Среда контроля стерильности: Жидкая тиогликолевая среда / Жидкая тиогликолевая среда с мясным экстрактом

Жидкая тиогликолевая среда / Жидкая тиогликолевая среда с мясным экстрактом

 

Fluid Thioglycollate Medium Жидкая тиогликолевая среда	M009
Fluid Thioglycollate Medium with Beef Extract Жидкая тиогликолевая среда с мясным экстрактом	М380

 

Эту среду используют для контроля стерильности различных биоматериалов, а также для культивирования широкого круга аэробных и анаэробных бактерий.

Бульон МакКонки М007, М083, М083I, М539 и М796

Рост на среде Fluid Thioglycollate Medium (M009) 1. Candida albicans 2. Clostridium sprogenes 3. Bacteroides vulgatus 4. Bacillus subtilis 5. Контроль (незасеянная среда)

 

Состав**

Ингредиенты	М009 грамм/литр	М380 грамм/литр
Гидролизат казеина	15,00	15,00
Дрожжевой экстракт	5,00	5,00
Мясной экстракт	–	5,00
Глюкоза	5,50	5,50
Натрия хлорид	2,50	2,50
L-цистин	0,50	0,50
Натрия тиогликолят	0,50	0,50
Резазурин	0,001	0,001
Агар-агар	0,75	0,75
Конечное значение рН (при 25°С)	7,1 ± 0,2	7,2 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 29,75 г порошка М009 или 34,75 г порошка М380 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 25°С и оставить для хранения в темном прохладном месте (при температуре ниже 25°С).

Примечание: если более, чем треть среды сверху стала розового цвета, ее можно один раз восстановить, прогрев в кипящей водяной бане или струе пара до исчезновения розовой окраски.

Принцип и оценка результата:

Эту среду предложил Бревер (1) для быстрого культивирования аэробов, а также анаэробов (ввиду добавления редуцирующего вещества и небольшого количества агар-агара). Американские специалисты (2, 3) рекомендовали указанные среды для тестов на стерильность антибиотиков, биоматериала, пищевых продуктов, а также для определения фенолового коэффициента и спороцидных свойств дезинфектантов. Вместе с тем, среды предназначены для исследования прозрачных жидкостей и водорастворимых материалов.

Глюкоза, гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, мясной экстракт и L-цистин дают питательные вещества для размножения бактерий. Тиогликолят натрия снижает окислительно-восстановительный потенциал, а также нейтрализует бактериостатический эффект соединений ртути и других тяжелых металлов, находящихся в исследуемом материале. Любое повышение концентрации кислорода сопровождается изменением цвета специального индикатора редокс-потенциала (резазурина) на красный (4, 5, 6). Низкий редокс-потенциал помогает поддерживать небольшое количество агара в среде (7).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет светло-соломенную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует; не более 10% в ее верхней части может окрашиваться в розовый цвет при хранении.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор М009 (2,97% вес/об) имеет рН 7,1 ± 0,2, раствор М380 (3,47% вес/об) имеет рН 7,2 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 48-72 ч при 35°С.

Штамм микроорганизмов (АТСС)	Рост
*Bacillus subtilis (6633)	Обильный
*Candida albicans (10231)	Обильный
*Clostridium sporogenes (11437)	Обильный
*Micrococcus luteus (9341)	Обильный
Neisseria meningitidis (13090)	Обильный
Streptococcus pyogenes (19615)	Обильный
*Bacteroides vulgatus (8482)	Средний или хороший

Примечание: * культуру можно инкубировать при 25-30°С в течение 2-7 дней.

Ссылки:

1. Brewer, 1940, J. Am. Med. Assoc., 115:598.
2. U. S. Pharmacopeia, 2002, USP 25/NF 20, Asian Edition, United States Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, MD.
3. Cunniff P. (Ed.), 1995, Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, 16th ed., AOAC, Washington, D.C.
4. Marshall, Gunnison and Luxen, 1940, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 43:672.
5. Nungester, Hood and Warren, 1943, Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 52:287.
6. Portwood, 1944, J. Bact., 48:255.
7. MacFaddin J.F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. 1, Williams and Wilkins, Baltimore.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при комнатной температуре в темноте.

Питательные среды

Для контроля стерильности применяют «Сухую питательную среду для контроля стерильности» (тиогликолевую) отечественного производства (ТУ 42. 14 N 161-79) и среду Сабуро (жидкую). Вместо коммерческой тиогликолевой среды может быть использована тиогликолевая среда индивидуального приготовления.

Состав и приготовление питательных сред. Тиогликолевая среда индивидуального приготовления:

панкреатического гидролизата казеина 15,0 г

дрожжевого экстракта (10%) 5,0 >>

натрия хлорида 2,5 >>

глюкозы 5,0 >>

цистина (цистеина) 0,75 >>

тиогликолевой кислоты или 0,3 мл

тиогликолята натрия 0,5 г

раствора резазурина натрия 1:1000

(свежеприготовленного) <*> 1,0 мл

агара 0,75 г

воды дистиллированной до 1000 мл

рН после стерилизации 7,0 +/- 0,2

———————————

<*> Допускается приготовление среды без резазурина натрия.

Тиогликолевую среду можно хранить в течение 14 сут со дня приготовления при температуре от 10 до 25 град. С в защищенном от света месте.

В случае, если при хранении среды, содержащей резазурин, верхний слой среды (более 1/3 объема) окрасится в розовый цвет, среду можно регенерировать нагреванием на кипящей водяной бане в течение 10-15 мин до исчезновения розовой окраски с последующим быстрым охлаждением. В случае, если окраска не исчезает после нагревания, среду считают непригодной к употреблению. Регенерацию среды можно проводить только один раз.

Среда Сабуро:

пептона ферментативного 10 г

глюкозы 40 >>

воды дистиллированной до 1000 мл

рН после стерилизации 5,6 +/- 0,2

Обе среды стерилизуют насыщенным паром при избыточном давлении 0,11 +/-0,02 МПа (1,1 +/-0,2 кгс/кв. см) и при температуре (121 +/-1) град. С в течение 15 мин.

Жидкость N 1:

пептона ферментативного 1 г

воды дистиллированной до 1000 мл

рН после стерилизации 7,1 +/-0,2

Жидкость N 2:

пептона ферментативного 5 г

твина-80 10 г

воды дистиллированной до 1000 мл

рН после стерилизации 7,1 +/-0,2

Жидкости разливают в колбы по 100 мл и стерилизуют так же, как и питательные среды.

Требования к ростовым свойствам питательных сред. Тиогликолевая среда и среда Сабуро должны обеспечивать визуально обнаруживаемый рост соответствующих тест — штаммов аэробных и анаэробных бактерий и грибов (предусмотренных НТД).

Используемые питательные среды должны обеспечивать рост микроорганизмов при посеве их в количестве менее 100 жизнеспособных клеток: для тиогликолевой среды — не позднее 48 ч инкубации при температуре от 30 до 35 град. С и для среды Сабуро — не позднее 72 ч инкубации при температуре от 20 до 25 град. С.

Ethide Laboratories — Как проводить мониторинг окружающей среды для обеспечения стерильности

Что такое мониторинг окружающей среды для медицинских изделий и медицинских устройств?

Мониторинг окружающей среды – это инструменты и методы, используемые для наблюдения за окружающей средой, определения ее качества и обеспечения того, чтобы окружающая среда соответствовала установленным критериям приемлемости. Мониторинг окружающей среды чистых помещений для медицинских изделий и медицинских устройств охватывает критерии приемлемости (также известные как уровни обеспечения стерильности) для производственных сред на протяжении всего жизненного цикла продукта, от сырья до конечного использования или истечения срока годности. Отличная программа мониторинга окружающей среды важна для контроля качества. Программа мониторинга окружающей среды особенно важна для обеспечения того, чтобы ваше медицинское устройство или продукт не содержали микробов на различных этапах производства, упаковки, транспортировки и хранения.

Что такое обеспечение стерильности?

Обеспечение стерильности — это мониторинг окружающей среды, включающий асептическую обработку, терминальную стерилизацию после асептического наполнения и терминальную стерилизацию. Для каждого продукта должен соблюдаться определенный уровень гарантии стерильности (SAL). В большинстве случаев уровень гарантии стерильности стерильного продукта составляет один шанс на миллион загрязнения продукта. Нестерильные продукты (такие как назальные или пероральные продукты) часто имеют более низкие уровни гарантии стерильности.

Что такое асептические процессы?

Асептические процессы – это методы или процедуры, проводимые в стерильной среде. Асептическая стерильная среда поддерживается с помощью специального оборудования, которое предотвращает заражение медицинских устройств или продуктов микробным материалом от техников, сырья или оборудования.

Термины «асептический» и «стерильный» не являются синонимами. Хотя как стерильные, так и асептические продукты предотвращают микробное заражение после использования, процессы, с помощью которых предотвращается микробное заражение, различаются. Термин «стерильный» означает полное отсутствие жизнеспособных микроорганизмов или микробов, способных к размножению. Таким образом, стерильные продукты часто подвергаются химической или тепловой стерилизации после помещения в окончательную упаковку. Химическая или термическая стерилизация убивает любые микроорганизмы внутри продуктов (полученные в процессе производства и упаковки). Этот процесс химической или тепловой стерилизации после упаковки конечного продукта известен как окончательная стерилизация. Однако асептический процесс предотвращает заражение за счет исключения микроорганизмов. Хотя определения асептического и стерильного не совпадают, стерильный используется взаимозаменяемо с асептическим. Действительно, многие продукты, маркированные как стерильные, производятся путем асептической обработки, а не конечной стерилизации. Асептические процессы могут различаться по сложности от сравнительно простого наполнения-укупорки до длительных производственных последовательностей сложных изделий, таких как медицинские устройства.

Examples of medical products manufactured in aseptic environments:

• Pharmaceutical sterile products
• Bulk sterile drug substances
• Sterile intermediates
• Excipients
• Medical devices
• Biologics

What is terminal sterilization?

Окончательно стерилизованные продукты подвергаются окончательной стерилизации, которая гарантирует количественный уровень безопасности, в отличие от продуктов, произведенных в асептических условиях. Таким образом, с точки зрения микробного риска окончательно стерилизованные изделия представляют собой стерильные медицинские изделия с наименьшим риском. Терминальная стерилизация чаще всего происходит паротепловым методом. Однако химическая стерилизация и облучение (такие как гамма- или электронно-лучевые технологии) также могут использоваться для терминальной стерилизации. Гарантия стерильности окончательно стерилизованных продуктов определяется с точки зрения вероятности нестерильности (PNS). Процессы конечной стерилизации должны достигать PNSU ≤ 1 000 000 (вероятность не более одной нестерильной единицы на 1 миллион произведенных единиц.

Что такое терминальная стерилизация после асептической обработки?

Терминальная стерилизация после асептической обработки представляет собой продукт, изготовленный с помощью асептических процессов, который затем подвергается окончательной стерилизации. Изделия, изготовленные с применением асептической обработки, контролируют предстерилизационную бионагрузку, так что последующая окончательная стерилизация может быть менее жесткой для изделия или медицинского изделия. Это может означать, что продукты подвергаются более низким температурам, более короткому времени цикла или меньшему химическому воздействию в процессе окончательной стерилизации. Для терминальной стерилизации продуктов, которые были произведены в асептических условиях, целью цикла конечной стерилизации является уничтожение организмов с низкой бионагрузкой, а не прохождение биологических индикаторов.

Как вы выполняете мониторинг окружающей среды для обеспечения стерильности?

Мониторинг окружающей среды в чистых помещениях для обеспечения стерильности качественно оценивает эффективность конструкции объекта и оперативного контроля для обеспечения стерильности продуктов. В программах мониторинга окружающей среды используются качественные измерения, поскольку трудно контролировать производственную среду по строгим метрическим критериям. Как показано на рис. 1 ниже, на стерильность продукта влияет множество внешних факторов. Хотя мониторинг окружающей среды важен, он не может заменить хорошее оборудование предприятия, проектирование процессов и методы. На самом деле, мониторинг дает только моментальный снимок реальных условий окружающей среды, возникающих в каждый момент времени на производственном объекте. Кроме того, чрезмерный отбор проб из окружающей среды может ухудшить безопасность продукта и его эффективность в критических антимикробных областях. Существуют неотъемлемые ограничения всех жизнеспособных и нежизнеспособных форм мониторинга с точки зрения размера выборки, местоположения выборки и возможности восстановления в программах мониторинга окружающей среды. Тестирование на стерильность и моделирование асептических процессов также имеют свои ограничения. Тем не менее, жизнеспособный мониторинг, нежизнеспособный мониторинг, моделирование асептических процессов и тестирование на стерильность — все это отличные методы для мониторинга окружающей среды в чистых помещениях медицинских устройств и продуктов. Эти методы обеспечивают соблюдение установленных критериев эффективности в соответствии с классификацией помещения ISO.

Рисунок 1. Внешние воздействия на стерильные продукты

Мониторинг жизнеспособности

Мониторинг жизнеспособности включает методы микробного отбора проб для обнаружения и оценки уровня культивируемых микроорганизмов в воздухе, на поверхностях и у персонала.

К методам отбора проб для мониторинга жизнеспособности относятся:

• Активный отбор проб воздуха
• Пассивный отбор проб воздуха
• Подсчет жизнеспособных частиц с использованием флуоресцентной технологии
0028
• Протирка поверхностей
• Мониторинг персонала

Мониторинг нежизнеспособных частиц

Мониторинг нежизнеспособных частиц измеряет количество и размер частиц (живых или мертвых), присутствующих в воздухе, с помощью калиброванных счетчиков частиц. Нежизнеспособный мониторинг используется для первоначальной классификации чистых помещений в соответствии со стандартом ISO 14644-1 и для периодической оценки обычных производственных условий.

Моделирование асептического процесса

Моделирование технологического процесса оценивает эффективность асептического действия с использованием стерильной питательной среды. Стерильная питательная среда может быть непосредственно заменена продуктом или добавлена ​​к нему. Моделирование процессов полностью репрезентативно для текущих, новых или пересмотренных производственных условий и операций. Моделирование асептического процесса часто выполняется перед внедрением нового или модифицированного компонента процесса (новый продукт, объект, оборудование, персонал и т. д.), чтобы оценить, соответствует ли добавление критериям асептической эффективности.

Проверка на стерильность

Проверка на стерильность проводится для определения соответствия материала спецификациям. Тестирование стерильности готовой продукции должно проводиться отдельно, если не утверждено параметрическое тестирование выпуска. Параметрический выпуск — это программа выпуска для обеспечения стерильности, которая демонстрирует контроль над процессом стерилизации для получения стабильных результатов стерильности для каждой партии. Параметрический выпуск в настоящее время является наиболее распространенным способом выпуска стерильных продуктов.

Резюме

В целом, безопасность стерильных продуктов требует соблюдения определенных микробиологических спецификаций. Стерильность гарантирует, что медицинские изделия не содержат живых микроорганизмов, способных к размножению. Мониторинг жизнеспособности в окружающей среде, мониторинг нежизнеспособности в окружающей среде, моделирование асептических процессов и тестирование на стерильность — это формы микробиологического анализа, которые исторически использовались для доказательства «стерильности». Рассмотрите возможность использования этих методов для обеспечения надлежащего и последовательного мониторинга окружающей среды на предмет стерильности вашего медицинского изделия или медицинского устройства.

Ethide Labs — контрактная испытательная организация, специализирующаяся на валидации стерилизации и мониторинге окружающей среды. Ethide Labs проводит тесты на цитотоксичность in vitro собственными силами и привлекает сторонние организации для тестирования цитотоксичности in vivo для тестирования токсичности медицинских устройств, продуктов и лекарств. Ethide Labs также предлагает услуги по тестированию на бионагрузку, микробиологическому тестированию, тестированию на бактериальный эндотоксин, остаточному тестированию ЭО, тестированию целостности упаковки и тестированию на цитотоксичность для компаний-производителей медицинского оборудования и смежных отраслей. Ethide сертифицирована по стандарту ISO 13485.

Ссылки

Фармакопейная конвенция США. <1211> Обеспечение стерильности. Роквилл, Мэриленд, США. 2021 г. (USPC <1211>).

Ethide Laboratories — Мониторинг окружающей среды и валидация стерилизации

Что такое мониторинг окружающей среды?

Мониторинг окружающей среды – это инструменты и методы, используемые для наблюдения за окружающей средой, определения ее качества и обеспечения того, чтобы окружающая среда соответствовала установленным критериям приемлемости.

Что такое стерилизация?

Стерилизация — это любой процесс, который удаляет, убивает или деактивирует все формы жизни. Стерилизация связана с термином стерильность, что означает полное отсутствие жизнеспособных микроорганизмов или микробов, способных к размножению. Таким образом, стерильные продукты, которые подвергаются стерилизации, часто подвергаются химической или тепловой стерилизации после помещения в окончательную упаковку. Химическая или термическая стерилизация убивает любые микроорганизмы внутри продуктов (полученные в процессе производства и упаковки). Этот процесс химической или тепловой стерилизации после упаковки конечного продукта известен как окончательная стерилизация.

В чем разница между стерильным и асептическим?

Хотя как стерильные, так и асептические продукты предотвращают микробное заражение после использования, процессы, с помощью которых предотвращается микробное заражение, различаются. Асептический процесс предотвращает заражение за счет исключения микроорганизмов.

Напротив, продукты, созданные с использованием стерильного метода, используют процесс конечной стерилизации для уничтожения живых микробов перед использованием продукта. Хотя определения асептического и стерильного не совпадают, стерильный используется взаимозаменяемо с асептическим. Действительно, многие продукты, маркированные как стерильные, производятся путем асептической обработки, а не конечной стерилизации.

Как связаны мониторинг окружающей среды и стерилизация?

Стерилизация означает удаление, уничтожение или дезактивацию живых микробов с продукта, поверхности, части оборудования или окружающей среды. Причина, по которой только жизнеспособные (живые) микроорганизмы представляют интерес для стерилизации, заключается в том, что только живые микроорганизмы могут воспроизводиться в организме человека, на поверхности, на продукте или внутри самого продукта.

Мониторинг окружающей среды для изделий медицинского назначения и медицинских устройств контролирует критерии приемлемости микробов для производственной среды на протяжении всего жизненного цикла продукта, от сырья до конечного использования или истечения срока годности. Стерильность производственного оборудования, сырья, рабочих поверхностей, линий передачи и т. д. имеет решающее значение для защиты чистого помещения или асептической производственной среды от микробного загрязнения. Процессы стерилизации поддерживают стерильность этих компонентов производственной среды.

В чем разница между мониторингом окружающей среды и тестированием на стерильность?

Наиболее популярным методом проверки стерилизации является метод избыточного уничтожения. Методы избыточного уничтожения используются для проверки того, что определенный процесс стерилизации может обеспечить определенный уровень стерильности, даже если бионагрузка выше, чем ожидалось, в труднодоступном для стерилизации месте или цикл стерилизации работает неэффективно. В зависимости от целей валидации стерилизации будет применяться либо подход полного цикла, либо подход пониженного уровня обработки, известный как подход частичного цикла. Примером подхода частичного цикла является подход полуцикла. Валидация избыточной стерилизации регулируется стандартом ISO 17655-1.

Мониторинг окружающей среды включает отбор проб воздуха, воды и производственных поверхностей на наличие микробов и очистку поверхностей, оборудования, продуктов и сырья от микробного загрязнения. Валидация стерилизации используется для того, чтобы гарантировать, что процесс стерилизации может должным образом уничтожить любые жизнеспособные микроорганизмы в образце, продукте, материале и т. д. Таким образом, валидация стерилизации поддерживает процесс мониторинга окружающей среды, гарантируя, что производственное оборудование, линии передачи, сырье и материалы продукты содержат живые микробы, удаленные или убитые перед использованием в производстве или конечным пользователем. Несколько руководящих документов USP (USP 1211, USP 1115, USP 1116 и т. д.) регулируют мониторинг окружающей среды.

Почему так важны мониторинг окружающей среды и проверка на стерильность?

Валидация стерилизации является важным этапом контроля качества, который подтверждает, что методы стерилизации эффективно убивают живую бионагрузку в продукте, части производственного оборудования, материале и т. д. Поскольку микроорганизмы существуют на каждой поверхности (включая наше тело), ​​микробы могут быть случайно вводятся в процессе производства или упаковки различными способами. Некоторыми из наиболее распространенных примеров являются загрязнение через используемое сырье, техников, трубки/трубопроводы, используемые для перемещения продукта между стадиями разработки в процессе, или через саму производственную среду. При таком изобилии источников загрязнения регулярное тестирование производственной среды и производственных процессов способствует долгосрочному контролю уровня бионагрузки в производимых продуктах. С этой целью мониторинг окружающей среды является важным показателем контроля качества. Это особенно важно для проверки вашего медицинского устройства или продукта на отсутствие микробов на различных этапах производства, упаковки, транспортировки и хранения, особенно для продуктов, произведенных в асептических условиях.

Резюме

В целом, как мониторинг окружающей среды, так и валидация стерилизации являются обязательными для утверждения регулирующими органами медицинских устройств или продуктов.

Эти тесты гарантируют, что медицинские устройства, продукты, производственные среды и упаковка свободны от жизнеспособных микробных загрязнителей и сохраняют стерильность. Поддержание стерильности гарантирует, что пациенты не будут подвергаться риску заражения после воздействия устройства или имплантации продукта. Убедитесь, что вы выбрали контрактную производственную организацию, которая может поддержать вас в соответствующем мониторинге окружающей среды и валидации стерилизации для вашего уникального медицинского устройства или продукта.

Ethide Labs — контрактная испытательная организация, специализирующаяся на валидации стерилизации и мониторинге окружающей среды. Ethide Labs проводит тесты на цитотоксичность in vitro собственными силами и привлекает сторонние организации для тестирования цитотоксичности in vivo для тестирования токсичности медицинских устройств, продуктов и лекарств. Ethide Labs также предлагает услуги по тестированию на бионагрузку, микробиологическому тестированию, тестированию на бактериальный эндотоксин, остаточному тестированию ЭО, тестированию целостности упаковки и тестированию на цитотоксичность для компаний-производителей медицинского оборудования и смежных отраслей.