Укус клеща. Что делать? На что обращать внимание? — Сеть МЦ «Доктор Боголюбов»
Итак если вы увидели что к коже вашего ребенка присосался клещ- необходимо действовать спокойно, четко и уверенно.
1 )в идеальном варианте клеща удаляет хирург или травматолог (вне зависимости от возраста ребенка), если вы находитесь вдали от квалифицированной помощи -клеща нужно удалить самостоятельно. Можно удалить пинцетом, зажимом, так же в свободной продаже есть специальные приспособления для удаления клещей например: Uniclean Tick Twister
(имеет преимущество перед пинцетом и зажимом, поскольку этим приспособлением тело клеща не сдавливается, и его легче достать полностью (важно для дальнейшей диагностики))
Если же ничего из выше перечисленного нет, то тогда можно использовать обычную прочную нить- обкрутив нить как можно ближе к хоботку ее завязывают в узел и плавно! подтягивают клеща в верх.
Если вы удаляете клеща при помощи пинцета, зажима- то захватите клеща как можно ближе к хоботку и подтягивайте при этом вращая его вокруг своей оси. Никаких резких движений в этот момент быть не должно иначе вы просто оторвете тельце от хоботка. Если же вы все же повредили целостность клеща , то лучше обратиться к хирургу или травматологу , который вам или вашему ребенку удалит головку клеща. Если же такой возможности нет, то обработайте участок с головой клеща спиртом и прокаленной (стерильной) иглой удалите головку самостоятельно.
После удаления клеща — место укуса обработать настойкой йода или спиртом (чтобы место не инфицировалось и не нагнаивалось). Также желательно отметить дату укуса в календаре, чтобы не путаться во время консультации с врачом.
2. если вы справились удачно и достали клеща целиком то необходимо его поместить в банку с влажной марлей и плотно закрыть крышкой, затем в течении 2 суток отдать в лабораторию ( в Москве это-:Лаборатория Роспотребнадзора, Москва, Графский пер.
, д.4 стр.9 (вход со двора, дверь напротив входа в виварий), тел. 8(495)687-40-47. Федеральный Центр гигиены и эпидемиологии (ФГУЗ ФЦ ГиЭ Роспотребнадзора), Москва, Варшавское шоссе, д. 19 А, тел. +74985404098 ;Институт полиомиелита и вирусного энцефалита, МО, г. Внуково, пос. Московский, тел. 439-90-96. Баклаборатория в Московской области г.Мытищи,ул.Семашко,д.2. тел 8(498) 684-48-17 Инвитро в Москве (495) 363-0-363, 8(800) 200-363-0
для другого метода обследования (ПЦР) подойдут и части не живого клеща , и при этом срок доставки фрагментов может быть удлинен.
Вся эта диагностика проводится для того, чтобы можно было 1— отслеживать санэпид обстановку по регионам, и 2— быть на чеку родителям при случае если обследование клеща на опасные инфекции (клещевой энцефалит и боррелиоз) дало «положительный» реультат т. е. клещ мог заразить ребенка. Почему именно «быть на чеку»? Ведь то что в данном клеще нашли источник инфекций не значит что передача инфекции произошла.
В какие сроки нужно сдавать анализы ребенку для исключения/подтверждения инфекций у ребенка? (клещевой энцефалит, боррелиоз)
Через 10 дней от момента укуса можно сдавать кровь на ПЦР(заболевания боррелиоз и клещевой энцефалит).
Через 21 день от момента укуса на IgМ к боррелиям. Если результаты положительные, то необходимо обратиться к инфекционисту.
Если сдавать эти важные анализы раньше указанного срока они просто напросто будут не информативными.
На что обращать внимание после укуса клеща?
Первые и основные симптомы на которые надо обращать внимание у ребенка, если укус клеща произошел: температура -в первые часы + покраснение в месте укуса— скорее так проявляется аллергическая реакция.
Также необходимо следить за местом укуса— появление красных колец вокруг места укуса в период от3 до 30 дней после укуса свидетельствует о начале боррелиоза- при данном симптоме также обязательно надо обратиться к инфекционисту!
А также внимательно наблюдайте за общим состоянием ребенка, если появляется слабость потливость, ребенок капризный, аппетит снижен, появляются боли в мышцах и суставах, самочувствие плохое и вы это напрямую связываете со случившимся укусом клеща, то наблюдение у инфекциониста крайне желательно.
Меры предосторожности:
Чтобы предотвратить укус и последствия укуса клеща нужно при посещении леса и лесопарковой зоны:
1) выбирать одежду которая закрывает все тело (рубашки кофты — с длинным рукавом , плотными манжетами и высоким плотно прилегающим к телу воротником, брюки длинные — чтобы можно было заправить в носки, обязательно идти с головным убором или в капюшоне который защитит не только голову но и шею )
2) одежда должна быть светлой (легче обнаружить клеща когда он попал на одежду)
3) как правило клещи больше обитают в высокой траве, кустах и кустарниках — поэтому внимательно относитесь к тому чтобы дети не бегали возле и между такого вида растений
4) пользуйтесь отпугивающими препаратами (репеллентами) — ДЭТА-проф – аэрозоль,ДЭФИ-Тайга – раствор, карандаш, лосьон, эмульсия, аэрозоль, бальзам, крем, гель;Ультратон (Ultraton) США – лосьон, аэрозоль (но осторожно использовать у детей раннего возраста(только согласно инструкции))
5) внимательно осматривайте себя, детей, животных и все что вы брали в лес или из леса до того как зайти домой
6) для предотвращения последствий укуса клеща, а именно клещевого энцефалита детям проводят вакцинацию.
На данный момент на территории РФ наиболее популярна вакцина «Вакцина клещевого энцефалита культурная очищенная концентрированная инактивированная сухая» проводится вакцинация с 3 дет , следует отметить что существуют вакцины, которыми можно прививать детей с 1 года (ФСМЕ-Иммун Инжект (Бакстрим-Иммуно, Австрия).
Вацинации против боррелиоза на данный момент-не существует.
Будьте внимательны к своему здоровью и здоровью своих близких.
N | Наименование документа | Регистрационный номер |
Раздел 3. ЭпидемиологияГруппа 3.1. Профилактика инфекционных болезней | ||
1 | Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных болезней | СП 3.1./3.2.1379-03 Минздрав России |
Подгруппы | ||
3. | ||
2 | Профилактика брюшного тифа и паратифов | СП 3.1.1.2137-06 Роспотребнадзор |
3 | Профилактика полиомиелита | СП 3.1.1.1118-02 Минздрав России |
4 | Профилактика острых кишечных инфекций | СП 3.1.1.1117-02 Минздрав России |
5 | Профилактика вирусных гепатитов. Общие требования к эпидемиологическому надзору за вирусными гепатитами | СП 3.1.958-99 Минздрав России |
6 | Иерсиниозы | СП 3. |
7 | Профилактика холеры. Общие требования к эпидемиологическому надзору за холерой | СП 3.1.1086-02 Минздрав России |
8 | Профилактика холеры. Организационные мероприятия. Оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий на случай возникновения очага холеры | МУ 3.1.1.2232-07 Роспотребнадзор |
9 | Лабораторная диагностика холеры | МУК 4.2.2218-07 Роспотребнадзор |
10 | Энтеровирусные заболевания: клиника, лабораторная диагностика, эпидемиология, профилактика | МУ 3. |
11 | Эпидемиологический надзор за полиомиелитом и острыми вялыми параличами | МУ 3.1.1.1119-02 Минздрав России |
12 | Эпидемиологическая диагностика вспышки острых кишечных инфекций | МУ, 1998 Минздрав России |
13 | Ротавирусная инфекция у новорожденных | МР, 1999 Минздрав России |
14 | По мониторингу окружающей среды за контаминацией холерными вибрионами на территории Российской Федерации | МР от 23.06.95 01-19/55-17 Госкомсанэпиднадзор |
3. | ||
15 | Профилактика менингококковой инфекции | СП 3.1.2.2156-06 Роспотребнадзор |
16 | Профилактика гриппа | СП 3.1.2.1319-03 Минздрав России |
17 | Профилактика гриппа. Дополнения и изменения к СП 3.1.2.1319-03 | СП 3.1.2.1382-03 Минздрав России |
18 | Профилактика коклюшной инфекции | СП 3.1.2.1320-03 Минздрав России |
19 | Профилактика туберкулеза | СП 3. |
20 | Профилактика стрептококковой (группы А) инфекции | СП 3.1.2.1203-03 Минздрав России |
21 | Профилактика кори, краснухи и эпидемического паротита | СП 3.1.2.1176-02 Минздрав России |
22 | Профилактика дифтерии | СП 3.1.1108-02 Минздрав России |
________________ | ||
23 | Эпидемиологический надзор за коклюшной инфекцией | МУ 3. |
24 | Эпидемиологический надзор и профилактика стрептококковой (группы А) инфекции | МУ 3.1.1885-04 Минздрав России |
25 | Эпидемиологический надзор за корью, краснухой и эпидемическим паротитом | МУ 3.1.2.1177-02 Минздрав России |
26 | Эпидемиологический надзор за дифтерийной инфекцией | МУ 3.1.1082-01 Минздрав России |
27 | Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высоковирулентными штаммами вируса гриппа птиц типа А (ВГПА), у людей | МУК 4. |
28 | Лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов | МУК 4.2.1887-04 Минздрав России |
29 | Быстрая диагностика гриппа и других ОРВИ иммунофлюоресцентным методом | МР от 18.04.06 0100/4434-06-34 Роспотребнадзор |
30 | Выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и куриных эмбрионах и их идентификация | МР от 18.04.06 0100/4430-06-34 Роспотребнадзор |
3.1.3 Кровяные инфекции | ||
31 | Профилактика чумы | СП 3. |
32 | Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом | СП 3.1.099-96 Госкомсанэпиднадзор России |
33 | Клещевой энцефалит | СП 3.1.098-96 Госкомсанэпиднадзор России |
34 | Туляремия | СП 3.1.097-96 Госкомсанэпиднадзор России |
35 | По определению районов массового распространения гнуса и других опасных насекомых и клещей | Инструкция от 30.01.02 03-23/1-11 Минздрав России |
36 | Эпидемиологический надзор за туляремией | МУ 3. |
37 | Организация эпидемиологического надзора за клещевым риккетсиозом | МУ 3.1.1755-03 Минздрав России |
38 | Организация и проведение эпидемиологического надзора в природных очагах чумы на территории Российской Федерации | МУ 3.1.1098-02 Минздрав России |
39 | Отлов, учет и прогноз численности мелких млекопитающих и птиц в природных очагах инфекций | МУ 3.1.1029-01 Минздрав России |
40 | Сбор, учет и подготовка к лабораторному исследованию кровососущих членистоногих — переносчиков возбудителей природно-очаговых инфекций | МУ 3. |
41 | Профилактика туляремии | МУ, приказ Минздрава России от 14.04.99, 125 |
42 | Организация и проведение мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки на территории природных очагов России | МР от 23.01.01 Минздрав России |
43 | Оценка информативности методов диагностики при эпизоотологическом обследовании очагов чумы | МР от 22.06.95 01-19/54-17 Госкомсанэпиднадзор |
3.1.4. Инфекции наружных покровов | ||
44 | Профилактика столбняка | СП 3. |
45 | Бешенство | СП 3.1.096-96, |
46 | Сибирская язва | СП 3.1.089-96, |
47 | По специфической профилактике столбняка | МУ, приказ Минздрава России от 17.05.99, 174 |
3.1.5. ВИЧ-инфекция | ||
48 | Об утверждении временной учетной формы N 313/у «Извещение о случае завершения беременности у ВИЧ-инфицированной женщины» | Приказ Минздрава России от 19. |
49 | Об утверждении инструкции по профилактике передачи ВИЧ-инфекции от матери ребенку и образца информированного согласия на проведение химио-профилактики ВИЧ | Приказ Минздрава России от 19.12.03, 606 |
50 | Об утверждении учетных форм для регистрации детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями | Приказ Минздрава России от 16.09.03, 442 |
51 | О создании Координационного совета Минздрава России по профилактике передачи ВИЧ-инфекции от матери ребенку в Российской Федерации | Приказ Минздрава России от 09.06.03, 235 |
52 | О создании Координационного совета по проблеме ВИЧ/СПИД Минздравсоцразвития России | Приказ Минздравсоцразвития России от 19. |
53 | Об освобождении от отбывания наказания осужденных к лишению свободы в связи с тяжелой болезнью | Приказ Минздрава России, Минюста России от 09.08.01, 311/24 |
________________ * Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать «N 311/242». — Примечание изготовителя базы данных. | ||
54 | Об использовании иммуноферментных тест-систем для выявления антител к ВИЧ в сыворотке крови человека | Приказ Минздрава России от 30.07.01, 292 |
55 | О научно-практическом центре профилактики и лечения ВИЧ-инфекции у беременных женщин и детей | Приказ Минздрава России от 19. |
56 | О введении в действие порядка предоставления льгот работникам, подвергающимся риску заражения вирусом иммунодефицита человека при исполнении своих служебных обязанностей | Приказ Минздравмедпрома России от 25.04.96, 169 |
57 | О введении в действие правил проведения обязательного медицинского освидетельствования лиц, находящихся в местах лишения свободы, на выявление вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекции) | Приказ Минздравмедпрома России от 25.04.96, 168 |
58 | О введении в действие правил проведения обязательного медицинского освидетельствования на ВИЧ и перечня работников отдельных профессий, производств, предприятий, учреждений и организаций, которые проходят обязательное медицинское освидетельствование на ВИЧ | Приказ Минздравмедпрома России от 30. |
59 | О мерах по совершенствованию профилактики и лечения ВИЧ-инфекции в Российской Федерации | Приказ Минздравмедпрома России от 16.08.94, 170 |
60 | Программа неотложных мер государств-участников Содружества Независимых Государств по противодействию эпидемии ВИЧ/СПИД | Утверждена Решением Совета глав правительств СНГ от 30.05.02 |
61 | Декларация о приверженности делу борьбы с ВИЧ/СПИДом | Принята резолюцией S-26/2 Специальной сессии Генеральной Ассамблеи ООН от 27.06.01 |
3.1.6. Внутрибольничные инфекции | ||
62 | Гигиенические требования к размещению, устройству, оборудованию и эксплуатации больниц, родильных домов и других лечебных учреждений | СанПиН 2. |
63 | Профилактика инфекционных заболеваний при эндоскопических манипуляциях | СП 3.1.1275-03 Минздрав России |
64 | Организация и проведение производственного контроля за соблюдением санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий | СП 1.1.1058-01 Минздрав России |
65 | Профилактика вирусных гепатитов. Общие требования к эпидемиологическому надзору за вирусными гепатитами | СП 3.1.958-00 Минздрав России |
66 | Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений | СанПиН 2. |
67 | Обеззараживание исследуемого материала, инфицированного бактериями I-IV групп патогенности при работе методом ПЦР | МУ 3.5.5.1035-01 Минздрав России |
68 | По эпидемиологическому надзору за внутрибольничными инфекциями | МУ от 02.12.87 Минздрав СССР |
69 | Микробиологический мониторинг производственной среды | МУК 4.2.734-99 Минздрав России |
70 | Метициллинрезистентные Staphylococcus aureus — возбудители внутрибольничных инфекций: идентификация и генотипирование | МР от 23. |
3.1.7. Инфекции, общие для человека и животных | ||
71 | Коксиеллез (лихорадка Ку) | СП 3.1.095-96, |
72 | Иерсиниозы | СП 3.1.094-96, |
73 | Лептоспироз | СП 3.1.091-96, |
74 | Орнитоз | СП 3.1.092-96, |
75 | Листериоз | СП 3. |
76 | Кампилобактериоз | СП 3.1.087-96, |
77 | Сальмонеллез | СП 3.1.086-96, |
78 | Бруцеллез | СП 3.1.085-96, |
79 | Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Общие положения | СП 3.1.084-96, |
80 | Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей | МУ 3. |
81 | Эпидемиология, диагностика и профилактика заболеваний людей лептоспирозами | МУ 3.1.1128-02 Минздрав России |
82 | Эпидемиология и профилактика листериоза | МУ 3.1.7.1104-02 Минздрав России |
83 | Критерии и оценка потенциальной опасности очагов лептоспирозов в урбанизированных ландшафтах и меры профилактики | МР от 28.04.95 01-19/41-17 Госкомсанэпиднадзор России |
84 | Эпидемиологический надзор за лихорадкой Ку | МР от 20.12.95 01-1-/124-17 Госкомсанэпиднадзор России |
85 | Методические рекомендации по защите людей, контактирующих с инфицированной птицей и участвующих в массовом забое животных, потенциально инфицированных вирусами гриппа птиц | МР от 05. |
Группа 3.2. Профилактика паразитарных болезней | ||
86 | Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных болезней | СП 3.1/3.2.1379-03 Минздрав России |
87 | Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации | СанПиН 3.2.1333-03 Минздрав России |
88 | Порядок выдачи санитарно-эпидемиологического заключения о возможности проведения работ с возбудителями инфекционных заболеваний человека I-IV групп патогенности, генно-инженерно-модифицированными микроорганизмами, ядами биологического происхождения и гельминтами | СП 1. |
89 | Профилактика энтеробиоза | СП 3.2.1317-03 Минздрав России |
90 | Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами | СП 1.2.731-99 Минздрав России |
91 | Производство и реализация рыбной продукции | СанПиН 2.3.4.050-96 Госкомсанэпиднадзор России |
92 | Профилактика лямблиоза | МУ 3.2.1882-04 Минздрав России |
93 | Профилактика дирофиляриоза | МУ 3. |
94 | Эпидемиологический надзор за паразитарными болезнями | МУ 3.2.1756-03 Минздрав России |
95 | Серологические методы лабораторной диагностики паразитарных заболеваний | МУ 3.2.1173-02 Минздрав России |
96 | Профилактика токсокароза | МУ 3.2.1043-01 Минздрав России |
97 | Мероприятия по снижению риска заражения населения возбудителями паразитозов | МУ 3.2.1022-01 Минздрав России |
98 | Малярийные комары и борьба с ними на территории Российской Федерации | МУ 3. |
99 | Санитарно-паразитологическая оценка эффективности обезвреживания воды ультрафиолетовым излучением | МУК 3.2.1757-03 Минздрав России |
100 | Энтомологические методы сбора и определения насекомых и клещей-вредителей продовольственных запасов | МУК 4.2.1479-03 Минздрав России |
101 | Использование модельных тестов цист лямблий и ооцист криптоспоридий для гигиенической оценки эффективности водоочистки | МУК 4.2.1174-02 Минздрав России |
102 | Методы лабораторного культивирования трех видов иксодовых клещей группы ricinus/persulcatus | МУК 4. |
103 | Методы санитарно-паразитологической экспертизы рыбы, моллюсков, ракообразных, земноводных, пресмыкающихся и продуктов их переработки | МУК 3.2.988-00 Минздрав России |
104 | Паразитологическая диагностика малярии | МУК 3.2.987-00 Минздрав России |
105 | Санитарно-паразитологические исследования воды хозяйственного и питьевого водопользования | МУК 4.2.964-00 Минздрав России |
106 | Методы санитарно-паразитологических исследований | МУК 4.2.796-99 Минздрав России |
107 | Паразитологические методы лабораторной диагностики гельминтозов и протозоозов | МУК 4. |
108 | Использование прозрачных аналитических трековых мембран для санитарно-паразитологических исследований воды | МР Минздрава России от 26.06.03 22 ФЦ/3314 |
109 | Санитарно-эпидемиологический надзор в сочетанных очагах гельминтозов | МР от 03.08.01 3.2-11-3/254-09 Минздрав России |
110 | Профилактика малярии среди авиаперсонала, работающего в эндемичных районах стран с жарким климатом | МР от 29.10.96 Госкомсанэпиднадзор России |
Группа 3.3. Иммунопрофилактика инфекционных болезней | ||
Подгруппы | ||
3. | ||
111 | Основные требования к вакцинным штаммам туляремийного микроба | МУ 3.3.1.2161-07 Роспотребнадзор |
112 | Основные требования к вакцинным штаммам холерного вибриона | МУ 3.3.1.2075-06 Роспотребнадзор |
113 | Осложнения после прививок против оспы, клинические формы, лечение, профилактика, диагностика, мониторинг | МУ 3.3.1.2045-06 Роспотребнадзор |
114 | По проведению вакцинопрофилактики натуральной оспы | МУ 3.3.1.2044-06 Роспотребнадзор |
115 | Организация работы прививочного кабинета детской поликлиники, кабинета иммунопрофилактики и прививочных бригад | МУ 3. |
116 | Порядок проведения профилактических прививок | МУ 3.3.1889-04 Минздрав России |
117 | Экономическая эффективность вакцинопрофилактики | МУ 3.3.1.1878-04 Минздрав России |
118 | Расследование поствакцинальных осложнений | МУ 3.3.1879-04 Минздрав России |
119 | Тактика иммунизации взрослого населения против дифтерии | МУ 3.3.1252-03 Минздрав России |
120 | Организация и проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета против управляемых инфекций (дифтерия, столбняк, корь, эпидемический паротит, полиомиелит) | МУ 3. |
121 | Мониторинг поствакцинальных осложнений и их профилактика | МУ 3.3.1.1123-02 Минздрав России |
122 | Медицинские противопоказания к проведению профилактических прививок препаратами национального календаря прививок | МУ 3.3.1.1095-02 Минздрав России |
123 | Временные отраслевые стандарты профилактической работы с детьми | МУ, приказ Минздрава России от 07.05.98, 151 |
124 | По вакцинопрофилактике гриппа у взрослых и детей | МУ, приказ Минздрава России от 27.01.98, 25 |
125 | Иммунизация детей инактивированной полиомиелитной вакциной | МР 3. |
126 | Порядок использования, сбора, хранения, транспортирования, уничтожения, утилизации (переработки) самоблокирующихся (саморазрушающихся) СР-шприцев и игл инъекционных одноразового применения | МР от 11.11.05 0100/9856-05-34 Роспотребнадзор |
127 | Критерий расчета запаса профилактических и лечебных препаратов для субъектов Российской Федерации на период пандемии гриппа | МР от 04.08.05 0100/6131-05-32 Роспотребнадзор |
128 | Основные требования и критерии оценки качества работы детских лечебно-профилактических учреждений по иммунопрофилактике | МР 99/222-00 |
3. | ||
129 | Надлежащая практика производства медицинских иммунобиологических препаратов | СП 3.3.2.1288-03 Минздрав России |
130 | Условия транспортирования и хранения медицинских иммунобиологических препаратов | СП 3.3.2.1248-03 Минздрав России |
131 | Санитарно-эпидемиологические требования к условиям транспортировки, хранения и отпуска гражданам медицинских иммунобиологических препаратов, используемых для иммунопрофилактики, аптечными учреждениями и учреждениями здравоохранения | СП 3.3.2.1120-02 Минздрав России |
132 | Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза | МУ 3. |
133 | Валидация методов контроля химических и физико-химических показателей качества МИБП: организация, порядок проведения и представления результатов | МУ 3.3.2.1886-04 Минздрав России |
134 | О порядке уничтожения непригодных к использованию вакцин и анатоксинов | МУ 3.3.2.1761-03 Минздрав России |
135 | Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа | МУ 3.3.2.1758-03 Минздрав России |
136 | Порядок обеспечения государственных муниципальных организаций здравоохранения медицинскими иммунобиологическими препаратами в рамках национального календаря профилактических прививок и календаря прививок по эпидемическим показаниям | МУ 3. |
137 | Организация контроля за соблюдением правил хранения и транспортирования медицинских иммунобиологических препаратов | МУ 3.3.2.1121-02 Минздрав России |
138 | Порядок государственного надзора за качеством медицинских иммунобиологических препаратов | МУ 3.3.2.1081-01 Минздрав России |
139 | Сертификация медицинских иммунобиологических препаратов | МУ 3.3.2.684-98 Минздрав России |
140 | О порядке экспертизы и испытаний медицинских иммунобиологических препаратов с целью их регистрации | Приказ Минздрава России от 15. |
141 | Контроль сыворотки крови крупного рогатого скота на присутствие посторонних вирусов и микоплазм | МУК 4.2.2123-06 Роспотребнадзор |
142 | Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям | МУК 4.1/4.2.588-96 Минздрав России |
Группа 3.4. Санитарная охрана территории | ||
143 | Санитарная охрана территории Российской Федерации | СП 3.4.1328-03 Минздрав России |
144 | Порядок сбора, упаковки, хранения, транспортирования и проведения лабораторного анализа биологического материала от больных (и умерших) пациентов с подозрением на тяжелый острый респираторный синдром (ТОРС) | МУ 1. |
145 | Санитарно-карантинный контроль в аэропортах, открытых для международных сообщений | МУ 3.4.1180-02 Минздрав России |
146 | Организация и проведение мероприятий по профилактике чумы в пунктах пропуска через Государственную границу Российской Федерации | МУ 3.4.2126-06 Роспотребнадзор |
147 | Санитарно-карантинный контроль на автомобильных пунктах пропуска через Государственную границу Российской Федерации | МУ 3.4.1179-02 Минздрав России |
148 | Санитарно-карантинный контроль в морских и речных портах, открытых для международных сообщений | МУ 3. |
149 | Медицинский (санитарный) досмотр в пунктах пропуска через Государственную границу Российской Федерации | МУ 3.4.1100-02 Минздрав России |
150 | Организация, обеспечение и оценка противоэпидемической готовности медицинских учреждений к проведению мероприятий в случае завоза или возникновения особо опасных инфекций, контагиозных вирусных геморрагических лихорадок, инфекционных болезней неясной этиологии, представляющих опасность для населения Российской Федерации и международного сообщения | МУ 3.4.1030-01 Минздрав России |
151 | Организация и проведение первичных мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевание карантинными инфекциями, контагиозными вирусными геморрагическими лихорадками, малярией и инфекционными болезнями неясной этиологии, имеющими международное значение | МУ 3. |
152 | Организация и проведение работы специализированными противоэпидемическими бригадами в чрезвычайных ситуациях | МУ 3.1.957-00 Минздрав России |
153 | Организация и проведение режимно-ограничительных мероприятий в зонах стихийных бедствий и техногенных катастроф | МУ 1.2.793-99 Минздрав России |
154 | Организация и проведение противоэпидемических мероприятий при террористических актах с применением биологических агентов | МР 2510/11646-01-34 от 06.11.01 Минздрав России |
Группа 3.5. Дезинфектология | ||
155 | Санитарно-эпидемиологические требования к организации и осуществлению дезинфекционной деятельности | СП 3. |
156 | Профессиональные стандарты деятельности предприятий дезинфекционного профиля | МР от 30.11.98 Минздрав России |
157 | Правила по охране труда работников дезинфекционного дела и по содержанию дезинфекционных станций, дезинфекционных отделов, отделений профилактической дезинфекции санитарно-эпидемиологических станций, отдельных дезинфекционных установок | 1964-79 Минздрав СССР |
158 | Единые нормы выработки на работы профилактической дезинфекции, дезинсекции и дератизации, проводимые на водном транспорте и промысловом флоте | Приказ Минздрава СССР от 27.09.79, 992, приложение |
159 | Нормы расчета потребности в средствах и материалах, применяемых для дезинфекции, дезинсекции, дератизации и стерилизации | Приказ Минздрава СССР от 17. |
160 | Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений | СанПиН 2.1.7.728-99 Минздрав России |
161 | Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами | СП 1.2.731-99 Минздрав России |
162 | Порядок использования, сбора, хранения, транспортирования, уничтожения, утилизации (переработки) самоблокирующихся (саморазрушающихся) СР-шприцев и игл инъекционных одноразового применения | МР от 11.11.05 0100/9856-05-34 Роспотребнадзор |
Подгруппы | ||
3. | ||
163 | Профилактика инфекционных заболеваний при эндоскопических манипуляциях | СП 3.1.1275-03 Минздрав России |
164 | Парикмахерские. Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию | СанПиН 2.1.2.1199-03 Минздрав России |
165 | Использование ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях | Р 3.5.1904-04 Минздрав России |
166 | Очистка, дезинфекция и стерилизация эндоскопов и инструментов к ним | МУ 3. |
167 | Обеззараживание биологического материала и объектов внешней среды, зараженных бактериями I-IV групп патогенности при исследованиях методом ПЦР | МУ 3.5.5.1034-01 Минздрав России |
168 | Применение ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздушной среды помещений организаций пищевой промышленности, общественного питания и торговли продовольственными товарами | МУ 2.3.975-00 Минздрав России |
169 | Организация государственного санитарно-эпидемиологического надзора за обеззараживанием сточных вод | МУ 2.1.5.800-99 Минздрав России |
170 | Технология обработки белья в медицинских учреждениях | МУ 3. |
171 | Санитарно-эпидемиологический надзор за обеззараживанием сточных вод ультрафиолетовым излучением | МУ 2.1.5.732-99 Минздрав России |
172 | Инструкция по дезинфекции и дезинсекции в паровоздушно-формалиновых, паровых и комбинированных дезинфекционных камерах | 1996 Минздрав России |
173 | Временная инструкция по дезинфекции шахтных колодцев и обеззараживанию воды в них | от 18.01.67 663-67 Минздрав СССР |
174 | Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения | МУ от 30. |
175 | Методические указания по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях | МУ от 28.02.95 11-16/03-06 Минздрав России |
176 | Методические указания по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов | МУ от 28.02.91 15/6-5 Минздрав СССР |
177 | Методические указания по дезинфекции при минусовых температурах (-30 °С) | МУ от 08.07.87 283-30 Минздрав СССР |
178 | Временные методические указания по обеззараживанию зерна и зернопродуктов, зараженных или подозрительных на зараженность патогенными микроорганизмами | ВМУ от 27. |
179 | Методические указания по дезинфекции на заводах медицинской промышленности, выпускающих стерильную продукцию | МУ от 24.04.72 Минздрав СССР |
180 | Методические указания для судовых медицинских работников по дезинфекции на морских судах во время рейсов | МУ от 15.11.65 552-65 Минздрав СССР |
181 | Контроль соблюдения условий паровой стерилизации растворов питательных сред с применением химических индикаторов | МУК 4.2.1991-05 Роспотребнадзор |
182 | Контроль удаления воздуха в паровых стерилизационных камерах | МУК 4. |
183 | Использование установки обеззараживания воздуха УОВ «Поток 150-М-01» и контроль микробной обсемененности воздуха при ее работе | МУК 4.2.1089-02 Минздрав России |
184 | Контроль дезинфекционных камер | МУК 4.2.1035-01 Минздрав России |
185 | Методические рекомендации по обеззараживанию изделий лечебного протезирования из синтетических полимерных материалов | МР от 12.06.75 1304-а-75 Минздрав СССР |
3.5.2. Дезинсекция | ||
186 | Санитарно-эпидемиологические требования к организации и проведению дезинсекционных мероприятий против синантропных членистоногих | СанПиН 3. |
187 | Методы определения эффективности инсектицидов, акарицидов, регуляторов развития и репеллентов, используемых в медицинской дезинсекции | МУ 3.5.2.1759-03 Минздрав России |
188 | Малярийные комары и борьба с ними на территории Российской Федерации | МУ 3.2.974-00 Минздрав России |
189 | Борьба с комарами, выплодившимися в подвальных помещениях | МУ 3.5.2.705-98 Минздрав России |
190 | Методические указания по организации индивидуальной защиты населения от иксодовых клещей — переносчиков возбудителей инфекций | МУ от 27. |
191 | Методические указания по борьбе с комарами в городах | МУ от 25.08.88 15-6/27 Минздрав СССР |
192 | Методические указания по организации и профилактике противоклещевых мероприятий и биологических наблюдений в природных очагах клещевого энцефалита | МУ от 02.10.87 28-6/33 Минздрав СССР |
193 | Методические указания по защите населения от гнуса | МУ от 23.01.86 28-6/2 Минздрав СССР |
194 | Методические указания по борьбе с мухами | МУ от 27.01.84 28-6/3 Минздрав СССР |
195 | Методические указания по борьбе с тараканами, блохами, постельными клопами, рыжими домовыми муравьями | МУ от 12. |
196 | Организационно-методические указания по дезинсекции морских и речных судов | МУ от 19.03.71 883-71 Минздрав СССР |
197 | Энтомологические методы сбора и определения насекомых и клещей — вредителей продовольственных запасов и непродовольственного сырья | МУК 4.2.1479-03 Минздрав России |
198 | Методические рекомендации по организации борьбы с крысиным клещом | МР от 11.04.01 11-3/130-09 Минздрав России |
199 | Методические рекомендации по борьбе с синантропными тараканами | МР от 31. |
3.5.3. Дератизация | ||
200 | Санитарно-эпидемиологические требования к проведению дератизации | СП 3.5.3.1129-02 Минздрав России |
201 | Инструкция по борьбе с мышевидными грызунами | от 31.08.72 Минздрав СССР |
202 | Инструкция по борьбе с грызунами в каменноугольных шахтах и городской канализации | от 07.04.70, 849 Минздрав СССР |
203 | Временная инструкция по определению относительной численности грызунов в морских и речных портах | от 04. |
204 | Инструкция по применению постоянных мест отравления грызунов на морских судах и в портах | от 26.07.67 681-67 Минздрав СССР |
205 | Временные методические указания по борьбе с черными крысами в населенных пунктах сельской местности | от 09.04.91 15/6-8 Минздрав России |
206 | Методические указания по борьбе с серой крысой в каменноугольных шахтах | от 22.10.89 15/16-19 Минздрав России |
207 | Методические указания по борьбе с грызунами в жилых домах | от 05.08.87 26-6/43 Минздрав СССР |
208 | Методические указания по дератизации на морских судах для судовых медицинских работников | от 30. |
209 | Методические указания по борьбе с серой крысой в природных очагах иктерогемморагического лептоспироза | от 09.06.84 Минздрав СССР |
210 | Временные методические указания по борьбе с обыкновенными полевками на овощебазах | от 13.02.84 28-6/4 Минздрав СССР |
211 | Методические указания по борьбе с грызунами в населенных пунктах | от 06.10.81 28-6/5 Минздрав СССР |
212 | Методические указания по дератизации на промысловом флоте | от 09.08.73 1114-73 Минздрав СССР |
213 | Методические указания для судовых медицинских работников по борьбе с грызунами на морских судах | от 23. |
214 | Методические рекомендации по анализу эффективности работы долговременного отравления грызунов и проведению дератизационных мероприятий в очагах зоонозных инфекций (на примере ГЛПС) | от 29.12.95 01-19/134-17 Минздрав России |
3.5.4. Стерилизация | ||
215 | Общие требования к технологическому регламенту радиационной стерилизации изделий медицинского назначения однократного применения | Р 2.6.4/3.5.4.1040-01 Минздрав России |
216 | Контроль соблюдения условий паровой стерилизации растворов питательных сред с применением химических индикаторов | МУК 4. |
217 | Контроль удаления воздуха в паровых стерилизационных камерах | МУК 4.2.1990-05 Роспотребнадзор |
218 | Методические указания по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов | от 28.02.91 15/6-5 Минздрав СССР |
219 | Контроль качества предстерилизационной очистки изделий медицинского назначения с помощью реактива азопирам | от 08.05.88 28-6/13 Минздрав СССР |
220 | Устойчивость медицинских инструментов к средствам предстерилизационной очистки, стерилизации и дезинфекции. Классификация. Выбор метода | ОСТ 25. |
221 | Методические указания по стерилизации ксенобиопротезов раствором глутарового альдегида | от 19.12.86 28-6/26 Минздрав СССР |
222 | Расчетные нормы времени на стерилизацию изделий медицинского назначения персоналом централизованных стерилизационных | Приказ Минздрава СССР от 30.08.85 1156, приложение |
223 | Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения. Методы, средства и режимы | ОСТ 42-21-2-85 Минздрав СССР |
224 | Методические указания по стерилизации некоторых гемосорбентов | от 28. |
225 | Методические указания по контролю стерильности медицинских изделий, стерилизованных радиационным способом | Приказ Минздрава СССР от 17.09.79 964/410, приложение |
226 | Временная инструкция по стерилизации в упакованном виде пластмассовых магазинов одноразового использования для хирургических сшивающих аппаратов | от 09.11.72 995-72 Минздрав СССР |
227 | Временные методические указания по стерилизации гамма-лучами гигроваты и перевязочных материалов | от 09.11.72 994-72 Минздрав СССР |
228 | Временная инструкция по мойке и стерилизации хирургических инструментов и изделий из пластмасс перекисью водорода и смесью окиси этилена с бромистым метилом | от 25. |
229 | Временные методические указания по газовой стерилизации кетгута | от 28.05.70 866-70 Минздрав СССР |
230 | Контроль режимов стерилизации растворов лекарственных средств с помощью биологических индикаторов ИБК-01 | МУК 4.2.1036-01 |
231 | Контроль соблюдения условий газовой стерилизации растворов лекарственных средств и питательных сред с применением химических индикаторов «ФАРМАТЕСТ-ВИНАР» | МР от 18.12.03 11-7/19-09 Минздрав России |
232 | Методические рекомендации по повышению надежности стерилизационных мероприятий в лечебно-профилактических учреждениях по системе «Чистый инструмент» | от 31. |
233 | Методические рекомендации по применению ингибиторов коррозии в процессе предстерилизационной очистки изделий медицинского назначения из металла | от 30.04.86 28-6/16 Минздрав СССР |
234 | Методические рекомендации по организации стерилизационных отделений в лечебно-профилактических учреждениях | Приказ Минздрава СССР от 08.09.77, 300, приложение |
3.5.5. Дезинфекционные средства и технологии | ||
235 | Использование ультрафиолетового бактерицидного излучения для обеззараживания воздуха и поверхностей в помещениях | Р 3.5.1904-04 Минздрав России |
236 | Организация и проведение производственного контроля за соблюдением санитарных правил и выполнением санитарно-противоэпидемических (профилактических) мероприятий | СП 1. |
237 | Методы определения эффективности инсектицидов, акарицидов, регуляторов развития и репеллентов, используемых в медицинской дезинсекции | МУ 3.5.2.1759-03 Минздрав России |
238 | Оценка токсичности и опасности дезинфицирующих средств | МУ 1.2.1105-02 Минздрав России |
239 | Порядок проведения государственной регистрации дезинфицирующих, дезинсекционных и дератизационных средств для применения в быту, в лечебно-профилактических учреждениях и на других объектах для обеспечения безопасности и здоровья населения | Приказ Минздрава России от 10.11.02, 344, приложение 1 |
240 | Инструкция о порядке государственной регистрации изделий медицинского назначения однократного применения отечественного производства, стерилизуемых радиационным методом с использованием источников ионизирующего излучения | Приказ Минздрава России от 22. |
241 | Методы испытания дезинфекционных средств для оценки их безопасности и эффективности | МУ, 1998 Минздрав СССР |
242 | Нормативные показатели безопасности и эффективности дезинфекционных средств, подлежащие контролю при проведении обязательной сертификации | 01-12/75-97 Минздрав России |
243 | Методические рекомендации по отбору и изучению биологической активности и токсичности репеллентов | от 14.07.87 24-6/24 Минздрав СССР |
244 | Методические рекомендации по оценке эффективности, токсичности и опасности родентицидов | от 20. |
1.1. Кишечные инфекции 
1.094-96
1.1.2130-06 Роспотребнадзор
1.2. Инфекции дыхательных путей 
1.1295-03 Минздрав России
1.2.2160-07 Роспотребнадзор
2.2136-06 Роспотребнадзор
1.7.1380-03 Минздрав России
1.2007-05 Роспотребнадзор
1.1027-01 Минздрав России.jpg)
1.1381-03 Минздрав России
01.04, 9
10.04, 166
04.99, 133
10.95, 295
1.7.728-99 Минздрав России
06.06
1.088-96, 
1.7.1189-03 Минздрав России
08.05 0100/6198-05-23 Роспотребнадзор
3.1318-03 Минздрав России
2.1880-04 Минздрав России
2.974-00 Минздрав России
2.1480-03 Минздрав России
3.1891-04 Минздрав России
1.1.1760-03 Минздрав России
3.1.2131-06 Роспотребнадзор
3.2.1172-02 Минздрав России
04.99, 129, приложение 3
4.1127-02 Минздрав России
4.1028-01 Минздрав России
5.1378-03 Минздрав России
01.79, 60, приложение 5
5.1. Дезинфекция 
5.1937-04 Минздрав России
5.736-99 Минздрав России
12.98 287-113 Минздрав России
2.1990-05 Роспотребнадзор
5.2.1376-03 Минздрав России
04.97 33-113 Минздрав России
12.86 28-6/3 Минздрав СССР
08.69, 218 Минздрав СССР
12.85 28-6/12 Минздрав СССР
08.63 453 Минздрав СССР
2.1991-05 Роспотребнадзор
1-005-87 Минздрав СССР
12.83 28-6/5 Минздрав СССР
08.72 988-72 Минздрав СССР
1.1058-01 Минздрав России
05.01, 167, приложение
12.95 01-19/127-17 Госкомсанэпиднадзор России| Номер и дата свидетельства | RU.77.99.88.003.Е.001479.04.18 10.04.2018 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Наименование продукции | |||||||||||||||||||||||||||||||||
| Наименование изготовителя | ООО «АВЕН», 121351, г. Москва, ул. Боженко, д. 8, корп. 4 (адрес производства: 143362, Московская обл., Наро-Фоминский р-он, г. Апрелевка, ул. Апрелевская, д. 16) (Российская Федерация) | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Наименование получателя | ООО «КАПИТАЛПРОДУКТ», 107113, г. Москва, Площадь Сокольническая, д. 4а, оф. 309 (Российская Федерация) | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Область применения продукции | для реализации населению в качестве биологически активной добавки к пище — источника глюкозамина, хондроитинсульфата, содержащей метилсульфонилметан и босвеллиевые кислоты.(ПРИЛОЖЕНИЕ) Рекомендации по применению: перед употреблением взболтать; 1 чайную ложку или 1 мерную ложку (5 мл) развести в 100-200 мл жидкости (воды или сока), взрослым принимать 1 раз в день во время еды. | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| В соответствии с РУ | ТУ 10.89.19-061-32436578-2018 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Типографский номер бланка | 356344 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Документы | Техническим регламентам Таможенного союза ТР ТС 021/2011, ТР ТС 022/2011 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Протоколы исследований | экспертного заключения ФБУЗ ФЦГ и Э Роспотребнадзора №10 ФЦ/983 от 06. 04.2018 г. | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Этикетка | в соответствии с требованиями ТР ТС 022/2011. Рекомендации по применению: перед употреблением взболтать; 1 чайную ложку или 1 мерную ложку (5 мл) развести в 100-200 мл жидкости (воды или сока), взрослым принимать 1 раз в день во время еды. Продолжительность приема — 1 месяц. При необходимости прием можно повторить. Срок годности — 2 года. Хранить в недоступном для детей месте, при температуре не выше 25°С. Вскрытый флакон хранить в холодильнике. Противопоказания: индивидуальная непереносимость компонентов, беременность, кормление грудью. Перед применением рекомендуется проконсультироваться с врачом. | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Свидетельство от | Федеральная Служба | ||||||||||||||||||||||||||||||||
| Гигиенические характеристики |
|
cereus, КОЕ/г, не более 
необходим специализированный закон о гостиничном бизнесе
Согласно Общероссийскому классификатору видов экономической деятельности, продукции и услуг (ОКВЭД) гостиничное обслуживание (гостиничные услуги) представляют собой самостоятельную отрасль экономики, в отношении которой давно назрел вопрос об отдельном отраслевом нормативно-правовом регулировании.
В Роспотребнадзоре считают, что в сфере услуг должен появится специализированный закон о гостиничном бизнесе.
Документ может обязать гостиницы получать «звезды», что повысит уровень сервиса на российском рынке, а также будет регулировать другие стороны этой деятельности, в том числе обеспечение безопасности клиентов.
Эксперты считают, что появление такого законопроекта окажет положительное влияние на туристическую отрасль в России, однако не исключают, что это может стать предлогом для увеличения числа проверок и взыскания штрафов сообщают «Известия».
«Гостиничное обслуживание представляют собой самостоятельную отрасль экономики, в отношении которой давно назрел вопрос об отдельном отраслевом нормативно-правовом регулировании», — говорится в Государственном докладе «Защита прав потребителей РФ в 2015 году» (скачать >), где отмечается (стр. 271 Доклада), что многие вопросы в этой сфере можно будет решить с помощью федерального закона «О гостиничном обслуживании в Российской Федерации».
Положения нового закона прежде всего должны касаться вопросов сертификации, стандартизации и классификации объектов туриндустрии. По мнению Роспотребнадзора, устанавливаемые законом правила повысят и уровень сервиса — определят требования к порядку обслуживания и предоставления информации о соответствующих услугах.
Директор по маркетингу группы компаний TBS Мария Конабеева говорит, что на сегодняшний день рынок гостиничного обслуживания почти не регламентируется.
— Туристы, привыкшее к определенному уровню обслуживания в гостиницах различной «звездности» за рубежом, часто остаются разочарованными после пребывания в российских отелях аналогичного уровня.
Мария Конабеева считает, что новый закон лишь поможет отрасли, хотя и отмечает, что важно понять, по каким критериям будут оценивать соответствие гостиницы стандартам и кто будет принимать участие в разработке этих стандартов.
Вице-президент Федерации рестораторов и отельеров Вадим Прасов говорит, что новая инициатива Роспотребнадзора приведет к тому, что на рынке станет больше требований, а значит, проверок и штрафов.
— Уже сейчас разные инстанции в некоторых городах проверяют гостиницы каждый день, — пояснил он.
По его словам, это происходит в тех городах, в которых запланированы матчи чемпионата мира по футболу.
Закон «О подготовке и проведении в Российской Федерации чемпионата мира по футболу FIFA 2018 года, кубка конфедераций FIFA 2017 года» уже обязывает гостиницы в 11 городах, в которых пройдут матчи, иметь свидетельства о присвоении категории.
— Согласно этому документу, все гостиницы этих городов поэтапно должны получать «звезды» в Министерстве культуры, — уточнил Вадим Прасов.
Во всех остальных городах страны «звезды» — необязательный критерий для работы отеля, отметила директор по маркетингу сети гостиниц Helioparkk Ксения Непомнящих.
— Отельеры соблюдают огромное количество регламентов, связанных с проживанием, питанием, безопасностью и прочим, и совершенно нет регламентов, определяющих качество и уровень сервиса, — сказала она.
— Новый закон должен донести эту мысль до всех игроков рынка, — заключила Ксения Непомнящих.
По данным Росстата за 2015 год, в России действует почти 12 тыс. гостиниц.
ОТ РЕДАКЦИИ
По мнению большинства экспертов «звездность» гостиницы должна быть неразрывно связана с обеспечением соответствующего уровня безопасности ее клиентов.
Проектом постановления предусмотрено утверждение требований к антитеррористической защищенности гостиниц и иных средств размещения, оказывающих гостиничные услуг в целях повышения уровня защищенности данных объектов от террористических актов, минимизации возможных последствий и ликвидации их угрозы, создания безопасных условий деятельности в сфере культуры, обеспечивающих сохранение жизни и здоровья людей.
Подробнее об этом >
Ведущие эксперты также не остались в стороне. Так в Правительстве Москвы были подготовлены предложения и замечания в указанный проект, которые были направлены в адрес разработчика (Минкультуры РФ).
Подробнее об этом >
Отрадно, что наши неоднократные обращения в адрес разработчика документа (Минкультуры России) о необходимости скорейшей разработки данного нормативного правового акта не остались без внимания и вопросы обеспечения антитеррористической защищенности мест размещения будут урегулированы.
28 октября 2015 года, в Москве состоялась Международная конференция по комплексной подготовке объектов туристской инфраструктуры и сервисов к проведению крупных спортивных мероприятий, в том числе Кубка Конфедераций FIFA 2017 года и Чемпионату мира по футболу FIFA 2018 года.
На мероприятии главный редактор журнала «Безопасность зданий и сооружений» Сергей Груздь еще раз подчеркнул, что настало время пристально и внимательно подойти к вопросу обеспечения безопасности гостиниц и других мест размещения, так как до настоящего времени ситуация с нормативным правовым регулированием в данной области оставалась не определенной (подробнее >).
Учитывая изложенное, при поддержке Минспорта России и с участием глав субъектов РФ, задействованных в подготовке и проведении ЧМ-2018, с целью информационного содействия, РИА «Индустрия безопасности» подготовило очередной выпуск издания «Безопасность зданий и сооружений», одной из главных тем которого является «Чемпионат мира-2018».
Уникальный журнал вышел в новом формате — с англоязычным сопровождением, так как был сориентирован также на участников крупнейшей в Европе выставки по безопасности IFSEC International, которая состоялась в Лондоне с 20 по 23 июня 2016 года!
В рамках данного выпуска представлены проекты по созданию и реконструкции мест размещения (отелей, гостиниц и т.
п), а также меры по их безопасности и антитеррористической защищенности, а ведущими компаниями презентованы наиболее эффективные решения, системы и оборудование по безопасности, рекомендуемые к внедрению на стадии проектирования и строительства.
Подробнее об издании >
Приглашаем Вас принять участие в очередном номере журнала «Безопасность зданий и сооружений» и рассказать о возможностях продвигаемого оборудования и приборов, программного обеспечения и решений для обеспечения безопасности и антитеррористической защищенности мест размещения.
Это поможет обеспечить эффективность реализуемых мер при оптимизации расходов заказчиков, а поставщикам и системным интеграторам — заказы с гарантированным финансированием, что весьма актуально в условиях кризисных проявлений в экономике.
Мы ответим на любые ваши вопросы
Первый заместитель генерального директора
Екатерина Побережная
+7(495)797-35-96 (многоканальный)
info@securitymedia.
ru
а
а
а
Директор по маркетингу и рекламе
Елена Мельникова
+7(495)797-35-96 (многоканальный)
а
а
Директор по стратегическому развитию
Янина Домарацкая
+7(495)797-35-96 (многоканальный)
аа
Заместитель главного редактора
Алексей Старшов
а
Выпускающий редактор
Юлия Розова
+7(495)797-35-96 (многоканальный)
а
Редактор
Наталья Гончарова
НОВОСТИ ПО ТЕМЕ
XXIV Международная выставка ИНТЕРПОЛИТЕХ приглашает
XXIV Международная выставка средств обеспечения безопасности государства «Интерполитех» пройдет в Москве, на ВДНХ, в павильоне 57 в период с 20 по 23 октября 2020 года.
Посещение: бесплатно, по онлайн-регистрации на сайте https://www.interpolitex.ru/
Время работы выставки для посетителей: с 10 до 18 часов с 20 по 22 октября, с 10 до 14 часов 23 октября 2020 г.
Выставка проводится при поддержке ПС ФСБ России, ГК Ростех, Мосгордумы, Союза машиностроителей России, Координационного Совета НСБ России, МТПП, Московского университета МВД России им. Кикотя, АО «Рособоронэкспорт», ВНИИ ГОЧС (ФЦ) МЧС России.
Тематика:
• системы и технологии «Безопасный город»
• технические средства обеспечения безопасности DIGIPOL
• технические средств охраны Государственной границы
• экспертно-криминалистические средства и технологии
Экспозиция выставки расположена на двух этажах павильона 57 ВДНХ. Участниками выставки стали более 120 экспонентов, в том числе Рособоронэкспорт, Швабе, НИИПХ, Росэлектроника, Концерн Автоматика, ВНИИ ГОЧС МЧС России, ОСК, ЦСТ, Туламашзавод, Видеософт, Диагностика-М, Техкрим и многие другие.
Деловая программа проводится на открытой площадке «Атриум» и в конференц-зале.
Ключевыми мероприятиями станут:
— выступления спикеров форума SayFuture с презентациями актуальных разработок сферы безопасности;
— панельные секции форума НСБ «Безопасная столица» по основным социально-значимым и государственным проектам обеспечения безопасности граждан и общества: охрана медицинских учреждений в период пандемии, дистанционные технологии безопасности, противопожарная безопасность, безопасный подъезд и другие;
— официальные выездные заседания Комиссии Московской городской Думы по безопасности, спорту и молодежной политике, Комитета по комплексному обеспечению безопасности на отечественных промышленных предприятиях, СПК Антитеррор, а также подписания ряда соглашений о сотрудничестве;
— открытые презентации продукции ОПК России РОСОБОРОНЭКСПОРТом, в том числе на английском языке, с прямой трансляцией для инозаказчиков;
— конференции и круглые столы ВНИИ ГОЧС (ФЦ) МЧС России, Института безопасного города, Московского университета МВД России им. Кикотя;
— выступления участников конкурса «Национальная безопасность» в открытом формате перед членами конкурсной комиссии.
Специализированными посетителями и участниками выставки выступают руководители и специалисты центральных аппаратов и региональных подразделений Росгвардии, МВД России, МЧС России, ПС ФСБ России, ФСИН России, департаментов и управлений Правительства г. Москвы и Московской области, ГУ МВД по г. Москве и Московской области, служб безопасности и охранных структур крупных промышленных и социально-значимых объектов, ассоциаций правоохранительной направленности.
На территории выставки выполняются все требования методических рекомендаций Роспотребнадзора по санэпидемиологической безопасности. Все гости и участники выставки должны быть в масках и перчатках.
XXIV Международная выставка средств обеспечения безопасности государства «Интерполитех – 2020» приглашает: приходи, участвуй, обсуждай!
Зайди на сайт — узнай больше: https://www.
interpolitex.ru/
Пресс-служба выставки «Интерполитех»
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ТОКСИЧНОСТЬ НЕКОТОРЫХ СПИРТОВ И КОЖНЫХ АНТИСЕПТИКОВ НА ИХ ОСНОВЕ | Бидевкина
1. Тoxnetdatabase: http://chem.sis. nlm.nih.gov/chemidplus/rn/startswi th/64-17-5;/67-63-0;/71-23-8
2. Вредные вещества в окружающей среде. Кислородсодержащие органические соединения. Часть I /Под ред. В.А.Филова, Б.А.Ивина, Ю.И.Мусийчука.-С.-Пб.:НПО «Профессионал», 2007.-С. 15-18.
3. Kramer A. et al. Quantity of ethanol absorption after excessive hand disinfection using three commercially available hand rubs is minimal and below toxic levels for humans //BMC Infectious Diseases. – 2007. – Т. 7. – №. 1. – С. 117.
4.
Below H. et al. Dermal and pulmonary absorption of propan-1-ol and propan-2- ol from hand rubs //American journal of infection control. – 2012. – Т. 40. – №. 3. – С. 250-257.
5. Экспресс-метод оценки общетоксического и кожно-раздражающего действия парфюмерно-косметической продукции invitro (на культуре подвижных клеток). МР № 29 ФЦ/394.ГоссанэпидслужбаРоссии.-2002 г.
6. MosmannT. Rapid colorimetric assay for cellular growth survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. // J.Immunol.Methods.- 1983.- v.65(1-2).- p.55-63.
7. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У. Хабриева. – 2-еизд. – М.: Изд. «Медицина», 2005, с.649-6
8.
Atienza J.M., Zhu J., Wang X., Xu X., Abassi Y.A. Dynamic monitoring of cell adhesion and spreading on microelectronic sensor arrays. J.ofBiomol.Screen., 2005, 10, 795-805.
9. Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности, Руководство. Р 4.2643-М., 2011, с.523-525.
Главная страница :: Официальный сайт ФК «Оренбург»
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
1 тур
1 августа (сб), 19:00г. Брянск, ст. «Динамо»
- Динамо-Брянск
- 0-1
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
2 тур
8 августа (сб), 18:00пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- 1-0
- Нефтехимик
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
1 тур
9 августа (вс), 16:00пос.
Ростоши, ст. “Газовик”- Оренбург-2
- 0-1
- Новосибирск
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
2 тур
12 августа (ср), 13:00пос. Ростоши, ст. “Газовик”
- Оренбург-2
- 0-4
- Динамо-Барнаул
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
3 тур
12 августа (ср), 19:00пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- 2-0
- Алания
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
4 тур
16 августа (вс), 18:00пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- 1-1
- Текстильщик
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
5 тур
22 августа (сб), 18:00г. Самара, ст. «Самара Арена»
- Крылья Советов
- 0-1
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
3 тур
23 августа (вс), 15:00пос.
Ростоши, ст. “Газовик”- Оренбург-2
- 1-3
- Челябинск
Бетсити Кубок России
1/64 финала
26 августа (ср), 19:00пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- 2-1
- Алания
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
4 тур
29 августа (сб), 14:00г. Сысерть, ст. Базы «Бажовия»
- Урал-2
- 1-1
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
6 тур
30 августа (вс), 18:00пос. Ростоши, ст «Газовик»
- Оренбург
- 2-1
- Волгарь
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
7 тур
5 сентября (сб), 19:00г. Воронеж, ст. «ЦСП»
- Факел
- 0-2
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
5 тур
6 сентября (вс), 16:00пос.
Ростоши, ст. “Газовик”- Оренбург-2
- 2-0
- Зенит-Ижевск
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
8 тур
9 сентября (ср), 19:00пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- 3-0
- Шинник
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
6 тур
12 сентября (сб), 18:00г. Набережные Челны, ст. «КАМАЗ»
- КАМАЗ
- 4-0
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
9 тур
13 сентября (вс), 20:00г. Москва, спортивный городок «Лужники»
- Торпедо
- 1-2
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
10 тур
19 сентября (сб), 18:00пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- 0-0
- Акрон
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
7 тур
20 сентября (вс), 18:00г.
Нижний Новгород, ст. «Локомотив»- Волна
- 1-0
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
11 тур
23 сентября (ср), 17:30г. Краснодар, ст. академии ФК «Краснодар»
- Краснодар-2
- 1-1
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
8 тур
26 сентября (сб), 15:00пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург-2
- 1-2
- Волга
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
12 тур
27 сентября (вс), 18:00пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- 2-2
- Балтика
Бетсити Кубок России
Группа 8. 2 тур
30 сентября (ср), 19:00г. Пермь, ст. «Звезда»
- Звезда
- отменен
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
9 тур
3 октября (сб), 13:00пос.
Ростоши, ст. «Газовик»- Оренбург-2
- 0-3
- Лада
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
13 тур
4 октября (вс), 16:00г. Домодедово, ст. «Авангард»
- Велес
- 1-1
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
10 тур
8 октября (чт), 18:00г. Тольятти, ст. «Торпедо»
- Лада-Тольятти
- 1-3
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
14 тур
9 октября (пт), 18:00пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- 2-2
- СКА-Хабаровск
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
15 тур
13 октября (вт), 20:00с. Песчанокопское, ст. «Центральный» им. И. П. Чайка
- Чайка
- 0-1
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
16 тур
17 октября (сб), 16:00г.
Москва, ст. «Спартак»- Спартак-2
- 0-3
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
12 тур
18 октября (вс), 16:00г. Оренбург, ст. “Газовик”
- Оренбург-2
- 0-3
- Крылья Советов-2
Бетсити Кубок России
Группа 8. 3 тур
21 октября (ср), 19:00г. Оренбург, ст. «Газовик»
- Оренбург
- 1-1
пен. 2:4 - Сочи
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
17 тур
24 октября (сб), 16:00г. Оренбург, ст. “Газовик”
- Оренбург
- 1-3
- Енисей
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
13 тур
25 октября (вс), 18:00Тюмень, ст. «Геолог»
- Тюмень
- 3-0
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
18 тур
28 октября (ср), 18:00г.
Нижний Новгород, ст. «Нижний Новгород»- Нижний Новгород
- 0-0
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
14 тур
31 октября (сб), 16:00г. Ростоши, ст. “Газовик”
- Оренбург-2
- 0-3
- Звезда
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
19 тур
1 ноября (вс), 16:00г. Ростоши, ст. “Газовик”
- Оренбург
- 3-1
- Чертаново
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
15 тур
5 ноября (чт), 16:00г. Новотроицк, ст. “Металлург”
- Носта
- 4-0
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
20 тур
7 ноября (сб), 13:00г. Томск, ст. «Труд»
- Томь
- 0-1
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
16 тур
10 ноября (вт), 15:00пос.
Ростоши, ст. «Газовик»- Оренбург-2
- 0-0
- Носта
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
21 тур
11 ноября (ср), 18:00пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- 0-0
- Иртыш
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
22 тур
15 ноября (вс), 17:00г. Нижнекамск, ст. “Нефтехимик”
- Нефтехимик
- 1-2
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
23 тур
21 ноября (сб), 17:00г. Владикавказ, ст. «Спартак»
- Алания
- 2-1
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
24 тур
25 ноября (ср), 17:00г. Иваново, ст. «Текстильщик»
- Текстильщик
- 0-2
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
25 тур
29 ноября (вс), 16:00пос.
Ростоши, ст. «Газовик»- Оренбург
- 2-1
- Крылья Советов
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
26 тур
5 декабря (сб), 16:00г. Астрахань, ст. «Центральный»
- Волгарь
- 2-2
- Оренбург
Первые зимние сборы. Матч 1
22 января, 19:00Турция, г. Белек
- Оренбург
- 2-3
- Младост
(Сербия)
Вторые зимние сборы. Матч 1
29 января, 19:00Турция, г. Белек
- Оренбург
- 1-2
- Приштина (Косово)
Вторые зимние сборы. Матч 2
31 января, 19:00Турция, г. Белек
- Оренбург
- 2-3
- Рудар (Черногория)
Вторые зимние сборы. Матч 3
3 февраля, 18:00Турция, г.
Белек- Оренбург
- 1-0
- Славия (Болгария)
Вторые зимние сборы. Матч 4
5 февраля, 19:00Турция, г. Белек
- Оренбург
- 2-1
- Краснодар-мол.
Вторые зимние сборы. Матч 5
6 февраля, 14:00Турция, г. Белек
- Оренбург
- 0-0
- Алания
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
27 тур
27 февраля (сб)пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- —
- Факел
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
28 тур
6 марта (сб)г. Ярославль, ст. «Шинник»
- Шинник
- —
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
29 тур
10 марта (ср)пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- —
- Торпедо
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
30 тур
14 марта (вс)г.
Жигулёвск, ст. «Кристалл»- Акрон
- —
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
31 тур
20 марта (сб)пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- —
- Краснодар-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
32 тур
24 марта (ср)г. Калининград, ст. “Калининград”
- Балтика
- —
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
33 тур
28 марта (вс)пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- —
- Велес
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
34 тур
3 апреля (сб)г. Хабаровск, ст. имени В. И. Ленина
- СКА-Хабаровск
- —
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
17 тур
4 апреля (вс)- Крылья Советов-2
- —
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
35 тур
7 апреля (ср)пос.
Ростоши, ст. «Газовик- Оренбург
- —
- Чайка
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
36 тур
11 апреля (вс)пос. Ростоши, ст. “Газовик”
- Оренбург
- Спартак-2
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
19 тур
16 апреля (пт)пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург-2
- —
- Лада-Тольятти
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
37 тур
17 апреля (сб)г. Красноярск, ст. «Центральный»
- Енисей
- —
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
20 тур
21 апреля (ср)- Лада
- —
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
38 тур
24 апреля (сб)пос. Ростоши, ст.
«Газовик»- Оренбург
- —
- Нижний Новгород
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
21 тур
26 апреля (пн)- Волга
- —
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
39 тур
28 апреля (ср)г. Москва, спортивный городок «Лужники»
- Чертаново
- —
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
22 тур
30 апреля (пт)пос. Ростоши, ст. “Газовик”
- Оренбург-2
- —
- Волна
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
40 тур
2 мая (вс)пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- —
- Томь
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
23 тур
6 мая (чт)пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург-2
- —
- КАМАЗ
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
41 тур
8 мая (сб)г.
Омск, спортивный комплекс «Красная Звезда»- Иртыш
- —
- Оренбург
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
24 тур
11 мая (вт)- Зенит-Ижевск
- —
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ФНЛ
42 тур
15 мая (сб)пос. Ростоши, ст. «Газовик»
- Оренбург
- —
- Динамо-Брянск
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
25 тур
18 мая (вт)пос. Ростоши, ст. Газовик
- Оренбург-2
- —
- Урал-2
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
26 тур
23 мая (вс)- Челябинск
- —
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
27 тур
30 мая (вс)пос. Ростоши, ст. “Газовик”
- Звезда
- —
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
28 тур
4 июня (пт)пос.
Ростоши, ст. «Газовик»- Оренбург-2
- —
- Тюмень
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
29 тур
12 июня (сб)- Динамо-Барнаул
- —
- Оренбург-2
ОЛИМП – Первенство ПФЛ
30 тур
15 июня (вт)- Новосибирск
- —
- Оренбург-2
Глава Российского футбольного союза призвал национальные клубы соблюдать правила, касающиеся Covid — Спорт
МОСКВА, 26 июня. / ТАСС /. Футбольные клубы Российской Премьер-лиги (РПЛ) должны строго соблюдать недавно изданный регламент о возобновлении тренировок и матчей национального сезона, говорится в заявлении генерального секретаря Российского футбольного союза (РФС) Александра Алаева. получено ТАСС в пятницу.
Футбольных матчей сезона РПЛ 2019/2020 17 марта приостановлены из-за пандемии COVID-19.Вице-премьер России Дмитрий Чернышенко заявил 2 июня, что футбольные матчи сезона РПЛ 2019/2020 возобновятся 19 июня, и позже в этот же день РПЛ опубликовала календарь оставшихся матчей чемпионата России по футболу вместе со списком новых правил.
направлена на предотвращение распространения нового коронавируса.
«РФС ведет переговоры с Роспотребнадзором о ситуации с футбольными клубами», — сказал Алаев. «Однако мы считаем, что на данный момент самое главное — строго соблюдать перечень регламентов по возобновлению турнира.«
«Эти правила очень логичны», — продолжил он. «Мы понимаем, что все возможные поправки [к правилам] будут бесполезны, если футболисты продолжат игнорировать социальное дистанцирование, пользоваться одними и теми же раздевалками или столовыми, поскольку о таких прецедентах уже сообщалось».
В четверг пресс-служба РФС сообщила, что четыре клуба РПЛ были оштрафованы в общей сложности на 100000 рублей (более 1440 долларов США) за нарушение антикоронавирусных правил в отношении тренировочных процедур и возобновления турнирных матчей лиги.
За два дня до перезапуска сезона РПЛ 19 июня ФК «Ростов» сообщил, что у шести игроков клуба положительный результат на новый коронавирус, и вся команда была помещена на 14-дневный карантин.
Соперник клуба по 23-му туру, ФК «Сочи», отказался переносить ранее запланированный матч, а ФК «Ростов» выстроили в очередь молодых игроков из академии футбола клуба, которые проиграли «Сочи» (1-10). О случаях коронавируса также сообщалось после возобновления сезона РПЛ в футбольных клубах Динамо Москва, Уфа и Оренбург.
«Всю команду могут отправить на карантин из-за несоблюдения элементарных норм некоторыми ее игроками», — сказал Алаев. «Однако в качестве примера можно привести футбольный клуб« Уфа », которому удалось оперативно определить минимальную группу инфицированных игроков, которые контактировали друг с другом, а затем сформировать свою университетскую команду».
COVID-19
В конце декабря 2019 года китайские официальные лица уведомили Всемирную организацию здравоохранения (ВОЗ) о вспышке ранее неизвестной пневмонии в городе Ухань в центральном Китае.С тех пор случаи нового коронавируса, названного ВОЗ COVID-19, были зарегистрированы во всех уголках земного шара, включая Россию.
11 марта 2020 года ВОЗ объявила вспышку коронавируса пандемией. Согласно последним статистическим данным, во всем мире инфицировано более 9 738 370 человек и зарегистрировано более 492 390 смертей. Кроме того, на сегодняшний день более 5 271 300 человек выздоровели от болезни по всему миру.
На сегодняшний день в России подтверждено 620 794 случая коронавируса, из которых 384 152 пациента вылечились.По последним данным по России, по всей стране погиб 8 781 человек. Ранее правительство России создало горячую линию в Интернете, чтобы держать общественность в курсе ситуации с коронавирусом.
Александр Соболев из «Спартака» и Адессое Оеволе из ФК «Тамбов» … Новости Фото
Соглашение о легком доступе
Следующие объекты содержат неизданный и / или запрещенный контент.
Изображения, помеченные как Загрузки с легким доступом не включены в ваш Премиум доступ или пакет подписки с Getty Images, и вам будет выставлен счет за любые изображения, которые вы используете.
Легкий доступ к загрузкам позволяет быстро загружать изображения в высоком разрешении без водяных знаков. Если у вас нет письменного соглашения с Getty Images, в котором указано иное, загрузки с легким доступом предназначены для совместных целей и не лицензируются для использования в окончательном проекте.
Ваша учетная запись Easy-Access (EZA) позволяет сотрудникам вашей организации загружать контент для следующих целей:
- Испытания
- Образцы
- Композиты
- Макеты
- Черновой пропил
- Предварительные правки
Он заменяет стандартную составную онлайн-лицензию для неподвижных изображений и видео на веб-сайте Getty Images.Учетная запись EZA не является лицензией. Чтобы завершить проект с использованием материалов, загруженных из вашей учетной записи EZA, вам необходимо получить лицензию. Без лицензии дальнейшее использование невозможно, например:
- презентации фокус-групп
- внешние презентации
- финальные материалы распределены внутри вашей организации
- любые материалы, распространяемые за пределами вашей организации
- любые материалы, распространяемые среди населения (например, реклама, маркетинг)
Поскольку коллекции постоянно обновляются, Getty Images не может гарантировать, что какой-либо конкретный элемент будет доступен до момента лицензирования.
Пожалуйста, внимательно ознакомьтесь со всеми ограничениями, сопровождающими Лицензионные материалы на веб-сайте Getty Images, и свяжитесь с вашим представителем Getty Images, если у вас возникнут вопросы по ним. Ваша учетная запись EZA останется на месте в течение года. Представитель Getty Images обсудит с вами продление.
Нажимая кнопку «Загрузить», вы принимаете на себя ответственность за использование неизданного контента (включая получение любых разрешений, необходимых для вашего использования) и соглашаетесь соблюдать любые ограничения.
Методические подходы к оценке эффективности и экономической эффективности риск-ориентированного контроля и надзора Федеральной службы по надзору за соблюдением прав потребителей и благополучия человека (Роспотребнадзор)
№ 1. 2014
Актуальные аспекты анализа рисков здоровью
UDK 614.3, 338.054.23
МЕТОДОЛОГИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К ОЦЕНКЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ
И ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ РИСК-ОРИЕНТИРОВАННОГО КОНТРОЛЯ
И НАДЗОР ФЕДЕРАЛЬНОЙ СЛУЖБЫ 9000 RIGNER PROLLIGER
И НАДЗОР КОНТРОЛЯ СЛУЖБЫ ПРОГРАММЫ 9000 RIGNER 9000 ДЛЯ CUSTHING
Н.
В. Зайцева, И.В. Май, П.З. Шур, Д.А. Кирьянов
ФБУН «Федеральный научный медико-профилактический центр
Технологии управления рисками здоровью»,
, ул. Монастырская, 82, Пермь, 614045, Пермь, Россия
Аннотация. Изложены методические подходы к расчету фактических и предотвращенных в результате контроля и надзора
экономических потерь от смертности, заболеваемости и инвалидности населения, связанных с неблагоприятным воздействием
факторов внешней среды.Метод основан на последовательном решении цепочки задач:
установление причинно-следственной связи показателей состояния здоровья от показателей качества среды обитания, количественная оценка контроля качества среды обитания
деятельности учреждений и Федеральной службы по защите прав потребителей и благополучия человека. Является
надзора (Роспотребнадзор), подсчетом случаев нарушений здоровья, предотвращенных в результате деятельности Службы
и оценкой их экономических эквивалентов.
Апробация подходов на примере Российской Федерации
позволила установить, что в результате деятельности органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав и благополучия человека
в 2013 году наметилась положительная тенденция. по 51 показателю
качества среды обитания, предотвращено около 160 тысяч смертей и более 2 миллионов случаев заболеваний, из которых
при отсутствии адекватных мер надзора в области санитарно-эпидемиологического благополучия
населения .Предотвращение потери валового внутреннего продукта (ВВП) более чем на 120 миллиардов рублей, недобор налоговых поступлений в федеральный бюджет
около 25,7 миллиардов рублей. С учетом расходов федерального бюджета на деятельность
Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека в 2013 году в части санитарно-эпидемиологического благополучия
на сумму 11,386 млрд руб. Потери ВВП в размере 10,56 рубля на 1
рубля расходов федерального бюджета предотвращено недобор налогов в федеральный бюджет в размере 2.
28
рубля на 1 рубль расходов федерального бюджета не было.
Ключевые слова: санитарно-эпидемиологический надзор, риск-ориентированное управление, экономическая эффективность.
Указом Президента РФ №797 от 15 мая 2008 г. «О безотлагательных мерах по ликвидации административных ограничений хозяйственной деятельности
», предусмотренных соответствующими федеральными законами1, внесено
лота изменений в надзорную и контролирующую деятельность органов государственной власти
агентствами, в том числе Федеральной службой по защите прав потребителей и прав человека и по надзору за благополучием человека
.
Зайцева Н.В., Мая И.В., Шур П.З., Кирьянов Д.А., 2014
Зайцева Нина Владимировна — академик РАМН, доктор медицинских наук,
профессор, директор (e-mail: znv @ fcrisk.ru; телефон: +7 (342) 237-25-34).
Май Ирина Владиславовна — доктор биологических наук, профессор, зам. Директора по научной работе (e-mail:
may@fcrisk.
ru, тел .: +7 (342) 237-25-47).
Шур Павел Залманович — доктор медицинских наук, ученый секретарь (e-mail: shur @ fcrisk.RU; телефон: +7 (342) 238-33-
37).
Кирьянов Дмитрий Александрович — кандидат технических наук, заведующий сектором математического моделирования систем и процессов
(e-mail: [email protected]; телефон: +7 (342) 237-18-04).
1 Федеральный закон от 26 декабря 2008 г. № 294-ФЗ «О защите прав юридических лиц и индивидуальных предпринимателей
в порядке государственного контроля (надзора) и муниципального контроля»;
Федеральный закон от 9 февраля 2009 г. № 8-ФЗ «Об обеспечении доступа к информации о деятельности государственных органов
и органов местного самоуправления»;
Федеральный закон от 27 июля 2010 г. № 210-ФЗ «Об утверждении Положения о Федеральной службе по тарифам»;
Федеральный закон от 18 июля 2011 г. № 242-ФЗ «О внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации по вопросам
по вопросам государственного контроля (надзора) и муниципального контроля».
ДНК-вакцины | ||||
1 | ДНК-вакцина | ДНК с электропорацией | Каролинский институт / Cobra Biologics | |
2 | ДНК-вакцина | ДНК-плазмидная вакцина | Университет Осаки / АнГес / Такара Био | |
3 | ДНК-вакцина | ДНК | Такис / Прикладные науки о ДНК / Evvivax | |
4 | ДНК-вакцина (на основе нуклеиновой кислоты) | Плазмидная ДНК, безыгольная доставка; Платформа UNITE от Immunomic, инструмент для прогнозирования эпитопов Т-клеток in silico от EpiVax и система безыгольных инъекций Tropis® от PharmaJet. | Immunomic Therapeutics, Inc. | |
5 | ДНК-вакцина | ДНК-плазмидная вакцина | Zydus Cadila | |
6 | ДНК-вакцина (индуцированный ответ антител) | ДНК-вакцина | BioNet Asia | |
7 | ДНК-вакцина | ДНК-вакцина через назальный спрей | Университет Ватерлоо | |
8 | bacTRL-Spike (ДНК-вакцина) | Перорально, ДНК-плазмидная вакцина | Symvivo Corporation | |
9 | ДНК-вакцина | ДНК-вакцина | Entos Pharmaceuticals | |
10 | ДНК-вакцина (линейная ДНК-вакцина) | Производственная платформа на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) LineaRx | Linearx Inc. | |
Инактивированные вакцины | ||||
1 | Деактивировано | Деактивировано | Институт медицинской биологии Китайской академии медицинских наук | |
2 | Деактивировано | Деактивировано | Пекин Минхай Биотехнология | |
3 | Деактивировано | TBD | Университет Осаки / БИКЕН / НИБИОН | |
4 | Деактивировано | Инактивированный + CpG 1018 | Sinovac / Dynavax | |
5 | Деактивировано | Инактивированный + CpG 1018 | Валнева / Dynavax | |
6 | Деактивировано | Деактивировано | НИИ проблем биологической безопасности, Республика Казахстан | |
Живые аттенуированные вакцины | ||||
1 | Живой аттенуированный вирус | Деоптимизированные по кодонам живые аттенуированные вакцины | Codagenix / Институт сыворотки Индии | |
2 | Живой аттенуированный вирус | Деоптимизированные по кодонам живые аттенуированные вакцины | Indian Immunologicals Ltd / Университет Гриффита | |
Невоспроизводящиеся векторные вакцины | ||||
1 | Нереплицирующийся вирусный вектор | MVA-кодированные VLP — платформа вакцины GV-MVA-VLP | GeoVax / BravoVax | |
2 | Нереплицирующийся вирусный вектор | Аденовирус 26 (Ad26) | Янссен Фармацевтические компании | |
3 | Нереплицирующийся вирусный вектор | Репликация дефектного аденовируса обезьян (GRAd), кодирующего SARS-CoV2 S | ReiThera / LEUKOCARE / Univercells | |
4 | Нереплицирующийся вирусный вектор | Кодировка MVA-S | DZIF — Немецкий центр исследований инфекций | |
5 | AdCOVID (нереплицирующийся вирусный вектор) | Экспрессия NasoVAX на основе аденовируса | Альтиммун | |
6 | Нереплицирующийся вирусный вектор | Ad5 S (технология GreVac Plug-And-Play) | Greffex | |
7 | OraPro-COVID-19 (нереплицирующийся вирусный вектор) | Оральный Ad5 S | Stabilitech Biopharma Ltd | |
8 | Нереплицирующийся вирусный вектор | Аденовирусные + HLA-подходящие пептиды (технология PeptiCRAd) | Valo Therapeutics Ltd | |
9 | Нереплицирующийся вирусный вектор | Платформа для пероральных вакцин VAAST | Vaxart | |
10 | Нереплицирующийся вирусный вектор | MVA, экспрессирующие структурные белки | Centro Nacional Biotecnología (CNB-CSIC), Испания | |
11 | Нереплицирующийся вирусный вектор | Вакцина на основе дендритных клеток | Университет Манитобы | |
12 | Нераплицирующийся вирусный вектор | вакцина на основе вируса парагриппа 5 (PIV5), экспрессирующая спайковый белок | Университет Джорджии / Университет Айовы | |
13 | Нереплицирующийся вирусный вектор | Рекомбинантный деактивированный вирус бешенства, содержащий S1 | Бхарат Биотех / Университет Томаса Джефферсона | |
Вакцины на основе белковых субъединиц | ||||
1 | Белковая субъединица | Капсидоподобная частица | AdaptVac (консорциум PREVENT-nCoV) | |
2 | Белковая субъединица | VLP системы экспрессии клеток насекомых Drosophila S2 | ExpreS2ion | |
3 | DPX-COVID-19 (белковая субъединица) | Пептидные антигены, содержащиеся в LNP | IMV Inc; Университет Лаваля | |
4 | Белковая субъединица | S протеин | WRAIR / USAMRIID | |
5 | Белковая субъединица | S-белок + адъювант | Национальный институт инфекционных болезней, Япония | |
6 | Белковая субъединица | VLP-рекомбинантный белок + адъювант | Университет Осаки / BIKEN / Национальные институты биомедицинских инноваций, Япония | |
7 | Белковая субъединица | Нативная вакцина Spike Protein, подобная тримерной субъединице, с использованием адъюванта CpG 1018 | Clover Biopharmaceuticals Inc. | |
8 | Белковая субъединица | Массивы микроигл Субблок S1 | Питтсбургский университет | |
9 | Белковая субъединица | Пептидная вакцина (технология сигнальных пептидов) — биоинформатическая платформа VaxHit | Ваксил Био | |
10 | Белковая субъединица | Адъювантная белковая субъединица (RBD) | Biological E Ltd | |
| 11 | Flowvax (белковая субъединица) | Пептид — технология контроля презентации антигена исключения размера | Flow Pharma Inc. | |
12 | Белковая субъединица | S протеин | Вакцины AJ | |
13 | Белковая субъединица | Пептидная вакцина Ii-Key | Generex / EpiVax | |
14 | EPV-CoV19 (белковая субъединица) | S протеин | EpiVax / Univ. | |
15 | Адъювантная рекомбинантная субъединичная вакцина (белковая субъединица) | S-белок (продукция бакуловируса) — антиген рекомбинантного шипового белка и его система экспрессии бакуловируса | Санофи Пастер / GSK | |
16 | Белковая субъединица | Иммуноактивирующая платформа gp-96 | Heat Biologics / Univ.Майами | |
17 | Белковая субъединица | Молекулярный стабилизированный зажимом белок Spike (Glaxosmithkline plc и Seqirus GmbH) | Университет Квинсленда / GSK / Dynavax / Seqirus GmbH | |
18 | Белковая субъединица | Пептидная вакцина | ФБРНИ НИЦ ВБ ВЕКТОР, Роспотребнадзор, Кольцово | |
19 | Белковая субъединица | Субъединичная вакцина | ФБРНИ НИЦ ВБ ВЕКТОР, Роспотребнадзор, Кольцово | |
20 | Белковая субъединица | Белок S1 или RBD | Медицинский колледж Бейлора | |
21 | Вирусоподобная частица SARS-CoV-2 (белковая субъединица) | Субъединичный белок растительного происхождения (FastPharming) | iBio / CC-Фарминг | |
22 | Белковая субъединица | Рекомбинантный белок, наночастицы (на основе S-белка и других эпитопов) | Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток | |
23 | COVID-19 XWG-03 (белковая субъединица) | Вакцина против коронавируса на основе рекомбинантного белка, основанная на серии усеченных S (спайковых) белков | Innovax / Xiamen Univ. | |
24 | Белковая субъединица | Адъювантный пептид в виде микросфер | VIDO-InterVac, Университет Саскачевана | |
25 | Белковая субъединица | Синтетическая длиннопептидная вакцина-кандидат для белков S и M | ОнкоГен | |
26 | Белковая субъединица | Орал E.система экспрессии белков S и N на основе coli | MIGAL Gaililee Research Institute | |
27 | Белковая субъединица | Вакцина с наночастицами | LakePharma, Inc. | |
28 | Белковая субъединица | Рекомбинантный спайковый белок с адъювантом Advax ™ | Vaxine Pty Ltd. | |
29 | Белковая субъединица | Вакцина на основе OMV | Институт биологических наук Quadram | |
30 | Белковая субъединица | Вакцина на основе OMV | BioMVis Srl / Университет Тренто | |
29 | TNX-1810, TNX-1820 и TNX-1830 (белковая субъединица) | На основе шипов | Университет Альберты / Tonix Pharmaceuticals Holding Corp | |
31 | Белковая субъединица | Структурно модифицированные сферические частицы вируса табачной мозаики (TMV) | Московский государственный университет им. | |
32 | TNX-1810, TNX-1820 и TNX-1830 (белковая субъединица) | На основе шипов | Университет Альберты | |
33 | Белковая субъединица | Рекомбинантный слитый белок S1-Fc | Технология AnyGo | |
34 | Белковая субъединица | Рекомбинантный белок | Yisheng Biopharma | |
35 | Белковая субъединица | Рекомбинантный белок S в IC-BEVS | Vabiotech | |
36 | Белковая субъединица | Орально доставлено, термостабильная единица | Институт прикладной биотехнологии, Inc. | |
37 | Белковая субъединица | Белок S-2P + CpG 1018 | Корпорация Medigen Vaccine Biologics / NIAID / Dynavax | |
38 | Белковая субъединица | Пептиды, полученные из белка Spike | Axon Neuroscience SE | |
39 | Белковая субъединица | Адъювантный рекомбинантный белок (RBD-Dimer) | Аньхой Чжифэй Лонгком Биофармацевтика / Институт микробиологии Китайской академии наук | |
40 | Белковая субъединица | На базе РосБР | Neovii / Тель-Авивский университет | |
41 | Белковая субъединица | На базе РосБР | Кентукки Бипроцессинг | |
42 | Белковая субъединица | Пептид наружных мембранных пузырьков (OMV) | Intravacc / Epivax | |
Репликация вирусных векторных вакцин | ||||
1 | Репликация вирусного вектора | YF17D Вектор | KU Leuven | |
2 | Репликация вирусного вектора | Переносчик кори — разработка живой аттенуированной вакцины с вектором рекомбинантного вируса кори против COVID-19 | Zydus Cadila | |
3 | Репликация вирусного вектора | Переносчик кори — разработка живой аттенуированной вакцины против кори для экспрессии других антигенов | Институт Пастера / Фемида / Univ. | |
4 | Репликация вирусного вектора | Вектор кори | ФБРНИ НИЦ ВБ ВЕКТОР, Роспотребнадзор, Кольцово | |
5 | Живой аттенуированный вирус | Вирус кори (цели S, N) — Разработка живого ослабленного вируса с использованием технологии вируса кори | DZIF — Немецкий центр исследований инфекций | |
6 | TNX-1800 (репликация вирусного вектора) | Вектор оспы, экспрессирующий S-белок — живая модифицированная вакцина против вируса оспы для чрескожного введения для потенциальной профилактики COVID-19 | Tonix Pharma / Southern Research | |
7 | Репликация вирусного вектора | Живая вирусно-векторная вакцина на основе аттенуированного остова вируса гриппа (интраназальная) | BiOCAD и IEM | |
8 | Репликация вирусного вектора | Рекомбинантная вакцина на основе вируса гриппа А для профилактики COVID-19 (интраназальная) | ФБРНИ НИЦ ВБ ВЕКТОР, Роспотребнадзор, Кольцово | |
9 | Репликация вирусного вектора | Аттенуированный грипп, экспрессирующий антигенную часть белка Spike | Fundação Oswaldo Cruz и Instituto Buntantan | |
10 | Репликация вирусного вектора | Вектор гриппа, экспрессирующий RBD — Разработка реплицирующейся вирусной векторной вакцины | Университет Гонконга | |
11 | Репликация вирусного вектора | Компетентная к репликации технология химерного вируса VSV (VSVΔG), доставляющая гликопротеин SARS-CoV-2 Spike (S). | Международная инициатива по вакцине против СПИДа (IAVI) / Батавия | |
12 | Репликация вирусного вектора | VSV-S | Университет Западного Онтарио | |
13 | Репликация вирусного вектора | Вектор VSV | ФБРНИ НИЦ ВБ ВЕКТОР, Роспотребнадзор, Кольцово | |
14 | Coroflu (репликация вирусного вектора) | M2-дефицитный вектор гриппа с единственной репликацией (M2SR); Она разработана на основе основы кандидата на вакцину против гриппа от Flugen, M2SR, с исследованиями, в которых последовательности генов SARS-CoV-2, нового коронавируса, вызывающего COVID-19, встраиваются в M2SR, так что новая вакцина также будет вызывать иммунитет против коронавирус | UW – Madison / FluGen / Bharat Biotech | |
15 | Репликация вирусного вектора | Переносчик вируса болезни Ньюкасла (NDVSARS-CoV-2 / Spike) | Intravacc / Wageningen Bioveterinary Research / Utrecht Univ. | |
16 | Репликация вирусного вектора | Вектор птичьего парамиксовируса (APMV) | Университет Ланкастера, Великобритания | |
РНК-вакцины | ||||
1 | РНК | LNP-мРНК; вакцина против Covid-19 на основе мРНК; Перевести платформу мРНК Bio | Перевести Био / Санофи Пастер | |
2 | РНК | LNP-мРНК; вакцина против Covid-19 на основе мРНК; Перевести платформу мРНК Bio | CanSino Biologics / Precision NanoSystems | |
3 | РНК | LNP-инкапсулированный коктейль мРНК, кодирующих VLP; Разработка мРНК-кандидата на вакцину COVID-19 с использованием мРНК для экспрессии рецептор-связывающего домена шипового белка COVID-19 и разработка мРНК, которые могут инструктировать хозяина производить вирусоподобные частицы, подобные SARS-CoV-2 | Университет Фудань / Шанхайский университет Цзяотун / RNACure Biopharma | |
4 | РНК | инкапсулированной в LNP мРНК, кодирующей RBD; Разработка кандидата на вакцину мРНК COVID-19 с использованием мРНК для экспрессии рецептор-связывающего домена шипового белка COVID-19 и разработка мРНК, которые могут инструктировать хозяина производить вирусоподобные частицы, подобные SARS-CoV-2 | Университет Фудань / Шанхайский университет Цзяотун / RNACure Biopharma | |
5 | РНК | Репликация дефектных РНК, полученных из SARS-CoV-2 | Centro Nacional Biotecnología (CNB-CSIC), Испания | |
6 | РНК | мРНК, инкапсулированная в LNP | Токийский университет / Дайити-Санкё | |
7 | РНК | Инкапсулированная в липосомы мРНК | BIOCAD | |
8 | РНК | Несколько кандидатов на мРНК | RNAimmune, Inc. | |
9 | РНК | мРНК | ФБРНИ НИЦ ВБ ВЕКТОР, Роспотребнадзор, Кольцово | |
10 | мРНК Вакцина (РНК) | мРНК | China CDC / Университет Тунцзи / Stermina | |
11 | LUNAR-COV19 (РНК) | мРНК; Разработка вакцины мРНК COVID-19, LUNAR-COV19, на основе технологии STARR компании Arcturus с использованием преимуществ быстрого скрининга вакцин, проведенных Duke | Arcturus / Duke-NUS | |
12 | РНК | saRNA | Имперский колледж Лондона | |
13 | Вакцина мРНК SARS-CoV-2 (РНК) | мРНК; мРНК вакцина для профилактики COVID-19 | Curevac | |
14 | РНК | мРНК в системе интраназальной доставки; нацеливание на консервативные эпитопы всего генома CoV-2; объединяет 3 различные технологии, такие как запатентованная технология eTheRNA Trimix | eTheRNA | |
15 | мРНК Вакцина (РНК) | мРНК | Greenlight Biosciences | |
Вакцины с VLP | ||||
1 | VLP | Вирусоподобная частица, основанная на RBD, отображаемая на вирусоподобных частицах | Saiba GmbH | |
2 | Вакцина с вирусоподобными частицами (VLP) | VLP растительного происхождения; Компания произвела вирусоподобную частицу (ВПЧ) коронавируса через 20 дней после получения гена SARS-CoV-2 . | Medicago Inc. | |
3 | VLP | Мультиэпитопный дисплей ADDomerTM; Доклиническая разработка вакцины на основе вирусоподобных частиц с использованием мультиэпитопного дисплея ADDomer для COVID-19 | Imophoron Ltd и Центр Макса Планка Бристольского университета | |
4 | VLP | Неизвестно | Институт Доэрти | |
5 | VLP | VLP | OSIVAX | |
6 | VLP | эВЛП | АРТЕС Биотехнология | |
Прочие | ||||
1 | Неизвестно | Неизвестно; вакцина против вируса SARS-CoV-2 | ImmunoPrecise | |
2 | Неизвестно | Неизвестно | Тулейнский университет | |
3 | Вакцина MAPS | Платформа вакцины Multiple Antigen Presenting System (MAPS) разработана для обеспечения высокоаффинного связывания защитных полисахаридов и белков в одной вакцине | Affinivax Inc. | |
/ EpiVax, Inc./PharmaJet
; Такис Биотех
/ GSK / Dynavax
Грузии
/ GSK
М.В. Ломоносова
Питтсбургского центра исследований вакцин
Репликационный вирусный вектор, экспрессирующий белок S
Карантинное постановление: Россия отправляет женщину обратно после того, как она …
МОСКВА (AP). В понедельник российский суд приказал женщине, сбежавшей из вирусного карантина, вернуться в больницу, из которой она бежала, и оставаться в карантине еще как минимум два дня. В постановлении подчеркивается, что общественное здравоохранение пытается остановить распространение нового коронавируса из Китая.
Алла Ильина попала в больницу северного русского города Санкт-Петербург.Санкт-Петербург 6 февраля с болью в горле и была проверена на новый вирус, потому что она вернулась из Китая пятью днями ранее. На следующий день она сбежала из больницы, отключив электронный замок в своей палате, после того как узнала, что ей придется провести в изоляции 14 дней вместо 24 часов, которые обещали ей врачи.
В посте в Instagram Ильина сказала, что врачи сказали ей, что у нее отрицательный результат на вирус, но ей все равно пришлось оставаться в карантине в течение двух недель.
«Дикий», — написала Ильина.«Все три теста показали, что я полностью здоров, так какого черта карантин?»
Ее наглый отъезд явно смутил российские власти. Спустя несколько дней российский надзорный орган здравоохранения Роспотребнадзор подал на нее в суд, прося суд назначить ее принудительную госпитализацию.
Вирус, появившийся в центральном Китае в декабре, заразил более 71 000 человек, убив 1770 пациентов в материковом Китае и еще пять человек в других местах. Китай ввел строгие меры изоляции в отношении более 60 миллионов человек в центральной провинции Хубэй, а другие страны принимают свои собственные меры, включая обязательный 14-дневный карантин, чтобы гарантировать, что вирус не закрепится на их территории.
Адвокат Ильиной заявила на судебном заседании в понедельник, что она не представляет никакой опасности для окружающих, и отметила, что ее допустили в зал суда, заполненный десятками людей, ни один из которых, включая органы здравоохранения России, не был в масках.
Она сказала газете «Фонтанка», что ее изолятор ужасен — ни книг, ни шампуня, ни Wi-Fi, ни мусорной корзины, ни мусора, ни двери, закрытой электронным замком. Расстроенная, она придумала, как замкнуть замок накоротко.
Представители здравоохранения утверждали, что изоляция Ильиной была необходимой мерой, чтобы остановить распространение вируса, утверждая, что он может находиться в латентном состоянии у человека до 24 дней. Суд встал на их сторону и приказал ей вернуться в больницу и оставаться в изоляции как минимум до среды.
Судебный процесс явно был направлен на то, чтобы отговорить других людей следовать ее примеру. В петербургском отделении Роспотребнадзора не ответили на просьбу прокомментировать эффективность решения суда, учитывая, что Ильина уже почти 10 дней после побега бродила на свободе.
На прошлой неделе из той же больницы Санкт-Петербурга сбежали еще как минимум трое человек, находящихся на карантине из-за возможной коронавирусной инфекции.
Двое из них с тех пор вернулись, а третья — женщина по имени Анна Рыбакова, по сообщениям СМИ, — остается на свободе. Роспотребнадзор подал иск с требованием вернуть Рыбакову в больницу, и судебное заседание по этому вопросу назначено на среду.
Глава Роспотребнадзора Анна Попова заявила в понедельник, что чиновники здравоохранения рассматривают возможность введения «более жесткой ответственности» для пациентов, нарушивших правила карантина и «более строгие протоколы карантина».
В России зарегистрировано только два случая заболевания COVID-19, вызванного этим вирусом, двух граждан Китая, которые прошли курс лечения и были освобождены. Тем не менее, российские власти приняли серьезные меры для предотвращения его распространения, включая госпитализацию сотен людей, вернувшихся из Китая в качестве меры предосторожности.
Россия также приостановила большую часть авиасообщения с Китаем, приостановила движение всех поездов в Китай и Северную Корею и закрыла сухопутную границу с Китаем и Монголией.
Москва также временно прекратила выдачу рабочих виз китайским гражданам и приказала китайским студентам, которые учились в России, не возвращаться до 1 марта.
Протоколы карантина различаются по России. В некоторых регионах чиновники здравоохранения изолируют китайских граждан, недавно вернувшихся из Китая, а в других все, кто сообщает о симптомах, напоминающих новый вирус, подлежат 14-дневному карантину.
Премьер-министр Михаил Мишустин также заявил, что Россия может начать депортацию иностранцев, зараженных вирусом.
Между тем российские власти сообщили в понедельник, что россиянка на борту круизного лайнера Diamond Princess, находящегося на карантине в Японии, стала первой россиянкой, у которой диагностирован COVID-19.
Женщина будет переведена в больницу и получит лечение, говорится в сообщении посольства России в Японии в Facebook. Не сразу было ясно, где это будет. Она одна из 454 человек, заразившихся на этом конкретном круизном лайнере.
___
Прочтите все статьи AP о вспышке коронавируса в Китае по адресу https://apnews.
com/VirusOutbreak
Google-файлов, апелляция против российского YouTube
Google подал ходатайство в российский суд, оспаривая решение страны включить видео YouTube в официальный черный список.
В клипе изображена женщина, использующая макияж и бритвенное лезвие, чтобы создать впечатление, будто она порезала одно из своих запястий.
Российский наблюдатель запретил клип, поскольку он распространял информацию о методах совершения самоубийства, сообщает BBC.
Google указал, что хотел бы использовать этот пример в качестве тестового примера, чтобы помочь прояснить правила черного списка.
В ноябреМосква внесла поправку в Закон об информации, разрешающую отключать сайты в целях защиты детей, говорится в сообщении.
Если бы Google не снял оскорбительный ролик в России, он мог бы столкнуться с тем, что местные интернет-провайдеры (ISP) заблокировали бы весь его сайт YouTube.
Однако видео остается доступным в других странах.
Согласно отчету, клип был загружен 18 января 2012 года российским пользователем SNEG0VA.
Когда черный список вступил в силу, его просмотрели менее 7500 раз. Новость о его удалении опубликовала российская газета «Ведомости».
Представитель YouTube заявила, что время от времени они будут ограничивать контент в доменах конкретной страны, если этого требуют законы страны или если будет обнаружено, что контент нарушает принципы нашего сообщества.
Она добавила, что в этом случае они обжаловали решение Russian Consumer Watchdog, поскольку не считают, что целью закона было ограничение доступа к видео, которые явно предназначены для развлечения зрителей.
Согласно отчету, Роскомнадзор (Федеральная служба по надзору в сфере связи, информационных технологий и массовых коммуникаций), отвечающий за ведение черного списка, подтвердил, что клип был отмечен вторым сторожевым псом Роспотребнадзора (Федеральная служба по контролю в США). Сфера защиты прав потребителей и благополучия человека.
Ролик — не единственный, который Google заблокировал на YouTube в России, но пресс-секретарь американской компании не смогла сказать, сколько видео было скрыто.
Список предназначен для ежедневного обновления, и пользователи могут проверять, запрещен ли сайт через инструмент онлайн-поиска, добавил он.
IJMS | Бесплатный полнотекстовый | Нарушение регуляции мембранной экспрессии TNFα в дендритных клетках пациентов с глиобластомой приводит к нарушению цитотоксической активности в отношении аутологичных опухолевых клеток
1.Введение.
Дендритные клетки (ДК) играют ключевую роль в противоопухолевых иммунных ответах из-за их способности представлять опухолевые антигены наивным Т-клеткам, а также индуцировать образование цитотоксических CD8 + Т-лимфоцитов [1,2]. За последние 20 лет, помимо антигенпредставляющей функции и способности стимулировать иммунные ответы, было показано, что ДК проявляют цитотоксическую активность в том смысле, что они могут напрямую вызывать гибель опухолевых клеток посредством механизмов, опосредованных гранулами и рецепторами смерти [3, 4].
Первый механизм связан с высвобождением цитотоксических медиаторов перфорина и гранзима В из литических гранул ДК [5,6,7].Последний путь включает экспрессию цитотоксических молекул, принадлежащих к семейству факторов некроза опухоли (TNFα, FasL, TRAIL и т. Д.) На поверхности ДК, которые запускают гибель опухолевых клеток-мишеней путем связывания с соответствующими рецепторами [3,5,8,9 ]. Тем не менее, киллерная функция ДК плохо изучена, что вызывает много вопросов относительно ее роли в противоопухолевых иммунных ответах. Поскольку моноциты действуют как естественный пул клеток-предшественников ДК при патологии, значительная часть ДК в микроокружении опухоли происходит из моноцитов.Обычные модели для исследований таких ДК in vitro основаны на культурах ДК, полученных из моноцитов в присутствии GM-CSF и IL-4 (IL-4-DC) [10]. В то же время важную роль в генерации ДК из моноцитов играют интерфероны I типа, особенно IFNα, который продуцируется большинством клеток в ответ на воспалительные стимулы и действует как сигнал опасности [11].
IFNα способен запускать быструю дифференцировку циркулирующих моноцитов в ДК [12]. Более того, сам IFNα и IFNα-активируемые факторы транскрипции (STAT1, IRF7, ISGF3 и др.)) регулируют не только большинство генов, участвующих в дифференцировке ДК [12], но и гены, кодирующие цитотоксические молекулы (TRAIL, перфорин и гранзимы) [5]. ДК, дифференцированные в присутствии IFNα (IFN-DC), представляют собой уникальную популяцию DC, которая отличается от IL-4-DC более выраженной антигенпрезентирующей способностью, более высокой миграционной активностью и более стабильным фенотипом [13,14, 15,16]. Кроме того, IFN-DC проявляют цитотоксическую активность против различных линий опухолевых клеток, экспрессируют широкий спектр цитотоксических лигандов (TNFα, TRAIL, FasL, перфорин), а также секретируют гранзим B, который практически не продуцируется IL-4-DC [5 , 9].Во время роста опухоли функциональная активность ДК часто нарушается, что снижает эффективность противоопухолевых иммунных ответов. Наши предыдущие исследования показали, что ИФН-ДК от пациентов с глиомами высокой степени злокачественности (мультиформная глиобластома) в отличие от ДК, полученных от пациентов с глиомами низкой степени злокачественности, характеризуются нарушенной TNFα / TNF-R-зависимой цитотоксичностью.
Этот дефект проявляется в сниженной способности IFN-DC лизировать клетки карциномы гортани HEp-2 (которые избирательно чувствительны к TNFα / TNF-R1-опосредованному лизису), и было показано, что этот дефект связан с характерными низкими уровнями экспрессии. мембранной формы TNFα (mTNFα), присутствующей на полученных от пациента ДК [17,18].Учитывая, что мультиформная глиобластома характеризуется крайне неблагоприятным прогнозом даже при использовании интенсивной лучевой и химиотерапии [19], можно предположить, что нарушение эффекторной функции ДК могло быть одной из причин агрессивного поведения опухоли. Однако чувствительность клеток глиобластомы к цитотоксической активности, опосредованной ДК, остается малоизученной. В целом мы полагаем, что разработка возможных методов регулирования цитотоксической активности ДК будет представлять большой клинический интерес.Действительно, усиление опосредованной ДК цитотоксичности или получение ДК с высоким цитотоксическим потенциалом может составлять новые подходы в противоопухолевой иммунотерапии.
В настоящем исследовании мы оцениваем цитотоксическую активность IFNα-индуцированных дендритных клеток против клеточных линий глиобластомы, полученных из первичных культур опухолевых клеток, и исследовали механизмы, лежащие в основе лизиса клеток глиобластомы, опосредованного DC. Полученные данные выявили дефект TNFα / TNF-R1-зависимой цитотоксичности ДК в отношении аутологичных опухолевых клеток у пациентов с глиобластомой.Таким образом, мы также выяснили молекулярные механизмы нарушения цитотоксичности, а также проанализировали подходы к усилению эффекторных функций DC.
2. Результаты
2.1. Клеточные линии глиобластомы, полученные из культур первичных опухолей, и иммортализованная клеточная линия U87, различаются по экспрессии рецепторов смерти семейства TNF
Мы использовали краткосрочные клеточные линии, полученные из первичных культур клеток глиобластомы, в качестве модели для изучения цитотоксического потенциала IFN-DC.
. Такой подход позволил увеличить количество опухолевых клеток после нескольких пассажей, а также получить морфологически однородные популяции клеток.Стандартная иммортализованная клеточная линия глиобластомы U87 служила контрольной культурой в различных сериях экспериментов.
Как показано на рисунке 1, клетки глиобластомы также экспрессировали другие семейства TNF. рецепторы, содержащие домен DD (рецепторы TRAIL-R и Fas).Клеточные линии глиобластомы характеризовались высокими уровнями экспрессии TRAIL-R2 (в среднем 54,8% ± 18,8%; рис. 1c). Было обнаружено, что TRAIL-R2-отрицательная только одна линия опухолевых клеток. Во всех других случаях соотношение клеток TRAIL-R2 + в изученных линиях краткосрочных клеток глиобластомы варьировало от 22,0% до 95,0% в зависимости от линии клеток. Клетки глиобластомы U87, считающиеся чувствительными к TRAIL-опосредованному лизису [22], экспрессировали TRAIL-R2 на более низком уровне, чем несколько линий неиммортализованных клеток глиобластомы.Клетки глиобластомы также характеризовались более низкой частотой экспрессии рецептора Fas (средняя частота 19,6 ± 8,1%; рис. 1d), чем клетки U87 (средняя частота 36,0 ± 4,0%). Таким образом, присутствие проапоптогенных рецепторов на опухолевых клетках, полученных из первичной культуры глиобластомы, указывает на возможную чувствительность клеток глиобластомы к рецептор-опосредованному лизису. Кроме того, индивидуальные различия, наблюдаемые в уровнях экспрессии рецепторов, изучаемых здесь, в линиях клеток глиобластомы, полученных от разных пациентов, могут определять разные уровни чувствительности опухолевых клеток к апоптозу.
2.2. Клеточные линии глиобластомы чувствительны к цитотоксическому эффекту донорских IFN-DC через механизм индукции апоптоза
Как показано на фиг. 2a, IFN-DC, полученные от здоровых доноров, лизировали все 13 протестированных клеточных линий глиобластомы. В зависимости от клеточной линии значения цитотоксичности IFN-DC варьировали от 20% до 85%, что отражало индивидуальные различия в чувствительности клеточных линий глиобластомы к уничтожению. В большинстве клеточных линий (9 из 13) донорские ДК обладали выраженной способностью лизировать клетки глиобластомы (цитотоксичность> 40%).Более того, цитотоксическая активность IFN-DC против многих клеточных линий глиобластомы была выше, чем наблюдаемая против иммортализованных клеток U87.
В отличие от DC, супернатанты донорского IFN-DC (при концентрации 25%, об. / Об.) Обладали слабой цитотоксической активностью (≤12%) в отношении клеточных линий глиобластомы, и, кроме того, супернатанты IFN-DC не лизировали клетки U87 (данные не показаны ). Таким образом, для запуска цитотоксической активности IFN-DC против клеток глиобластомы требовался прямой контакт между DC и опухолевыми клетками.
Совместное культивирование клеток глиобластомы, предварительно меченных витальным красителем CFSE и донорскими IFN-DC (рис. 2b), привело к заметному увеличению относительного количества клеток аннексина V + , в основном из-за раннего апоптоза (аннексин V + PI — ).Таким образом, цитотоксический эффект донорских ДК опосредован индукцией апоптоза в клетках глиобластомы.2.3. Гранулы-опосредованный и TNFα / TNF-R1-зависимый лизис являются преобладающими механизмами цитотоксичности IFN-DC в отношении клеточных линий глиобластомы, полученных из культур первичных опухолей
Затем мы рассмотрели роль индивидуальных механизмов, опосредованных рецепторами смерти, лежащих в основе цитотоксического действия IFN.
-DC. С этой целью мы провели серию экспериментов, включающих ингибирование лигандов TNFα, FasL и TRAIL, путем предварительной обработки донорных IFN-DC растворимыми рецепторами rTNF-R1, rFas и rTRAIL-R2 (рис. 2c – e).Самый сильный ингибирующий эффект наблюдался при обработке IFN-DC растворимым рецептором rTNF-R1. Таким образом, ингибирование TNFα / TNF-R1-зависимого пути (фиг. 2c) снижает цитотоксическую активность донорских DC в 6 из 8 протестированных клеточных линий (среднее значение подавления 33%). Однако после обработки двух клеточных линий глиобластомы (GB # 10 и GB # 13) и клеток U87 rTNF-R1 снижения цитотоксичности DC не наблюдалось, что указывает на устойчивость этих клеточных линий к TNFα-зависимому лизису. Fas-зависимый путь (фиг. 2d) снижает цитотоксическую активность донорских DC против 3 из 6 испытанных линий клеток (GB № 7, GB № 11 и GB № 12).Медиана ингибирующего действия rFas на чувствительные клетки составляла 19,6%. Ингибирующий эффект rFas на цитотоксичность ДК также наблюдался в культурах клеток U87, что согласуется с литературными данными о чувствительности этой линии клеток к FasL-зависимому апоптозу [22].
Аналогичные результаты были получены при ингибировании TRAIL-зависимого пути. . Снижение цитотоксической активности при обработке IFN-DC растворимым рецептором rTRAIL-R2 (рис. 2e) также было обнаружено только в 3 из 6 протестированных линий клеток глиобластомы (GB # 7, GB # 10 и GB # 11) (среднее подавление, 21.0%) и в клеточной линии U87, которая, как сообщается, относится к группе TRAIL-чувствительных опухолевых клеток [22]. Поскольку ингибирование сигнальных путей, опосредованных рецептором смерти, либо частично нейтрализует цитотоксический эффект донорских IFN-DC, либо действительно не влияют на эту функцию, мы изучили возможное участие механизма, опосредованного перфорином / гранзимом B, в цитотоксической активности IFN-DC против клеток глиобластомы. Для этого донорские ДК были предварительно обработаны конканамицином А (КМА), который является специфическим ингибитором вакуолярной H + -АТФазы.Известно, что CMA способствует нейтрализации pH в литических гранулах, что в конечном итоге приводит к инактивации перфорина [23,24].
Обработка ДК конканамицином А (рис. 2f) снижала цитотоксическую активность ДК против всех протестированных линий клеток (средний ингибирующий эффект 37%), а также против клеток U87 (средний ингибирующий эффект 27,3%). Мы подтвердили участие гранулы. -опосредованный механизм цитотоксической активности IFN-DC в отношении клеточных линий глиобластомы в экспериментах по дегрануляции DC. Действительно, совместное культивирование донорских IFN-DC с клетками глиобластомы (рис. 2g) привело к более чем 3-кратному увеличению количества DC, экспрессирующих CD107a (CD107a + CFSE + клетки), которые представляют собой мембрану литических гранул. маркер.Таким образом, опосредованный гранулами и TNFα / TNF-R1-зависимый пути являются основными механизмами, лежащими в основе цитотоксической активности IFN-DC против большинства полученных краткосрочных клеточных линий глиобластомы (рис. 2h), тогда как FasL / Fas- и TRAIL / TRAIL-R2- зависимые пути не являются критическими, что вносит значительно меньший вклад в донорскую IFN-DC-опосредованную цитотоксическую активность против клеток глиобластомы.
Важно отметить, что не наблюдали корреляции между уровнем ингибирующего эффекта, опосредованного изученными нейтрализующими молекулами, и экспрессией соответствующих рецепторов на опухолевых клетках.Таким образом, различия в чувствительности опухолевых клеток к лизису, опосредованному рецепторами смерти, не полностью связаны с характеристиками экспрессии этих рецепторов. Более того, полученные данные указывают на то, что, несмотря на схожее гистогенетическое происхождение опухолевых клеток от пациентов с глиобластомой, они отличаются от иммортализованных клеток глиобластомы U87 своей чувствительностью к DC-опосредованному лизису и определенными путями, участвующими в этом процессе.
2.4. Снижение цитотоксической активности IFN-DC от пациентов с глиобластомой в отношении аутологичных и аллогенных клеток глиобластомы, чувствительных к TNFα / TNF-R1-опосредованному лизису
IFN-DC, генерируемые из моноцитов пациентов с глиобластомой, характеризовались фенотипическими профилями с задержкой клеточной дифференцировки, но выраженным равным уровнем молекулы, участвующие в презентации антигена (HLA-DR, CD86) донорским IFN-DCs, как показано в таблице 1, которая подтверждает наши предыдущие результаты [25].
По сравнению с донорскими ИФН-ДК, ИФН-ДК от пациентов с глиобластомой показали на 30% меньшую цитотоксическую активность по отношению к тем же клеточным линиям глиобластомы (p = 0,05; рис. 3а). В этих экспериментах мы тестировали ДК, взятые от 4-15 человек, против каждой клеточной линии. . Дефектная цитотоксическая активность IFN-DC, полученных от пациентов с глиобластомой, против аутологичных опухолевых клеток наблюдалась только в клеточных линиях, чувствительных к TNFα / TNF-R1-опосредованному лизису (таблица 2). Однако, если клетки не были чувствительны к TNFα / TNF-R1-зависимому сигнальному пути (GB # 10, GB # 13), цитотоксическая активность IFN-DC, полученных от пациентов, была сравнима с таковой донорского происхождения.Сходные результаты были получены для цитотоксической активности аллогенных IFN-DC от пациентов с глиобластомой в отношении исследованных линий опухолевых клеток (рис. 3b). Только когда клетки глиобластомы были устойчивы к TNFα-опосредованному лизису (GB # 10), цитотоксическая активность была одинаковой для ДК, полученных от здоровых доноров и пациентов.
Во всех других случаях цитотоксичность полученных от пациента ДК в отношении аллогенных клеточных линий глиобластомы была ниже, чем в отношении тех же опухолевых клеток.Мы не обнаружили корреляций между чувствительностью клеточной линии к другим TNFα / TNF-R1-независимым механизмам и дефектной цитотоксичностью DC пациентов.
Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что TNFα / TNF-R1-зависимый механизм играет важную роль в опосредованной DC цитотоксичности в отношении аутологичных опухолевых клеток и что дефектная TNFα-опосредованная цитотоксичность DC ответственна за снижение эффекторных функций IFN-DC пациентов.
2,5. IFN-DC от пациентов с глиобластомой не отличаются от донорских IFN-DC по паттерну молекулярной экспрессии внутриклеточных цитолитических гранул и поверхностных лигандов FasL и TRAIL
. Ранее мы показали, что IFN-DC от пациентов с глиобластомой характеризуются пониженной экспрессией mTNFα по сравнению с донорским IFN-DC [18].
Здесь мы показываем, что экспрессия других молекул, участвующих в цитотоксической активности DC, у пациентов с глиобластомой сохраняется. Таким образом, IFN-DC от пациентов с глиобластомой были сопоставимы с донорскими IFN-DC с точки зрения экспрессии определенных внутриклеточных молекул в цитолитических гранулах, таких как перфорин, гранзим B, CD107a (рисунок 3d), а также поверхностные молекулы FasL и TRAIL (рисунок 3c ).Следовательно, сниженная экспрессия mTNFα на IFN-DC у пациентов с глиобластомой может быть ключевым фактором, ответственным за нарушение цитотоксической функции DC против опухолевых клеток, чувствительных к TNFα / TNF-R1-зависимому лизису.В то же время сохраненная экспрессия других лигандов, в основном перфорина и гранзима В, позволяет ДК от пациентов с глиобластомой лизировать опухолевые клетки, хотя и на более низком уровне по сравнению с донорскими ИФН-ДК.
2.6. Снижение цитотоксичности IFN-DC у пациентов с глиобластомой связано с низким уровнем мРНК TNFα и высокой активностью TACE / ADAM-17.
ДК от пациентов с глиомами высокой степени злокачественности против аутологичных опухолевых клеток.IFN-DC от пациентов с глиобластомой характеризовались более чем двукратным снижением уровней мРНК TNFα по сравнению с донорскими IFN-DC (Me 2 — ΔΔCt = 0,35; p = 0,05; Рисунок 4a). Экспрессия mTNFα также зависит от интенсивности выделения и активности TNFα-превращающего фермента (TACE / ADAM-17), который расщепляет внеклеточную часть mTNFα и превращает ее в биологически активную секретируемую форму TNFα (sTNFα) [26]. Прежде чем сравнивать экспрессию TACE / ADAM-17 в DC от здоровых доноров и пациентов, мы определили оптимальные контрольные точки обнаружения ферментов в ответ на стимуляцию LPS (рис. 4b).Резкое снижение уровней ТАСЕ / ADAM-17 наблюдалось в течение первых 60 минут после добавления ЛПС к донорским культурам IFN-DC. Впоследствии уровни экспрессии TACE / ADAM-17 увеличивались, достигая максимума через 2 часа после начала стимуляции, а затем оставались обнаруживаемыми до 24 часов культивирования, после чего следовало постепенное снижение. На основании полученных данных мы провели сравнительный анализ экспрессии TACE / ADAM-17 на IFN-DC от здоровых доноров и пациентов с глиобластомой через 2 ч после лечения LPS. На рисунке 4в показано, что интактные (не стимулированные ЛПС) ДК от пациентов характеризовались более выраженной экспрессией фермента TACE / ADAM-17, чем донорские ДК (p = 0.17). Более того, уровни экспрессии TACE / ADAM-17 в LPS-стимулированных культурах DC, полученных от пациентов, были более чем в два раза выше, чем у здоровых донорских DC (p = 0,035). Максимальная активность TACE / ADAM-17 в донорских IFN-DC наблюдалась в ответ на стимуляцию LPS соответствовал наивысшему уровню экспрессии этого фермента, обнаруженному через 2 ч после обработки (данные не показаны). Подобно повышенной экспрессии TACE / ADAM-17, полученные от пациентов ДК также характеризовались более высокой активностью TACE / ADAM-17 ранее (p = 0.2) и после (p = 0,08) стимуляции LPS, чем донорские DC (рис. 4d). LPS-стимулированные IFN-DC от пациентов с глиобластомой характеризовались почти в три раза большей активностью TACE / ADAM-17, чем IFN-DC донорского происхождения. Полученные результаты показывают, что низкие уровни экспрессии mTNFα, наблюдаемые на ДК, полученных от пациентов с глиобластомой, могут быть связаны не только с нарушением экспрессии TNFα, но также могут быть вызваны высокими уровнями экспрессии и активности TACE / ADAM-17, ответственных за выделение mTNFα из мембрана постоянного тока.
2.7. rIL-2 и дцДНК повышают цитотоксическую активность IFN-DC в отношении аутологичных клеток глиобластомы с помощью различных механизмов
Ранее мы показали, что рекомбинантный интерлейкин 2 (rIL-2) и двухцепочечная ДНК человека (дцДНК) усиливают экспрессию mTNFα на IFN -ДК от пациентов с глиобластомой [18]. Наши наблюдения могут быть важны для разработки возможных методов коррекции нарушения цитотоксической активности ДК, полученной от пациентов с глиобластомой, против аутологичных опухолевых клеток, чувствительных к TNFα / TNF-R1-зависимому лизису.Поэтому здесь мы исследовали эффекты rIL-2 и дцДНК в качестве стимуляторов цитотоксической активности полученных от пациента ДК против клеток глиобластомы. Стимулирующее действие rIL-2 и дцДНК на экспрессию mTNFα было связано в среднем с 1,5-кратным увеличением цитотоксической активности полученных от пациентов IFN-DC в отношении аутологичных опухолевых клеток (рис. 5). Затем мы изучили влияние rIL -2 и дцДНК на двух потенциальных уровнях нарушенной регуляции (транскрипционной или посттрансляционной) экспрессии mTNFα в полученных от пациента DCs (Рисунок 6a – c).Интактные и обработанные rIL-2 IFN-DC характеризовались одинаково низким уровнем экспрессии мРНК TNFα (фиг. 6a). В отличие от rIL-2, обработка культур IFN-DC дцДНК увеличивала экспрессию мРНК TNFα в DC (p = 0,05). Кроме того, дцДНК снижала экспрессию TACE / ADAM-17 в IFN-DC, полученных от пациентов, и снижала его протеолитическую активность более чем на 20% (рис. 6b, c). Мы наблюдали, что rIL-2 не влияет на экспрессию TACE / ADAM-17 в IFN-DC, в целом предполагая, что rIL-2 и дцДНК регулируют экспрессию mTNFα посредством различных механизмов.Мы также оценили потенциальный эффект rIL-2 и дцДНК на экспрессию других цитотоксических лигандов, участвующих в цитотоксической активности DC против клеток глиобластомы. Активация IFN-DC, полученных от пациентов с глиобластомой, с помощью rIL-2 и dsDNA увеличивала экспрессию медиаторов рецептор-зависимой цитотоксичности семейства TNF (FasL и TRAIL), а также гранулярно-зависимую цитотоксичность (фиг. 6d). Интересно, что обработка rIL-2 вызывала статистически значимое увеличение экспрессии перфорина и дцДНК — как перфорина, так и гранзима B. 3. Обсуждение
В этом исследовании мы впервые показали, что IFNα-индуцированные ДК, полученные из моноцитов, могут действовать как эффекторные клетки и лизировать клетки глиобластомы, полученные из первичных опухолевых культур. Есть данные, позволяющие предположить, что клетки глиобластомы обладают низкой чувствительностью к NK-опосредованному лизису. Действительно, клетки глиобластомы экспрессируют лиганды ингибирующих рецепторов NK-клеток на своей поверхности, в то время как лиганды активирующих рецепторы NK-клеток экспрессируются на низких уровнях [27,28,29]. В этом исследовании линии клеток, полученные из первичных культур глиобластомы, проявляли различную чувствительность к цитотоксическому эффекту IFN-DC, что в целом отражает индивидуальную гетерогенность глиобластомы. Однако в большинстве случаев донорские ИФН-ДК демонстрируют достаточно высокий уровень цитотоксичности (> 40%) в отношении клеток глиобластомы. Согласно нашим наблюдениям за паттернами экспрессии рецепторов ФНО, содержащих домен смерти, на клеточных линиях глиобластомы цитотоксический эффект ИФН -ДК по отношению к клеточным линиям глиобластомы, полученным из первичных культур, могут опосредоваться через внешние рецептор-зависимые механизмы апоптоза. Данные об экспрессии рецепторов TNF-R, TRAIL-R1 / 2 и Fas на постоянных клеточных линиях глиобластомы человека (SF-126, SF-188, U-138MG, LN235 и др.)) и свежевыделенных клетках глиобластомы сообщалось ранее [30,31,32]. Однако наши результаты отличаются от результатов этих исследований, которые продемонстрировали прямую корреляцию между чувствительностью клеток глиобластомы к рецептор-опосредованным механизмам апоптоза и экспрессией соответствующих рецепторов [32,33]. В отличие от этих наблюдений, мы не обнаружили корреляции между экспрессией рецепторов TNFα, FasL и TRAIL на опухолевых клетках и ингибирующим действием растворимых рецепторов для этих лигандов. Следовательно, рецепторы TNF-R, Fas и TRAIL-R могут не только участвовать в индукции апоптоза, но и опосредовать другие эффекты, даже выступая в качестве факторов роста для клеток глиобластомы [34]. Кроме того, мы проанализировали медиаторы цитотоксической активности DC, экспрессируемые на клеточной поверхности IFN-DC. Таким образом, ингибирование цитотоксических лигандов / медиаторов показало, что в основе цитотоксической активности донорских IFN-DC против большинства клеток глиобластомы лежат два основных пути, то есть гранулярно-зависимый и TNFα / TNF-R1-зависимый пути.
Цитотоксичность, опосредованная гранулами, может играть важную роль в противоопухолевом иммунитете при опухолях глиомы головного мозга благодаря тому факту, что линии клеток глиомы могут быть устойчивыми к апоптозу, опосредованному рецепторами смерти [35,36]. в том, что среди изученных рецептор-опосредованных путей именно TNFα / TNF-R1-зависимый механизм был задействован в подавляющем большинстве случаев в лизисе клеток глиобластомы дендритными клетками. Следовательно, этот механизм вносит значительный вклад в цитотоксический потенциал IFN-DC.IFN-DC от пациентов с глиобластомой характеризовались пониженной цитотоксической активностью в отношении аутологичных опухолевых клеток. Интересно, что уровень снижения в большинстве случаев соответствовал интенсивности ингибирующего эффекта, опосредованного rTNF-R1, то есть составлял долю от общего цитотоксического потенциала, опосредованного TNFα / TNF-R1-зависимым механизмом. Мы предполагаем, что низкие уровни экспрессии mTNFα на IFN-DC, полученные от пациентов с глиобластомой, о которых сообщалось в нашем предыдущем исследовании [18], могут быть предполагаемым ключевым фактором, способствующим нарушению цитотоксической активности DC против аутологичных опухолевых клеток. Однако мы наблюдали отсутствие подавления общей цитотоксической активности в отношении аутологичных опухолевых клеток из-за нарушенной экспрессии mTNFα, о чем свидетельствует экспрессия других медиаторов (перфорин, гранзим B, FasL и TRAIL) в культурах IFN-DC, полученных от пациентов с глиобластомой. сохраняется на уровнях, сопоставимых с донорскими IFN-DC. Между тем, мы не можем исключить участие других рецепторно-независимых механизмов цитотоксичности ДК.
Важный вывод этого исследования можно сделать в отношении иммортализованной клеточной линии U87, которая отличается от большинства неиммортализованных клеточных линий глиобластомы с точки зрения своей чувствительности к IFN-DC-опосредованному цитотоксическому эффекту и задействованным механизмам лизиса.В частности, эта клеточная линия устойчива к цитотоксичности DC, опосредованной TNFα / TNF-R1. Ранее мы показали, что IFN-DC, полученные от пациентов с глиомами высокой степени злокачественности, сопоставимы со здоровыми донорскими IFN-DC с точки зрения цитотоксической активности против клеток U87 [17]. Эти результаты предполагают, что клетки U87 не являются адекватным аналогом клеток глиобластомы в качестве модели in vitro и, следовательно, не могут использоваться в качестве оптимальной модели для изучения иммунных механизмов противоопухолевой защиты, а также для разработки новых противоопухолевых препаратов. По нашим данным, снижение цитотоксической активности ДК, полученных от пациентов с глиобластомой, было связано с низким уровнем мРНК TNFα. Согласно S. Hira et al., ДК, полученные от пациентов с миелоидным лейкозом, также характеризовались низкой цитотоксической активностью в отношении TNFα-чувствительных опухолевых мишеней из-за низкой экспрессии гена TNFα в ДК [4]. Таким образом, наши результаты являются дополнительным подтверждением нарушения цитотоксической активности ДК, опосредованной TNFα, у пациентов со злокачественными опухолями. В этом исследовании мы проанализировали регуляцию экспрессии mTNFα как на транскрипционном, так и на посттрансляционном уровнях, чтобы впервые продемонстрировать высокую экспрессию. и активность TACE / ADAM-17 в IFN-DC пациентов с глиобластомой.Подобные изменения в активности TACE / ADAM-17 были также обнаружены в клетках глиомы высокой степени злокачественности, что связано с прогрессированием опухоли и плохим прогнозом [37]. Наши данные показывают, что активность TACE / ADAM-17 у пациентов с глиомами высокой степени злокачественности изменяется не только в опухолевых, но и в иммунных клетках. Это системное нарушение активности фермента может быть вызвано опухолевыми клетками и секретируемыми из них растворимыми медиаторами, влияющими на функциональную активность DC и / или их предшественников моноцитов. В этом случае высокая активность TACE / ADAM-17 в DC также может способствовать росту опухоли за счет ингибирования цитотоксической активности DC посредством снижения уровней mTNFα.Однако ингибирование TACE / ADAM-17 снижает шеддинг mTNFα на мембранах IFN-DC и усиливает цитотоксическую активность DC против TNFα / TNF-R1-чувствительных опухолевых клеток [18]. Повышенные уровни mTNFα [18] наряду с повышенной цитотоксической активностью IFN -ДК от пациентов с глиобластомой против аутологичных опухолевых клеток после лечения rIL-2 и дцДНК позиционируют эти медиаторы как активаторы цитотоксического действия, опосредованного mTNFα. Несмотря на сходный нижестоящий стимулирующий эффект, rIL-2 и дцДНК имеют разные механизмы действия на экспрессию mTNFα с помощью DC.Стимулирующее действие дцДНК на ДК связано с повышением низких уровней мРНК TNFα по сравнению с исходным уровнем, а также со снижением по сравнению с исходным уровнем высоких уровней и активности фермента TACE / ADAM-17. Напротив, эффект rIL-2 не связан со значительным увеличением уровня мРНК TNFα и сопутствующим подавлением активности TACE / ADAM-17, что указывает на участие других механизмов, регулирующих уровни mTNFα. Известно, что IL-2 оказывает плейотропное действие на иммунные клетки, которое опосредуется специфическим клеточным рецептором, IL-2R [38].Ранее мы продемонстрировали, что IFN-DC экспрессируют высокоаффинный рецептор IL-2, CD25 [25]. Эти данные свидетельствуют о том, что IFN-DC могут быть чувствительны к модулирующему эффекту IL-2. Известно, что синтез TNFα регулируется различными протеинкиназами (протеинкиназа C, p38 MAP-киназа), которые обеспечивают стабильность мРНК TNFα [39,40]. Примечательно, что IL-2 является положительным регулятором этих киназ в активированных клетках иммунной системы [41,42,43]. Таким образом, можно предположить, что влияние rIL-2 на экспрессию TNFα в IFN-DC от пациентов с глиобластомой реализуется на посттранскрипционном уровне через протеинкиназозависимый механизм. Механизм действия дцДНК на ДК остается неясным. Было показано, что при попадании в цитозоль IFN-DC экзогенная дцДНК практически сразу же транспортируется в ядро [44]. Накопление дцДНК в ядрах в IFN-DC, вероятно, обеспечивает прямую активацию экспрессии различных генов, включая TNFα, в то время как влияние на TACE / ADAM-17 может быть косвенным через регулирование направленности других молекул. Мы продемонстрировали, что введение rIL-2 и дцДНК значительно увеличивало экспрессию перфорина и гранзима В (обработка дцДНК), а также имело тенденцию к усилению экспрессии FasL и TRAIL на полученных от пациентов IFN-DC.Эти данные позволяют предположить, что rIL-2 и дцДНК могут рассматриваться как активаторы TNFα-независимой цитотоксической активности IFN-DC, полученных от пациентов, против аутологичных клеток глиобластомы.
Что касается ограничений исследования, мы использовали не первичные опухолевые клетки, а клеточные линии, полученные из первичных культур глиобластомы, в качестве клеток-мишеней для изучения чувствительности глиобластомы к DC-опосредованной цитотоксической активности. Хотя специфические свойства самой опухоли и присущие клеточные взаимоотношения сохраняются в культурах первичных опухолевых клеток, скорость клеточной пролиферации в таких культурах снижается, что ограничивает возможность проведения некоторых исследований.Получение клеточных линий из первичных культур позволило увеличить количество опухолевых клеток после нескольких пассажей и получить морфологически однородные клеточные популяции. Кроме того, глиобластома характеризуется низкой мутационной нагрузкой и низкой способностью к образованию неоантигенов [45], и эти свойства могут сохраняться в клеточных линиях, полученных из первичных культур клеток глиобластомы [46]. В совокупности мы заключаем, что способность ДК к лизировать опухолевые клетки — важное явление. Полученные данные характеризуют прямое цитотоксическое действие IFN-DC на клетки глиобластомы и демонстрируют избирательный (TNFα / TNF-R1-опосредованный) дефект этой функции у DC, полученных от пациентов с глиобластомой.Мы определили механизм, лежащий в основе снижения цитотоксического потенциала ДК у пациентов с глиобластомой, и определили цели дальнейших исследований, направленных на регуляцию цитотоксических функций и возможность коррекции цитотоксических свойств ДК у онкологических больных. Генерация ДК, которые не только вызывают иммунные ответы, но и демонстрируют высокий цитотоксический потенциал против опухолевых клеток, может потенциально изменить наши клинические подходы к лечению и пути введения вакцин на основе ДК, а также сделать возможным достижение более положительных клинических результатов. иммунотерапии.Это исследование подчеркивает актуальность фундаментальных исследований с точки зрения улучшения нашего диагностического и лечебного потенциала (таких как определение подходящих биомаркеров и попытки сформулировать новые фармакологические стратегии [47]) для пациентов с глиомами высокой степени злокачественности, которым предстоит сложное хирургическое лечение. и бесконечный курс адъювантной терапии. Цитотоксическая активность ДК существенно облегчает захват опухолевого антигена и его последующую презентацию Т-клеткам и может использоваться в качестве терапевтического инструмента для усиления иммунного ответа, направленного на устранение опухолевых клеток. 4. Материалы и методы
4.1. Пациенты
В исследование были включены 43 пациента с мультиформной глиобластомой (25 мужчин и 18 женщин в возрасте от 23 до 75 лет, медиана 54 года; 27 пациентов с впервые выявленной глиомой и 16 пациентов с рецидивирующей глиомой), лечившихся в отделении нейрохирургии Новосибирска, Институт травматологии и ортопедии в 2016–2019 гг. Гистологический анализ опухолевых тканей головного мозга проводили согласно классификации опухолей центральной нервной системы Всемирной организации здравоохранения 2016 г.Девяносто семь здоровых анонимных лиц того же возраста и пола были набраны в качестве здорового контроля. Информированное согласие было получено от всех пациентов и доноров в соответствии с Хельсинкской декларацией. Исследование было одобрено локальными этическими комитетами Института фундаментальной и клинической иммунологии (протокол № 28 от 15 декабря 2015 г.) и Института травматологии и ортопедии (протокол № 1 от 11 января 2016 г.).
4.2. Генерация DC
Для генерации DC прикрепляющиеся к пластику мононуклеарные клетки (преимущественно моноциты), выделенные из периферической крови центрифугированием в градиенте плотности с использованием Ficoll-Paque (GE Healthcare, Фрайбург, Германия), культивировали в среде RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, Irvine, UK), дополненный 0.3 мг / мл L-глутамина, 5 мМ буфера HEPES, 100 мкг / мл гентамицина и 2,5% эмбриональной сыворотки теленка (FCS, Sigma-Aldrich) в присутствии rhGM-CSF (40 нг / мл, Sigma-Aldrich) и rhIFN -α (роферон-А, 1000 Ед / мл, Roche, Швейцария) при 37 ° C при концентрации 5% CO 2 в течение 4 дней. Созревание DC индуцировали дальнейшим воздействием стандартной концентрации липополисахаридов [48] (10 мкг / мл, LPS, E. coli O114: B4, Sigma-Aldrich, Иерусалим, Израиль) в течение дополнительных 24 часов. Жизнеспособность ДК, определенная по исключению трипанового синего, во всех случаях составляла более 93–95%.Фенотипические характеристики IFN-DC, полученных от донора и пациента, показаны в таблице 1. В некоторых сериях экспериментов рекомбинантный человеческий интерлейкин-2 (rIL-2, 50 Ед / мл) и двухцепочечная ДНК человека (dsDNA) (5 мкг / мл) добавляли одновременно с LPS к культурам клеток DC пациентов. Двухцепочечную ДНК получали, как описано в предыдущих сообщениях [49]. Вкратце, ДНК человека выделяли из плаценты здоровых женщин безфенольным методом. ДНК фрагментировали в ультразвуковом дезинтеграторе с частотой 22 кГц для получения смеси фрагментов ДНК размером от 200 до 6000 п.н.Препараты ДНК растворяли в физиологическом растворе и хранили при -20 ° C. 4.3. Линии опухолевых клеток
Первичные культуры клеток глиобластомы получали путем механического и ферментативного (0,3% коллагеназа, Sigma-Aldrich, Реховот, Израиль) дезагрегации опухолевых проблем, полученных от пациентов с гистологически подтвержденной мультиформной глиобластомой (степень IV, n = 13). Суспензии клеток культивировали в среде DMEM / F12 (Gibco, Пейсли, Великобритания) с добавлением 0,3 мг / мл L-глутамина, 5 мМ буфера HEPES, 10 -4 М меркаптоэтанола, 100 мкг / мл гентамицина и 10% FBS.Клетки обновляли новой культуральной средой два раза в неделю и поддерживали при 37 ° C в инкубаторе с 5% CO 2 . Первичные культуры клеток пассировали при достижении клеточного субконфлюэнта (70–80%) с использованием 0,25% трипсина / ЭДТА (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США). Клетки далее культивировали в виде клеточных линий (n = 13) в полной культуральной среде. Число пассажей для клеточных линий, полученных из первичных культур опухолевых клеток, составляло от двух до пяти.
Клеточная линия иммортализованной глиобластомы человека U-87 была получена от Dr.Шилова (Федеральный исследовательский центр Института цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук) и культивировали в среде αMEM (Gibco, Пейсли, Великобритания) с добавлением 100 мкг / мл гентамицина и 10% FBS.
4.4. Анализ проточной цитометрии
Фенотип DC анализировали с помощью проточной цитометрии на основе экспрессии поверхностных молекул с использованием конъюгированных с флуорохромом mAb (BD Pharmingen ™, Сан-Хосе, Калифорния, США; R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, США), специфичных для CD14 (FITC) , CD83 (Pe), CD86 (FITC), HLA-DR (FITC), CCR7 (Pe), FasL (Pe), TRAIL (Pe), CD107a (APC) или TACE / ADAM-17 (APC).Для определения внутриклеточных молекул IFN-DC были пермеабилизированы с использованием набора растворов для фиксации / пермеабилизации (BD Cytofix / Cytoperm ™, San Jose, CA, USA) в соответствии с инструкциями производителя и окрашены анти-CD107a- (APC, BD Pharmingen ™). , США), mAb против гранзима B- (Pe, BD Pharmingen ™, США), антиперфорина (Pe, BioLegend, Сан-Диего, Калифорния, США). В каждый эксперимент включали соответствующие изотипу контрольные моноклональные антитела для определения неспецифического фонового окрашивания. Клетки анализировали проточной цитометрией с использованием проточного цитометра BD FACSCalibur (BD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния, США) и программы анализа CellQuest.Из каждой пробы клеток было собрано не менее 10 000 событий.
Фенотипирование опухолевых клеток выполняли путем окрашивания mAb против Fas (FITC) и против TRAIL-R2 (Pe) (BD Pharmingen ™, США) в соответствии со стандартной процедурой после пассажа с 0,25% трипсином / EDTA. Для оценки пролиферативной активности опухолевых клеток использовали Pe-конъюгированные mAb против Ki-67 (BD PharMingen, San Jose, CA, USA) и соответствующие контрольные mAb изотипа в сочетании с окрашиванием внутриклеточных молекул.
4.5. Анализ МТТ.
Клеточные линии глиобластомы, полученные из первичных опухолевых культур, и линия клеток U87 (50 × 10 3 клеток / лунка) культивировали с LPS-стимулированными донорскими IFN-DC в 96-луночных планшетах с плоским дном в соотношении 1: 1 в трех экземплярах. В некоторых экспериментах ДК предварительно инкубировали в течение 1 ч с рекомбинантным химерным белком TNFR1 / TNFRSF1A Fc человека (10 мкг / мл, R&D Systems, США), рекомбинантным химерным белком rhFas / TNFRSF6 / CD95 Fc человека (10 мкг / мл. , R&D Systems, США), рекомбинантный химерный белок Fc rhTRAIL R2 / TNFRSF10B человека (10 мкг / мл, R&D Systems, США) или в течение 2 ч с конканамицином A (100 нМ, Sigma-Aldrich, Милан, Италия) .
После 20 ч инкубации раствор МТТ (3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) 2,5-дифенилтетразолий бромид, Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) (20 мкл 5 мг / мл сток) добавляли в каждую лунку, и планшеты инкубировали в темноте в течение 4 ч при 37 ° C. Затем планшеты центрифугировали при 1500 об / мин в течение 5 минут, среду удаляли и в каждую лунку добавляли диметилсульфоксид (150 мкл, ДМСО, MP Biomedicals, LLC, Illkirch Cedex, Франция) для растворения кристаллов формазана. Поглощение при 492 нм измеряли с помощью многолуночного спектрофотометра (Thermo Scientific Multiskan FC, Вантаа, Финляндия).Процент цитотоксичности (%) рассчитывали по следующей формуле: [1- (поглощение в экспериментальной лунке с целевыми и эффекторными клетками — фоновое поглощение эффекторных клеток / поглощение необработанных клеток-мишеней)] × 100.
4.6. Анализ апоптоза
Клетки глиобластомы, окрашенные флуоресцентным красителем 5 (6) -карбоксифлуоресцеиндиацетат N-сукцинимидилового эфира (CFSE) (2 мкМ; Molecular probes, Inc., Юджин, Орегон, США), инкубировали с IFN-DC в соотношении DC : опухолевые клетки 10: 1 в течение 18 ч.Процент апоптоза опухолевых клеток измеряли с использованием набора для обнаружения апоптоза аннексина V-APC (BD Pharmingen ™, США). Вкратце, клетки промывали PBS и метили APC-конъюгированным аннексином V и иодидом пропидия (PI) в течение 15 мин при комнатной температуре с последующим анализом на проточном цитометре FACSCalibur. Для каждого образца было собрано не менее 10 000 событий в пределах CFSE-положительной области ворот.
4.7. Анализ дегрануляции CD107a
IFN-DC инкубировали с клетками глиобластомы, предварительно окрашенными красителем CFSE, при соотношении DC: опухолевые клетки 10: 1 в течение 18 часов в присутствии APC-конъюгированных антител против CD107a человека и монензина A (10 мкМ ) (все BD Pharmingen ™).После совместного культивирования с клетками-мишенями глиобластомы DC промывали и анализировали на проточном цитометре FACS Calibur с использованием программы анализа CellQuest. Частоту дегранулирующих DC измеряли как CD107a + DC, стробированные внутри CFSE-отрицательных клеток. Для каждой выборки было собрано не менее 10 000 событий в области ворот.
4.8. Анализ экспрессии мРНК TNFa
Препарат тотальной РНК выделяли из образцов IFN-DC здоровых доноров и пациентов до и через 2 ч после стимуляции LPS с использованием коммерческого набора RIBO-sol-B (ФГНИИ ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия) в соответствии с инструкциями производителя.Количественное определение РНК проводили на спектрофотометре Nanodrop ND-100 (NanoDrop Technologies, Inc., США). Реакцию обратной транскрипции проводили на матрице мРНК с использованием термоциклера C1000 ™ (Bio-Rad Laboratories, Inc., Геркулес, Калифорния, США) и набора MMLV RT (Евроген, Москва, Россия) в соответствии с протоколом производителя. Праймеры были отобраны с помощью программы Vector NTI и синтезированы компанией Biosset. Последовательности праймеров, используемых в количественной ПЦР в реальном времени (для обозначает прямой праймер, rev, обратный праймер):
TNFα-для 5′-CCAATGGCGTGGAGCTGAGA-3 ‘
TNFα-rev 5′-TGATGGTGTGGGTGAGGAGCAC-3′
RPLP0-
RPLP0-AGGAT-
RPLP0-9ATGCC
-AGGCC ′ -TATCCTCGTCCGACTCCTCCGA-3 ′.
ПЦР в реальном времени выполняли в 96-луночных планшетах с использованием реагентов SYBR® Green PCR Master Mix на устройстве ViiATM (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Условия реакции включали начальную денатурацию (95 ° C) и последующие 40 циклов репликации (95 ° C 15 с, 58 ° C 30 с и 72 ° C 60 с). Каждый продукт ПЦР включал триплеты тестируемых образцов. Результаты количественной ПЦР в реальном времени анализировали с использованием программного обеспечения QuantStudioTM Real-Time PCR Software v1.1. Уровень мРНК гена TNFα был нормализован к большой субъединице P0 кислого рибосомного фосфорилированного белка (RPLP0) методом 2 −∆∆Ct .В качестве контрольной группы использовали IFN-DC здоровых доноров, а уровень экспрессии гена TNFα был принят равным 1.
4.9. Анализ активности TNFα-конвертирующего фермента (TACE / ADAM-17)
Для оценки активности фермента TACE / ADAM-17 в DC в ответ на стимул (LPS, rIL-2, dsDNA) коммерческий набор для анализа активности TACE SensoLyte®520 ( Anaspec, Inc, Фремонт, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя.
ДК от пациентов с глиомами высокой степени злокачественности против аутологичных опухолевых клеток.IFN-DC от пациентов с глиобластомой характеризовались более чем двукратным снижением уровней мРНК TNFα по сравнению с донорскими IFN-DC (Me 2 — ΔΔCt = 0,35; p = 0,05; Рисунок 4a). Экспрессия mTNFα также зависит от интенсивности выделения и активности TNFα-превращающего фермента (TACE / ADAM-17), который расщепляет внеклеточную часть mTNFα и превращает ее в биологически активную секретируемую форму TNFα (sTNFα) [26]. Прежде чем сравнивать экспрессию TACE / ADAM-17 в DC от здоровых доноров и пациентов, мы определили оптимальные контрольные точки обнаружения ферментов в ответ на стимуляцию LPS (рис. 4b).Резкое снижение уровней ТАСЕ / ADAM-17 наблюдалось в течение первых 60 минут после добавления ЛПС к донорским культурам IFN-DC. Впоследствии уровни экспрессии TACE / ADAM-17 увеличивались, достигая максимума через 2 часа после начала стимуляции, а затем оставались обнаруживаемыми до 24 часов культивирования, после чего следовало постепенное снижение.
На основании полученных данных мы провели сравнительный анализ экспрессии TACE / ADAM-17 на IFN-DC от здоровых доноров и пациентов с глиобластомой через 2 ч после лечения LPS. На рисунке 4в показано, что интактные (не стимулированные ЛПС) ДК от пациентов характеризовались более выраженной экспрессией фермента TACE / ADAM-17, чем донорские ДК (p = 0.17). Более того, уровни экспрессии TACE / ADAM-17 в LPS-стимулированных культурах DC, полученных от пациентов, были более чем в два раза выше, чем у здоровых донорских DC (p = 0,035). Максимальная активность TACE / ADAM-17 в донорских IFN-DC наблюдалась в ответ на стимуляцию LPS соответствовал наивысшему уровню экспрессии этого фермента, обнаруженному через 2 ч после обработки (данные не показаны). Подобно повышенной экспрессии TACE / ADAM-17, полученные от пациентов ДК также характеризовались более высокой активностью TACE / ADAM-17 ранее (p = 0.2) и после (p = 0,08) стимуляции LPS, чем донорские DC (рис. 4d). LPS-стимулированные IFN-DC от пациентов с глиобластомой характеризовались почти в три раза большей активностью TACE / ADAM-17, чем IFN-DC донорского происхождения.
Стимулирующее действие rIL-2 и дцДНК на экспрессию mTNFα было связано в среднем с 1,5-кратным увеличением цитотоксической активности полученных от пациентов IFN-DC в отношении аутологичных опухолевых клеток (рис. 5). Затем мы изучили влияние rIL -2 и дцДНК на двух потенциальных уровнях нарушенной регуляции (транскрипционной или посттрансляционной) экспрессии mTNFα в полученных от пациента DCs (Рисунок 6a – c).Интактные и обработанные rIL-2 IFN-DC характеризовались одинаково низким уровнем экспрессии мРНК TNFα (фиг. 6a). В отличие от rIL-2, обработка культур IFN-DC дцДНК увеличивала экспрессию мРНК TNFα в DC (p = 0,05). Кроме того, дцДНК снижала экспрессию TACE / ADAM-17 в IFN-DC, полученных от пациентов, и снижала его протеолитическую активность более чем на 20% (рис. 6b, c). Мы наблюдали, что rIL-2 не влияет на экспрессию TACE / ADAM-17 в IFN-DC, в целом предполагая, что rIL-2 и дцДНК регулируют экспрессию mTNFα посредством различных механизмов.Мы также оценили потенциальный эффект rIL-2 и дцДНК на экспрессию других цитотоксических лигандов, участвующих в цитотоксической активности DC против клеток глиобластомы.
Активация IFN-DC, полученных от пациентов с глиобластомой, с помощью rIL-2 и dsDNA увеличивала экспрессию медиаторов рецептор-зависимой цитотоксичности семейства TNF (FasL и TRAIL), а также гранулярно-зависимую цитотоксичность (фиг. 6d). Интересно, что обработка rIL-2 вызывала статистически значимое увеличение экспрессии перфорина и дцДНК — как перфорина, так и гранзима B.
Однако в большинстве случаев донорские ИФН-ДК демонстрируют достаточно высокий уровень цитотоксичности (> 40%) в отношении клеток глиобластомы. Согласно нашим наблюдениям за паттернами экспрессии рецепторов ФНО, содержащих домен смерти, на клеточных линиях глиобластомы цитотоксический эффект ИФН -ДК по отношению к клеточным линиям глиобластомы, полученным из первичных культур, могут опосредоваться через внешние рецептор-зависимые механизмы апоптоза. Данные об экспрессии рецепторов TNF-R, TRAIL-R1 / 2 и Fas на постоянных клеточных линиях глиобластомы человека (SF-126, SF-188, U-138MG, LN235 и др.)) и свежевыделенных клетках глиобластомы сообщалось ранее [30,31,32]. Однако наши результаты отличаются от результатов этих исследований, которые продемонстрировали прямую корреляцию между чувствительностью клеток глиобластомы к рецептор-опосредованным механизмам апоптоза и экспрессией соответствующих рецепторов [32,33]. В отличие от этих наблюдений, мы не обнаружили корреляции между экспрессией рецепторов TNFα, FasL и TRAIL на опухолевых клетках и ингибирующим действием растворимых рецепторов для этих лигандов.
Следовательно, рецепторы TNF-R, Fas и TRAIL-R могут не только участвовать в индукции апоптоза, но и опосредовать другие эффекты, даже выступая в качестве факторов роста для клеток глиобластомы [34].
Следовательно, этот механизм вносит значительный вклад в цитотоксический потенциал IFN-DC.IFN-DC от пациентов с глиобластомой характеризовались пониженной цитотоксической активностью в отношении аутологичных опухолевых клеток. Интересно, что уровень снижения в большинстве случаев соответствовал интенсивности ингибирующего эффекта, опосредованного rTNF-R1, то есть составлял долю от общего цитотоксического потенциала, опосредованного TNFα / TNF-R1-зависимым механизмом. Мы предполагаем, что низкие уровни экспрессии mTNFα на IFN-DC, полученные от пациентов с глиобластомой, о которых сообщалось в нашем предыдущем исследовании [18], могут быть предполагаемым ключевым фактором, способствующим нарушению цитотоксической активности DC против аутологичных опухолевых клеток. сохраняется на уровнях, сопоставимых с донорскими IFN-DC. Между тем, мы не можем исключить участие других рецепторно-независимых механизмов цитотоксичности ДК.
По нашим данным, снижение цитотоксической активности ДК, полученных от пациентов с глиобластомой, было связано с низким уровнем мРНК TNFα. Согласно S. Hira et al., ДК, полученные от пациентов с миелоидным лейкозом, также характеризовались низкой цитотоксической активностью в отношении TNFα-чувствительных опухолевых мишеней из-за низкой экспрессии гена TNFα в ДК [4]. Таким образом, наши результаты являются дополнительным подтверждением нарушения цитотоксической активности ДК, опосредованной TNFα, у пациентов со злокачественными опухолями. В этом исследовании мы проанализировали регуляцию экспрессии mTNFα как на транскрипционном, так и на посттрансляционном уровнях, чтобы впервые продемонстрировать высокую экспрессию. и активность TACE / ADAM-17 в IFN-DC пациентов с глиобластомой.Подобные изменения в активности TACE / ADAM-17 были также обнаружены в клетках глиомы высокой степени злокачественности, что связано с прогрессированием опухоли и плохим прогнозом [37]. Наши данные показывают, что активность TACE / ADAM-17 у пациентов с глиомами высокой степени злокачественности изменяется не только в опухолевых, но и в иммунных клетках.
Это системное нарушение активности фермента может быть вызвано опухолевыми клетками и секретируемыми из них растворимыми медиаторами, влияющими на функциональную активность DC и / или их предшественников моноцитов. В этом случае высокая активность TACE / ADAM-17 в DC также может способствовать росту опухоли за счет ингибирования цитотоксической активности DC посредством снижения уровней mTNFα.Однако ингибирование TACE / ADAM-17 снижает шеддинг mTNFα на мембранах IFN-DC и усиливает цитотоксическую активность DC против TNFα / TNF-R1-чувствительных опухолевых клеток [18]. Повышенные уровни mTNFα [18] наряду с повышенной цитотоксической активностью IFN -ДК от пациентов с глиобластомой против аутологичных опухолевых клеток после лечения rIL-2 и дцДНК позиционируют эти медиаторы как активаторы цитотоксического действия, опосредованного mTNFα. Несмотря на сходный нижестоящий стимулирующий эффект, rIL-2 и дцДНК имеют разные механизмы действия на экспрессию mTNFα с помощью DC.Стимулирующее действие дцДНК на ДК связано с повышением низких уровней мРНК TNFα по сравнению с исходным уровнем, а также со снижением по сравнению с исходным уровнем высоких уровней и активности фермента TACE / ADAM-17.
Напротив, эффект rIL-2 не связан со значительным увеличением уровня мРНК TNFα и сопутствующим подавлением активности TACE / ADAM-17, что указывает на участие других механизмов, регулирующих уровни mTNFα. Известно, что IL-2 оказывает плейотропное действие на иммунные клетки, которое опосредуется специфическим клеточным рецептором, IL-2R [38].Ранее мы продемонстрировали, что IFN-DC экспрессируют высокоаффинный рецептор IL-2, CD25 [25]. Эти данные свидетельствуют о том, что IFN-DC могут быть чувствительны к модулирующему эффекту IL-2. Известно, что синтез TNFα регулируется различными протеинкиназами (протеинкиназа C, p38 MAP-киназа), которые обеспечивают стабильность мРНК TNFα [39,40]. Примечательно, что IL-2 является положительным регулятором этих киназ в активированных клетках иммунной системы [41,42,43]. Таким образом, можно предположить, что влияние rIL-2 на экспрессию TNFα в IFN-DC от пациентов с глиобластомой реализуется на посттранскрипционном уровне через протеинкиназозависимый механизм.
Механизм действия дцДНК на ДК остается неясным. Было показано, что при попадании в цитозоль IFN-DC экзогенная дцДНК практически сразу же транспортируется в ядро [44]. Накопление дцДНК в ядрах в IFN-DC, вероятно, обеспечивает прямую активацию экспрессии различных генов, включая TNFα, в то время как влияние на TACE / ADAM-17 может быть косвенным через регулирование направленности других молекул.TNFα-для 5′-CCAATGGCGTGGAGCTGAGA-3 ‘
TNFα-rev 5′-TGATGGTGTGGGTGAGGAGCAC-3′
RPLP0-
RPLP0-AGGAT-
RPLP0-9ATGCC
-AGGCC ′ -TATCCTCGTCCGACTCCTCCGA-3 ′.