Приготовление толстой капли крови на малярийный плазмодий: Исследование крови на малярию

Разное

Содержание

Диагностика малярии. Много фото

Автор статей и главный редактор
Лисневич Наталья Николаевна
врач высшей категории, стаж более 30 лет, г. Калуга,
[email protected]


Диагностика малярии основана на данных клинических проявлений, эпидемиологического расследования и лабораторных методах исследования, включающих методики выявления паразитов, их количества, видовую принадлежность и обнаружение антител в организме исследуемого. Обследованию в первую очередь подлежат пациенты из группы риска — прибывшие из эндемичных по малярии регионов, лихорадка у которых появилась в первые два года после выезда из этих регионов.

Рис. 1. Забор крови для приготовления препарата «толстая капля».

Рис. 2. Окраска и вид препаратов «толстая капля» и тонкий мазок.

Диагностика малярии с использованием микроскопического метода

Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка, позволяющая обнаружить паразитов, их количество и видовую принадлежность, является ведущим методом диагностики малярии. Она проводится при малейшем подозрении на это заболевание, независимо от температурной реакции пациента. Для определения видовой принадлежности паразитов и стадии заболевания используется тонкий мазок крови. В толстой капле локализуется больше паразитов, чем в мазке. Этот метод диагностики превосходит методику определения наличия возбудителей малярии в тонком мазке крови в 20 — 40 раз.

В периферической крови паразиты обнаруживаются через определенное время после заражения:

  • при 3-х дневной малярии — через 8 — 12 дней,
  • при тропической — от пяти с половиной дней до 12,
  • при 4-х дневной — через 15 — 21 день,
  • при малярии, подобной 3-х дневной — через 9 — 15 дней.

Паразиты в крови присутствуют как во время лихорадочного приступа, так и в межприступный период и при паразитоносительстве.

Рис. 3. Техника приготовления тонкого мазка.

Техника приготовления «толстой» капли

Полученная при проколе пальца капля крови наносится на предварительно очищенное и сухое предметное стекло и размазывается до получения пятна 1 см в диаметре. После подсушивания на воздухе предметное стекло заливается краской Романовского—Гимзы. По истечении 40-минутной экспозиции препарат ополаскивается под проточной водой и подсушивается при комнатной температуре, установленный в вертикальное положение.

Под микроскопом исследуется не менее 100 полей зрения. Более эффективным считается исследование 2-х толстых капель в течение 2,5 минут, чем 1-й капли в течение 5-и минут. 100 полей зрения просматриваются даже в том случае, когда малярийные плазмодии выявились уже в первых полях. Это производится для того, чтобы не пропустить микст-инфекцию.

Рис. 4. Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка является ведущим методом диагностики малярии.

Порог обнаружения паразитов

Порогом обнаружения малярийных плазмодиев называется минимальная концентрация возбудителей, которую возможно выявить при микроскопировании препарата «толстая капля». При заболевании этот показатель составляет 5 паразитов в одном микролитре крови. При просмотре 100 полей зрения обследуется 0,2 мкл крови.

При наличии косвенных признаков малярии (пребывание в эндемичных зонах, гипохромная анемия, обнаружение пигмента в моноцитах) и отрицательных результатов исследования препаратов «толстая капля», исследование вновь повторяется более тщательно, и не одно, а серия, состоящая из 4 — 6 препаратов при одном уколе, либо полученных при заборе крови, который производится 4 — 6 раз в сутки в течение 2 — 3 дней.

Интенсивность паразитемии определяется знаком «+».

  • 1 (+) обозначает выявление от 1 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 5 — 50 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 2 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 50 — 500 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 3 (+) обозначает выявление от 1 до 10 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 500 — 5000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 4 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 5000 — 50000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 5 (+) обозначает выявление более 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует более 50000 плазмодиям в одном мкл крови.

Интенсивность паразитемии можно вычислить по количеству паразитов на 100 эритроцитов в 10 полях зрения, либо по соотношению числа паразитов и лейкоцитов в 1 мкл крови.

По интенсивности паразитемии определяется прогноз при тропической малярии. При других видах заболевания более 2% эритроцитов не поражается.

Формы малярийных плазмодиев в разные фазы развития

В препарате крови «толстая капля» возможно определить плазмодии малярии, находящиеся на разных стадиях развития — трофозоида, кольца, шизонта, морулы, и гаметы.

Рис. 5. Plasmodium ovale имеет округлую форму.

Рис. 6. Молодой трофозоит Plasmodium vivax в эритроците.

Рис. 7. Юные трофозоиды Plasmodium falciparum.

Рис. 8. Кольцевидные трофозоиты Plasmodium vivax.

Рис. 9. Амебовидные шизонты Plasmodium vivax.

Рис. 10. Зрелые шизонты Plasmodium vivax.

Рис. 11. Женские гаметоциты возбудителей тропической малярии.

Рис. 12. Гаметоциты плазмодий тропической малярии имеют полулунную форму, плазмодии других видов заболевания — округлую.

Рис. 13. В процессе роста в цитоплазме паразитов накапливается пигмент. На фото Р. vivax.

Контроль эффективности лечения

При адекватном лечении малярии уровень паразитемии в течение суток снижается на 25% и более, а через 3 суток от начала лечения он должен составлять не более 25% от исходного. В случае обнаружения паразитов на 4-е сутки от начала лечения свидетельствует о развитии лекарственной резистентности возбудителей.

Кратность проведения исследования

При выявлении малярии микроскопическое исследование препаратов крови проводится ежедневно. При тяжелой форме тропической малярии микроскопия проводится 2 раза в день до исчезновения возбудителей в крови и далее еженедельно до 28 дня лечения с целью оценки его эффективности и выявления резистентности к противомалярийным препаратам.

Рис. 14. Эритроциты при инфицировании P. vivax и P. ovale увеличиваются, обесцвечиваются и деформируются, в них появляется токсическая зернистость.

При инфицировании P. malariae и P. falciparum форма и размеры эритроцитов не изменяется. На фото деформированные эритроциты больного малярией (микрофотография в сканирующем микроскопе).

к содержанию ↑

Иммунологические методы диагностики малярии

С помощью серодиагностики малярии возможно выявить в сыворотке крови пациента антитела и растворимые паразитарные антигены. Серологические реакции показаны к применению в случаях появления у больных лихорадки неясного генеза, гепатоспланомегалии, анемии, а также для исследования крови донора — предполагаемого источника инфекции. Серологические реакции применяются при эпидемиологическом наблюдении за лицами, проживающими в неблагополучных по малярии в прошлом территориях.

Чаще всего при диагностике малярии применяется НРИФ — непрямая реакция иммунофлуоресценции. Используются так же ИФА, РИГА и др. Внедряется в практику использование реакции энзим-меченых антител (РЭМА).

В случаях очень низкой паразитемии показано применение ПЦР (полимеразной цепной реакции). Дороговизна и сложность применения данной методики не позволяет широко ее использовать.

Разработаны новые методы диагностики малярии — экспрессного микроскопического анализа препаратов крови с использованием флюоресцирующих красителей, позволяющие в течение двух минут выявить паразитов тропической малярии, количество которых более 60 в 1 мкл гемолизированой крови.

При малярии антитела появляются на 8 — 27 день паразитемии. Первыми появляются антитела IgM, затем — антитела IgG. Антитела после перенесенной малярии и успешного излечения могут длительно сохраняться в крови человека — от 0,5 до 2 и даже 20 лет.

Рис. 15. Чаще всего при диагностике малярии применяется НРИФ — непрямая реакция иммунофлуоресценции.

к содержанию ↑

Дифференциальная диагностика малярии

Малярию следует отличать от гриппа и других ОРВИ, кишечных инфекций, лептоспироза, желтой лихорадки, злокачественных форм вирусных гепатитов, тифо-паратифозных заболеваний, сепсиса, бруцеллеза, сепсиса, геморрагических лихорадок, заболеваний крови.

При коматозном состоянии малярию следует отличать от эпидемического цереброспинального менингита, уремической, печеночной и диабетической комы.

Иногда малярию следует дифференцировать с холециститом, холангитом, абсцессом печени, пиелонефритом и лимфогранулематозом.

Рис. 16. Рутинное исследование препарата «толстая капля» в регионах эндемичных по малярии.

Отказ от ответственности: Этот материал не предназначен для обеспечения диагностики, лечения или медицинских советов. Информация предоставлена только в информационных целях. Пожалуйста, проконсультируйтесь с врачом о любых медицинских и связанных со здоровьем диагнозах и методах лечения. Данная информация не должна рассматриваться в качестве замены консультации с врачом.

  ССЫЛКИ ПО ТЕМЕ Статьи раздела «Малярия»Самое популярное

ПОНРАВИЛАСЬ СТАТЬЯ?

Подпишитесь на нашу рассылку!

 

Тестовый контроль итогового уровня знаний.

Литература:

Учебник Н.А.Бакулиной и Э.Л.Краевой «Микробиология», стр.373-382

 

Учебник А.А. Воробьева и Ю.С. Кривошеина, стр 141-143, 161-163, 210-211 Учебник К.Д. Пяткина, Ю.С. Кривошеина, стр. 445-464

 

 

Студент ……………….. Преподаватель——————————

 

Приложение к теме


Аспергиллы — леечная плесень

 

 

  Противогрибковые антибиотики (нарушают проницаемость клеточной мембраны грибов. Выделены из разных видов стрептомицет. Например, гризеовульфин – из зеленой плесени Penicilium griseofulvum)
  1. Нистатин, интраназол   клотримазол, Используется в виде таблеток, мазей, свечей для лечения кандидомикозов слизистых оболочек рта, влагалища, желудочно-кишечного тракта, мочеполовых органов, кожи. Для профилактики при длительном приеме антибиотиков широкого спектра действия.
  2. Леворин,амфотерицин,пимофуцин   Применяется при кандидозе и аспиргиллезе легких и трихомониазе половых органов.
    3. Трихомицин,кетаназол     Применяется при трихомониазе и Candidosis.
  4. Микогептин и амфотерицин Используются микозах. при глубоких системных
  5. Гризеовульфин, флуконазол, лоцерил Назначается при дерматомикозах (парше, трихофитин, микроспории) и при поражениях лимфатических узлов костей этими грибками.

 

 

Время – 180 минут

Занятие 9

Тема: «Протозоология»

Цель: закрепить и углубить знания основ медицинской паразитологии, в частности — о патогенных простейших.

Задачи: знать:

— основы паразитологии,

— патогенные простейшие, их классификацию, морфологические и биологические свойства, патогенное действие, лабораторную диагностику и профилактику протозоонозов;

уметь:

— определять патогенного простейшего на слайдах, карточках и таблицах и ответить на вопросы в карточках,

— приготовить мазок и толстую каплю крови для исследования на наличие кровепаразитов,

— рассмотреть под микроскопом микропрепарат толстой капли крови и определить паразита,

— обучить пациента мерам личной профилактики протозойных болезней.

 

· Вопросы для обсуждения

1. Предмет и задачи паразитологии, типы паразитов.

2. Организм как среда обитания паразита.

3. Взаимоотношения в системе «хозяин-паразит».

4. Жизненный цикл паразитов, эпидемиология паразитарных болезней.

5. Природно-очаговые болезни.

6. Меры профилактики паразитарных болезней.

7. Общая характеристика типа Protozoa.

8. Характеристика классов простейших:

а) саркодовых: дизентерийная амеба, диагностика и профилактика; б) жгутиковых: трихомонады (трихомоноз), лямбии (лямблиоз), лейшмании (лейшманиоз), диагностика и профилактика;

в) инфузории (балантидиоз) — диагностика, профилактика;

г) споровики (малярийный плазмодий, токсоплазма) — диагностика и профилактика.

· Контроль исходного уровня знаний

· Самостоятельная работа

1. Определение патогенных простейших на слайдах и карточках, описание их свойств.

2. Изучение методики приготовления мазка и толстой капли крови. Определение паразита в микропрепарате.

Работа 1

Взять карточку-задание у преподавателя. Выполнить задание, изучая возбудителей по карточкам, слайдам и таблицам. Записать ответы на вопросы карточки. Зарисовать возбудителей протозойных болезней

 

Выполнение работы

 

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

…………………………………………………………………………………………

……………………………………………

Работа 2

а) Методика приготовления мазков и толстой капли крови для исследования на наличие кровепаразитов. Окрашивание мазков по Романовскому

Приготовление мазков крови

Мазок приготовляется из капли крови, взятой из пальца больного. Кончик пальца тщательно протирают спиртом или эфиром, дают коже высохнуть и, слегка сжав палец ниже места укола, делают укол в мякоть пальца стерильным скарификатором. Первую выступившую каплю крови стирают досуха кусочком ваты. Вторую каплю наносят на чистое, хорошо обезжиренное предметное стекло. Затем берут второе предметное стекло (желательно со шлифованным краем), прикладывают его к середине первого стекла под углом 45о и приближают его край к капле крови. При

соприкосновении со стеклом кровь растекается по его краю. В этот момент быстро скользящим движением продвигают шлифованное стекло в обратную сторону. При этом кровь увлекается за стеклом и ложится тонким мазком. Мазок высушивают на воздухе. Принято брать у больного два мазка крови, которые после высушивания отправляют в лабораторию.

Фиксация мазков производится в жидком фиксаторе, но не на пламени. Употребляют: смесь Никифорова (15 минут) или метиловый спирт (3 минуты). После фиксации препараты высушивают на воздухе.

Малярия. Трансмиссивное заражение — презентация онлайн

МАЛЯРИЯ
Старший преподаватель
кафедры инфекционных болезней
(с курсом медицинской паразитологии
и тропических заболеваний)
Ласкин Александр Викторович
Mandell, Douglas, and Bennett’s Principles and
Practice of Infectious Diseases, 7th Edition
Pages: 4320
Imprint: Churchill Livingstone
ISBN: 978-0-443-06839-3
Copyright: 2010
Малярия

группа
антропонозных
протозойных трансмиссивных болезней,
возбудители которых передаются комарами
рода
Anopheles,
и
характеризуется
преимущественным
поражением
ретикулогистиоцитарной
системы
и
эритроцитов.
Проявления:
1) рецидивирующие лихорадочные
пароксизмы;
2) анемия;
3) гепатоспленомегалия.
Трансмиссивное заражение
От лат. transmissio — передача
Заражение происходит при участии
переносчиков – кровососущих и других
членистоногих.
Малярийный комар и
плазмодий
(инокуляция)
Триатомовый клоп и
трипаносомы
(контаминация)
В докладе обобщена информация
из 106 эндемичных по малярии
стран и других источников
Ситуация на 2010 год
учтённые случаи
216 млн. случаев малярии, из них
174 млн. (81%) ─ в Африке.
655 000 человек умерли, из них
91% ─ в Африке.
86% умерших от малярии─
дети до 5 лет.
диапазон неопределенности для смертности от
малярии составляет 537 000 до 907 000.

8. У людей малярию вызывают:

Plasmodium falciparum – тропическая,
P. vivax – трехдневная,
P. ovale – типа трехдневной (или овалемалярия),
P. malariae – четырехдневная малярия.
Виды возбудителей отличаются между собой по морфологии, биологии,
жизненному циклу и характеру патологических процессов.
P. knowlesi
– патогенный для человека вид
плазмодиев обезьян из Юго-Восточной Азии.
Близок
к
P.
falciparum
по
Эритроцитарная шизогония 24 часа
морфологии.
Округлые гаметоциты.
Клиника
похожа
на
тропическую
малярию,
осложнения могут привести к смерти больного.

10. Условия для местной передачи малярии

• Комары рода Anopheles
• Тёплая погода для развития в
комарах спорозоитов
• Человек с плазмодиями в
крови

11. Стандартные ошибки

• В России нет малярийных комаров, а если
есть, то на южных рубежах – неверно
• Развитие в комаре идёт только в условиях
тропического климата – неверно
• Комар кусает только больного человека
(т.е. у него ярко выраженная клиника —
срочная госпитализация и уничтожение
паразитов в крови) — неверно
Распространение комаров рода Anopheles в мире

13. Распространение комаров рода Anopheles в Европе

14. Цикл развития плазмодия

1) Больной,
2) носитель
без
клинических
проявлений
Среди местного населения гиперэндемичных регионов регистрируется значительное количество
бессимптомных паразитоносителей. Отсутствие у них клинических проявлений малярии не
позволяет своевременно выявить заболевание и провести радикальное лечение. Поэтому эти
лица могут служить источниками инфекции на протяжении длительного времени.

15. INTERNATIONAL TRAVEL AND HEALTH 2010

Countries and territories with malarious areas
(* = P. vivax risk only)
Afghanistan
Algeria*
Angola
Argentina*
Armenia*
Azerbaijan*
Bahamas
Bangladesh
Belize
Benin
Bhutan
Bolivia
Botswana
Brazil
Burkina Faso
Burundi
Cambodia
Cameroon
Cape Verde
Central African
Republic
Chad
China
Colombia
Comoros
Congo
Congo, Democratic
Republic of the
(former Zaire)
Costa Rica
Côte d’Ivoire
Djibouti
Dominican Republic
Ecuador
Egypt
El Salvador
Equatorial Guinea
Eritrea
Ethiopia
French Guiana
Gabon
Gambia
Georgia*
Ghana
Guatemala
Guinea
Guinea-Bissau
Guyana
Haiti
Honduras
India
Indonesia
Iran, Islamic Republic of
Iraq*
Kenya
Korea, Democratic
People’s Republic of*
Korea, Republic of*
Kyrgyzstan *
Lao People’s Democratic
Republic
Liberia
Madagascar
Malawi
Malaysia
Mali
Mauritania
Mayotte
Mexico
Morocco*
Mozambique
Myanmar
Namibia
Nepal
Nicaragua
Niger
Nigeria
Oman
Pakistan
Panama
Papua New Guinea
Paraguay
Peru
Philippines
Russian Federation*
Rwanda
Sao Tome and Principe
Saudi Arabia
Senegal
Sierra Leone
Solomon Islands
Somalia
South Africa
Sri Lanka
Sudan
Suriname
Swaziland
Syrian Arab
Republic*
Tajikistan
Tanzania, United
Republic of
Thailand
Timor-Leste
Togo
Turkey*
Turkmenistan*
Uganda
Uzbekistan *
Vanuatu
Venezuela
Viet Nam
Yemen
Zambia
Zimbabwe
МАЛЯРИЯ В СТРАНАХ ВОСТОЧНОГО ПОЛУШАРИЯ
МАЛЯРИЯ В СТРАНАХ
ЗАПАДНОГО
ПОЛУШАРИЯ

19. INTERNATIONAL TRAVEL AND HEALTH 2012

Зоны Центральной Азии, где регистрируются
местные случаи малярии, 2006 год
Казахстан
Узбекистан
Киргизия
Таджикистан
Туркмения
Зоны, где
регистрируются
местные случаи
Ш.Разаков
Директор НИИМП им.Л.М.Исаева, Узбекистан
Конференция 17-19 сентября 2007, Тбилиси, Грузия
Зоны, где
регистрируются
местные случаи
P. FALCIPARUM
В активных очагах малярии в 2010 г. проживало
2 710 000 чел. или почти 40 % населения Таджикистана
ВОЗ сообщает о снижении числа
подтверждённых случаев малярии в
Таджикистане
Разница в результатах
серологической и
микроскопической диагностики
В России каждый четвёртый учтённый трудовой
мигрант прибыл из Таджикистана
В современных условиях наибольшую эпидемическую
опасность представляют выходцы из высоко эндемичных
регионов, инфицированные малярийными плазмодиями.
Переселяясь на временное или постоянное место жительства
в ранее оздоровленные регионы, где существуют условия для
распространения малярии, эти лица могут в течение
длительного времени служить активными источниками
инфекции. Нестерильный иммунитет, сформированный в
результате неоднократного заражения и длительного
присутствия в крови малярийных плазмодиев, способствует
атипичному или бессимптомному течению инфекции.
Зачастую, даже при наличии клинических проявлений
заболевания, нелегальные эмигранты из стран Африки, Азии,
Южной и Центральной Америки избегают обращаться за
медицинской помощью. Занимаясь самолечением, они лишь
купируют клинические признаки заболевания, но не
обеспечивают полной санациии организма от возбудителей.
• В организме комара спорогония P. vivax при оптимальных условиях
(28-30°С) длится 6-7 суток.
• Развитие P. vivax в переносчике при среднесуточной температуре
воздуха ниже +16°С невозможно.
среднесуточная
25,5
25,5
23,5
26,5
29
т е м п е р а т у р а (°С)
26
27
26,5
25,5
Вывод: в России существуют все условия для
местной передачи малярии
23,5
УПРАВЛЕНИЕ ФЕДЕРАЛЬНОЙ СЛУЖБЫ ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ
ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА ПО ГОРОДУ МОСКВЕ
ПИСЬМО
от 22 июня 2012 г. N 18-07-224/256
О НАЧАЛЕ СЕЗОНА ПЕРЕДАЧИ МАЛЯРИИ
По данным фенологических наблюдений за переносчиком малярии информирую,
что сезон передачи малярии в Москве начался 15.06.12.
Первые случаи проявления малярии с местной передачей можно ожидать после
29.06.12.
В соответствии с перечнем показаний к обследованию на малярию согласно
СанПин 3.2.1333-03 «Профилактика паразитарных болезней на территории РФ», пункт
3.10, обследованию подлежат лица лихорадящие и с неустановленным диагнозом в
течение 3 дней в эпидемиологический сезон и в течение 5 дней в остальное время года.
Вр.и.о. руководителя
В.М.ГЛИНЕНКО
Июль 1999 года операция у швейцарца в Цюрихе. Через месяц – вторая
операция. Получил кровь от 16 доноров. Через 14 дней после второй
операции – ухудшение самочувствия. Признаки острой инфекции.
22 день – лихорадка до 40ºС.
23 день – в крови Plasmodium. Ретроспективно Plasmodium в крови, взятой
на 20 день после операции. 26 день – смерть от полиорганной
недостаточности. Анализ эритроцитарных концентратов показал наличие
антител у одного из доноров. Начат постоянный контроль для выявления
у него паразитов в крови. В течение 3 недель – отрицательные результаты.
Затем обнаружен гаметоцит P. falciparum. Ещё через месяц наблюдений
обнаружены бесполые формы в эритроцитах. ПЦР-анализ подтвердил
идентичность паразитов донора и реципиента.
Донор был в Камеруне за 6 лет до этих событий, в других эндемичных
районах не был, приступов лихорадки не отмечал, болел малярией 15 лет
назад, проживая в Африке.
Т.к. такого длительного течения тропической малярии не описано,
происхождение малярии у донора остаётся неясным.
Увеличение числа случаев местной малярии
1200
1000
800
600
400
200
0
1996 1997 1988 1999 2000 2001 2002 2003 2004
Всего
в т.ч. местная малярия
Завозная малярия
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1988 1999 2000 2001 2002 2003 2004
Из бывших союзных республик
Из стран дальнего зарубежья
к
о
м
а
р
Схема цикла P. falciparum и P. malariae
+
ооциста
зигота
ч
е
л
о
в
е
к
оокинета
спороциста
спорозоит
30 — 40 минут
кровь
печень
Эритроцитарн.
шизогония
(многократно)
Тканевая
шизогония
однократно
к
о
м
а
р
Схема цикла P. vivax и P. ovale
ооциста
+
зигота
ч
е
л
о
в
е
к
спорозоит
оокинета
спороциста
тахи-
бради-
кровь
гипнозоит
Эритроцитарн.
шизогония
(многократно)
STOP !
Тканевая
шизогония
однократно
печень
Все клинические проявления
обусловлены
только эритроцитарной
шизогонией.
Началом
клиники
является
приступ лихорадки (малярийный
пароксизм), который обусловлен
массовым выходом мерозоитов в
кровь и массовым разрушением
эритроцитов.
Длительность шизогонии
Виды
плазмодиев
Тканевая
± 1 сут.
Брадиспорозоит
Эритроц.
f.
6 сут.
48 ч.
v.
8 сут.
48 ч.
6-30 мес.
o.
9 сут.
48 ч.
m.
15 сут.
72 ч.
Длительность шизогонии
определяет периоды:
• Препатентный — время с момента
заражения до появления паразитов в
крови (плазмодий малярии) или в кале
(цисты простейших и яйца гельминтов).
ПП > Тканев. шизогонии
• Инкубационный – время со дня
заражения
до
появления
первых
клинических симптомов болезни.
ИПmin= Тканев. шиз.+ 1 Эрит.шиз.

44. Стадии шизогонии (любой)

1. Трофозоит
2. Шизонт (от греч. schizoрасщепление)
3. Мерозоит
Ответ лаборатории после микроскопии препаратов крови включает
1. Вид паразита
2. Стадии, наличие или отсутствие половых форм
3. Количество паразитов
Пример:
Обнаружены (стадия) P. falciparum ++ (12-15 на 100 полей зрения)
1. Юные трофозоиты
2. Юные шизонты
3. Гаметоциты
В каждом из этих случаев свой прогноз и тактика
лечения
1. ТРОФОЗОИТ
одно ядро
юный
мало
цитоплазмы,
крупная
вакуоль
зрелый
Много
цитоплазмы
Pl.vivax стадия кольца – юный трофозоит
2. ШИЗОНТ
много ядер
юный
цитоплазма
общая
зрелый
Вокруг
каждого ядра
своя
цитоплазма=
образовались
мерозоиты
Шизонт малярийного
плазмодия в тканях
печени
Стадии шизогонии на примере эритроцитарной
юн.
зрел.
трофозоит
1
юн.
зрел.
шизонт
мерозоит
2
3

51. Лабораторная диагностика

• Толстая
капля
• Тонкий мазок

52. Толстая капля

Тонкий мазок (P.vivax)
Приготовление мазка
На
край
стерильного
предметного
стекла
помещают маленькую каплю крови. Правой рукой
к ней подводят второе предметное стекло со
шлифованными краями, которое ставят на каплю
крови под углом 40-45 . При этом капля должна
распределится ровной полоской между краем
предметного стекла и шлифованным стеклом.
Затем,
сохраняя
прежний
угол
наклона,
шлифованным стеклом полоску крови быстрым
движением распределяют по предметному
стеклу. Мазок должен быть равномерным,
тонким, с бахромой на конце.

55. Приготовление толстой капли

Слой крови в толстой капле не должен
быть очень толстым, иначе после
высушивания она трескается и может
отпасть.
Нормальной
считается
толстая капля, через которую после
высушивания
слабо
просвечивает
крупный печатный текст, а при
микроскопии в одном поле зрения
насчитывается в среднем 10–15 ядер
лейкоцитов.
• СУШКА на воздухе.
• ФИКСАЦИЯ (сухие мазки!) этиловым спиртом (15
мин) или в течение 10-15 мин смесью Никифорова
(этиловый спирт и эфир 1:1).
• ОКРАСКА мазков и нефиксированных толстых
капель
по
методу
Романовского
краской,
содержащей метиленовый синий, эозин и продукт
его расщепления – азур. Метиленовый синий
окрашивает цитоплазму паразита в голубой цвет, а
эозин – ядра паразита в вишнево-красный.
Окраска длится 40-45 мин.
• ПРОМЫВКА проточной водой.
• СУШКА на воздухе
• Микроскопирование
• Перед
употреблением
краску
разводят дистиллированной водой
нейтральной реакции (pH 7,2) в
соотношении 1-2 капли краски на 1
мл воды.
• Правильно окрашенная толстая
капля имеет фиолетовый цвет.

58. Определение уровня паразитемии по толстой капле

Количество
Результат просмотра 100 полей зрения
Уровень
паразитов
препарата крови «толстая капля» (объектив x
паразитемии
90, окуляр x 7), число паразитов
в 1 мкл крови
+
++
+++
++++
5-50
50-500
500-5000
5000 и более
1 — 10
во всём препарате (в 100 полях зрения)
10 — 100
во всём препарате (в 100 полях зрения)
1 – 10
в каждом поле зрения
10 и более
в каждом поле зрения
P. VIVAX
В ТОНКОМ МАЗКЕ
можно обнаружить на всех стадиях развития
Юн.
трофозоит
1/3 – 1/2 диаметра эритроцита.
Может быть 2 в эритроците
Зрел.
трофозоит
амебовидная форма
Шизонт
Зрел.
шизонт
Макро
гаметоцит
Микро
гаметоцит
от 2 до 22 ядер
(морула) – беспорядочная кучка
мерозоитов (до 22,в среднем 14-16),
напоминающая «тутовую ягоду».
сходны с крупными трофозоитами
определяются по крупному рыхлому ядру
Пораженные эритроциты увеличены, обесцвечены, с мелкой густой
зернистостью красно-фиолетового цвета (зернистость Шюффнера)
P. MALARIAE
В ТОНКОМ МАЗКЕ
на всех стадиях развития
Юн.
трофозоит
Зрел.
трофозоит
Зрел.
шизонт
сходны с P.vivax, всегда 1
овальная или лентовидная форма
по 6-12 мерозоитов, собраны розеткой
вокруг пигмента, «вид маргаритки»
Гаметоциты сходны с P.vivax, но мельче
Пораженные эритроциты не меняются в размерах

61. Pl. malariae отличается характерным видом зрелого шизонта, который имеет «розетки»

P. OVALE
В ТОНКОМ МАЗКЕ
на всех стадиях развития
Эритроциты как правило, увеличены, но меньше, чем при
vivax, обесцвечены, c крупной редкой зернистостью красного
цвета (зернистость Джеймса), часть овальной формы с
фестончатым краем.
Все другие стадии развития сходны с P. vivax.
ХАРАКТЕРНЫЙ ВИД ЭРИТРОЦИТОВ С ФЕСТОНЧАТЫМ КРАЕМ.
P. FALCIPARUM
В ТОНКОМ МАЗКЕ
только юные трофозоиты и гаметоциты
остальные формы только при злокачественном течении
Юн.
трофозоит
Гаметоциты
очень мелкие (1/5 диаметра эритроцита),
их может быть несколько в одном
эритроците
крупные полулуния, по форме
напоминают бананы.
Пораженные паразитами эритроциты в
размерах не увеличены.
ВОЗ: случаи малярии
надо проверять
Только в 22% всех случаев
подозрения на малярию в
Африке
проводится
лабораторное подтверждение.
Остальные пациенты сразу
получают
антималярийные
препараты.
риск возникновения
лекарственной
устойчивости
Как вариант решения
Экспресс-тест для
диагностики малярии
RAPID DIAGNOSTIC TEST (RDT)
RAPID DIAGNOSTIC TEST (RDT)
Экспресс-тест для
диагностики малярии
Важны для
диагностики при
недоступности
микроскопии
Рост продаж во всём
мире
Только для P.
falciparum
most can be used to detect only P. falciparum
antigens (histidine-rich protein II [HRP-II] and plasmodium lactate dehydrogenase)
or a combination of P. falciparum antigens (HRP-II) and antigens common
to all parasite species (plasmodium lactate dehydrogenase and aldolase).
Рост продаж тест-систем и соотношение их типов
У большинства температура хранения от +4 до +30 градусов –
может быть ущерб точности и надёжности
Тест-системы для обнаружения возбудителей
тропической малярии в периферической крови.
Окно результатов
Контроль (С)
Кровь
Тест (Т)
Раствор
ПЕРИОДЫ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ МАЛЯРИИ
•Инкубационный
•Первичных проявлений (первичная атака и ранние
(эритроцитарные) рецидивы)
•Латентный
•Поздних проявлений (поздние рецидивы)
•Реконвалесценция
P. vivax
ИнкП min=8+2=10 дн.
коротк (12-16 дн)
длит (6-30 мес).
длительное и относительно доброкачественное
течение.
У неиммунных ─ с продромы: недомогание, слабость,
головн. боль, познабливание, ломота в мышцах.
Инициальная лихорадка неправильного типа (до 3839°С) ─ 2-3 дня.
Период разгара ─ приступы периодические: через
день и, как правило, в одно и то же время днем, чаще
в период между 11 и 16 часами.
P. vivax
Приступ = последовательно возникающие озноб — жар — пот =
«малярийная триада».
1) Потрясающий озноб от 20 мин до 2 ч,
2) Жар от 2 до 6 часов, быстро до 38-40 °С.
>>Головная боль, жажда, рвота. ↑ЧСС, АД ↓105/50–90/40. Признаки
бронхита — сухие хрипы. Почти у всех умеренное вздутие живота,
жидкий стул, обильное мочеиспускание.
3)↓ t°С до нормы за 1-2 часа = профузное потоотделение.
Затем больные ощущают облегчение, слабость и часто засыпают.
Лихорадочные приступы по 5-8 часов, периоды между ними 40-43
часа.
Гепатоспленомегалия на первой неделе. Анемия постепенно, на 2-3 нед.,
не снижается ниже 3 1012/л. Умеренный нейтрофильный лейкоцитоз.
Приступы без лечения длятся 4-5 нед. выраженность постепенно
снижается ─ прекращаются.
Ранние рецидивы через 6-8 нед. после купирования, поздн. рец. от 3-6
мес. до 2-3 лет. Сразу правильное чередование приступов без
продромы.
P. malariae
ИнкП min=15+3=18 дн. (25-30 дн.)
без продромы и инициальной лихорадки. приступ длится
13 часов с интервалами в 2 дня.
Возможно длительное латентное течение
Осложнение ─ нефротический синдром. Оседание на
базальной мембране мальпигиевых телец иммунных
комплексов, образованных при взаимодействии IgG и IgM
с паразитарными антигенами и комплементом.
Протеинурия, гипопротеинемия. Отеки, гипертония и
почечная недостаточность. При осложнении прогноз
крайне неблагоприятный, т.к. малярийная нефропатия не
поддается лечению противомалярийными препаратами и
кортикостероидами.
P. ovale
Западная Африка и Юго-Восточная Азия
ИнкП min=9+2=11 дн.
коротк (12-16 дн)
длит (6-18 мес).
Доброкачественное течение и часто спонтанное
выздоровление после первичных приступов.
Клиника как у трехдневной.
Инициальная лихорадка ─ редко. Приступы вечером.
Без лечения длится 2 года. Иногда поздние рецидивы
могут возникать через 3-4 года после купирования
первичных приступов.
P. falciparum
ИнкП min=6+2=8 дн.
ИнкП (8 до 12 дн.).
ИнкП значительно увеличивается при повторных заражениях
реконвалесцентов, а также в результате применения противомалярийных
препаратов.
Без лечения у неиммунных лиц смерть в первые дни болезни.
Начало ─ полиморфная клиника.
Первые признаки ─ общее недомогание, познабливание, потливость,
головная боль, головокружение, снижение аппетита, тошнота, боли в спине,
костях и суставах, послабление стула. В большинстве случаев у неиммунных
лиц заболевание начинается внезапно, больной возбужден, жалуется на
общую слабость, озноб, головную боль, ломоту в мышцах и суставах.
Возможно двух–трехкратное повышение температуры тела до 38°С.
Инициальная лихорадка от 3 до 8 дней, постоянный характер, затем
становится перемежающейся. У лиц, впервые заболевших тропической
малярией, заболевание отличается коротким начальным периодом.
P. falciparum
Нет строгой периодичности типичных малярийных приступов. Они
могут начинаться в любое время суток, но чаще в первой половине
дня.
Снижение
температуры
тела
не
сопровождается
резким
потоотделением.
Лихорадочные приступы длятся более суток (около 30 часов),
периоды апирексии – короткие (менее суток). В периоды озноба и
жара кожа сухая.
Тахикардия и значительное снижение АД до 90/50–80/40 мм рт.ст. ЧД
нарастает, появляется сухой кашель, сухие и влажные хрипы,
указывающие на развитие бронхита или бронхопневмонии.
P. falciparum
Разгар болезни диспепсия (отсутствие аппетита, тошнота, рвота, боли в
эпигастрии), возможно появление энтерита и энтероколита. С первых дней
заболевания болезненность в левом подреберье, усиливающаяся при глубоком
вдохе, что свидетельствует об увеличении селезенки, которая становится
доступной для пальпации к 4-6 дню болезни. Ее край плотный, гладкий и
болезненный. В процессе заболевания размеры печени увеличиваются, может
развиться токсический гепатит.
Увеличивается содержание прямого и непрямого билирубина, в 2-3 раза
возрастает активность аминотрансфераз. В некоторых случаях отмечается
нарушение
функции
почек,
проявляющееся
признаками
токсического
нефрозонефрита.
При типичном течении тропической малярии с первых дней болезни развивается
анемия.
Через 1-2 недели после начала заболевания содержание гемоглобина снижается
до 70-90 г/л, количество эритроцитов уменьшается до 2,5-3,5 1012/л.
Нейтрофильный лейкоцитоз, ретикулоцитоз и увеличение СОЭ. Особенно тяжело
малярия протекает у лиц с дефицитом массы тела, а также при обезвоживании,
перегревании и сопутствующей анемии. Степень тяжести малярии увеличивается
при сочетании с брюшным тифом, вирусным гепатитом, амебиазом и другими
заболеваниями.
P. falciparum
Продолжительность
стадии
первичных
малярийных
приступов при неосложненном течении тропической малярии
обычно короче, чем при других формах заболевания, и
составляет 2-3 недели. Ранние рецидивы, возникающие
вследствие нерационального лечения, наступают через 7-10
дней
после
купирования
первичных
пароксизмов.
Формирующийся
иммунитет
способствует
переходу
заболевания в латентное течение. В некоторых случаях
бессимптомное паразитоносительство при тропической
малярии (инаппарантная форма заболевания) может
длиться в течение 1-1,5 лет.
ОСЛОЖНЕНИЯ
Могут быть на любой стадии.
Без лечения (или плохом) ─ 1-3 нед болезни.
Церебральная форма малярии (малярийная кома),
ИТШ = (алгид),
Гемоглобинурийная лихорадка
Острая почечная недостаточность
Церебральная форма малярии
Возникает чаще в первые 24 — 43 ч от начала заболевания, особенно у лиц с дефицитом
массы тела.
Предвестники сильная головная боль, резкая слабость, апатия или, наоборот,
беспокойство, суетливость. В прекоматозном периоде больные малоподвижны,
односложно и неохотно отвечают на вопросы, быстро истощаются и снова погружаются в
сопорозное состояние.
При осмотре голова больного запрокинута назад. Ноги чаще в положении разгибания, руки
полусогнуты в локтевых суставах. У больного выражены менингеальные симптомы
(ригидность затылочных мышц, симптомы Кернига, Брудзинского). Эти симптомы
обусловлены не только церебральной гипертензией, но и связаны также с поражением
тонических центров в лобной области. Не исключаются кровоизлияния в оболочки
головного мозга. У отдельных больных отмечаются явления гиперкинеза от клинических
судорог мышц конечностей до общих тетанических или эпилептиформных судорожных
припадков. В начале комы исчезает глоточный рефлекс, позднее — роговичные и зрачковые
рефлексы.
Температура тела 38,5 — 40,5ºС. Тоны сердца приглушены, ЧСС соответствует температуре
тела, АД снижено. Дыхание поверхностное, учащенное от 30 до 50 в мин. Печень и
селезенка увеличены, плотные. Нарушение функция тазовых органов, → непроизвольные
мочеиспускание и дефекация. В периферической крови у половины больных наблюдается
увеличение количества лейкоцитов до 12 — 16х109 /л с ядерным сдвигом в сторону молодых
форм нейтрофилов.
Инфекционно-токсический
шок (алгид)
Резкая слабость, заторможенность, переходящая в
прострацию.
Кожа бледно-серого цвета, холодная, покрыта потом. Черты
лица заострены, глаза, глубоко запавшие с синими кругами,
взгляд безучастный.
Температура
тела
понижена.
Дистальные
участки
конечностей цианотичны.
Пульс чаще 100 ударов в минуту, малого наполнения.
Максимальное АД падает ниже 80 мм рт.ст.
Дыхание поверхностное, чаще 30 раз в минуту.
Диурез менее 500 мл в сутки. Иногда бывает диарея.
Гемоглобинурийная лихорадка
Причина — массовый гемолиз эритроцитов из-за гибели большого количества
плазмодиев и выходом в кровь паразитарных антигенов, а также токсическим
действием повышенных доз противомалярийных препаратов, таких, как хинин,
примахин, сульфаниламиды.
Возникает внезапно и проявляется потрясающим ознобом, гипертермией (до 40°С и выше).
Боли в мышцах, ломота в суставах, резкая слабость, головная боль, неприятные ощущения
в верхней половине живота и пояснице.
Возможна рвота темной желчью. Кожа и слизистые быстро приобретают желтушную
окраску. Выделение мочи темного цвета, что обусловлено наличием оксигемоглобина.
Через некоторое время он превращается в более светлый пигмент – метгемоглобин, и
собранная моча светлеет. В стеклянной посуде она разделяется на два слоя.
Верхний слой прозрачный, темно-красного цвета, нижний – мутный, темно-коричневый,
содержащий детрит. Сыворотка крови приобретает темно-красный цвет, показатель
гематокрита снижается, увеличивается содержание свободного билирубина. В
периферической крови наблюдается нейтрофильный лейкоцитоз, увеличивается число
ретикулоцитов.
В случаях быстрой отмены химиопрепаратов, вызвавших гемолиз эритроцитов,
гемоглобинурия протекает легко и заканчивается в течение 3-5 дней. При длительном
действии цитотоксических факторов развивается острая почечная недостаточность
ренального типа, которая в тяжелых случаях может привести к гибели больного.
Диффференциальный диагноз
Начальный период – лихорадка, общая слабость, ознобы.
•Брюшной тиф,
•ОРЗ,
•пневмонии,
•лихорадка Ку (возбудитель Coxiella burnetii (прежде
Rickettsia burnettii) Свыше 4000 случаев в Нидерландах
2007-2010 гг., первоначально по ошибке -«козий грипп»
•лептоспироз,
•вирусные гепатиты.
Брюшной тиф (паратифы) постоянная лихорадка с суточными колебаниями не
более 1ºС. Больные заторможены, у них постоянная головная боль без определенной
локализации, анорексия. Брадикардия. Язык влажный, обложен густым серым или
грязно-серым налетом, утолщен, с отпечатками зубов. Живот умеренно вздут, при
пальпации в правой подвздошной области болезненность, грубое урчание..
Увеличение мезентериальных лимфатических узлов → укорочение перкуторного звука
Диффференциальный диагноз
ОРЗ головная боль в области лба и надбровных дуг, светобоязнь, боль при
движениях глаз.
Признаки поражения верхних отделов респираторного тракта (заложенность носа,
першение в горле, сухой болезненный кашель, осиплость голоса, гиперемия слизистой
ротоглотки). Печень и селезенка – в норме.
Лихорадка Ку боль при движении глаз, ретробульбарные боли, гиперемия лица,
инъекция сосудов склер.
Увеличение печени на 3-4 день болезни. Позже признаки очаговой пневмонии (боли в
груди, возникающие при глубоком дыхании, кашель со скудной слизистой мокротой,
локализованные сухие или влажные хрипы).
Лептоспироз боли в мышцах (икроножные !).
На коже макулопапулезная (кореподобная) сыпь.
Геморрагический синдром кровоизлияния в область склер, в кожу, носовые и
желудочные кровотечения.
Поколачивание по пояснице болезненно, в моче белок, гиалиновые и зернистые
цилиндры, появляются эритроциты, увеличивается количество лейкоцитов. В крови
повышается концентрация остаточного азота. Возможно развитие серозного менингита.
При серологических исследованиях наблюдается нарастание титра специфических
антител.
Диффференциальный диагноз
Острые вирусные гепатиты
Синдромы в начальном (преджелтушном) периоде:
гриппоподобный,
диспептический,
астеновегетативный
артралгический или их сочетание.
Снижение или исчезновение аппетита, боль и тяжесть в подложечной
области или в правом подреберье.
Возможна тошнота и рвота.
У курящих уменьшается или пропадает желание курить.
В конце преджелтушного периода положительные пробы на содержание
билирубина в моче, например, унифицированная проба Розина (с 1%
спиртовым раствором йода).
В преддверии желтушного периода потемнение мочи и просветление кала.
Позже желтушность склер, слизистых оболочек ротоглотки, а затем и кожи.
температурный лист больного трехдневной малярией
День госпитализации
1
2
3
4
5
6
41
40
делагил
39
38
37
36
35


>>> >>>
паразитемия
34
1
2
3
4
5
+++
+++
+++
6
7
8
дни болезни

>>>
++
9
+

10
11
Гепатоспленомегалия
у больного малярией.
Баку, 1923 г.
Из паразитологического музея
Е.Н. Павловского, ВМедА.
Тропическая малярия человека
температурный лист больного тропической малярией
42
день госпитализации 1
2
3
4
МЕФЛО
ХИН
41
5
6
примахин
40
39
38
37
36

35
>

>>
Гаметоциты
34
>>
+
паразитемия
++++ ++++ ++++
++
++
+

+

10
11
33
1
2
3
4
5
6
День болезни
7
8
9

95. Гепатомегалия у детей в гиперэндемичном очаге тропической малярии.

96. Кровоизлияния в вещество мозга при тропической малярии (патологоанатомическое исследование)

Восприимчивость и иммунитет
Восприимчивы
все
люди.
Постинвазионный
иммунитет слабой напряженности, видоспецифический,
нестойкий
и
непродолжительный.
Достаточно
напряженный
иммунитет
формируется
после
многократных заражений на протяжении длительного
времени (5-7 лет). Такой иммунитет надежно защищает
от тяжелых форм заболевания, что наблюдается в
эндемичных районах, где среди местного населения
широко
распространено
безлихорадочное,
или
“холодное” паразитоносительство. При отсутствии
новых заражений (например, при выезде иммунного
лица за пределы эндемичного района) иммунитет
угасает и совсем исчезает.
Guidelines for
the treatment of
malaria
Second edition
2010
Число страниц: 194
Дополнение в
апреле 2011 года
ВОЗ теперь
рекомендует в первую
очередь при лечении
тяжёлой тропической
малярии у африканских
детей парентеральное
введение артесуната

100. Рекомендации ВОЗ по лечению неосложнённой малярии и тяжёлой тропической малярии

Неосложнённая
Тяжёлая
AL = artemether-lumefantrine; AS = artesunate;
AQ = amodiaquinine; CQ = chloroquine; M = mefloquine;
SP = sulfadoxine-pyrimethamine; QNN = quinine;
AM = artemether;
AT = artemotil.
Артеметер+люмефантрин (коартем, риамет). Комбинация содержит 20
мг артеметра и 120 мг люмефантрина в каждой таблетке.
Рекомендуемая схема лечения: по 1 дозе препарата 2 раза в день на
протяжении 3 суток. Весовые дозы: 5-14 кг – 1 таб., 12-24 кг – 2 таб., 25-34
кг – 3 таб., 35 кг и более – 4 таблетки.
Артесунат+амодиахин. Рекомендуемая курсовая доза составляет 4мг
артесуната на кг массы тела и 10 мг амодиахина на кг массы тела. Она
делится на 3 части, каждая из которых назначается один раз в сутки на
протяжении 3 дней.
Артесунат+мефлохин. Артесунат 4 мг на кг/сут в 2 приема в течение 3
дней. Мефлохин 15 мг/кг однократно на 2 день или в дозе 25 мг/кг в 2
приема на 2 и 3 дни.
Артесунат+сульфадоксин-пириметамин. Курс лечения 3 дня. В первый
день назначается артесунат (4 мг/кг) и сульфадоксин-пиримитамин
(1,25/25 мг/кг) в один прием. В последующие 2 дня лечение проводится
только артесунатом из расчета 4 мг/кг в один прием.

102. Рекомендации ВОЗ

• Монотерапия препаратами китайской
полыни не должна проводиться
• Пациентам следует обращаться к
врачу даже в том случае, если после
самостоятельного лечения
ощущается полное выздоровление.

103. Основные препараты, используемые для лечения малярии

1. ХИНИН – для лечения осложнённой
тропической малярии
2. ХЛОРОХИН (делагил) – препарат выбора
для лечения и химиопрофилактики
малярии (кроме тропической)
3. МЕФЛОХИН (лариам) – препарат выбора
для лечения и химиопрофилактики
тропической малярии
4. ПРИМАХИН – препарат гамонтогистошизотропного действия

104. Лечение трехдневной малярии

1-й этап
ХЛОРОХИН
Уничтожение паразитов в
эритроцитах —
прекращение приступов
лихорадки
Пациент клинически
здоров
2-й этап
ПРИМАХИН
Уничтожение гипнозоитов в
печени — предотвращение
поздних рецидивов

105. Лечение тропической малярии

1-й этап
2-й этап
МЕФЛОХИН — при лёгк. и сред
ХИНИН — при тяжёлой форме
ПРИМАХИН
Уничтожение паразитов в
эритроцитах —
прекращение приступов
лихорадки
Уничтожение гаметоцитов в
крови — предотвращение
заражения других людей
Гаметоциты появляются на 7-12 день
болезни и сохраняются месяц и более

106. хинина сульфат (0,65 т.– 0,3 амп)

по 0,65 г 3 раза в сутки в течение
7–10 дней.
Препарат
растворяют
в
физиологическом растворе или
0,5% растворе глюкозы и вводят
внутривенно капельно в течение 4
часов
(объем
инфузионного
раствора – не более 500 мл).

107. ХЛОРОХИН (ДЕЛАГИЛ) (0,25)

Лечение по схеме: в первый день – 1,0 г, на
второй и третий день – по 0,5 г.
Химипрофилактика по 0,5 г 1 раз в один и
тот же день недели.
Контроль приема препарата – определение
его метаболитов в моче с помощью
цветной качественной реакции ДиллГлазго.
• Хлорохин обладает умеренным
иммуносупрессивным эффектом
МЕФЛОХИН (0,25)
Для тропической малярии
Лечение — из расчета 25 мг/кг (для взрослых
— 1-1,5 г.) в 2 приема с интервалом 6-8 ч. в
течение суток. Принимают внутрь во время
еды, его максимальная концентрация в крови
наблюдается через 7-24 часа после приема.
Химиопрофилактика

принимают
1
таблетку
(250
мг)
за
неделю
до
предполагаемого прибытия в эндемичную
зону и в течение всего срока пребывания в
ней по 1 таб. еженедельно в один и тот же
день недели. После выезда из зоны прием
продолжать в течение 4 недель.

109. МЕФЛОХИН ТОРМОЗИТ РЕАКЦИЮ !

Не
назначается
пилотам,
водителям
автортанспортных средств, а также лицам,
деятельность
которых
связана
с
выполнением операторских функций.
Для них:
• прием хлорохина по 300 мг 1 раз в неделю,
но не более 6 месяцев подряд ;
• обеспечение максимальной степени защиты
от нападения переносчиков.
Примахин 0,009
Обладает гистошизотропным и гаметоцидным
действием на плазмодии.
Используется для радикального лечения и
профилактики трехдневной малярии с длительной
инкубацией. Назначается по 0,027 ежедневно в
течение 14 дней.
Для уничтожения циркулирующих в крови
гаметоцитов Pl.falciparum (как второй этап лечения
тропической малярии) по 0,015г основания
ежедневно в течение 14 дней.
• Прием препарата может сопровождаться болями в животе,
диспепсией, общей слабостью, возможно развитие
метгемоглобинемии. Его назначение нежелательно
беременным и лицам с недостаточностью глюкозо-6фосфат дегидрогеназы.

112. Химиопрофилактика хлорохинустойчивой тропической малярии

Прием МЕФЛОХИНа
по 250 мг 1 раз в неделю
июль
пн
вт
ср
чт
пт
сб
вс
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
август
25
26
27
28
29
30
31
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
за 1 неделю до прибытия, все время в очаге,
4 недели после возвращения
Общее время приема не больше 4-х месяцев.

113. Побочные эффекты МЕФЛОХИНА

Их вероятность через 3-4 месяца непрерывной
химиопрофилактики 55-60%.
• Головокружение, тошнота, рвота, синусовая
брадикардия, аритмия, галюцинации.
• Гематотоксичность — тромбоцитопения, лейкопения или
лейкоцитоз.
• Гепатотоксичность — повышение активности
трансаминаз.
При профилактическом использовании отмечена
тенденция к кумуляции препарата. Это ограничивает
возможность использования мефлохина с
профилактической целью у пилотов, водителей,
беременных женщин и детей в возрасте до 2 лет или с
массой тела менее 15 кг.

114. Мефлохин не назначается пилотам,

водителям автортанспортных средств, а
также лицам, деятельность которых связана
с выполнением операторских функций.
Для них –
• прием хлорохина по 300 мг 1 раз в
неделю, но не более 6 месяцев подряд ;
• максимальная защита от комаров.
Химиопрофилактика тропической малярии в
Юго-Восточной Азии
(устойчивость к мефлохину)
Доксициклин — 100 мг в день,
но не более 30 дней.
только взрослым и детям старше 14 лет

116. Химиопрофилактика тропической малярии в Юго-Восточной Азии устойчивость к мефлохину)

Химиопрофилактика тропической малярии в ЮгоВосточной Азии устойчивость к мефлохину)
пн
4
11
18
25
вт
5
12
19
26
ср
6
13
20
27
чт
7
14
21
28
пт
1
8
15
22
29
сб
2
9
16
23
30
вс
3
10
17
24
31
ДОКСИЦИКЛИН
— 100 мг в день,
но не более 30
дней.
только взрослым
и детям старше 14
лет

119. трехдневная, четырехдневная и тропическая малярии

ХЛОРОХИН
дни
Дозы, г
Утро
Вечер
1
1,0
0,5
2
0,5
3
0,5
По данным ВОЗ паразитарными болезнями
в мире поражено около
4,6 миллиарда человек.
Малярией поражено более 500 млн. человек.
Ежегодно от нее погибает около 2 млн.
Сонной болезнью — 300 тыс. человек
Лейшманиозами — 12 млн. человек.
Филяриатозами — 250 млн. человек
Шистосомозами — 270 млн. человек
Анкилостомидозами — 900 млн. человек.
В докладе обобщена информация
из 106 эндемичных по малярии
стран и других источников
Ситуация на 2010 год
216 млн. случаев малярии, из них
174 млн. (81%) ─ в Африке.
655 000 человек умерли, из них
91% ─ в Африке.
86% умерших от малярии─
дети до 5 лет.
диапазон неопределенности для смертности от
малярии составляет 537 000 до 907 000.
МЕФЛОХИН-УСТОЙЧИВАЯ
МАЛЯРИЯ В
ЮГО-ВОСТОЧНОЙ АЗИИ

Рекомендации по ведению дневника и составлению отчета

Специальности 060101 Лечебное дело

_______________

(Ф.И.О. студента)

Сроки прохождения практики с «___»______________20__г. по «___»_______________20__г.

База практики_____

За время прохождения практики мною выполнена следующая работа:

I Цифровой отчет:

Перечень умений Количество
  1. Приготовление хлоросодержащих дезинфицирующих растворов. 2. Дезинфекция посуды, остатков пищи, предметов ухода, выделе­ний пациентов, инвентаря. 3. Дезинфекция объектов при вирусных гепатитах. 4. Проведение выборки врачебных назначений из истории болезни. 5. Составление требования на медикаменты. 6. Проведение раскладки лекарственных средств и раздача их пациентам. 7. Раздача пищи пациентам. 8. Составление порционника. 9. Контроль за передачей продуктов из дома и хранением их в отделении. 10. Снижение повышенной температуры тела физическими метода­ми. 11. Разведение антибиотиков. 12. Выполнение внутривенных, внутримышечных, подкожных инъекций. 13. Собирание и заполнение системы для капельного вливания. 14. Проведение пероральной регидратационной терапии. 15. Дробное введение сыворотки по Безредко. 16. Введение иммуноглобулинов. 17. Термометрия с ведением постового и индивидуального температурного листов. 18. Помощь при рвоте, судорогах, критическом снижении темпера­туры, желудочно-кишечном кровотечении, перфорации язв кишечника. 19. Промывание желудка. 20. Постановка всех видов клизм. 21. Постановка газоотводной трубки. 22. Постановка банок, горчичников, компрессов. 23. Проведение ингаляций. 24. Закапывание капель в ухо, глаза, нос. 25. Приготовление постели пациенту. 26. Смена нательного и постельного белья. 27. Уход за тяжелобольными. 28. Уход за кожными покровами, слизистыми. 29. Подготовка пациента и инстурментария к ректороманоскопии. 30. Подготовка инструментария и помощь врачу при проведении спинномозговой пункции. 31. Посев крови на гемокультуру. 32. Взятие крови на биохимическое, серологическое исследование, ВИЧ-инфекцию, менингококк. 33. Забор кала на бактериологическое исследование, форму №30, микропейзаж, копрограмму. 34. Забор рвотных масс и промывных вод желудка на бактериоло­гическое исследование. 35. Забор мочи на бактериологическое исследование, желчные пигменты и уробилин. 36. Оформление направлений в лабораторию. 37. Забор ликвора на ликворологическое и бактериологическое исследования. 38. Взятие мазка из носоглотки на менингококк, ВL, вирусы. 39. Приготовление толстой капли крови на малярийный плазмодий. 40. Осмотр и определение характера стула с отметкой в истории болезни. 41. Определение цвета и прозрачности мочи с отметкой в истории болезни. 42. Измерение суточного диуреза. 43. Упаксвка бикса для отправки в лабораторию ООИ. 44. Техника безопасности при работе с кровью (знание прика­зов). 45. Заполнение карты экстренного извещения на инфекционного пациента,санитарная обработка пациента, оформление документации на инфекционного пациента при поступлении. 46. Заполнение паспортной части истории болезни. 47. Осмотр пациентов с различной патологией, оценка состояния. 48. Курация пациентов с написанием истории болезни.    

II Текстовый отчет:

III. Отзыв руководителя практики от ЛПУ

Общая оценка по практике ________________________________________________

Руководители практики (подписи):

Общий _________________________________________________________________

Непосредственные: _______________________________________________________

_______________________________________________________

Печать ЛПУ _______________________________________________________

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ВЕДЕНИЮ ДНЕВНИКА И СОСТАВЛЕНИЮ ОТЧЕТА

Дневник ведется по каждому разделу практики. В начале дневника заполняется график прохождения практики по датам и количеству дней, в соответствии с программой практики, делается отметка о проведенном инструктаже по технике безопасности.

Ежедневно в графе «Содержание и объем выполненной работы» регистрируется вся проведенная студентами самостоятельная работа в соответствии с программой практики и указанием непосредственного руководителя, а также заносится подробное описание манипуляции, предметов ухода и медицинской техники, описание приборов, проведенных анализов и т.д., впервые применявшихся на данной практике. Записанные ранее в дневнике методики манипуляций, обследования и т.п. повторно не описываются, указывается лишь число проведенных работ и наблюдений в течение дня практики.

В записях в дневнике следует четко выделить:

1) что видел и наблюдал студент;

2) что им было проделано самостоятельно, проведенная санитарно-просветительная работа с пациентами с указанием числа присутствующих.

Ежедневно студент совместно с непосредственным руководителем практики подводит цифровые итоги проведенных работ. При выставлении оценок учитывается количество и качество проделанных работ, правильность и полнота описания впервые проводимых в период данной практики манипуляций, лабораторных исследований, наблюдений и т.п., знание материала, изложенного в дневнике, четкость, аккуратность и своевременность проведенных записей. Оценка выставляется ежедневно непосредственным руководителем практики. В графе «Оценка и подпись руководителя практики» записываются указания по ведению дневника, дается оценка качества проведенных студентом самостоятельных работ.

По окончании практики по данному разделу студент составляет отчет о проведенной практике. Отчет по итогам практики составляется из двух разделов:

1) цифрового,

2) текстового.

В цифровой отчет включается количество проведенных за весь день практики самостоятельных практических работ, предусмотренных программой практики. Цифры, включенные в отчет, должны соответствовать сумме цифр, указанных в дневнике.

В текстовом отчете студенты дают характеристику базы практики, отмечают положительные и отрицательные стороны практики; какие знания и умения получены ими во время практики; предложения по улучшению теоретической и практической подготовки в колледже, по организации и методике проведения практики на практической базе, в чем помог лечебному учреждению и т. д.

В отзыве руководителя по практике должно быть отражено следующее:

    • Работал по программе или нет.
    • Теоретическая подготовка, умение применять теорию на практике.
    • Производственная дисциплина и прилежание.
    • Внешний вид студента.
    • Проявление интереса к специальности.
    • Регулярно ли ведет дневник и выполняет минимум практических умений.
    • Индивидуальные особенности: честность, инициатива, уравновешенность, выдержка, отношение к пациентам и работе.
    • Замечания по практике, общее впечатление, предложения по улучшению качества практики.

    Информио

    ×

    Неверный логин или пароль

    ×

    Все поля являются обязательными для заполнения

    ×

    Сервис «Комментарии» — это возможность для всех наших читателей дополнить опубликованный на сайте материал фактами или выразить свое мнение по затрагиваемой материалом теме.

    Редакция Информио.ру оставляет за собой право удалить комментарий пользователя без предупреждения и объяснения причин. Однако этого, скорее всего, не произойдет, если Вы будете придерживаться следующих правил:

    1. Не стоит размещать бессодержательные сообщения, не несущие смысловой нагрузки.
    2. Не разрешается публикация комментариев, написанных полностью или частично в режиме Caps Lock (Заглавными буквами). Запрещается использование нецензурных выражений и ругательств, способных оскорбить честь и достоинство, а также национальные и религиозные чувства людей (на любом языке, в любой кодировке, в любой части сообщения — заголовке, тексте, подписи и пр.)
    3. Запрещается пропаганда употребления наркотиков и спиртных напитков. Например, обсуждать преимущества употребления того или иного вида наркотиков; утверждать, что они якобы безвредны для здоровья.
    4. Запрещается обсуждать способы изготовления, а также места и способы распространения наркотиков, оружия и взрывчатых веществ.
    5. Запрещается размещение сообщений, направленных на разжигание социальной, национальной, половой и религиозной ненависти и нетерпимости в любых формах.
    6. Запрещается размещение сообщений, прямо либо косвенно призывающих к нарушению законодательства РФ. Например: не платить налоги, не служить в армии, саботировать работу городских служб и т.д.
    7. Запрещается использование в качестве аватара фотографии эротического характера, изображения с зарегистрированным товарным знаком и фотоснимки с узнаваемым изображением известных людей. Редакция оставляет за собой право удалять аватары без предупреждения и объяснения причин.
    8. Запрещается публикация комментариев, содержащих личные оскорбления собеседника по форуму, комментатора, чье мнение приводится в статье, а также журналиста.

    Претензии к качеству материалов, заголовкам, работе журналистов и СМИ в целом присылайте на адрес

    ×

    Информация доступна только для зарегистрированных пользователей.

    ×

    Уважаемые коллеги. Убедительная просьба быть внимательнее при оформлении заявки. На основании заполненной формы оформляется электронное свидетельство. В случае неверно указанных данных организация ответственности не несёт.

    Страница не найдена — Саянский медицинский колледж

    Я, субъект персональных данных, в соответствии с Федеральным законом от 27 июля 2006 года № 152 «О персональных данных» предоставляю ОГБПОУ «Саянский медицинский колледж» (далее — Оператор), расположенному по адресу Иркутская обл., г.Саянск, м/он Южный, 120, согласие на обработку персональных данных, указанных мной в форме веб-чата, обратной связи на сайте в сети «Интернет», владельцем которого является Оператор.

    1. Состав предоставляемых мной персональных данных является следующим: Имя, адрес электронной почты.
    2. Целями обработки моих персональных данных являются: обеспечение обмена короткими текстовыми сообщениями в режиме онлайн-диалога или обмена текстовыми сообщениями через электронную почту.
    3. Согласие предоставляется на совершение следующих действий (операций) с указанными в настоящем согласии персональными данными: сбор, систематизацию, накопление, хранение, уточнение (обновление, изменение), использование, передачу (предоставление, доступ), блокирование, удаление, уничтожение, осуществляемых как с использованием средств автоматизации (автоматизированная обработка), так и без использования таких средств (неавтоматизированная обработка).
    4. Я понимаю и соглашаюсь с тем, что предоставление Оператору какой-либо информации о себе, не являющейся контактной и не относящейся к целям настоящего согласия, а равно предоставление информации, относящейся к государственной, банковской и/или коммерческой тайне, информации о расовой и/или национальной принадлежности, политических взглядах, религиозных или философских убеждениях, состоянии здоровья, интимной жизни запрещено.
    5. В случае принятия мной решения о предоставлении Оператору какой-либо информации (каких-либо данных), я обязуюсь предоставлять исключительно достоверную и актуальную информацию и не вправе вводить Оператора в заблуждение в отношении своей личности, сообщать ложную или недостоверную информацию о себе.
    6. Я понимаю и соглашаюсь с тем, что Оператор не проверяет достоверность персональных данных, предоставляемых мной, и не имеет возможности оценивать мою дееспособность и исходит из того, что я предоставляю достоверные персональные данные и поддерживаю такие данные в актуальном состоянии.
    7. Согласие действует по достижении целей обработки или в случае утраты необходимости в достижении этих целей, если иное не предусмотрено федеральным законом.
    8. Согласие может быть отозвано мною в любое время на основании моего письменного заявления.

    Акушерство и гинекология инфекционные болезни с эпидемиологией вич инфекция глазные болезни

    по специальности 0401 «Лечебное дело»
    АКУШЕРСТВО И ГИНЕКОЛОГИЯ
    ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ С ЭПИДЕМИОЛОГИЕЙ
    ВИЧ – ИНФЕКЦИЯ
    ГЛАЗНЫЕ БОЛЕЗНИ
    БОЛЕЗНИ УХА, ГОРЛА, НОСА
    БОЛЕЗНИ ЗУБОВ И ПОЛОСТИ РТА
    НЕРВНЫЕ БОЛЕЗНИ
    ПСИХИЧЕСКИЕ БОЛЕЗНИ
    КОЖНЫЕ И ВЕНЕРИЧЕСКИЕ БОЛЕЗНИ

    Составители: преподаватели Казанского базового медицинского колледжа Леонтьева Л.С., Муратова Л.Ш., Камалетдинова Р.М., «Акушерство и гинекология», Щукина Т.М. «Инфекционные болезни с эпидемиологией», Абашева Г.А., Акимова Н.Н., Пименова А.Л. «ВИЧ-инфекция», Кислова В.М. «Болезни уха, горла, носа», Насыбуллина В.М. «Кожные и венерические болезни», Самойлова Л.А. «Болезни зубов и полости рта», Батало- ва А.М., Разбежкина Н.Ю. «Психические болезни», Митрофанова А.А. «Нервные болезни», Шамсутдинова Р.А. «Глазные болезни».


    АКУШЕРСТВО И ГИНЕКОЛОГИЯ 5

    Требования государственного образовательного стандарта к уровню подготовки специалистов в области акушерства и гинекологии 5

    Проблемно-ситуационные задачи 5

    АКУШЕРСТВО 5

    ГИНЕКОЛОГИЯ 30

    Задачи по оказанию доврачебной помощи при неотложных состояниях 47

    АКУШЕРСТВО 47

    ГИНЕКОЛОГИЯ 54

    ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ С ЭПИДЕМИОЛОГИЕЙ 58

    Требования государственного образовательного стандарта к уровню подготовки специалистов в области инфекционных болезней с эпидемиологией 58

    Проблемно-ситуационные задачи 58

    ВИЧ-ИНФЕКЦИЯ 67

    ГЛАЗНЫЕ БОЛЕЗНИ 72

    Требования государственного образовательного стандарта к уровню подготовки специалистов в области в области глазных болезней 72

    БОЛЕЗНИ УХА, ГОРЛА, НОСА 75

    Требования государственного образовательного стандарта к уровню подготовки специалистов в области в области болезней уха, горла, носа 75

    БОЛЕЗНИ ЗУБОВ И ПОЛОСТИ РТА 78

    Требования государственного образовательного стандарта к уровню подготовки специалистов в области болезней зубов и полости рта 78

    НЕРВНЫЕ БОЛЕЗНИ 82

    Требования государственного образовательного стандарта к уровню подготовки специалистов в области нервных заболеваний 82

    ПСИХИЧЕСКИЕ БОЛЕЗНИ 86

    Требования государственного образовательного стандарта к уровню подготовки специалистов в области в области нервных заболеваний 86

    Проблемно-ситуационные задачи 86

    КОЖНЫЕ И ВЕНЕРИЧЕСКИЕ БОЛЕЗНИ 89

    Требования государственного образовательного стандарта к уровню подготовки специалистов в области кожных и венерических заболеваний 89

    Проблемно-ситуационные задачи 90

    Действия 90

    Обоснования 90

    Рекомендуемая литература 98

    Инструктивно-методические документы 100

    Malaria_procedures_benchaid.pub

    % PDF-1.6 % 27 0 объект > эндобдж 69 0 объект > эндобдж 102 0 объект > эндобдж 24 0 объект > поток Acrobat Distiller 7.0.5 (Windows) PScript5.dll Версия 5.22009-06-04T12: 52: 18-04: 002007-02-09T10: 27-05: 002009-06-04T12: 52: 18-04: 00application / pdf

  1. Malaria_procedures_benchaid.pub
  2. zbv7
  3. uuid: d7c8387d-02f3-429c-baed-32d9315677fcuuid: 3dfb5e74-4364-4e65-a5ac-0fb486f39c5011945NCCL054023-127-104NCCL-48-29-115-42 конечный поток эндобдж 23 0 объект > эндобдж 68 0 объект > эндобдж 21 0 объект > эндобдж 22 0 объект > эндобдж 71 0 объект > эндобдж 103 0 объект > эндобдж 70 0 объект > эндобдж 99 0 объект > эндобдж 108 0 объект > эндобдж 118 0 объект > эндобдж 120 0 объект > эндобдж 127 0 объект > эндобдж 129 0 объект > эндобдж 137 0 объект > эндобдж 141 0 объект > эндобдж 145 0 объект > эндобдж 149 0 объект > эндобдж 123 0 объект > эндобдж 125 0 объект > эндобдж 76 0 объект > эндобдж 156 0 объект > эндобдж 157 0 объект > эндобдж 158 0 объект > эндобдж 159 0 объект > эндобдж 160 0 объект > эндобдж 161 0 объект > эндобдж 78 0 объект > эндобдж 89 0 объект > эндобдж 93 0 объект > эндобдж 97 0 объект > эндобдж 80 0 объект > эндобдж 109 0 объект > эндобдж 110 0 объект > эндобдж 28 0 объект > / ColorSpace> / Font> / ProcSet [/ PDF / Text / ImageC / ImageI] / ExtGState >>> / Type / Page >> эндобдж 119 0 объект > поток HWnF} Wa_Mn

    Способ уменьшения отслоения толстых мазков крови для диагностики малярии

    , 1 , 2 , 2 , 2 и 2

    Andrew P Norgan

    1 Отделение медицины, клиника Майо, Рочестер, Миннесота, США

    Хизер Э. Аргуэлло

    2 Отдел клинической микробиологии, Клиника Майо, Рочестер, Миннесота, США

    Линн М. Слоан

    2 Отдел клинической микробиологии, Клиника Майо, Рочестер, Миннесота, США

    Эмили К. Фернхольц

    2 Отдел клинической микробиологии, Клиника Майо, Рочестер, Миннесота, США

    Бобби С. Притт

    2 Отдел клинической микробиологии, Клиника Майо, Рочестер , Миннесота, США

    1 Департамент медицины, Клиника Майо, Рочестер, Миннесота, США

    2 Отдел клинической микробиологии, Клиника Майо, Рочестер, Миннесота, США

    900 10 Автор, ответственный за переписку.

    Поступило 01.03.2013 г .; Принято 1 июля 2013 г.

    Copyright © 2013 Norgan et al .; лицензиат BioMed Central Ltd. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0), которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии правильного цитирования оригинальной работы. Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

    Реферат

    Предпосылки

    Золотым стандартом диагностики малярии является исследование толстых и тонких мазков крови.Толстые пленки содержат в 10-20 раз больше крови, чем тонкие, что, соответственно, обеспечивает повышенную чувствительность при скрининге малярии. Потенциальным осложнением при приготовлении толстопленочных препаратов является отслоение капли крови от предметного стекла во время окрашивания или полоскания, что приводит к потере образца. В этой работе два метода улучшения прилипания к стеклу толстой пленки (методы «царапины» (SCM) и «погружение в ацетон» (ADM)) сравнивались со «стандартным методом» (SM) подготовки толстой пленки.

    Методы

    Стандартизированные капли крови из 26 ранее исследованных образцов цельной крови с ЭДТА (22 положительных и 4 отрицательных) одновременно наносили на предметные стекла с помощью SM, ADM и SCM.Для слайдов, приготовленных SM и ADM, каплю осторожно распределяли до пятна диаметром примерно 22 миллиметра на слайде, используя край второго предметного стекла. Для SCM капля растекалась путем тщательного измельчения (или царапания) ее по предметному стеклу острием второго предметного стекла. Слайды сушили в течение одного часа в вытяжном шкафу с ламинарным потоком. Для ADM предметные стекла один раз окунули в сосуд Коплина, наполненный ацетоном, и дали высохнуть на воздухе. Затем все слайды окрашивали по Гимзе и исследовали слепым методом.Приверженность лечению оценивалась слепыми рецензентами.

    Результаты

    На предметных стеклах, приготовленных с помощью SCM, не было обнаружено значительных или серьезных дефектов. Напротив, 8 слайдов, подготовленных ADM, и 3 слайда, подготовленных с помощью SM, показали значительные или серьезные дефекты. Толстые пленки, полученные тремя способами, были неразличимы под микроскопом, и для трех методов были получены согласованные результаты (положительные или отрицательные). Расчетная паразитемия образцов крови варьировала от 25 до 429 169 паразитов / мкл крови.

    Выводы

    SCM — недорогой, быстрый и простой метод, который улучшает прилипание толстых пленок крови к стандартным предметным стеклам без изменения общей подготовки предметных стекол, микроскопического внешнего вида или интерпретируемости. Используя SCM, толстые пленки можно надежно исследовать менее чем через два часа после получения образца. Это представляет собой значительное диагностическое улучшение по сравнению с протоколами, требующими длительных периодов сушки.

    Ключевые слова: Малярия, Толстая пленка, Приверженность, Случаи

    Предпосылки

    Хотя распространенность и важность быстрых диагностических и молекулярных тестов на малярию возрастают, стандартным методом диагностики малярии в большей части мира остается исследование толстой кишки. и тонкие мазки крови [1].Микроскопия, несмотря на то, что она трудоемка и технически сложна, сохраняется благодаря своим совокупным преимуществам стоимости, доступности и относительной чувствительности. Стандартные мазки крови от малярии представляют собой тонкую (несвязанный фиксированный лист отдельных клеток крови) и толстую пленку (многослойную пленку незафиксированной лизированной крови) [1]. Впервые описанный Россом в 1903 году (хотя и использовавшийся Россом и Лейшманом несколько лет назад), толстая пленка, по оценкам, в 10–20 раз более чувствительна, чем тонкая пленка, с порогом обнаружения в идеальных условиях 10–50 паразитов / мкл. крови [2-5].Чувствительность мазков крови от малярии и, в частности, толстых пленок может сильно варьироваться в зависимости от методов подготовки, опыта и навыков микроскописта и времени, затраченного на изучение пленки. В неидеальных условиях полевой лаборатории оценочная чувствительность составляет всего 100-500 паразитов / мкл, что сопоставимо с методами обнаружения антигена в аналогичных условиях [4-6]. К сожалению, сложностью приготовления толстой пленки как в лабораторных, так и в полевых условиях является отшелушивание части или всей капли крови во время подготовки, обычно во время полоскания после окрашивания [2,7-13].Потеря образца во время подготовки может потребовать подготовки заменяющего предметного стекла, если имеется дополнительный образец крови, и отсрочить диагностику. В обзоре литературы можно найти ряд предложений по улучшению отшелушивания капель крови, в том числе: 1) увеличенное время сушки капель крови (до 24 часов) [3,12,13]; 2) использование печи или термоблока для сушки образца [3,9,14-16]; 3) кратковременные промывки в метаноле или ацетоне для обезвоживания образца [8,10,11]; и 4) использование очень малых объемов крови (<5 мкл) для приготовления толстой пленки в сочетании с альтернативной процедурой окрашивания [16].

    Каждая из этих предлагаемых модификаций техники имеет потенциальные преимущества и недостатки. Например, увеличение времени высыхания толстой пленки сверх минимально необходимого времени — это простой и экономичный метод, который может улучшить прилипание капли, но он работает прямо противоположно идее исследования мазка крови как быстрой диагностической процедуры и приводит к неизбежно к задержке постановки диагноза (и, возможно, лечения), если паразитемия не выявляется при исследовании одновременно подготовленных тонких слайдов.

    Напротив, использование теплового блока или печи для облегчения сушки толстых пленок является недорогим способом как улучшения прилипания капель крови, так и ускорения приготовления толстой пленки, хотя и с некоторыми очевидными недостатками. Заметным осложнением нагрева толстых пленок является то, что фиксация красных кровяных телец может происходить, если температура или продолжительность нагревания не контролируются тщательно; по этой причине широко не рекомендуется [8]. В отличие от тонкой пленки крови, толстую пленку нельзя зафиксировать перед окрашиванием, так как фиксация предотвратит осмотический лизис и дегемоглобинизацию.Интересно, что в литературе есть несколько ссылок на промывки метанолом или ацетоном, которые используются для быстрого обезвоживания и частичного «закрепления» толстых пленок крови [8]. Неясно, широко ли использовалась эта техника, но обычно используемые паразитологические лабораторные справочники предполагают, что быстрое погружение в ацетон (не более двух) может улучшить адгезию толстых пленок [8]. Смрковски и его коллеги сообщили, что погружение в метанол с последующим погружением в ацетон уменьшает шелушение [11].Напротив, Iqbal et ​​al. обнаружили, что включение трех ацетоновых капель в протокол быстрого окрашивания по Гимзе привело к худшему прилипанию капель, чем при стандартном окрашивании по Гимзе без ацетона [10].

    Было отмечено, что более крупная капля крови способствует склонности толстой пленки отслаиваться от предметного стекла. Thellier et ​​al. обратился к этой проблеме напрямую, рекомендуя использовать <5 мкл крови в их методе быстрого окрашивания [16]. Эта процедура кажется многообещающей, поскольку авторы сообщили об увеличении приверженности, увеличении скорости анализа и улучшенной чувствительности.Однако это не может быть легко реализовано во всех условиях из-за требований к дополнительным реагентам (например, сапонина) и точному контролю объема капель крови [16].

    Стандартной практикой в ​​клинической лаборатории авторов было приготовление толстых пленок малярии путем измельчения или «царапания» капли крови на предметном стекле вторым предметным стеклом, чтобы уменьшить отслоение капли крови во время подготовки предметного стекла. Этот метод не описывался и не сравнивался со стандартным методом (SM) в литературе, поэтому была исследована эффективность метода царапин (SCM) в улучшении прилипания капель крови по сравнению с SM или ацетоновым погружением (ADM).

    Методы

    Подготовка предметных стекол

    Стандартизованные капли крови (35 мкл) из двадцати шести ранее исследованных образцов цельной крови с ЭДТА (22 положительных и 4 отрицательных) помещали на предметные стекла в трех экземплярах для получения толстых пленок, окрашенных по Гимзе, либо Стандартные, ацетоновые и царапающие методы (SM, ADM и SCM соответственно). Для слайдов, приготовленных SM и ADM, каплю осторожно распределяли до площади примерно размером с никель (~ 22 мм в диаметре) на слайде, используя край второго стеклянного слайда.Для SCM капля растекалась путем осторожного шлифования (или царапания) ее с умеренным усилием на предметное стекло острием второго предметного стекла. Все слайды сушили в течение одного часа в вытяжном шкафу с ламинарным потоком. Для ADM предметные стекла один раз окунули в сосуд Коплина, наполненный ацетоном, и дали высохнуть на воздухе. Срезы окрашивали по Гимзе с использованием установленных протоколов [8] и слепым методом исследовали на предмет идентификации паразитов тремя независимыми обученными экспертами. Положительная и отрицательная идентификация паразитов представляет собой либо полное согласие (24 случая), либо консенсус двух рецензентов (2 случая).Процент паразитемии рассчитывали по слайду SCM в каждом наборе из трех слайдов путем одновременного подсчета паразитов и лейкоцитов до тех пор, пока не будет подсчитано двести (или пятьсот, если с первыми двумя сотнями было подсчитано менее десяти паразитов). Плотность паразитов рассчитана с использованием оценочной плотности 8000 лейкоцитов на микролитр крови, чтобы продемонстрировать приблизительный диапазон паразитемии в положительных образцах крови, использованных в этом исследовании.

    Оценка приверженности

    Приверженность оценивалась 3 слепыми рецензентами по следующей шкале: 3 — отсутствие дефекта (остаток образца 90-100%), 2 — незначительный дефект (оставшийся образец 66-89%), 1 — значительный дефект (11 -65% остатка образца), 0 — серьезный дефект (осталось 10% образца или меньше).Три слепых рецензента независимо оценили серьезность дефектов, используя указанную шкалу. Присвоенные оценки приверженности представляют собой либо полное согласие (18 случаев), либо консенсус двух рецензентов (восемь случаев).

    Результаты

    Приверженность капель крови

    Оценка приверженности была присвоена каждому слайду слепым способом (репрезентативные изображения см. На рисунке). Слайды, подготовленные с помощью SCM, показали как более низкую частоту, так и меньшую серьезность дефектов прилипания капель крови, чем слайды, подготовленные SM или ADM (рисунок).Не было случаев значительных дефектов (1 по шкале приверженности) или серьезных дефектов (0 по шкале приверженности) для поцарапанных слайдов (рисунок). Слайды, подготовленные ADM, не работали так же хорошо, как SCM или SM с точки зрения частоты или серьезности дефектов прилипания (рисунок). Для SCM наиболее часто наблюдаемым результатом была полностью приставшая капля крови (25/26) с единственным незначительным дефектом прилипания. В то время как полностью прилипшие капли также были наиболее частым результатом для слайдов, приготовленных SM или ADM, частота дефектов прилипания была значительно выше SM (9/26) или ADM (12/26) (рисунок).

    Оценка прилипания капель крови. Примеры различных уровней приверженности по каплям крови и связанных баллов приверженности.

    Частотное распределение оценок приверженности капель крови по методам. Слайды, изготовленные методом царапины, имели самую высокую частоту полного прилегания и не имели каких-либо существенных дефектов (1 балл) или серьезных дефектов (0 баллов). Погружение в ацетон не улучшило адгезию капель по сравнению со стандартным методом приготовления.

    Внешний вид толстой пленки и интерпретация

    Внешний вид толстых пленок, полученных тремя способами подготовки, считался микроскопически неразличимым (для двух слайдов с серьезными потерями образца оценка основывалась на небольшой части оставшегося образца), без каких-либо артефактов, отмеченных с либо SCM, либо ADM. Соответствующие положительные или отрицательные результаты были получены для слайдов, приготовленных тремя способами. Несмотря на серьезные нарушения приверженности на некоторых слайдах, все же можно было оценить положительный результат на 22 положительных слайдах.Точно так же было достигнуто согласие по 4 отрицательным случаям (то есть отсутствие артефактов, которые усложняли бы интерпретацию ни одним из методов). Расчетная паразитемия варьировала от 25 до 429 169 паразитов / мкл крови.

    Обсуждение

    Царапание слайдов при приготовлении толстых пленок от малярии было стандартной практикой в ​​лаборатории клинической паразитологии авторов на протяжении более 40 лет. Истоки этой практики неизвестны, но считается, что она улучшает прилипание толстых пленок крови к предметным стеклам, обеспечивая время сушки менее 30 минут с небольшой потерей мазка крови или без нее.Этот метод прост в применении и требует лишь умеренного усилия, чтобы поцарапать предметное стекло острием другого предметного стекла, что не представляет опасности для биобезопасности лабораторного персонала.

    Рекомендации по объему пробы в толстых малярийных пленках различаются в зависимости от источника и обычно находятся в диапазоне 5–40 мкл [16–21]. Учитывая эти диапазоны и стандартную практику лаборатории авторов, в этом исследовании использовался объем капель 35 мкл. Объем 35 мкл соответствует рекомендациям Руководства по клиническим микробиологическим процедурам, а также является объемом капли, который может быть получен при использовании неизмеренных капель крови (например,g., из одноразовой пипетки для переноса или взятия крови путем укола пальца) [21].

    Результаты подтверждают, что предметные стекла SCM повсеместно не имели существенных дефектов и не влияли ни на внешний вид, ни на качество интерпретации. Напротив, примерно одна треть слайдов, приготовленных стандартным методом, демонстрировала некоторый дефект прилипания капель крови после стандартного окрашивания по Гимзе.

    В отличие от некоторых предыдущих отчетов, в этом исследовании не наблюдалось улучшения приверженности от погружения в ацетон.Потенциальный недостаток этого результата заключается в том, что в этом исследовании было выполнено только одно погружение, в то время как в других исследованиях сообщалось о двух или трех погружениях [8,10]. Другая возможность состоит в том, что фиксация ацетоном более эффективна с каплями крови меньшего объема, чем использовалось в этой работе. Следует отметить, что Iqbal et ​​al. также сообщил о более низком прилипании образцов, промытых ацетоном, по сравнению с предметными стеклами, приготовленными стандартным методом. К сожалению, различия в процедурах окрашивания, использованных в этом исследовании, не позволяют приписать различия в приверженности использованию только ацетоновых промывок.

    Важно отметить, что метод царапания улучшает прилипание капель в условиях, использованных в этом исследовании (лаборатория с контролируемой температурой и влажностью с использованием новых стеклянных предметных стекол), но такие факторы, как температура, влажность, чистота предметных стекол и гематокрит образца могут независимо модулировать прилипание капель. В этой работе эти переменные напрямую не рассматривались, и хотя образцы действительно обладали различным гематокритом, он не был контролируемой переменной в исследовании. Неизвестно, пригодится ли метод царапин в настройках, где слайды очищаются и используются повторно.SCM разрушает предметное стекло, так как при царапании на стекле протравливаются канавки. Вероятно, что повторное травление слайдов может в конечном итоге привести к нежелательному снижению прозрачности слайдов. Однако может не потребоваться повторное протравливание слайдов, если преимущества прилипания капель крови аналогичны слайдам, которые были «предварительно протравлены».

    Выводы

    Метод царапин — недорогой, быстрый и простой метод, который улучшает прилипание толстых пленок крови к стандартным предметным стеклам без изменения подготовки предметных стекол, микроскопического внешнего вида или интерпретируемости.Используя метод царапин, толстые пленки можно надежно исследовать менее чем через два часа после получения образца. Это представляет собой диагностическое улучшение по сравнению с протоколами, требующими длительных периодов сушки для обеспечения прилипания капель.

    Сокращения

    SCM: метод царапины; ADM: метод погружения в ацетон; СМ: Стандартный метод.

    Конкурирующие интересы

    Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

    Вклад авторов

    Задумал и спроектировал эксперименты: APN, BSP.Проведены эксперименты: APN, HEA, LMS, ECF, BSP. Проанализированы данные: APN, BSP. Внесенные реагенты / материалы / инструменты анализа: HEA, LMS, ECF. Написал статью: АПН, БСП. Все авторы одобрили окончательную версию этой рукописи.

    Благодарности

    Мы благодарны сотрудникам паразитологической лаборатории Mayo Clinic за техническую помощь. Эта работа была поддержана докторской стипендией NIH F30 1F30DA26762 (APN).

    Список литературы

    • ВОЗ. Базовая микроскопия малярии.Женева: Пресса ВОЗ; 2010. [Google Scholar]
    • Росс Р. Усовершенствованный метод микроскопической диагностики перемежающейся лихорадки. Ланцет. 1903; 161: 86. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (00) 50432-2. [CrossRef] [Google Scholar]
    • Уорхерст, округ Колумбия, Уильямс, JE. Лабораторная диагностика малярии. J Clin Pathol. 1996; 49: 533–538. DOI: 10.1136 / jcp.49.7.533. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Ochola LB, Vounatsou P, Smith T., Mabaso M, Newton C. Надежность диагностических методов в диагностике и лечении малярии при отсутствии золота стандарт.Lancet Infect Dis. 2006; 6: 582–588. DOI: 10.1016 / S1473-3099 (06) 70579-5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Муди А. Экспресс-тесты для выявления малярийных паразитов. Clin Microbiol Rev.2002; 15: 66–78. DOI: 10.1128 / CMR.15.1.66-78.2002. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Moody AH, Chiodini PL. Методы обнаружения паразитов крови. Clin Lab Haematol. 2000; 22: 189–201. DOI: 10.1046 / j.1365-2257.2000.00318.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Бэйн Б.Дж., Льюис С.М.Практическая гематология, 10 изд. Филадельфия: Черчилль Ливингстон; 2006. Методы приготовления и окрашивания мазков крови и костного мозга; С. 59–78. [Google Scholar]
    • Garcia LS. Диагностическая медицинская паразитология. 5-е издание. Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press; 2007. [Google Scholar]
    • Houwen B. Подготовка мазка крови и процедуры окрашивания. Lab Hematol. 2000; 6: 1–7. [Google Scholar]
    • Икбал Дж., Хира П.Р., Аль-Али Ф., Халид Н., Шер А. Модифицированное окрашивание по Гимзе для быстрой диагностики инфекции малярии.Med Princ Pract. 2003. 12: 156–159. DOI: 10,1159 / 000070751. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Смрковски Л.Л., Родригес К.С. Посевы крови на малярию: метод быстрой фиксации для предотвращения отслоения толстой пленки. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1981; 75: 901–902. [PubMed] [Google Scholar]
    • Смрковски Л.Л., Хоффман С.Л., Пурномо, Хусейн Р.П., Масбар С., Курниаван Л. Устойчивый к хлорохину Plasmodium falciparum на острове Флорес, Индонезия. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1983; 77: 459–462.DOI: 10.1016 / 0035-9203 (83)

      -8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

    • Смрковски Л.Л., Бак Р.Л., Алькантара А.К., Родригес К.С., Уилангко CV. Исследования устойчивости к хлорохину, хинину, амодиахину и мефлохину среди филиппинских штаммов Plasmodium falciparum. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1985. 79: 37–41. DOI: 10.1016 / 0035-9203 (85) -7. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Кастро Г. Экспресс-диагностика малярии по толстым мазкам крови. J Lab Clin Med. 1940; 25: 1308–1310.[Google Scholar]
    • Рейли Дж. Т., Бэйн Б. Дж., Амос Р., Кавилл И., Чепмен К., Англия Дж. М., Хайд К., Матутес Е., Вуд Дж. К., Бэйн Б. Дж., Чиодини П. Л., Англия Дж. М., Бейли Дж. У. Лабораторная диагностика малярии. Clin Lab Haematol. 1997. 19: 165–170. DOI: 10.1111 / j.1365-2257.1997.tb00001.x. [CrossRef] [Google Scholar]
    • Thellier M, Datry A, Alfa Cisse O, San C, Biligui S, Silvie O, Danis M. Диагностика малярии с помощью толстых мазков крови: определение и оценка более быстрого протокола с улучшенной читаемостью.Ann Trop Med Parasitol. 2002. 96: 115–124. DOI: 10,1179 / 000349802125000691. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Бейон П., Эндрюс Л., Хант-Кук А., Сандерсон Ф., Гилберт С.К., Hill AVS. Исследование толстого мазка крови на малярию, вызванную Plasmodium falciparum, снижает чувствительность и недооценивает плотность паразитов. Малар Дж. 2006; 5: 104. DOI: 10.1186 / 1475-2875-5-104. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Карл С., Дэвис TME, Сен-Пьер Т.Г. Сравнение чувствительности обнаружения гаметоцитов Plasmodium falciparum с помощью магнитного фракционирования, микроскопии толстой пленки крови и ОТ-ПЦР.Малар Дж. 2009; 8: 98. DOI: 10.1186 / 1475-2875-8-98. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Nkrumah B, Agyekum A, Acquah SEK, May J, Tannich E, Brattig N, Nguah SB, von Thien H, Adu-Sarkodie Y, Huenger F. Сравнение нового экспресс-теста Partec на малярию с традиционным окрашиванием по Гимзе и золотым стандартом ПЦР в реальном времени. J Clin Microbiol. 2010. 48: 2925–2928. DOI: 10.1128 / JCM.02403-09. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Прюдом О’Мира В., Ремич С., Огуту Б., Лукас М., Мталиб Р., Обаре П., Олоо Ф, Онока С., Осога Дж., Орт С., McKenzie FE.Систематическое сравнение двух методов измерения плотности паразитов в мазках крови от малярии. Parasitol Res. 2006; 99: 500–504. DOI: 10.1007 / s00436-006-0135-х. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
    • Гарсия Л. В: Справочник по процедурам клинической микробиологии, Том 2. Гарсиа Л., редактор. Вашингтон, округ Колумбия: ASM Press; 2010. Приготовление толстых пленок от малярии. [Google Scholar]

    Расхождения в экспресс-диагностике малярии и мазке периферической крови, окрашенном по Гимзе, в диагностике инфекции Plasmodium ovale в Новой Англии

    СЛУЧАЙНЫЙ СЛУЧАЙ

    26-летняя женщина поступила в отделение неотложной помощи через неделю перемежающейся лихорадки, озноба, головных болей, тошноты и недомогания.Ее симптомы усиливались и ослабевали с максимальной температурой до 39,4 ° C. Она отрицала боль в животе, диарею, рвоту, дизурию, гематурию, кашель и кожные высыпания. При обследовании брюшной полости у пациента выявлена ​​возможная спленомегалия. Ее осмотрел лечащий врач через три дня после появления симптомов и сказал, что ее симптомы, вероятно, имели вирусное происхождение. Тесты на грипп и моноспот тогда были отрицательными. Она попыталась принять ибупрофен от лихорадки, но ее симптомы ухудшались.Ее история имела большое значение для поездки в Африку, где она два года проработала медицинским работником в Танзании и Замбии. Перед поездкой она получила соответствующие прививки и принимала противомалярийные препараты в течение первой половины своего пребывания, но не смогла завершить лечение во второй половине. Пациент отрицал какие-либо болезни в тот период. У нее был контакт с больными туберкулезом и ВИЧ, но ее панели по ВИЧ, туберкулезу и гепатиту оставались отрицательными после возвращения в Соединенные Штаты.

    Заказанные лабораторные результаты включали, помимо прочего, общий анализ крови, мазки периферической крови, электролиты, тесты на коагуляцию и анализ мочи (таблица 1). По результатам клинического анализа крови пациентка предположила тяжелую гемолитическую анемию с панцитопенией. Все ее тесты на антитела к анаплазме , эрлихии, бабезии и Лайму были отрицательными. Пациент прошел тест на малярию с помощью теста BinaxNOW Malaria Test. Этот RDT представляет собой иммунохроматографический анализ in vitro для качественной идентификации антигенов Plasmodium . 1 Результаты теста отрицательные. Однако окрашенные по Гимзе толстые и тонкие мазки периферической крови продемонстрировали наличие трофозоитов кольцевой формы. Процент паразитемии составил 1,2%. Ученые лаборатории имели основания полагать, что паразитом был Plasmodium ovale , основываясь на морфологических характеристиках, которые были отображены в мазках периферической крови. Характерные для P. ovale , эритроциты были слегка увеличены, бахромчатые и содержали точки Шуффнера (Рисунки 1 и 2).Наличие точек Шуффнера позволило ученым исключить P. falciparum и P. malariae , поскольку в них отсутствуют эти структуры. Эритроциты, инфицированные P. vivax , также могут демонстрировать точки Шуффнера, но это было исключено, поскольку инфицированные эритроциты были фимбриро- ванными, что является уникальной характеристикой P. ovale (рис. 1 и 2). Кроме того, эритроциты, инфицированные P. vivax , имеют тенденцию быть более увеличенными, чем эритроциты, инфицированные P.овальный .

    Ученые лаборатории полагали, что несоответствие между RDT и мазками периферической крови могло быть связано с неспособностью RDT обнаружить паразитемию на 1,2%. После обсуждения между учеными лаборатории и патологами отделения лабораторной медицины в Центр контроля заболеваний было отправлено несколько изображений мазков периферической крови. Специалисты CDC подтвердили, что паразитами являются P. ovale , большинство из которых находятся на стадии трофозоитов кольцевой формы.Также были обнаружены некоторые шизонты (рис. 3).

    Пациенту назначили Коартем для лечения, который представляет собой комбинированный препарат двух противомалярийных агентов артеметер и люмефантрин. Точный механизм действия этих агентов не совсем понятен, однако исследования показали, что они подавляют синтез нуклеиновой кислоты и белка паразитов. 2 В дополнение к Коартему пациенту дополнительно вводили примахин фосфат, который нацелен на гипнозоитную стадию P.ovale и P. vivax . Это лечение необходимо для предотвращения рецидива болезни из-за секвестрированных паразитов в печени. 3

    Таблица 1.

    Отчет о соответствующих лабораторных исследованиях при поступлении

    Рисунок 1.

    Мазок периферической крови пациента, демонстрирующий два фимбриированных эритроцита с кольцевыми трофозоитами P. ovale . Пятно Гимзы. х1000.

    Рисунок 2.

    Мазок периферической крови пациента, демонстрирующий увеличенный эритроцит с кольцевидными трофозоитами P.овальный . Пятно Гимзы. х1000.

    Рисунок 3.

    Мазок периферической крови пациента с шизонтальной формой P. ovale . Пятно Гимзы. х1000.

    Важно отметить, что в 2016 г. 178 образцов были отправлены на тестирование на малярию с помощью BinaxNOW RDT (таблица 2). Был 151 тест (84,8%), которые были истинно отрицательными (отрицательный RDT, отрицательный мазок крови на Plasmodium spp.). Истинно-положительных результатов было 20 (11,2%) (положительный результат ДЭТ, положительный мазок крови на Plasmodium spp.), 6 (3,4%) ложноотрицательных результатов (отрицательный ДЭТ, положительный мазок крови на Plasmodium spp.) И 1 (0,6%) ложноположительный результат (положительный ДЭТ, отрицательный мазок крови на Plasmodium spp.). Центр контроля заболеваний подтвердил, что 5 из 6 ложноотрицательных результатов были вызваны P. ovale . Один из этих 6 все еще ожидает подтверждения от CDC относительно того, является ли организм P. vivax или P. ovale . Следовательно, все ложноотрицательные результаты ДЭТ, скорее всего, были связаны с инфицированием P.овальный . Процент паразитемии у этих пациентов был низким (таблица 3). Только один тест BinaxNOW был положительным у пациента с инфекцией P. ovale . Эти данные указывают на общую диагностическую чувствительность 76,9%, диагностическую специфичность 99,3%, прогностическую ценность положительного результата 95,2% и прогностическую ценность отрицательного результата 96,2%.

    ОБСУЖДЕНИЕ

    Всемирная организация здравоохранения заявляет, что более трех миллиардов человек подвержены риску заболевания малярией. В 2015 году на страны Африки к югу от Сахары приходилось 88% мировых случаев малярии и 90% смертей от малярии. 4 В США ежегодно диагностируется около 1500 случаев. Большинство этих случаев связаны с путешественниками, особенно медицинскими работниками, и иммигрантами из стран, эндемичных по малярии. 5 Этиология малярии — простейшие паразиты из рода Plasmodium. Существует четыре основных вида Plasmodium , вызывающих болезни у людей. Эти четыре вида — это P. falciparum, P. vivax, P. ovale и P. malariae. 6 P. ovale встречается преимущественно по всей Африке к югу от Сахары. 6 Встречается также на островах Западной части Тихого океана. 7 В Танзании на P. ovale приходится более 10% от видов Plasmodium ; В Замбии на его долю приходится до 5% из видов Plasmodium . 8,9

    Жизненный цикл малярии, вызываемой P. ovale , а также другими видами Plasmodium , включает двух хозяев. В течение В процессе кровоснабжения самка комара Anopheles вводит спорозоиты в организм человека-хозяина.Спорозоиты проникают в печень человека, где они размножаются бесполым путем. Эта стадия известна как экзоэритроцитарная шизогония. На этом этапе организмы превращаются в шизонтов, которые в конечном итоге лопаются и высвобождают мерозоиты. При инфекциях P. ovale и P. vivax существует стадия покоя, при которой организм остается в гепатоцитах в виде гипнозоитов. Гипнозоиты могут вызывать рецидивы, попадая в кровоток через несколько недель, месяцев и даже лет в некоторых случаях. Затем мерозоиты проникают в эритроциты и подвергаются бесполому размножению.Это известно как стадия эритроцитарной шизогонии. Организм развивается в трофозоитную стадию кольцевой формы, которая превращается в шизонта. Шизонт в конечном итоге лопается, высвобождая мерозоиты, которые заражают больше эритроцитов, что приводит к усилению гемолиза. Некоторые паразиты могут дифференцироваться на женские и мужские гаметоциты в эритроците. Эти гаметоциты, захваченные комаром Anopheles , подвергаются половому размножению (спорогенный цикл) со слиянием гамет и, в конечном итоге, миграцией спорозоитов в слюнные железы комаров. 6

    Таблица 2. Результаты экспресс-теста

    BinaxNOW в сравнении с мазками периферической крови 178 образцов в 2016 г.

    Таблица 3.

    Уровни паразитемии для положительных мазков крови

    Жизненный цикл Plasmodium spp. важно понимать, потому что именно на стадии эритроцитарной шизогонии жизненного цикла паразита проявляются первые признаки и симптомы малярии. Лихорадка является одним из наиболее характерных признаков малярии и возникает в разное время из-за созревания шизонтов в разные периоды времени для каждого вида Plasmodium .Шизонты P. vivax и P. ovale созревают каждые 48 часов; поэтому лихорадка третичная, случающаяся каждые два дня. Малярийный пароксизм состоит из трех стадий. Озноб характерен для первой стадии. Вторая стадия характеризуется высокой температурой с теплой сухой кожей и сопутствующими головной болью, недомоганием, тошнотой и рвотой. На последней стадии возникает обильное потоотделение, в результате чего температура тела снижается. 10

    Малярия, вызванная P.falciparum является более тяжелым и быстро прогрессирующим из-за прилипания инфицированных эритроцитов к стенкам сосудов микроциркуляции, вызывая блокировку кровотока и, как следствие, ишемию пораженной ткани. Анемия часто встречается во всех случаях малярии из-за внутрисосудистого гемолиза и фагоцитоза инфицированных эритроцитов. Внутрисосудистый гемолиз может в конечном итоге привести к гемоглобинурии и, возможно, почечной недостаточности, если паразитемия высока. Возможные лабораторные результаты в случае малярии включают нормохромную / нормоцитарную анемию, тромбоцитопению, лейкопению или лейкоцитоз, гипонатриемию, гипогликемию, повышенные тесты функции печени и почек, протеинурию и аномальные тесты коагуляции. 10 В гематологических результатах у пациента выявлены анемия, тромбоцитопения, лейкопения и повышенный уровень D-димера. Химический анализ и анализ мочи показали повышение уровня трансаминаз, общего и прямого билирубина, а также белка и крови в моче (Таблица 1). Тромбоцитопения и лейкопения могли быть вызваны спленомегалией и, как следствие, секвестрацией. Тромбоцитопения также может быть объяснена признаками ДВС-синдрома у пациента, о чем свидетельствует повышенный уровень D-димера. Повышенный общий и прямой билирубин является результатом внутрисосудистого гемолиза.

    Диагностика малярии в основном основывается на клинических симптомах пациента, а также на результатах физикального обследования, хотя результаты физикального обследования, как правило, неспецифичны. Могут присутствовать признаки нарушения функции печени. Известно также, что малярия вызывает спленомегалию из-за увеличения выведения паразитированных эритроцитов. 10 Для окончательного диагноза необходимо провести лабораторные исследования. Прямая микроскопическая оценка толстых и жидких мазков крови является наиболее распространенным методом идентификации.Существуют также тесты на антиген малярии (RDT) и молекулярные тесты для дифференциации видов или для использования у людей с низким уровнем паразитемии. 6 Оценка толстых и тонких мазков периферической крови, окрашенных по Гимзе, как упоминалось ранее, остается золотым стандартом и является важным шагом в точном определении видов Plasmodium . Необходимо определить вид, вызывающий инфекцию, поскольку он влияет на тип применяемого протокола лечения. 3 Окраска по Гимзе позволяет обнаруживать морфологические особенности, которые могут быть видны у определенных видов и отсутствовать у других. При инфекции P. ovale инфицированные эритроциты обычно имеют нормальный размер, но могут быть увеличены в 1,25 раза, поскольку организм заражает молодые эритроциты, у которых более гибкие мембраны. Это позволяет искажать и увеличивать инфицированные эритроциты. Эритроциты имеют округлую или овальную форму, могут содержать точки Шуффнера и иногда кажутся бахромчатыми.На стадии трофзоита кольцевой формы паразит имеет твердую цитоплазму и большой хроматин. Также часто можно увидеть многократно инфицированные эритроциты с P. ovale. Шизонты содержат 6-14 мерозоитов. Это большинство морфологических характеристик, которым следуют лабораторные работники, чтобы идентифицировать P. ovale как причину малярии. 11

    Несмотря на то, что микроскопическая оценка остается золотым стандартом для лабораторного подтверждения малярии, чувствительность не составляет 100%, а требование квалифицированного обращения и интерпретации затрудняет поддержание оптимальной квалификации для ученых-клиницистов, практикующих в неэндемичных регионах. . 12 На протяжении многих лет было разработано множество лабораторных тестов, чтобы помочь в быстрой диагностике малярийных инфекций.

    Хотя большинство тестов, выполненных на образце пациента, предполагали малярию, важно исследовать тестовый набор BinaxNOW, чтобы понять, почему он не может обнаружить малярийные антигены, присутствующие в крови пациента. Тест BinaxNOW Malaria (BN) — это первый и единственный одобренный Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) экспресс-тест на малярию в США. 13 В этом качественном тесте используются моноклональные антитела для идентификации богатых гистидином белков, специфичных для P. falciparum , и альдолазы, которая является основным ферментом гликолитического пути малярийных паразитов, в образце цельной крови с ЭДТА. 1,6 Коммерческие антитела разделяются вдоль мембраны; если малярийные антигены присутствуют при добавлении образца, они будут связываться с захваченными антителами на мембране и образовывать видимую тестовую линию под контрольной линией после добавления реагента.Этот тест не позволяет различать виды P. falciparum , отличные от , или инфекции с несколькими видами Plasmodium . 1 Эффективность теста оценивалась в исследовании 2001 года, которое проводилось в эндемичных по малярии регионах. BinaxNOW сравнивали с традиционной оценкой толстых и тонких мазков периферической крови. Диагностическая чувствительность оценивалась по уровням паразитемии, наблюдаемым под микроскопом. Исследование пришло к выводу, что этот иммунохроматографический метод очень полезен для диагностики P.falciparum случаев, но не так эффективен для выявления других видов малярии. 1

    Прежде чем анализировать диагностическую чувствительность и специфичность теста BinaxNOW, важно понять, что для определения чувствительности теста для определения уровней паразитемии использовалось количество паразитов на мкл крови, а не процент паразитемии. , который лаборатория использует при оценке тонких мазков периферической крови 1 . Паразитемия также может быть определена количественно с помощью толстого мазка, но из-за того, что микроорганизмы легко видны на тонком мазке, его чаще всего используют для определения уровня паразитемии.Процент паразитемии можно пересчитать в количество организмов на мкл. Используя стандартное количество 5,0 × 10 6 эритроцитов на / мкл, 1% паразитемии эквивалентно 50 000 организмов / мкл. Паразитемия 0,1% эквивалентна 5000 организмов / мкл. Расчет можно скорректировать, если пациенту известно точное количество эритроцитов на мкл крови. 14 Было продемонстрировано, что экспертная микроскопия способна обнаруживать паразитемию 0,001% (50 организмов на мкл). 14

    Для P.falciparum , результаты исследования 2001 г. показывают, что при уровне паразитемии> 5000 / мкл диагностическая чувствительность теста составляла 99,7%. Диагностическая чувствительность теста снижалась при более низком уровне паразитемии. При уровне 0–100 / мкл диагностическая чувствительность составила 53,9%. Общая диагностическая чувствительность для P. falciparum составила 95,3% при диагностической специфичности 94,2%. Это был надежный процент, потому что в исследовании участвовало 1796 случаев малярии, результаты которых оказались положительными при микроскопии.Из 1796 пациентов 557 были инфицированы P. falciparum , а 1187 — инфекциями P. vivax . Для P. vivax диагностическая чувствительность при уровне паразитемии> 5000 / мкл составила 93,5%. Чувствительность также снижалась при снижении уровня паразитемии. Общая диагностическая чувствительность для P. vivax составила 68,9% при диагностической специфичности 99,8%. Смешанные инфекции, вызванные P. falciparum и P. vivax , составили 34 из 1796 случаев, при этом 94.Чувствительность 1%. Диагностическая чувствительность была ниже для случаев P. malariae и P. ovale . Для P. malariae диагностическая чувствительность составила только 43,8% для 16 микроскопически положительных образцов малярии и 50% диагностической чувствительности для двух образцов P. ovale . Следовательно, диагностическая чувствительность тест-набора BinaxNow была низкой для P. ovale , однако в ходе исследования было протестировано недостаточное количество положительных образцов на этих паразитов.По этой причине нельзя точно сделать вывод о диагностической чувствительности и специфичности для P. ovale . 1

    В исследовании 2014 года, проведенном Танидзаки, Като, Ивагами и др., Авторы пришли к выводу, что диагностическая чувствительность ДЭТ, таких как тестовый набор BinaxNOW, недостаточно высока для правильной диагностики инфекции P. ovale . Этот вывод также был основан на ограниченном количестве образцов P. ovale , что привело к чувствительности только 22,2% для девяти пациентов, прошедших тестирование. 15 Кроме того, исследователи из разных учреждений обнаружили, что диагностическая чувствительность ДЭТ для P. ovale в клинических образцах может составлять всего 5,5%. 12 Известно, что пациенты, инфицированные P. ovale , часто имеют низкий паразитемический статус. 7 В некоторых исследованиях также утверждается, что P. ovale не так легко обнаружить с помощью ДЭТ, потому что этот организм, как правило, имеет низкую продукцию альдолазы. 16 Таким образом, клинические лаборатории в Соединенных Штатах, которые используют BinaxNOW в качестве первичного скринингового теста на малярию, должны знать, что даже если это отличный тест на P.falciparum и P. vivax , многие случаи P. ovale могут быть ложноотрицательными, особенно если одновременно не проводится прямое микроскопическое исследование мазка периферической крови. В нашем учреждении все тесты BinaxNOW, заказанные врачами, также автоматически получают заказ на мазок крови на паразитов. Все пациенты, независимо от результата BinaxNOW, получают результат мазка крови с уровнем паразитемии. Об окончательном результате сообщается, когда патолог гематолог рассматривает мазок крови.Мазок отправляется в CDC для подтверждения, когда патолог не может различить не виды P. falciparum (обычно между P. ovale и P. vivax ; редко бывает, что у нас P. malariae ). Было подтверждено, что почти все мазки крови, которые были отправлены в CDC в 2016 году, содержали P. ovale (один результат еще не получен). В случае получения отрицательного результата мазка крови врач сообщает: «Паразитов крови не обнаружено.Хотя отрицательный результат мазка делает диагноз малярии маловероятным, настоятельно рекомендуется исследовать несколько образцов в течение 2–3 дней, если клинические подозрения высоки ». Производитель тестового набора BinaxNOW заявляет, что все отрицательные тесты должны подтверждаться микроскопией. 1 Микроскопия позволяет видоизменять и определять количество паразитов и тяжесть заболевания. БЭД по малярии не предоставляют эту информацию. 12

    Еще одним примечательным фактом является то, что анализ малярии BinaxNOW не обладает высокой диагностической чувствительностью с P.knowlesi инфекция. В исследовании 2014 года 28 образцов свежей крови и 41 замороженный образец от пациентов с P. knowlesi были протестированы с помощью BinaxNOW malaria RDT. Видообразование было выполнено перед использованием ПЦР. RDT смог обнаружить виды non-falciparum только в 29% (8/28) в образцах свежей крови с P. knowlesi и в 24% (10/41) в образцах замороженной крови. 17 P. knowlesi является причиной малярии человека в Юго-Восточной Азии. Трудно диагностировать микроскопически, потому что молодые кольцевидные трофозоиты имеют общие морфологические характеристики с P.falciparum и более зрелые трофозоиты с P. malariae. 18

    Также важно отметить, что высокие уровни паразитемии могут вызывать ложноотрицательные результаты с помощью ДЭТ из-за эффекта прозоны. Избыток антигена блокирует сайты связывания на тест-полоске, тем самым предотвращая связывание антител. Это может произойти в образцах, демонстрирующих паразитарную нагрузку 4% или больше. 19

    При использовании ДЭТ могут возникать ложные положительные результаты, поскольку малярийные антигены могут оставаться в кровотоке в течение нескольких недель после успешного лечения. 20 Описана перекрестная реактивность с ревматоидным фактором. Ревматоидный фактор может присутствовать при аутоиммунных состояниях, а также при некоторых вирусных и паразитарных инфекциях. 21

    Этот случай иллюстрирует важность того, чтобы клинический лабораторный ученый поддерживал свою компетентность, поскольку обнаружение, видообразование и оценка паразитемии все еще сильно зависят от микроскопической оценки мазков периферической крови. Это особенно верно в отношении ученых-клинических лабораторий, которые не практикуют в эндемичных по малярии районах.Как указывалось ранее, опытная микроскопия продемонстрировала способность обнаруживать 50 организмов на 1 мкл). 14 Ученые из клинических лабораторий, которые плохо знакомы с этой областью и / или не имеют опыта, скорее всего, не смогут обнаружить такой низкий уровень паразитемии.

    Даже среди опытных микроскопистов есть расхождения. В исследовании 2012 года, в котором исследователи сравнивали ДЭТ с микроскопией и ПЦР для выявления малярии у детей школьного возраста в Кении, для микроскопической оценки использовались хорошо обученные «опытные» технологи.Во время оценки мазков периферической крови 10,2% (612) слайдов пришлось перекрашивать из-за плохого окрашивания, а у 18,7% (1125) были расхождения между двумя экспертами-микроскопистами, которые должны были быть устранены третьим технологом. 22

    Плохая техника (микроскопия, подготовка и окрашивание мазков периферической крови) может привести к неточным результатам. Артефакты, такие как включения эритроцитов, тромбоциты и окрашенный осадок, могут быть ошибочно приняты за Plasmodium spp.Необходимо тщательное обучение и поддержание навыков подготовки и оценки мазков периферической крови. 23,24 Авторы рекомендуют клиническим лабораторным работникам регулярно включать диагностику малярии в свое непрерывное образование.

    Анализ изображений и машинное обучение для выявления малярии

    https://doi.org/10.1016/j.trsl.2017.12.004Получение прав и контента

    Малярия остается серьезным бременем для глобального здравоохранения: примерно 200 миллионов случаев во всем мире и более 400 000 смертей в год.Помимо биомедицинских исследований и политических усилий, современные информационные технологии играют ключевую роль во многих попытках борьбы с болезнью. Одним из препятствий на пути к успешному снижению смертности является, в частности, неадекватная диагностика малярии. Чтобы улучшить диагностику, были использованы программное обеспечение для анализа изображений и методы машинного обучения для количественной оценки паразитемии на микроскопических препаратах крови. В этой статье дается обзор этих методов и обсуждаются текущие разработки в области анализа изображений и машинного обучения для микроскопической диагностики малярии.Мы организуем различные подходы, опубликованные в литературе, в соответствии с методами, используемыми для получения изображений, предварительной обработки изображений, обнаружения паразитов и сегментации клеток, вычисления признаков и автоматической классификации клеток. Читатели найдут различные методы, перечисленные в таблицах, с соответствующими статьями, указанными рядом с ними, как для тонких, так и для толстых изображений мазков крови. Мы также обсудили последние разработки в разделах, посвященных глубокому обучению и технологиям смартфонов для будущей диагностики малярии.

    Сокращения

    GLRLM

    Матрица продолжительности серий серого уровня

    IEEE

    Институт инженеров по электротехнике и электронике

    NIH

    Национальный институт здравоохранения

    NLM

    Национальная медицинская библиотека

    PCR

    Цепная реакция полимеразы

    PLOS

    Публичная научная библиотека

    QFT Кватернионное преобразование Фурье

    QPI

    Quantitative Phase Imaging

    SBFSEM

    Последовательная блочная сканирующая электронная микроскопия

    SEM

    Сканирующий электронный микроскоп

    SROFM

    Оптико-жидкостный микроскоп с субпиксельным разрешением

    SUSAN

    Сегментная поддержка Unimus

    Самый маленький сегмент

    Всемирная организация здравоохранения

    Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

    Опубликовано Elsevier Inc.

    Рекомендуемые статьи

    Цитирующие статьи

    (PDF) Метод уменьшения отслоения толстых мазков крови для диагностики малярии

    Контраст, примерно на одной трети слайдов, приготовленных

    стандартным методом, обнаружен некоторый дефект в крови

    адгезия капель после стандартного окрашивания по Giemsa

    .

    В отличие от некоторых предыдущих отчетов, в

    этом исследовании не наблюдалось никакого эффекта от погружения в ацетон

    .Потенциальный недостаток этого результата состоит в том, что

    только одно погружение было выполнено в этом исследовании,

    , в то время как два или три погружения были зарегистрированы в других исследованиях

    [8,10]. Другая возможность состоит в том, что фиксация ацетоном

    более эффективна с меньшим объемом капель крови

    , чем использованная в этой работе. Следует отметить, что Iqbal et al.

    также сообщили о более низкой адгезии в промытых образцах

    ацетона по сравнению со слайдами, приготовленными стандартным методом

    .К сожалению, различия в процедурах окрашивания

    , использованных в этом исследовании, не позволяют приписать различия в приверженности к применению только ацетона

    промывок.

    Важно отметить, что метод царапин im-

    доказывает прилипание капель в условиях, использованных в

    этом исследовании (боратория la-

    с контролем температуры и влажности с использованием новых стеклянных предметных стекол), но такие факторы, как

    температура, влажность, чистота предметного стекла и гематокрит образца

    могут независимо модулировать ад-

    капель.Эта работа напрямую не касалась этих переменных

    , и хотя образцы действительно обладали различным гематокритом

    , он не был контролируемой переменной в исследовании

    . Неизвестно, будет ли метод царапины

    полезным в настройках, где слайды очищаются и используются повторно.

    SCM разрушает предметное стекло, поэтому канавки

    врезаются в стекло при царапании. Вероятно,

    , что многократное травление слайдов может в конечном итоге привести

    к нежелательному снижению прозрачности слайдов.

    Однако может не потребоваться повторное протравливание

    предметных стекол, если преимущества прилипания капель крови

    аналогичны таковым для предметных стекол, которые были «предварительно протравлены».

    Выводы

    Метод скретчинга — это недорогой, быстрый и простой

    метод, который улучшает прилипание толстых

    пленок крови к стандартным предметным стеклам без изменения подготовки предметных стекол

    , микроскопического внешнего вида или интер-

    предварительной подготовки. .Используя метод царапания, толстые пленки

    можно надежно исследовать менее чем через два часа после получения образца

    . Это представляет собой диагностическое улучшение

    по сравнению с протоколами, требующими длительных периодов сушки, до

    , обеспечивающих прилипание капель.

    Сокращения

    SCM: метод царапины; ADM: метод погружения в ацетон; СМ: Стандартный метод.

    Конкурирующие интересы

    Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

    Вклад авторов

    Задумал и спроектировал эксперименты: APN, BSP.Выполнил

    экспериментов

    : APN, HEA, LMS, ECF, BSP. Проанализированы данные: APN, BSP.

    Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: HEA, LMS, ECF. Написал статью

    : APN, BSP. Все авторы одобрили окончательную версию этой рукописи.

    Благодарности

    Мы благодарны сотрудникам паразитологической лаборатории Mayo Clinic за техническую

    помощь. Эта работа была поддержана Predoctoral Fellowship NIH F30

    1F30DA26762 (APN).

    Сведения об авторе

    1

    Департамент медицины, клиника Мейо, Рочестер, Миннесота, США.

    2

    Отделение

    Клиническая микробиология, клиника Мэйо, Рочестер, Миннесота, США.

    Получено: 1 марта 2013 г. Принято: 1 июля 2013 г.

    Опубликовано: 8 июля 2013 г.

    Ссылки

    1. ВОЗ: Базовая микроскопия малярии. Женева: Пресса ВОЗ; 2010.

    2. Росс Р. Усовершенствованный метод микроскопической диагностики перемежающейся лихорадки

    .Ланцет 1903, 161: 86.

    3. Уорхерст, округ Колумбия, Уильямс Дж. Э .: Лабораторная диагностика малярии. Дж. Клин Патол

    1996, 49: 533–538.

    4. Очола Л.Б., Вунацу П., Смит Т., Мабасо М., Ньютон С.: Надежность

    диагностических методов в диагностике и лечении малярии в

    отсутствие золотого стандарта. Lancet Infect Dis 2006, 6: 582–588.

    5. Moody A: Экспресс-тесты для выявления малярийных паразитов. Clin Microbiol Rev

    2002, 15: 66–78.

    6. Moody AH, Chiodini PL: Методы обнаружения паразитов крови.

    Clin Lab Haematol 2000, 22: 189–201.

    7. Бейн Б.Дж., Льюис С.М.: Методы подготовки и окрашивания крови и костей

    пленок костного мозга. В Практической гематологии, 10 изд. Филадельфия: Черчилль

    Ливингстон; 2006: 59–78.

    8. Гарсия Л.С.: Диагностическая медицинская паразитология. 5-е издание. Вашингтон, округ Колумбия: ASM

    Press; 2007.

    9. Houwen B: Подготовка мазка крови и процедуры окрашивания.Lab Hematol

    2000, 6: 1–7.

    10. Икбал Дж., Хира П.Р., Аль-Али Ф., Халид Н., Шер А: модифицированное окрашивание по Гимзе для

    быстрой диагностики инфекции малярии. Med Princ Pract 2003, 12: 156–159.

    11. Смрковски Л.Л., Родригес К.С.: Посевы крови на малярию: быстрая фиксация

    Метод предотвращения отслоения толстой пленки. Trans R Soc Trop Med Hyg

    1981, 75: 901–902.

    12. Смрковски Л.Л., Хоффман С.Л., Пурномо, Хусейн Р.П., Масбар С., Курниаван L:

    Устойчивый к хлорохину Plasmodium falciparum на острове Флорес,

    Индонезия.Trans R Soc Trop Med Hyg 1983, 77: 459–462.

    13. Смрковски Л.Л., Бак Р.Л., Алькантара А.К., Родригес К.С., Уилангко CV: Исследования устойчивости

    к хлорохину, хинину, амодиахину и мефлохину среди

    филиппинских штаммов Plasmodium falciparum. Trans R Soc Trop Med Hyg

    1985, 79: 37–41.

    14. Кастро Дж .: Экспресс-диагностика малярии по толстым мазкам крови. J Lab

    Clin Med 1940, 25: 1308–1310.

    15. Рейли Дж. Т., Бэйн Б. Дж., Амос Р., Кавилл И., Чепмен К., Англия Дж. М., Хайд К., Матутес

    Е, Вуд Дж. К., Бэйн Б. Дж., Чиодини П. Л., Англия Дж. М., Бейли Дж. У .: Лаборатория

    диагноз малярии.Clin Lab Haematol 1997, 19: 165–170.

    16. Thellier M, Datry A, Alfa Cisse O, San C, Biligui S, Silvie O, Danis M: Диагностика

    малярии с использованием толстых мазков крови: определение и оценка более быстрого протокола

    с улучшенной читаемостью. Энн Троп Мед Паразитол 2002,

    96: 115–124.

    17. Беджон П., Эндрюс Л., Хант-Кук А., Сандерсон Ф., Гилберт С.К., Хилл AVS: Толстый

    Анализ мазка крови

    на малярию, вызванную Plasmodium falciparum, снизил чувствительность

    и занижает плотность паразитов.Малар Дж. 2006, 5: 104.

    18. Карл С., Дэвис TME, Сен-Пьер Т.Г.: Сравнение чувствительности обнаружения

    гаметоцитов Plasmodium falciparum с помощью магнитного фракционирования

    , микроскопии толстой пленки крови и ОТ-ПЦР. Малар J 2009,

    8:98.

    19. Nkrumah B, Agyekum A, Acquah SEK, May J, Tannich E, Brattig N, Nguah SB,

    von Thien H, Adu-Sarkodie Y, Huenger F: сравнение нового экспресс-теста Partec

    на малярию с стандартное окрашивание по Гимзе и стандартная ПЦР в реальном времени gold

    .J Clin Microbiol 2010, 48: 2925–2928.

    Norgan et al. Malaria Journal 2013, 12:23 Страница 4 из 5

    http://www.malariajournal.com/content/12/1/231

    Влияние плотности малярийных паразитов на параметры клеток крови

    Abstract

    Изменения параметров клеток крови — уже хорошо известная особенность малярийных инфекций. В дополнение к этой информации, цель этого исследования состояла в том, чтобы изучить различные эффекты, которые разные уровни плотности паразитов оказывают на параметры клеток крови.Пациенты, у которых была диагностирована малярия в больнице Фобфра, провинция Так, Таиланд, в период с 1 января st 2009 г. по 1 января st 2012 г. были набраны в качестве субъектов для сбора данных. Были оценены и статистически проанализированы параметры клеток крови 2024 инфицированных малярией пациентов. Количество нейтрофилов и тромбоцитов было значительно выше, однако количество эритроцитов было значительно ниже у пациентов с P . falciparum по сравнению с таковыми с P . vivax инфекция (p <0,0001). Количество лейкоцитов также было значительно выше у пациентов с высокой паразитемией по сравнению с пациентами с низкой и средней паразитемией. Что касается дифференциального количества лейкоцитов, количество нейтрофилов было значительно выше у пациентов с высокой паразитемией по сравнению с пациентами с низкой и средней паразитемией (p <0,0001). С другой стороны, количество лимфоцитов и моноцитов было значительно ниже у пациентов с высокой паразитемией (p <0,0001). Количество эритроцитов и концентрация гемоглобина, а также количество тромбоцитов также значительно снизились (p <0.05) и (p <0,0001) соответственно. Подводя итог, можно сказать, что пациенты, инфицированные различными паразитами малярии, демонстрировали важные отличительные гематологические параметры, при этом количество нейтрофилов и эозинофилов оказывало наибольшее влияние на гематологические параметры. Кроме того, пациенты, инфицированные малярией различной плотности, также демонстрировали важные изменения в количестве лейкоцитов, количестве тромбоцитов и концентрации гемоглобина во время инфекции. Эти результаты дают возможность распознать и диагностировать анемию, связанную с малярией, помочь в ее лечении, а также облегчить симптомы тяжелой малярии в эндемичных регионах.

    Образец цитирования: Kotepui M, Piwkham D, PhunPhuech B, Phiwklam N, Chupeerach C, Duangmano S (2015) Влияние плотности малярийных паразитов на параметры клеток крови. PLoS ONE 10 (3): e0121057. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0121057

    Академический редактор: Джуд Марек Пржиборски, Филиппский университет Марбург, ГЕРМАНИЯ

    Поступила: 7 апреля 2014 г .; Одобрена: 4 февраля 2015 г .; Опубликовано: 25 марта 2015 г.

    Авторские права: © 2015 Kotepui et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника

    Доступность данных: Данные не могут быть опубликованы доступны в связи с этическими ограничениями, наложенными Комитетом по этике по правам человека в связи с исследованиями с участием людей в качестве субъектов исследования Университета Валайлак, поскольку набор данных включает идентифицирующую информацию.Запросы данных можно направить доктору Веравату Махаттанатракулу, главе Комитета по этическому разрешению.

    Финансирование: У этих авторов нет поддержки или финансирования, чтобы сообщить о них.

    Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

    Введение

    Изменения в количестве клеток крови — хорошо известный признак малярийных инфекций. Эти изменения затрагивают основные клеточные линии, включая эритроциты (эритроциты), лейкоциты и тромбоциты.Гематологические изменения в течение малярийной инфекции, такие как анемия, тромбоцитопения и лейкоцитоз или лейкопения, хорошо известны. Эти изменения зависят от уровня эндемичности малярии, фоновой гемоглобинопатии, статуса питания, демографических факторов, а также иммунитета к малярии [1,2,3].

    Гиперпаразитемия была внесена в список Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) в качестве одного из критериев тяжелой малярии falciparum на протяжении более двух десятилетий [4]. Предыдущие исследования показали, что существует корреляция между плотностью паразитов и тяжестью малярийных инфекций [5,6].Смертность также коррелирует со степенью паразитемии. Пациенты с самой высокой плотностью паразитов также имеют самые высокие показатели летальности [7]. Кроме того, высокая паразитемия, вызванная инфекцией Plasmodium falciparum , принимает серьезный оборот в анемии [8]. Более того, чрезмерный гемолиз паразитированных эритроцитов при малярийной инфекции может привести к анемии [9]. Тромбоцитопения также наблюдалась у большинства пациентов с малярией. Также было замечено, что при высоких паразитемиях количество тромбоцитов значительно ниже.Предыдущие исследования отметили, что повышение уровня P . falciparum паразитарные нагрузки приводят к снижению количества тромбоцитов [10,11].

    Целью этого исследования было продемонстрировать влияние P . falciparum и P . vivax инфекции, а также различная плотность паразитов на параметры клеток крови у больных малярией. Гематологические параметры (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, уровень гемоглобина (Hb), средний корпускулярный объем (MCV), средний корпускулярный гемоглобин (MCH), средняя концентрация корпускулярного гемоглобина (MCHC) и ширина распределения эритроцитов (RDW) у пациентов, инфицированных малярия.

    Методы

    Заявление об этике

    Этот протокол исследования был рассмотрен и одобрен Комитетом по этическому разрешению прав человека в связи с исследованиями с участием людей Университета Валайлак. Имя и номер больницы (HN) пациентов не разглашаются. Информированное согласие не было получено от участников исследования, но записи / информация о пациентах были анонимны и деидентифицированы до этого анализа.

    Сбор данных

    Данные, использованные в этом исследовании, были собраны в Лаборатории медицинских технологий больницы Фобфра, провинция Так.В это исследование были включены данные всех пациентов с диагнозом малярия в период с 1 января 2009 г. по 1 января 2012 г. в больнице Фобфра, провинция Так. Демографические, клинические и лабораторные данные всех этих пациентов были собраны с использованием стандартной формы, а полученная информация сохранена в электронной базе данных. Количество лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов измеряли с помощью автоматического счетчика клеток. В течение этого периода исследования после тщательной калибровки независимо использовались три разных счетчика клеток (Mindray BC-5180, BC 5300, BC-5200).Абсолютное количество дифференцированных лейкоцитов получали путем умножения абсолютного количества лейкоцитов на их соответствующий дифференциальный процент. Были обнаружены незрелые или аномальные лейкоциты, эритроциты или скопления тромбоцитов, или когда результаты подсчета клеток существенно отличались от нормальных значений, выполнялось ручное подтверждение результатов автоматического подсчета клеток. Другие доступные лабораторные исследования включали RBC, Hb, MCV, MCH, MCHC, RDW и количество тромбоцитов. Стандартная процедура, используемая для диагностики малярии, — это исследование толстых и жидких мазков крови на малярийных паразитов путем окрашивания по Райту и Гимзе и обнаружение организма под световым микроскопом лабораторными работниками.После обнаружения малярийных паразитов тонкие мазки использовались для определения вида паразита и плотности паразита. Уровень паразитемии выражали как процент (%) эритроцитов, инфицированных малярийными паразитами. В этом исследовании была исследована тысяча эритроцитов, и среди них было отмечено количество инфицированных эритроцитов. Затем рассчитывали процент паразитемии путем деления количества инфицированных эритроцитов на общее количество проиндексированных эритроцитов, умноженных на 100. Данные пациентов были разделены для сравнения на P . falciparum и P . vivax группы. Что касается уровней малярийной паразитемии, данные были сгруппированы в группы с высокой паразитемией (> 10 паразитов / 1 месторождение нефти), умеренной паразитемией (1–10 паразитов / 1 месторождение нефти) и низкой паразитемией (1–100 паразитов / 100 месторождений нефти). Была проведена проба Колмогорова-Смирнова. Было обнаружено, что данные не имеют нормального распределения и поэтому представлены в виде медианы и диапазона. Демографические параметры, такие как пол и национальность, сравнивались с использованием точного теста Фишера.Непрерывные переменные, такие как возраст и гематологические параметры, сравнивались с использованием теста Манна-Уитни или критерия Краскалла-Уоллиса. Анализ данных проводился с помощью программы SPSS ver. 11.5 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс, США).

    Результаты

    Характеристики пациента

    В период с 1 января -го 2009 г. по 1 декабря -го 2012 года для этого исследования были собраны данные по 2 024 случаям пациентов с малярией со всеми доступными параметрами. Из этих случаев 987 (48.8%) были вызваны P . falciparum , тогда как 1037 (51,2%) были вызваны P . vivax . Нет пациентов с коинфекцией P . falciparum и P . Найдено vivax . Средний возраст значительно отличался между двумя группами паразитарных инфекций (p <0,0001), со значительными различиями по полу (p = 0,008), национальности (0,012), а также малярийной паразитемии (p <0,0001). Всего было 1318 (65.1%) пациентов с низкой паразитемией, 542 (26,8%) пациента с умеренной паразитемией и 164 (8,1%) пациента с высокой паразитемией. Все общие характеристики этих пациентов показаны в таблице 1. Диаграмма консорта также показана на рисунке 1.

    Количество лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов у пациентов с

    P . falciparum и P . vivax инфекция

    Количество лейкоцитов достоверно не различается у пациентов с P . falciparum по сравнению с таковыми с P . vivax инфекция (p> 0,05) (таблица 2). Для дифференциального подсчета лейкоцитов количество нейтрофилов было значительно выше у пациентов с P . falciparum по сравнению с P . vivax (p <0,0001), тогда как количество эозинофилов было ниже у пациентов с P . falciparum по сравнению с P . vivax инфекция (p = 0,027). Что касается параметров эритроцитов, количество эритроцитов было значительно ниже у пациентов с P . falciparum по сравнению с P . vivax инфекция (p = 0,009). Кроме того, другие параметры эритроцитов, включая MCV, MCH и MCHC, были значительно выше у пациентов с P . falciparum по сравнению с P . vivax инфекция (p <0,05). Количество тромбоцитов было значительно ниже у пациентов с P . falciparum по сравнению с P . vivax инфекция (p <0.0001) (рис.2).

    Количество лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов при разном уровне паразитемии

    Количество лейкоцитов было значительно выше у пациентов с высокой паразитемией по сравнению с пациентами с низкой и средней паразитемией (Таблица 3). Для дифференциального подсчета лейкоцитов количество нейтрофилов было значительно выше у пациентов с высокой паразитемией по сравнению с пациентами с группами низкой и средней паразитемии (p <0,0001). Количество лимфоцитов и моноцитов было значительно ниже у пациентов с высокой паразитемией по сравнению с пациентами с группами низкой и средней паразитемии (p <0.0001). Количество эритроцитов и гемоглобин были значительно снижены у пациентов с высокой паразитемией по сравнению с пациентами с группами низкой и средней паразитемии (p <0,05), тогда как MCV и MCH были значительно снижены у пациентов с умеренной паразитемией по сравнению с пациентами с группами низкой и высокой паразитемии (p <0,05). Количество тромбоцитов было заметно снижено у пациентов с высокой паразитемией по сравнению с пациентами с группами низкой и средней паразитемии (p <0,0001) (рис. 3). Можно предсказать, что связь между малярийной паразитемией и гематологическими параметрами не зависит от возраста.Таким образом, согласно статистическим данным, возраст не является фактором, который вызывает какие-либо существенные различия между малярийной паразитемией и гематологическими показателями (Таблица 4).

    Обсуждение

    На основании собранных данных, заражение P . falciparum более опасны, чем инфекции, вызванные другими видами малярии, особенно P . vivax , из-за частоты связанных с ним тяжелых и смертельных осложнений. Этот смертельный паразит может быть причиной церебральной малярии, острой почечной недостаточности, острого малярийного гепатита, гипогликемии, гиперпирексии, некардиогенного отека легких, респираторного дистресс-синдрома взрослых, синдрома надпочечников, гиперпаразитемии, лихорадки Блэкуотера, сердечных аритмий и желудочно-кишечных синдромов. как секреторная диарея [12,13].

    Гематологические аномалии считаются признаком малярии и, как сообщается, наиболее выражены в P . falciparum инфекции. Это исследование показало, что P . falciparum малярийные инфекции могут приводить к значительным изменениям различных параметров клеток крови по сравнению с инфекциями с P . vivax , включая более высокий нейтрофильный и более низкий ответы эозинофилов. Было обнаружено, что это открытие контрастирует с результатами предыдущего исследования, в котором сообщалось, что изменения, вызванные малярией, включают снижение уровня нейтрофилов [14].Основные механизмы включают маргинализацию нейтрофилов к участкам воспаления, локализацию в селезенке, сывороточные лимфотоксические факторы и интеркуррентные бактериальные инфекции [15,16,17,18]. Несмотря на то, что результаты этого исследования оказались разными, это исследование все еще показывает корреляцию с другим предыдущим исследованием, которое показало, что индуцированная малярия falciparum у обезьян Aotus приводит к увеличению абсолютного количества нейтрофилов после инфицирования [19]. Однако было обнаружено, что лейкоцитоз чаще встречается у Plasmodium vivax инфицированных афроамериканских солдат по сравнению с кавказскими солдатами [20].Предыдущие данные для эозинопении в этом исследовании показали, что P . Инфекция falciparum может подавлять ранее существовавшую эозинофилию, но P . Инфекции vivax в меньшей степени влияют на количество эозинофилов в периферической крови [21].

    Это исследование показало более низкое количество эритроцитов в P . falciparum по сравнению с P . vivax . Причина и следствие малярии и анемии сложны и до конца не изучены.Зараженные эритроциты обладают пониженной деформируемостью и измененными характеристиками поверхности, что обычно приводит к их фильтрации и удалению селезенкой. Однако паразит малярии P . falciparum нашел способ противодействовать этой защитной мере. Они модифицируют мембрану своей клетки-хозяина, что в конечном итоге приводит к цитоадгезии эритроцитов к эндотелию. Зараженные и неинфицированные эритроциты группируются вместе — процесс, называемый секвестрацией и розеткой, и закупоривает капиллярные и посткапиллярные венулы различных органов.Кроме того, усиленное разрушение неинфицированных эритроцитов в сочетании со снижением выработки эритроцитов усугубляет анемию, связанную с малярией. [22,23]. В соответствии с этим количество эритроцитов у пациентов с малярией falciparum было ниже, чем у пациентов с малярией vivax. Индексы RBC, включая MCV, MCH и MCHC, также были выше в P . falciparum , чем P . vivax инфекции. Это может быть причиной того, что скорость производства эритроцитов приводит к выбросу незрелых эритроцитов в кровоток, что может вызвать увеличение значений MCV, MCH и MCHC.

    Помимо анемии, снижение количества тромбоцитов является еще одним из наиболее известных гематологических изменений, наблюдаемых у пациентов с малярией. Это исследование подтвердило более низкое количество тромбоцитов у пациентов, инфицированных P . falciparum по сравнению с P . vivax были особенно важны. Предыдущее исследование показало, что распространенность тромбоцитопении была сходной при заражении малярией vivax и falciparum, но у пациентов с тяжелой малярией falciparum количество тромбоцитов было значительно ниже, чем у пациентов с нетяжелой малярией falciparum [24].Результаты других предыдущих исследований показали, что тромбоцитопения, по-видимому, возникает в результате периферической деструкции [25]. Иммуноопосредованное разрушение циркулирующих тромбоцитов может быть причиной тромбоцитопении при малярийных инфекциях, особенно вызванных P . falciparum [26]. Патогенетические механизмы, с помощью которых тромбоциты опосредуют тяжесть заболевания у пациентов с малярией falciparum, еще предстоит определить. Однако клинические исследования показали, что тромбоциты у пациентов с P . falciparum экспрессирует Toll-подобные рецепторы (TLR), которые высвобождают предварительно упакованные медиаторы воспаления [27], такие как оксид азота (NO), ключевой медиатор гомеостаза тромбоцитов. У пациентов с тяжелой формой малярии была обнаружена пониженная биодоступность NO, что может способствовать увеличению активации и потребления тромбоцитов [28,29]. В этом исследовании наблюдались тенденции между увеличением плотности паразитов и увеличением уровня гематологических показателей. Количество лейкоцитов, особенно нейтрофильных гранулоцитов, было значительно выше у пациентов с высокими паразитемиями по сравнению с пациентами с низкими и умеренными паразитемиями.Предыдущее исследование обнаружило устойчивую положительную взаимосвязь между количеством лейкоцитов и плотностью паразитов у пациентов, инфицированных Plasmodium [30]. Результаты предыдущего исследования показали, что не было тенденции по квартилям плотности паразитов по отношению к количеству лейкоцитов в течение периода P . falciparum и P . vivax инфекции [31]. Однако количество лимфоцитов и моноцитов было значительно выше у пациентов с низкими паразитемиями по сравнению с пациентами с умеренными и высокими паразитемиями.Тенденция к снижению тромбоцитов с увеличением уровня паразитемии, наблюдаемая в этом исследовании, была ранее отмечена для P . falciparum [31,32,33,34] и P . vivax [31]. Низкое количество тромбоцитов было связано с увеличением плотности паразитов. Эта ассоциация может быть результатом сенсибилизации, вызванной паразитизированными эритроцитами в тромбоцитах, с последующим повышением чувствительности тромбоцитов к аденозиндифосфату (АДФ) и более высокой секрецией плотных гранул [3,35].Эти изменения могут способствовать агрегации тромбоцитов на эндотелии, например, при церебральной малярии [36].

    Анемию можно рассматривать как меру совокупного воздействия малярии на отдельного пациента. Пациенты с длительной лихорадкой в ​​анамнезе (> 2 дней) в 1,5 раза чаще заболевали анемией, а их гематокрит снижался в 3 раза> 25% [2]. Хотя патогенез анемии при малярии сложен и плохо изучен, он обычно наблюдается у пациентов с малярией falciparum [8].Он может быстро развиваться, принимая серьезный оборот в случае P . falciparum инфекция из-за большого количества паразитов. При более высоком уровне паразитемии чрезмерный гемолиз паразитированных эритроцитов может привести к анемии. В этом исследовании количество эритроцитов и гемоглобин были значительно снижены у пациентов с высокой паразитемией, что согласуется с предыдущими исследованиями, показывающими значительное увеличение распространенности анемии с увеличением плотности паразитов [37]. Предыдущее исследование показало, что анемия наблюдалась у 72 человек.4% пациентов с высоким числом паразитов, а также обратной зависимостью между плотностью паразитов и уровнем гемоглобина [38]. Механизм, связанный с анемией, не доказан, но две возможные причины этих изменений — усиление гемолиза или снижение скорости образования эритроцитов [39,40]. Более того, предыдущее исследование показало, что высокая паразитемия, даже без осложнений, может привести к высокой смертности, которая может достигать до 50% у пациентов с паразитемией более 10% в регионах с низкой передачей [41].Эта информация полезна для агентств общественного здравоохранения, чтобы облегчить борьбу с анемией, связанной с малярией. Однако это следует интерпретировать с осторожностью, поскольку предполагается, что нет других факторов, которые ответственны за анемию (вмешивающиеся факторы).

    Основным ограничением этого исследования является смешивающий фактор, который может влиять на гематологические параметры, такие как бактериальные, вирусные и гельминтозные инфекции, дефицит питательных микроэлементов и генетический фон пациентов. В этом исследовании также использовалась микроскопия как единственный метод обнаружения малярийных паразитов; Это означает, что некоторые пациенты с отрицательной малярией могли иметь малярийных паразитов, которые могли быть обнаружены только с помощью ПЦР, и это могло привести к недооценке влияния малярийной паразитемии на гематологические параметры.

    Заключение

    Это исследование позволяет сделать вывод, что пациенты, инфицированные различными малярийными паразитами, демонстрируют важные изменения и различия во многих гематологических параметрах, причем количество нейтрофилов и эозинофилов является двумя наиболее важными изменениями во время малярийной инфекции. Кроме того, пациенты, инфицированные малярийными паразитами различной плотности, также демонстрируют значительное количество лейкоцитов, количество тромбоцитов и концентрацию гемоглобина во время малярийной инфекции. Политика борьбы с малярией должна быть направлена ​​на снижение или устранение плотности малярийных паразитов в крови.

    Благодарности

    Авторы благодарны и хотели бы особо поблагодарить лабораторию медицинских технологий больницы Phop Phra за предоставленные данные, которые были важны для этой исследовательской статьи.

    Вклад авторов

    Задумал и спроектировал эксперименты: МК НП. Проведены эксперименты: МК БП НП СД. Проанализированы данные: МК УК. Внесенные реактивы / материалы / инструменты анализа: МК БП НП СД. Написал бумагу: МК ДП.

    Ссылки

    1. 1.Erhart LM, Yingyuen K, Chuanak N, Buathong N, Laoboonchai A, Miller RS ​​и др. Гематологические и клинические показатели малярии в полуиммунном населении западного Таиланда. Am J Trop Med Hyg. 2004; 70: 8–14. pmid: 14971691
    2. 2. Прайс Р.Н., Симпсон Дж. А., Ностен Ф., Люксембург С., Хкирджароен Л., Тер Куиле Ф. и др. Факторы, способствующие развитию анемии после неосложненной малярии falciparum. Am J Trop Med Hyg. 2001. 65: 614–622. pmid: 11716124
    3. 3. Wickramasinghe SN, Abdalla SH.Изменения крови и костного мозга при малярии. Baillieres Best Practices Clin Haematol. 2000; 13: 277–299. pmid: 10942626
    4. 4. Всемирная организация здравоохранения. Тяжелая и осложненная малярия. Trans R Soc Trop Med Hyg. 1990; 84: 1–65. pmid: 2385863
    5. 5. Тангпукди Н., Крудсуд С., Кано С., Вилайратана П. Индекс малярийной паразитемии Falciparum для прогнозирования тяжелой малярии. Int J Lab Hematol. 2012; 34: 320–327. pmid: 22221310
    6. 6. Филлипс А., Бассет П., Зеки С., Ньюман С., Пасвол Г.Факторы риска тяжелого заболевания малярией falciparum у взрослых. Clin Infect Dis. 2009. 48: 871–878. pmid: 19243243
    7. 7. Murthy GL, Sahay RK, Srinivasan VR, Upadhaya AC, Shantaram V, Gayatri K. Клинический профиль малярии falciparum в больнице третичного уровня. J Indian Med Assoc. 2000. 98: 160–162. pmid: 11016175
    8. 8. Башаури Л.А., Мандил А.А., Банасси А.А., Ахмед М.А. Малярия: гематологические аспекты. Ann Saudi Med. 2002. 22: 372–376. pmid: 17146269
    9. 9.Эквалл Х. Малярия и анемия. Curr Opin Hematol. 2003. 10: 108–114. pmid: 12579035
    10. 10. Rojanasthien S, Surakamolleart V, Boonpucknavig S, Isarangkura P. Гематологические и коагуляционные исследования при малярии. J Med Assoc Thai. 1992; 75: 190–194. pmid: 1506799
    11. 11. Ричардс М.В., Беренс Р.Х., Доэрти Дж.Ф. Краткое сообщение: гематологические изменения при острой завозной Plasmodium falciparum малярии. Am J Trop Med Hyg. 1998; 59: 859. pmid: 9886188
    12. 12.Кочар Д.К., Кочар С.К., Агравал Р.П., Сабир М., Наяк К.С., Агравал Т.Д. и др. Изменяющийся спектр тяжелой малярии falciparum: клиническое исследование в Биканере (северо-запад Индии). J Vector Borne Dis. 2006. 43: 104–108. pmid: 17024858
    13. 13. Mohapatra MK. Естественная история осложненной малярии falciparum — перспективное исследование. J Assoc Physitors Индия. 2006; 54: 848–853. pmid: 17249251
    14. 14. Гольдштейн Э. Клиническое исследование малярии falciparum и vivax у военнослужащих Вьетнама.Mil Med. 1968; 133: 991–996. pmid: 4977144
    15. 15. Дейл, округ Колумбия, Вольф С.М. Исследования нейтропении при острой малярии. Кровь. 1973; 41: 197–206. pmid: 4575057
    16. 16. Хвиид Л., Кемп К. Какова причина лимфопении при малярии? Заражение иммунной. 2000; 68: 6087–6089. pmid: 11203040
    17. 17. Bordessoule D, Gaulard P, Mason DY. Предпочтительная локализация лимфоцитов человека, несущих гамма-дельта-Т-клеточные рецепторы, в красной пульпе селезенки. J Clin Pathol.1990; 43: 461–464. pmid: 2143201
    18. 18. Мабей, округ Колумбия, Браун А., Гринвуд Б.М. Plasmodium falciparum Инфекции малярии и сальмонеллы у детей Гамбии. J Infect Dis. 1987; 155: 1319–1321. pmid: 3553352
    19. 19. Какома I, Джеймс М.А., Уайтли Х.Э., Монтелегре Ф., Бусез М., Фафьяр-Вестоун С.Дж. и др. Кинетика тромбоцитов и другие гематологические профили при экспериментальной инфекции Plasmodium falciparum : сравнительное исследование обезьян Saimiri и Aotus.Kisaengchunghak Chapchi. 1992. 30: 177–182. pmid: 1420030
    20. 20. Фишер Г.У., Гордон М.П., ​​Лобель Х.О., Рунчик К. Малярия у солдат, возвращающихся из Вьетнама. Эпидемиологические, терапевтические и клинические исследования. Am J Trop Med Hyg. 1970; 19: 27–39. pmid: 4

      9

    21. 21. Шанкс Г.Д., Вилайратанапорн С. Эозинофильный ответ на малярийные инфекции, вызванные falciparum. Юго-Восточная Азия J Trop Med Public Health. 1992; 23: 795–797. pmid: 1298092
    22. 22. Халдар К., Мохандас Н.Малярия, эритроцитарная инфекция и анемия. Образовательная программа Hematology Am Soc Hematol. 2009: 87–93. pmid: 20008186
    23. 23. Суванаруск Р., Кук Б.М., Дондорп А.М., Силамут К., Саттабонгкот Дж., Уайт Нью-Джерси и др. Деформируемость эритроцитов, паразитирующих Plasmodium falciparum и P . vivax . J Infect Dis. 2004. 189: 190–194. pmid: 14722882
    24. 24. Сараву К., Дочерла М., Васудев А., Шастры Б.А. Тромбоцитопения при малярии vivax и falciparum: обсервационное исследование 131 пациента в Карнатаке, Индия.Ann Trop Med Parasitol. 2011; 105: 593–598. pmid: 22325818
    25. 25. Ladhani S, Lowe B, Cole AO, Kowuondo K, Newton CR. Изменения лейкоцитов и тромбоцитов у детей с малярией falciparum: связь с исходом болезни. Br J Haematol. 2002; 119: 839–847. pmid: 12437669
    26. 26. Пейн А., Фергюсон Д. Д., Кай О, Городская Британская Колумбия, Лоу Б., Марш К. и др. Опосредованное тромбоцитами скопление эритроцитов, инфицированных Plasmodium falciparum , является распространенным адгезивным фенотипом и связано с тяжелой формой малярии.Proc Natl Acad Sci U S. A. 2001; 98: 1805–1810. pmid: 11172032
    27. 27. Моррелл К.Н., Аггри А.А., Чепмен Л.М., Моджески К.Л. Новые роли тромбоцитов как иммунных и воспалительных клеток. Кровь. 2014. 123: 2759–2767. pmid: 24585776
    28. 28. Ансти Н.М., Вайнберг Дж. Б., Хассанали М.Ю., Мвайкамбо Э.Д., Маненга Д., Мисуконис М.А. и др. Оксид азота у танзанийских детей с малярией: обратная зависимость между тяжестью малярии и производством оксида азота / экспрессией синтазы оксида азота типа 2.J Exp Med. 1996. 184: 557–567. pmid: 8760809
    29. 29. Йео Т.В., Лампа Д.А., Гитавати Р., Тджитра Е., Кенангалем Е., Макнил Ю.Р. и др. Нарушение биодоступности оксида азота и обратимая эндотелиальная дисфункция L-аргинина у взрослых с малярией falciparum. J Exp Med. 2007. 204: 2693–2704. pmid: 17954570
    30. 30. McKenzie FE, Prudhomme WA, Magill AJ, Forney JR, Permpanich B, Lucas C и др. Количество лейкоцитов и малярия. J Infect Dis. 2005; 192: 323–330. pmid: 15962228
    31. 31.Erhart LM, Yingyuen K, Chuanak N, Buathong N, Laoboonchai A, Miller RS ​​и др. Гематологические и клинические показатели малярии в полуиммунном населении западного Таиланда. Am J Trop Med Hyg. 2004; 70: 8–14. pmid: 14971691
    32. 32. Rojanasthien S, Surakamolleart V, Boonpucknavig S, Isarangkura P. Гематологические и коагуляционные исследования при малярии. J Med Assoc Thai. 1992; 75: 190–194. pmid: 1506799
    33. 33. Ричардс М.В., Беренс Р.Х., Доэрти Дж.Ф. Краткое сообщение: гематологические изменения при острой завозной Plasmodium falciparum малярии.Am J Trop Med Hyg. 1998; 59: 859. pmid: 9886188
    34. 34. Сараву К., Дочерла М., Васудев А., Шастры Б.А. Тромбоцитопения при малярии vivax и falciparum: обсервационное исследование 131 пациента в Карнатаке, Индия. Ann Trop Med Parasitol. 2011; 105: 593–598. pmid: 22325818
    35. 35. Прасад Р., Дас Б.К., Пенгориа Р., Мишра О.П., Шукла Дж., Сингх ТБ. Статус коагуляции и функции тромбоцитов у детей с тяжелой формой малярии, вызванной falciparum, и их корреляция с исходом. J Trop Pediatr.2009; 55: 374–378. pmid: 19401406
    36. 36. Grau GE, Mackenzie CD, Carr RA, Redard M, Pizzolato G, Allasia C и др. Накопление тромбоцитов в микрососудах головного мозга при детской церебральной малярии со смертельным исходом. J Infect Dis. 2003. 187: 461–466. pmid: 12552430
    37. 37. Китуа А.Ю., Смит Т.А., Алонсо П.Л., Урасса Х., Масанджа Х., Кимарио Дж. И др. Роль паразитемии низкого уровня.Trop Med Int Health. 1997. 2: 325–333. pmid: 9171840
    38. 38. Али ХАТ, Махмуд Т., Бахт С.Ф., Фарук М.Ю., Ахмед Н. Плотность паразитов и спектр клинических заболеваний при малярии falciparum. J Coll Врачи Surg Pak. 2008. 18: 362–368. pmid: 18760048
    39. 39. Уэтеролл Д. Анемия малярии. МакГрегор I WW, редактор. Нью-Йорк: Черчилль Ливингстон; 1988.
    40. 40. Филлипс Р.Э., Пасвол Г. Анемия, вызванная малярией Plasmodium falciparum .Baillieres Clin Haematol. 1992; 5: 315–330. pmid: 1511178
    41. 41. КТО. Тяжелая форма малярии, вызванной falciparum. Всемирная организация здравоохранения, Кластер инфекционных заболеваний. Trans R Soc Trop Med Hyg. 2000; 94: S1 – S90. pmid: 11103309

    Чувствительное обнаружение малярии Plasmodium vivax с помощью магнитооптического метода вращающегося кристалла в Таиланде

    Чувствительность RMOD при обнаружении

    инфекций P. {- 1}}} \).Как видно на рис. 1А, этот диапазон хорошо покрывается образцами, хотя их распределение плотности паразитов не было однородным.

    Помимо общей плотности паразитов, опытный микроскопист также определил распределение эритроцитарных стадий, и паразиты были классифицированы как кольца , трофозоиты, шизонты, мужские и женские гаметоциты . Последние три формы составляли менее 10% от общей плотности паразитов во всех выборках, за одним исключением, в котором их доля достигала 35%.Секвестрация шизонтов — хорошо известное явление при инфекциях P. falciparum , но статистика наших образцов P. vivax предполагает, что это также происходит для P. vivax 21 . Соответственно, в мазках крови были обнаружены в основном кольца и трофозоиты, но их относительные соотношения варьировались в выборке. Большая часть образцов (n = 27) показала относительно синхронный характер и содержала либо преимущественно \ ((\ ge 70 \%) \) кольца, либо трофозоиты, как видно на рис.1Б. В отличие от доминирования кольцевых паразитов в периферическом кровообращении инфекций P. falciparum , в случае этих P. vivax -положительных образцов более 30% образцов не показали кольцевых форм, а 88% содержали трофозоиты более чем на 10%.

    Рис. 1

    ( A ) Значения плотности паразитов в образцах, инфицированных P. vivax (n = 35), с их медианой и 95% доверительным интервалом (95% -CI) медианы.( B ) Процент образцов, содержащих указанную пропорцию колец (светло-серые столбцы) и трофозоитов (темно-серые столбцы), т.е. гистограммы частоты встречаемости колец и трофозоитов.

    В качестве первого шага уровень слабого остаточного сигнала MO, который присутствует даже в образцах людей, не инфицированных малярией, был измерен на пуле неинфицированных образцов, чтобы установить порог, который разделяет положительный и отрицательный сигнал RMOD. случаи. Измерения четырнадцати неинфицированных образцов, полученных от людей, не инфицированных малярией в Таиланде, каждый из которых был измерен в двух экземплярах, дали среднее остаточное значение MO \ (\ rm {(0.50 \ pm 0,22) \, {mV / V}} \), как показано на рис. 2A. Уровень сигнала MO, который разделяет случаи заболеваемости с положительной и отрицательной малярией, т. Е. Пороговый уровень, был определен как среднее плюс двукратное стандартное отклонение этих остаточных значений, предполагая, что значения MO неинфицированных образцов обычно распределены случайным образом. переменные. Это привело к уровню отсечки 0,94 мВ / В, как показано горизонтальной черной пунктирной линией на рис. 2B и C.

    Как показано на рис. 2B, все модели P.Образцы крови, инфицированные vivax , протестированы выше порогового значения, что дает 100% чувствительность для этого набора образцов. Более того, для более чем 90% образцов значения MO по крайней мере на один порядок больше порогового значения, что означает, что этот метод может обнаруживать более низкие плотности паразитов. Чтобы смоделировать такие случаи, мы выбрали десять из исходных образцов крови и подготовили из них серии разведений, используя неинфицированную цельную кровь в качестве среды для разбавления. {- 1}}} \), а плотности паразитов в наиболее разбавленных образцах покрывают диапазон \ (0.{-1}})} \) не зависят от номинальной паразитной нагрузки. Эти остаточные значения MO разбросаны вокруг среднего остаточного значения, полученного для неинфицированных контролей, ниже порогового уровня, определенного ранее. Это также подтверждает, что этот остаточный сигнал МО не связан с паразитами. Соответственно, предел обнаружения с точки зрения плотности паразитов определяется как средняя плотность паразитов для образцов со значениями МО вблизи порогового значения, т. Е. В диапазоне \ (\ rm {0.94 \ pm {0.08} \, {mV / V}} \). Эта оценка приводит к пределу обнаружения прибл.{-1}}} \), когда в качестве эталона использовалась оптическая микроскопия 20 .

    Рисунок 2

    ( A ) Значения MO для четырнадцати образцов, не инфицированных малярией, полученных от двух человек в различные моменты времени в ходе исследования, с их средним значением и стандартным отклонением. ( B ) Значения МО инфицированных образцов (серые кружки, n = 35) в зависимости от плотности их паразитов. Каждая точка данных представляет собой среднее значение MO по крайней мере двух технических дубликатов (отдельные ошибки менее 10% и скрыты логарифмической шкалой).Цветные символы показывают значения MO образцов, полученных путем серийного разведения десяти инфицированных образцов. Черные непрерывные и пунктирные линии указывают среднее значение MO для образцов, не инфицированных малярией, и пороговый уровень, соответственно, в то время как черная стрелка отмечает расчетную самую низкую плотность обнаруживаемых паразитов по RMOD. ( C ) Синие звездочки показывают значения MO образцов, инфицированных P. vivax , собранных в Папуа-Новой Гвинее (n = 104), как воспроизведено из Ref. 15 .Синяя пунктирная линия отмечает значение отсечки для RMOD, определенное анализом рабочих характеристик приемника (ROC) в этом исследовании 15 .

    Корреляция между значениями МО, плотностью паразита и распределением стадий

    Как видно на рис. <0,0001 \)) для образцов, полученных серийным разведением, если их значения MO выше порогового уровня.Однако корреляция между значениями МО и плотностью паразитов для исходных (неразбавленных) образцов составляет \ (R = 0,66 \ text {(рейтинг Спирмена,} \ rm {95 \% \ text {-} ДИ: 0,40 \, к \ , 0.81)} \), что указывает на умеренную корреляцию. Этот разброс значений MO для образцов с почти одинаковой паразитемией естественным образом возникает, по крайней мере частично, из того факта, что RMOD количественно определяет количество гемозоина в крови, которое зависит не только от общей плотности паразита, но и от распределения стадий. циркулирующих паразитов и скорости выведения гемозоина из кровотока.Такой разброс значений МО из-за перечисленных факторов также объясняет относительно большую ошибку предела обнаружения, указанного выше.

    Хотя сигнал MO показывает только умеренную корреляцию с плотностью паразита, он лучше коррелирует с расчетным содержанием гемозоина ( HZ ), который является параметром, рассчитанным путем допущения различных скоростей продукции гемозоина на разных стадиях эритроцитов. Когда мы используем подмножество образцов с явным преобладанием колец и трофозоитов, т.е.е., которые содержат шизонты и гаметоциты менее чем в \ (3 \% \), содержание гемозоина хорошо аппроксимируется соотношением \ (HZ = 1 \ cdot Ri + \ alpha \ cdot T \), где \ (Ri \ text { и} T \) обозначают плотность колец и трофозоитов, соответственно, а \ (\ alpha \) — относительный вклад гемозоита трофозоитов по сравнению с кольцами. (Обратите внимание, что параметр HZ представляет собой взвешенную плотность паразитов, которая не равна фактической концентрации гемозоина, а линейно ей пропорциональна). Как показано на рис.3A, коэффициент корреляции Спирмена между значениями MO и соответствующими значениями HZ достигает своего максимума, \ (R = 0,9 \), при \ (\ alpha = 4,5 \ pm 0,3 \). Хотя оценка относительной скорости продуцирования шизонтов и гаметоцитов менее точна из-за их редкости и ограниченного размера статистической выборки, их вклад оценивается примерно в 10%. В 12–20 раз превышает содержание гемозоина в кольцах. Как показано на рис. 3B, для полного набора образцов наилучшая корреляция Спирмена, \ (\ rm {R = 0.75 \ {(95 \% \ text {-} CI: 0.55 \, to \, 0.87})} \), было достигнуто при следующих относительных вкладах гемозоина на разных стадиях: \ (HZ = 1 \ cdot Ri + 4.5 \ cdot T + 17 \ cdot (S + G) \), где S и G обозначают плотность шизонтов и гаметоцитов в образцах соответственно.

    Рисунок 3

    ( A ) Коэффициент ранговой корреляции Спирмена между значениями MO и расчетным содержанием гемозоина, \ (HZ = 1 \ cdot Ri + \ alpha \ cdot T \), как функция \ (\ alpha \).Красная кривая показывает коэффициент корреляции, рассчитанный для подгруппы образцов, в которых доля шизонтов и гаметоцитов была ниже 3% (n = 19). Черная кривая показывает коэффициент корреляции для полной выборки (n = 35). ( B ) Значения MO как функция плотности паразитов (нижняя ось абсцисс, синие кружки) и как функция HZ (верхняя ось абсцисс, красные ромбы).

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.