтаноламина, 2 М EDTA, и десятикратным объемом буфера (pH 10,0), содержащего 145 мМ ацетата аммония и 2 мМ EDTA. Затем препарат помещали в небольшие емкости и хранили при –70 ° C.

На следующем этапе хроматографическая колонка (25 × 800 мм) заполнялась носителем Sephacryl-HR300 (BioRad, США) для гель-фильтрации и уравновешивалась тремя объемами буферного раствора (pH 8.0), содержащий следующее: 0,1 М трис, 1 мМ EDTA и 50 мМ хлорид натрия. Система была запрограммирована на скорость потока 2 мл / мин. Препарат размораживали и наносили на колонку (сразу весь образец) в объеме, не превышающем 3% от объема геля. Концентрация белка в исходном препарате не превышала 2,5 мг / мл. Выход белка контролировали спектрофотометрически при длине волны 280 нм. Образцы, содержащие ПА, собирали и объединяли после 10–15 хроматографических циклов.

На заключительном этапе rPA концентрировали (примерно в десять раз) с использованием ультрафильтрационной мембраны Vivaflow 200 с номинальной элиминацией молекулярной массы 30 кДа или концентраторов Vivaspin-20 (Sartorius) с тем же диаметром пор. №

Степень очистки ПА определяли по результатам электрофореза в денатурирующих условиях в 10% -ном полиакриламидном геле. Концентрацию белка измеряли по оптической плотности на спектрофотометре при длине волны 280 нм.Очищенный и лиофилизированный rPA хранили при –70 и 0–8 ° C соответственно.

Выделение и очистка белка EA1 слоя S

Клеточную массу, собранную центрифугированием, отмывали от оставшейся среды 0,85% -ным раствором хлорида натрия для выделения EA1. Биомассу (500 мл) смешивали с 50 мл экстрагирующего буфера, который содержал следующее: 5 мМ трис-гидрохлорид, 1% SDS и 5 мМ 2-меркаптоэтанол. Затем смесь нагревали на водяной бане при 70 ° C в течение 30 мин, охлаждали и центрифугировали при 7000 g (4 ° C, 30 мин).

Полученный супернатант стерилизовали на фильтровальной установке с помощью микрофильтрационной мембраны Vivaflow 200 толщиной 0,2 мкм при рабочем давлении примерно 250 кПа. Контроль специфической стерильности осуществляли путем посева супернатанта на твердую среду или инокуляции в жидкую среду (0,1 мл на чашку с агаром Хоттингера или на пробирку с бульоном Хоттингера) и последующей инкубацией при 37 ° C.

На следующем этапе клеточный экстракт подвергали диафильтрации десятью объемами буфера (pH 8.0), содержащий 0,1 М трис-гидрохлорид и 2 мМ ЭДТА, с использованием устройства Vivaflow 200 с номинальной элиминацией молекулярной массы 30 кДа. Промежуточный продукт, содержащий EA1, хранили при –70 ° C. Белок

EA1 очищали с помощью хроматографической системы BioLogic Duo Flow TM . Хроматографическую колонку (26 × 200 мм) заполняли предварительно декантированным гидроксиапатитом (Sigma, США) и уравновешивали десятью свободными объемами буфера (5 мМ K 2 HPO 4 / KH 2 PO 4 , pH 6. 8) при скорости потока 10 мл / мин до достижения стабильного исходного уровня. Промежуточный продукт оттаивали и наносили на колонку. Затем белок элюировали пропусканием трех свободных объемов 0–1 М линейного градиента фосфата калия (K 2 HPO 4 / KH 2 PO 4 ) через колонку. Выход белка контролировали спектрофотометрически (при длине волны 280 нм). Фракции, содержащие EA1, собирали и объединяли после 10–15 циклов очистки.

Вторую стадию очистки проводили на том же носителе по аналогичной методике. Очищенный белок EA1 подвергали диафильтрации с десятью объемами бидистиллированной воды при 4 ° C с помощью устройства Vivaflow 200 (30 кДа). При необходимости препарат EA1-белка концентрировали, помещали в небольшие контейнеры и хранили при –70 ° C. Лиофилизированные препараты хранили при 8 ° C.

Электрофорез белков

Электрофоретическое разделение белков проводили в 10% полиакриламидном геле с SDS.Каждый образец (20 мкл) смешивали с буфером (pH 6,8), содержащим следующее: 0,125 М трис-гидрохлорид, 4% SDS, 20% глицерин, 2% 2-меркаптоэтанол и 0,03 мМ бромфенолового синего. Соотношение образца и буфера составляло 1: 1. Затем смесь нагревали при 100 ° C в течение 90 с и вносили в лунки полиакриламидного геля (15 мкл на лунку). Электрофорез проводили в вертикальной камере (Amersham, США) в буфере (pH 8,3), содержащем 25 мМ Трис, 192 мМ глицин и 3,5 мМ SDS. Гель окрашивали в растворе, содержащем 0.3 мМ кумасси бриллиантовый синий, 40% этанол (Брынцалов А.Ферейн) и 7% ледяная уксусная кислота (Panreac, Испания) в течение 1–2 часов. Затем гель помещали в раствор, содержащий 5% этанола и 7% ледяной уксусной кислоты, и инкубировали при непрерывном встряхивании до получения видимого результата.

Определение концентрации белковых препаратов

Концентрацию белка в препаратах определяли спектрофотометрически [8].

Иммуноэлектронная микроскопия

Мечение антител коллоидным золотом проводили по методике, описанной ранее [9].Препараты для иммуноэлектронной микроскопии готовили по методике, описанной J. Farchaus et al. [10] с нашими модификациями [9]. Препараты анализировали на электронном микроскопе Hitachi HU-12A (Япония).

Иммунизация лабораторных животных

Иммунизация лабораторных животных проводилась подкожно в зону внутренней поверхности бедра один или два раза с интервалом в две недели. Морским свинкам и линейным мышам вводили однократную дозу в объеме 0 мкг.5 и 0,2 мл соответственно. Животным контрольных групп вводили стерильный 0,9% раствор хлорида натрия (0,2 мл для мышей или 0,5 мл для морских свинок).

Выделение лимфоцитов вилочковой железы и селезенки

Мышей линии

разделили на группы, состоящие из шести животных, каждая из которых была иммунизирована тестируемыми препаратами. Биомодели контрольной группы остались нетронутыми. Через 4 часа после иммунизации животных умерщвляли смещением шейных позвонков в соответствии с Директивой No.2010/63 / EC «О защите животных, используемых в научных целях» Европейского парламента и Совета Европейского Союза от 22 сентября 2010 г. Лимфоциты выделяли общепринятыми методами [11].

Выделение РНК из лимфоцитов тимуса и Селезенка, обратная транскрипция и ПЦР

Лимфоциты селезенки и тимуса, хранящиеся в растворе Хенкса при температуре –70 ° C, оттаивали до комнатной температуры. РНК из клеток выделяли с помощью набора реагентов РИБО-сорб (ИнтерЛабСервис, Россия) согласно рекомендациям производителя.Обратную транскрипцию проводили с помощью набора Reverta (InterLabServis) в соответствии с инструкциями производителя. Препарат кДНК хранили не более 12 месяцев при температуре не выше –70 ° С. ПЦР проводили с праймерами к фрагментам генов, кодирующих β-актин (положительный контроль) и TLR типов 2, 4 и 6. Праймеры для ПЦР, использованные в исследовании, имели следующие последовательности [12]:

β- актин-F 5′-TGGAATCCTGTGGCATCCATGAAAC-3 ‘

бета-актин-R 5′-TAAAACGCAGCTCAGTAACAGTCCG-3′

TLR2-F 5′-CAGCTTAAAGGGCGGGTCAC-3 ‘9002GCCC4 TLGGGTCAC-3’ 9002GCC4 TLGGCA-3 ‘9002GCCC4 TLR4-F 5’-AGTGGGTCAAGGAACAGAAGCA-3 ‘

TLR4-R 5′-CTTTACCAGCTCATTTCTCACC-3′

TLR6-F 5′-AGTGCTGCCAAGTTCCGACAT-3 ‘

0

TLRGC-RAGC-3′

TLRGC-RAGC-RAGC6 синтезированы в ВНИИ микробов против зубного налета на автоматическом синтезаторе ДНК АСМ-800 (Биосеть, Россия). Амплификацию фрагментов гена проводили на программируемом термоциклере Терцик (ДНК-технология, Россия) по следующему профилю: 1 цикл, 95 ° С, 5 мин; 30 циклов, 95 ° C, 1 мин; 1 цикл, 60 ° C, 1 мин; 1 цикл, 72 ° С, 1 мин; и заключительный цикл, 5 мин, 72 ° С. Горизонтальную камеру (BioRad) использовали для электрофоретического анализа продуктов ПЦР в 2% агарозном геле.

Определение пролиферативной активности иммунокомпетентных клеток методом проточной цитометрии

Лимфоциты тимуса и селезенки лабораторных животных, фиксированные в этаноле, собирали центрифугированием при 250–300 g в течение 10 мин.Добавляли калий-фосфатный буфер (pH 7,3 ± 0,1), содержащий 50 мкг / мл йодида пропидия (Thermo Fisher Scientific, США), 100 мкг / мл РНКазы (Fermentas, США) и 0,1% Triton X-100 (Sigma). к полученному осадку. Через 15–20 мин воздействия образцы смеси анализировали на проточном цитометре Dako Cytomation Cyan ADP (Dako Cytomation, Дания). Результаты анализировали согласно протоколу производителя оборудования и реагентов.

Апоптоз оценивали по накоплению гиподиплоидных клеток (<2С ДНК на клетку) в пике, расположенном слева от пика, соответствующего диплоидным клеткам.Активацию иммунокомпетентных клеток определяли по их количеству на стадии пролиферации, которая включала стадии S + G 2 + M клеточного цикла (> 2C ДНК на клетку). Также определяли соотношение количества клеток на стадии апоптоза и пролиферации. Значение этого индекса ниже 1 свидетельствовало об отсутствии повреждения исследуемых препаратов на иммунокомпетентных клетках.

Образцы цельной дефибринированной крови человека (здоровый донор, 3 мл) с добавленными антигенами сибирской язвы (rPA или EA1) (10 мкг) в стерильном физиологическом растворе использовали в качестве положительного контроля при определении цитотоксичности антигенных препаратов in vitro.Пробирки с отрицательным контролем содержали физиологический раствор вместо антигенов. Инкубацию проводили в течение 1 дня при 37 ° C. Цитофлуориметрический контроль выполняли, как описано выше.

После инкубации антигенных препаратов с дефибринированной кровью выделяли лейкоциты и окрашивали раствором, содержащим митрамицин и бромистый этидий (Sigma).

Морфологические и гистологические исследования

Иммунизированных морских свинок умерщвляли хлороформом в определенные промежутки времени (по три особи одновременно) для определения токсичности по морфологическим показателям.После вскрытия было проведено обследование и проведено макрометрическое исследование массы и размеров органов животных.

Для гистологического исследования отбирали ткани печени, сердца, легких, почек, надпочечников, кожи, тимуса, селезенки, а также местных и удаленных лимфатических узлов животных. Гистологический материал фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина. Дальнейшее лечение проводилось по стандартной методике [13]; Готовые полутонкие срезы окрашивали гематоксилином и эозином (Merck, США).Материал исследовали под микроскопом Olympus CX31 при увеличении в 40–200 раз. Морфометрические характеристики оценивали с помощью плотно-морфометрической программы пакета программ МЕКОС-ТС (версия 2.1.0.0).

Среднее количество клубочков определяли в поле зрения разреза почек. Количество звездчатых ретикулоэндотелиоцитов (клеток Купфера) определяли в поле зрения среза печени. Перечисляли лимфатические фолликулы в лимфоидных органах.

Количество почечных тельцов (клубочков) в измененном функциональном состоянии (полнокровие капиллярной сети, морщинистые клубочки, отек сосудистых петель) было представлено как процент клубочков без видимых изменений.

Активность лимфоидных органов характеризовали полуколичественным методом (в баллах от 0 до 3). Отсутствие активности было присвоено 0 баллов; слабо выраженная активность — 1 балл; умеренно выраженная активность — 2 балла; и достоверно выраженная активность составила 3 ​​балла.Тест на наличие фолликулов лимфатических узлов (зоны В) оценивался на 3 балла, если в этих зонах присутствовали так называемые световые центры, богатые бластными формами клеток на стадии митоза и макрофагами, содержащими фрагменты ядер. На средний уровень активности фолликулов (2 балла) указывало увеличение количества эпителиоидных клеток в светлых центрах и четкий периферический край, состоящий из небольших лимфоцитов вокруг центров. В фолликулах со слабой активностью (1 балл) световые центры содержали мало клеток (характеризуются «пустыми зонами») и были окружены широкой мантийной зоной из мелких лимфоцитов.Фолликулы без светлых центров считались неактивными (0 баллов).

Активность медуллярных тяжей B-зон и T-зон (паракортикальных зон) считалась нулевой (0 баллов), если не наблюдалась клеточная гиперплазия. Преобладание бластных форм указывало на 3 точки активности; смешанный состав (бласты и неактивированные лимфоциты или зрелые плазматические клетки) показал 2 точки активности; а преобладание неактивированных клеток с небольшим количеством бластных элементов оценивали как 1 балл активности.

Аналогичный подход был использован для оценки активности Т- и В-зон в селезенке, где увеличение гиперпластической активности может сопровождаться увеличением размера этих структур, как в лимфатических узлах.

Статистические методы

Статистический расчет экспериментальных данных проводился стандартными методами: вычислением среднего арифметического абсолютных и относительных величин ( M ), средней ошибки среднего арифметического ( m ) и вычисления Доверительный коэффициент разницы средних ( т ).

ИССЛЕДОВАНИЕ УРОВНЯ ИММУНИТЕТА ВИРУСА МОРС В КОНКРЕТНОЙ ГРУППЕ НАСЕЛЕНИЯ …: Ingenta Connect

Корь остается одной из основных причин детской смертности в развивающихся странах и периодически приводит к возникновению крупных вспышек в разных странах. Эта проблема стала особенно актуальной после того, как ВОЗ приняла стратегический план борьбы с корью. В плане поставлена ​​цель снизить заболеваемость корью в глобальном масштабе. В 2010–2011 гг. Крупные вспышки кори были зарегистрированы на африканском континенте: в Демократической Республике Конго на юге Африки, в Нигерии и в некоторых других африканских странах.В Гвинейской Республике вакцинация против кори проводится однократно детям в возрасте 9 месяцев. В 2014–2015 гг. Отмечен рост заболеваемости корью. Материалы и методы. С помощью ИФА исследованы 22 образца сыворотки крови здоровых взрослых гвинейцев в возрасте от 24 до 71 года и 136 образцов сыворотки крови, полученные от детей и взрослых — пациентов больницы города Кинди (Гвинейская Республика). Клинические образцы поступили в 2015–2016 гг. Использовались следующие тест-системы: тест-системы производства Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG (Германия): «ИФА на вирус кори (IGM)», «ИФА на вирус кори (IgG)»; «Авидность: иммуноферментный анализ на вирус кори (IgG)», а также тест-система «Вектор-Бест» на IgM-корь (Россия).Результаты и обсуждение. Только у одного из 22 обследованных здоровых людей не обнаружены IgG-антитела к вирусу кори. Количественный анализ титра IgG-антител, а также их авидность среди 21 человека свидетельствуют о перенесении кори в недавнем или отдаленном прошлом. Проведя исследование 116 образцов сыворотки крови пациентов больницы в Кинди на предмет IgM-антител к кори, ретроспективно выявлен случай кори у ребенка 2,5 лет. Изучив 130 образцов сыворотки крови на IgG-антитела к вирусу кори, 12.Выявлено 3% серонегативных к кори лиц. Все обследованные лица в возрасте 23 лет и старше были серопозитивны к вирусу кори, 60% из них имели высокие титры антител. Антитела к вирусу кори отсутствовали или были определены в низких титрах у 76,2% людей до 22 лет, что может свидетельствовать о нарушениях плановой вакцинации детей из-за вспышки Эболы. Чтобы снизить риск возникновения крупных вспышек кори в районах, свободных от передачи вируса Эбола, ВОЗ рекомендует проводить массовые кампании вакцинации против кори.

Нет ссылок

Без цитирования

Нет дополнительных данных

Нет статей СМИ

Без показателей

Тип документа: Исследовательская статья

Филиалы: 1: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Роспотребнадзор), Москва, Российская Федерация 2: Санкт-Петербургский институт Пастера, Санкт-Петербург, Российская Федерация 3: Всероссийский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов, Российская Федерация 4: Институт прикладной биологии в Гвинее, Киндия, Гвинейская Республика

Дата публикации: 1 января 2016 г.

ИССЛЕДОВАНИЕ УРОВНЯ ИММУНИТЕТА ВИРУСА КОРЬЯ В КОНКРЕТНОЙ ГРУППЕ НАСЕЛЕНИЯ…: Ingenta Connect

Цель глобальной элиминации кори к 2010–2020 гг. Была признана одним из приоритетов программы ВОЗ «Здоровье для всех в 21 веке» (1998 г.). Однако вспышки кори произошли в 2010–2016 гг. В странах с высоким уровнем охвата прививками от кори, включая США и некоторые европейские страны. Крупные вспышки кори были также зарегистрированы на африканском континенте, в частности в Гвинейской Республике, в результате сокращения количества прививок от кори. охват в связи с эпидемией вируса Эбола в Гвинейской Республике в 2014–2015 гг.ВОЗ рекомендует проводить плановую вакцинацию против кори, а также дополнительные мероприятия по иммунизации после прекращения передачи вируса Эбола. Эффективность мероприятий однозначно связана с выявлением эпидемически значимых для возрастных групп дополнительной иммунизации. Целью исследования было оценить уровень иммунитета к кори у разных возрастных групп населения Гвинейской Республики. Материалы и методы. Двадцать пять образцов сыворотки крови здоровых взрослых гвинейцев в возрасте 28–66 лет и 121 образец сыворотки крови подростков и взрослых, госпитализированных в больницу города Киндиа (Гвинейская Республика) для лечения в помещении, были протестированы с помощью ELISA.Специфические антитела к вирусу кори выявляли с помощью следующих коммерческих тест-систем ELISA, производимых компанией Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG (Германия): IgM-антитела — методом иммуноферментного анализа на вирус кори (IgM), IgG-антитела — компанией Anti -ИФА на вирус кори (IgG) », антитела к вирусу кори IgG-авидности — от« Авидность: иммуноферментный анализ на вирус кори (IgG) ». Часть сывороток исследовали с помощью тест-систем ИФА «Вектор-Бест IgM-кори» и «Вектор-Бест IgG-корь» (Россия). Результаты и обсуждение.Сравнительное количественное исследование уровня иммунитета к кори (т. Е. Титров IgG-антител) здоровых взрослых гвинейцев в 2015 и 2016 годах выявило отсутствие антител IgG в сыворотке только у одного человека в возрасте 30 лет. В 68,7% случаев изучались титры IgG-антител. за год существенно не изменилось. В большей части (68,0%) из 25 исследованных сывороток были обнаружены высокие уровни титров IgG-антител (≥ 1000 МЕ / л). Кроме того, в большинстве случаев выявлены IgG-антитела высокой авидности (87.5%) образцов сыворотки крови, что свидетельствует об анамнезе заражения вирусом кори в прошлом среди обследованных взрослых в возрасте 28+. ИФА 121 образца сыворотки крови пациентов с различным клиническим диагнозом, находящихся на лечении в домашних условиях в больнице города Киндиа (Гвинейская Республика), выявило 21 пациента с отрицательными антителами против кори к кори. Среди пациентов с известным возрастом (n = 113) IgG-антитела к вирусу кори были определены в 78,8% исследованных проб. При этом в каждой возрастной группе выявлены как серонегативные пациенты, так и пациенты с низкими титрами специфических IgG-антител к вирусу кори.Среди пациентов в возрасте 18–40 лет доля серонегативных пациентов составила 28,5 ± 5,1%. Эта когорта может быть восприимчивой к заражению вирусом кори и способствовать поддержке, а также развитию активного эпидемического процесса в случае вспышек кори в Гвинейской Республике.

Нет ссылок

Без цитирования

Нет дополнительных данных

Нет статей СМИ

Без показателей

Тип документа: Исследовательская статья

Филиалы: 1: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Роспотребнадзор) 2: Санкт-ПетербургПетербургский институт Пастера 3: Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб» 4: Институт прикладной биологии в Гвинее

Дата публикации: 1 января 2017 г.

Exclusive: Китайская Huawei, не оправдающаяся от санкций США, планирует наброситься на электромобили

Джули Чжу и Илей Сунь

ГОНКОНГ / ПЕКИН (Рейтер) — Китайская Huawei планирует выпускать электромобили под своим собственным брендом и может выпустить некоторые модели уже сейчас. год, по словам четырех источников, крупнейшего в мире производителя телекоммуникационного оборудования, пострадавшего от У.С. санкции, исследует стратегический сдвиг.

Huawei Technologies Co Ltd ведет переговоры с государственной Changan Automobile и другими автопроизводителями об использовании их автомобильных заводов для производства электромобилей (EV), по словам двух людей, знакомых с этим вопросом.

Huawei также ведет переговоры с поддерживаемой Пекином компанией BAIC Group BluePark New Energy Technology относительно производства своих электромобилей, сказал один из двух и отдельное лицо, непосредственно знакомое с этим вопросом.

Этот план знаменует собой потенциально серьезный сдвиг в направлении Huawei после почти двух лет работы U.Санкции, которые ограничили его доступ к ключевым цепочкам поставок, вынудили его продать часть своего бизнеса смартфонов, чтобы сохранить бренд.

Компания Huawei была внесена администрацией Трампа в черный список торговли по соображениям национальной безопасности. Многие руководители отрасли не видят шансов на то, что его преемник отменит блокировку продажи американских технологий и микросхем на миллиарды долларов китайской компании, которая отрицает правонарушения.

Представитель Huawei отрицал, что компания планирует проектировать электромобили или производить автомобили под брендом Huawei.

«Huawei не является производителем автомобилей. Однако с помощью ИКТ (информационно-коммуникационных технологий) мы стремимся стать поставщиком цифровых автомобилей и новых компонентов, что позволит производителям автомобилей (производителям оригинального оборудования) создавать более совершенные автомобили».

Huawei начала внутреннее проектирование электромобилей и обращаться к поставщикам дома с целью официально запустить проект уже в этом году, сообщили три источника.

Ричард Ю, глава группы потребительского бизнеса Huawei, который привел компанию к тому, чтобы стать одним из крупнейших в мире производителей смартфонов, переключит свое внимание на электромобили, сообщил один из источников. По словам другого источника, электромобили будут нацелены на сегмент массового рынка.

История продолжается

Все источники отказались называть имена, поскольку обсуждения являются частными.

Компания Changan из Чунцина, производящая автомобили совместно с Ford Motor Co, отказалась от комментариев. BAIC BluePark не ответила на неоднократные запросы о комментариях.

Акции основной листинговой компании Changan Chongqing Changan Automobile выросли на 8% после сообщения Reuters об обсуждениях. Акции BluePark подскочили на максимальный дневной лимит в 10%.

РАСТУЩИЙ РЫНОК электромобилей

Китайские технологические компании уделяют больше внимания электромобилям на крупнейшем в мире рынке таких транспортных средств, поскольку Пекин активно продвигает более экологичные автомобили как средство сокращения хронического загрязнения воздуха.

Ожидается, что к 2025 году продажи транспортных средств на новой энергии (NEV), включая электромобили, работающие только на аккумуляторных батареях, а также автомобили с подключаемым гибридным двигателем и водородными топливными элементами, составят 20% от общего годового объема продаж автомобилей в Китае.

Отраслевые прогнозы Продажи NEV в Китае на уровне 1.8 миллионов единиц в этом году по сравнению с 1,3 миллиона в 2020 году.

В амбициозных планах Huawei по производству собственных автомобилей компания присоединится к группе азиатских технологических компаний, которые сделали аналогичные объявления в последние месяцы, включая Baidu Inc и Foxconn.

«Новые и сложные ограничения США на поставку полупроводников для Huawei медленно душат компанию», — сказал Дэн Ван, технологический аналитик исследовательской фирмы Gavekal Dragonomics.

«Поэтому логично, что компания переходит на менее энергоемкие отрасли, чтобы поддерживать свою деятельность.»

В Соединенных Штатах Amazon.com Inc и Alphabet Inc также разрабатывают технологии, связанные с автомобилями, или инвестируют в стартапы, связанные с умными автомобилями.

Компания Huawei уже много лет разрабатывает ряд технологий для электромобилей, включая системы программного обеспечения для автомобилей. , датчики для автомобилей и коммуникационное оборудование 5G.

Компания также установила партнерские отношения с такими автопроизводителями, как Daimler AG, General Motors Co и SAIC Motor, для совместной разработки интеллектуальных автомобильных технологий.

Она ускорила набор инженеров для автомобильных технологий с 2018 года.

На этой неделе Huawei получила как минимум четыре патента на электромобили, включая методы зарядки между электромобилями и проверки состояния аккумулятора, согласно официальным данным о патентах Китая.

Продвижение Huawei на рынок электромобилей в настоящее время осуществляется отдельно от совместной компании по производству интеллектуальных транспортных средств, которую она основала вместе с Changan и производителем аккумуляторов для электромобилей CATL в ноябре, сообщили два источника.

(Отчетность Джули Чжу в Гонконге и Yilei Sun в Пекине; дополнительный отчет Дэвида Киртона в Шэньчжэне; редактирование Сумита Чаттерджи и Ричарда Пуллина)

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *