Новый санпин: С 1 января 2021 вступит в силу новый СанПин утвержденный главным санитарным врачом Российской Федерации

Разное

Содержание

Новый СанПиН для общепита: ХАССП обязателен

29.03.2021

Новый СанПиН для общепита: ХАССП обязателен

27 октября 2020 постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации утверждены новые санитарно-эпидемиологические правила и нормы (СанПиН 2.3/2.4.3590-20 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации общественного питания населения»).

Пожалуй, главное, что закреплено в новых санитарных правилах — это необходимость проводить производственный контроль, основанный на принципах ХАССП (в английской транскрипции НАССР — Hazard Analysis and Critical Control Points). ХАССП – это свод правил организации производственной деятельности на основе 7 принципов, гарантирующий обеспечение на выходе качественного и безопасного для потребителя продукта.

Внедрение ХАССП обеспечивает контроль над безопасностью производственных процессов, снижает риски по выпуску небезопасной продукции. При наличии установленных процедур у предприятия есть возможность документировано доказать безопасность своей продукции в случае претензий со стороны потребителей или контролирующих органов.

Требование разработать и внедрить процедуры ХАССП, по сути, не ново: ХАССП обязателен с 2015 года согласно Технического регламента Таможенного союза ТР ТС 021/2011 (Статья 10).

Часть организаций общепита заранее занимались изучением этого вопроса, есть много тех, кто разобрался и скорректировал работу в соответствии с принципами ХАССП. Но большая доля предприятий общепита, в том числе, расположенных при гостиницах, особенно — на периферии, о том, что такое ХАССП чаще всего не слышали. Стремясь к соблюдению СанПиН, эти предприятия могут пойти по быстрому пути, просто купив набор универсальных документов, которые останутся папками на стеллаже и не будут иметь полезного назначения в работе предприятия.

Чтобы этого не произошло, надо понимать, что система ХАССП разрабатывается индивидуально для каждого предприятия, с учётом, например, количества цехов, производственных процессов, видов выпускаемой продукции или групп блюд. Доверить разработку системы можно профессионалам, которые не только «пропишут» все процедуры и правила, но и обучат персонал.

Самостоятельно разработать и внедрить ХАССП на предприятии сложно, но можно. Невозможно прописать четкие инструкции на «все случаи жизни», особенно для большинства начинающих предпринимателей и технологов без опыта практических решений. На это могут уйти месяцы, поэтому важно понимать алгоритм работы по формированию «собственной» ХАСПП, который должен выглядеть следующим образом:

— формирование рабочей группы ХАССП
— определение области распространения системы ХАССП
— разработка политики предприятия в области пищевой безопасности
— описание сырья и готовой продукции
— определение ожидаемого использования продукта
— построение блок-схемы технологического процесса
— подтверждение схемы технологического процесса на объекте
— анализ потенциальных опасностей
— определение критических контрольных точек (ККТ)
— установление критических пределов для каждой ККТ
— разработка системы мониторинга для каждой ККТ

— определение корректирующих действий
— установление процедур верификации (проверки)
— ведение учетной документации и ревизионные проверки
— обучение персонала
— актуализация процедур ХАССП

Если на предприятии принято решение разрабатывать систему своими силами, руководителям рекомендуется пройти обучение по ХАССП (ИСО 22000), что позволит оформить ХАССП самостоятельно, обучить персонал и, самое главное, внедрить систему на предприятии.


Что диктуют новые санитарно-эпидемиологические требования к жилью — Российская газета

Чище и аккуратнее должны стать российские города. С 1 марта вступают в силу новые санитарно-эпидемиологические требования к жилью и содержанию территорий населенных пунктов.

Многие новшества касаются сбора и вывоза мусора. Так, на территориях общего пользования на расстоянии не более 100 метров друг от друга должны теперь стоять урны, которые положено опустошать не реже раза в сутки. Контейнерные площадки около домов должны быть огорожены с трех сторон и должны регулярно обрабатываться от насекомых и грызунов. Возможна организация систем подземного накопления отходов с автоматическими подъемниками для контейнеров. После погрузки мусора в мусоровоз площадки предписывается очистить от отходов. А сами мусоровозы положено периодически мыть и дезинфицировать. Запрещено сжигать в черте города или села опавшие листья — их теперь положено вывозить на свалки, сообщает Роспотребнадзор. В теплое время года (выше +10 градусов) улицы, площади и тротуары нужно поливать и подметать, а если на градуснике меньше нуля — обрабатывать от гололеда. На пляжах обязательны кабины для переодевания, урны, а через каждые 100 метров должны быть обустроены общественные туалеты и душевые (убирать их положено не реже раза в сутки).

Некоторые санитарные требования не новые, но стали более конкретизированными. Например, запрещается вести разгрузку товаров для магазинов, которые встроены или пристроены к жилым домам, со стороны двора и входов в подъезды. Это можно делать только с торцов зданий, со стороны дорог или из подземных тоннелей и закрытых дебаркадеров. Не разрешается мыть автомобили, сливать масло, регулировать звуковые сигналы, тормоза и двигатели около жилых домов.

Участки, на которых построены многоэтажки, должны соответствовать гигиеническим нормативам, установленным для воздуха, почвы, должны соблюдаться безопасные уровни ионизирующих и неионизирующих излучений. Дворы должны быть благоустроены, озеленены, оборудованы проездами и тротуарами с твердым покрытием, электрическим освещением. Внутри жилых помещений должны соблюдаться нормы по качеству воздуха, шуму, электромагнитному излучению, инсоляции. Кстати, собственно нормы по шуму, инсоляции и другим параметрам приводятся в другом СанПиН, который тоже вступает в силу с 1 марта.

Крышки мусоропровода в жилых домах должны плотно закрываться, а не реже раза в месяц ствол мусоропровода нужно промывать. Не допускается захламление подвалов, лестничных пролетов и лестничных клеток, чердаков.

Большинство требований нового СанПиН, касающихся обслуживания многоквартирного дома и придомовой территории, были уже прописаны в других документах, отмечает президент Ассоциации компаний, обслуживающих недвижимость (АКОН), Никита Чулочников. Помимо норм и правил, касающихся жилья, документом установлены требования к обустройству кладбищ, водным объектам, почве, размещению радиоэлектронных средств, санобработке лиц без определенного места жительства и др. Новые санитарные правила исключают дублирующие требования нормативных документов других контрольно-надзорных ведомств и инстанций, трактуются однозначно и недвусмысленно, подчеркивают в Роспотребнадзоре.

Роспотребнадзор вводит новые санитарно-эпидемиологические требования к организации питания в учреждениях социальной защиты

Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 27.10.2020 № 32 утверждены санитарно-эпидемиологические правила и нормы СанПиН 2.3/2.4.3590-20 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации общественного питания населения».

По информации Роспотребнадзора, размещенной на сайте ведомства,
в новый СанПиН включены требования 17 актов в сфере общественного питания, причем с учетом особенностей питания всех категорий граждан: взрослое, детское население, инвалиды и лица, нуждающиеся в особом питании, а также питание в детских садах, школах, больницах, социальных
и специализированных учреждениях, и содержат особенные требования, направленные на снижение риска здоровью детей, обусловленного пищевым фактором, и повышение роли здоровьесберегающей функции питания. При разработке учтен принцип укрупнения и кодификации требований, что привело к их сокращению в 5 раз по сравнению с действующими, при неизменном сохранении обязательных для предотвращения риска для жизни

и здоровья санитарно-эпидемиологических требований.

Документ опубликован на Официальном интернет-портале правовой информации 12.11.2020 и вступит в силу с 01.01.2021.

В вязи с тем, что новый СанПиН расширил перечень пищевой продукции, которая не допускается при организации питания детей, учреждениям системы социальной защиты населения города Москвы, предоставляющим социальные, образовательные реабилитационные услуги несовершеннолетним, потребуется уточнить ассортимент продуктов питания, которые начнут поступать в учреждения с 01.01.2021.

ГКУ «СК ДТСЗН города Москвы» направило соответствующее письмо в учреждения системы социальной защиты населения города Москвы.

Новый СанПин-3590 — РИЦ

Об изменениях

27 октября 2020 года вышло Постановление Главного государственного санитарного врача РФ №32 «Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил и норм СанПин 2.3/2.4.3590-20 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации общественного питания населения», которое вступило в силу с 23 ноября 2021 года. В документе содержатся требования, направленные на снижение риска здоровью, обусловленного пищевым фактором, и на повышение роли функции питания, обеспечивающей сохранение здоровья. Также появились изменения в положениях об организации питания, контроле за рационом, требования к ведению гигиенического журнала и журнала бракеража сырья, значительно изменился список запрещенных продуктов питания.

Обо всех изменениях, а также отражение изменений в линейке программ 1С:Плановое питание специалисты компании «РИЦ-1С» рассказали на вебинаре 12 марта 2021 года.

О программах

Новая разработка 1С программы, первое, что хотелось отметить: Плановое питание уже содержат все необходимые изменения СанПин для учета питания, реализованы

принципы здорового питания, включающие контроль норм потребления продуктов и повседневного меню, формируются нормы закладки продуктов и ведется учет потерь и отходов, документируются замены продуктов.

В состав линейки входят следующие программные продукты:


Программа

Для каких учреждений подходит

1 1С:Дошкольное питание Дошкольные образовательные учреждения, государственные и частные, с группами старшего дошкольного возраста (детсад) и младшего дошкольного возраста (ясли)
2 1С:Школьное питание Общеобразовательные учреждения, организации начального и среднего профессионального образования и других организованных коллективах
3 1С:Медицина. Диетическое питание Лечебные и оздоровительные учреждения
4 1С:Комбинат планового питания Высшие учебные заведения, индустриальные комбинаты питания

Эффект от внедрения программных продуктов 1С

  1. Обеспечивается организация правильного и безопасного питания в различных учреждениях

  2. Автоматизация расчета заказа поставщику позволяет сократить время и исключает возникновение ошибок

  3. Оперативный учет прихода, расхода и остатков позволяет сократить потери продуктов до минимума

  4. Все эти факторы в совокупности помогут наладить учет питания и обеспечивают соблюдение действующих норм СанПин.

Более подробную информацию о программных продуктах можно узнать у специалистов компании «РИЦ-1С». Для этого свяжитесь с нами любым удобным способом: через сайт «оставив заявку», написав на почту – [email protected], позвонив по телефону – 8 (343) 351-76-76.

СанПин для общественного питания с 01.01.2021 (СанПиН 2.3/2.4.3590)

С 01 января 2021 г. вступают в действия новые санитарно-эпидемиологических правила и нормы СанПиН 2.3/2.4.3590-20 «Санитарно-эпидемиологические требования к организации общественного питания населения».

Данные правила вступают в действие в соответствии с постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 27.10.2020 № 32 «Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил и норм СанПиН 2.3/2.4.3590-2О «Санитарно-эпидемиологические требования к организации общественного питания населения»

Новый СанПиН устанавливае санитарно-эпидемиологические требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека биологических, химических, физических и иных факторов среды обитания и условий деятельности при оказании услуг общественного питания населению, несоблюдение которых создает угрозу жизни или здоровью человека, угрозу возникновения и распространения инфекционных и неинфекционных заболеваний.

Организациям общественного питания населения рекомендуется в своей деятельности руководствоваться принципами здорового питания.

Данные Правила распространяются на юридических лиц и граждан, в том числе индивидуальных предпринимателей, осуществляющих деятельность по оказанию услуг общественного питания населению.

СанПин 2.3/2.4.3590-20 будет действовать с 01.01.2021 до 01.01.2027.

СанПин 2.3/2.4.3590-20 для общественного питания действующий в 2021 году (c оглавлением, навигацией, номерами страниц и подготовленные для печати, как представлено на рисунках ниже):

Добавленное оглавление к СанПиН 2.3/2.4.3590-20 СанПиН 2.3/2.4.3590-20 в текстовом формате СанПиН 2.3/2.4.3590-20 в отсканированном формате с сайта http://publication.pravo.gov.ru

Скачать СанПиН 2.3/2.4.3590-20 в текстовом формате doc (word)

Скачать СанПиН 2.3/2.4.3590-20 в формате pdf 

Скачать  СанПиН 2.3/2.4.3590-20 в формате pdf (только сам СанПин в отсканированном формате с сайта http://publication.pravo.gov.ru, без  постановления)

Данный СанПиН был взят с официального интернет-портала правовой информации:

 

СанПин действующий с 01.01.2021 для детских садов, школ и т.д. (СП 2.4.3648-20)

Правила противопожарного режима с 01.01.2021 по пост. №1479

СанПин 2.3/2.4.3590-20 СанПиН по общественному питанию

На чтение 2 мин Просмотров 602 Опубликовано

Рассмотрим, что изменилось в системе российских СанПиНов в 2021 году.

Роспотребнадзор утвердил СанПиН по организации общественного питания до 2027 года. Соответствующее постановление главного государственного санитарного врача России опубликовано на официальном интернет-портале правовой информации.


Новый СанПиН общественного питания

«Утвердить санитарно-эпидемиологические правила и нормы СанПин 2.3/2.4.3590-20 ‘’Санитарно-эпидемиологические требования к организации общественного питания населения’’», — говорится в документе.

Срок действия нового СанПин установлен до 1 января 2027 года, передает RNS.

 

В обновленный СанПиН включены требования 17 актов в сфере общественного питания, причем с учетом особенностей питания всех категорий граждан. Они содержат особенные требования, направленные на снижение риска здоровью детей, отмечает Роспотребнадзор. Указывается, что при разработке учтен принцип укрупнения и кодификации требований, что привело к их сокращению в 5 раз по сравнению с действующими, при неизменном сохранении обязательных для предотвращения риска для жизни и здоровья санитарно-эпидемиологических требований.

Изменения в СанПиНах связаны с действием «регуляторной гильотины», или масштабного пересмотра и упрощения всей российской законодательной базы. Новые СанПиНы упразднили более ста прежних. Отметим наиболее важные их них.

 

Номер Название Кого касается

СанПиН 2.3/2.4.3590-20

«Санитарно-эпидемиологические требования к организации общественного питания населения»

Общепит

СП 2.1.3678-20

«Санитарно-эпидемиологические требования к эксплуатации помещений, зданий, сооружений, оборудования и транспорта, а также условиям деятельности хозяйствующих субъектов, осуществляющих продажу товаров, выполнение работ или оказание услуг»

  • Медицинские организации
  • Аптеки
  • Спортивные организации
  • Культурно-досуговые организации
  • Торговые объекты
  • Гостиницы, хостелы, санатории
  • Парикмахерские и салоны красоты
  • Химчистки, прачечные
  • Общественные туалеты

СП 2.4.3648-20

«Санитарно-эпидемиологические требования к организациям воспитания и обучения, отдыха и оздоровления детей и молодежи»

Государственные и частные школы и детские сады, другие места пребывания детей (кружки, студии)

Видео по теме: Утверждены новые СанПиН по общепиту

«Новеллой СанПиНа является не только существенное сокращение количества требований, но и установления их исходя из факторов (биологических, химических, физических и иных факторов среды обитания)», — отметили в ведомстве.

Скачать САНПИН СП 2.3-2.4 3590-20 бесплатно

СКАЧАТЬ

Новый СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания»

01 марта 2021 года вступил в силу новый СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания», срок действия ограничен 01.03.2027.
Новые санитарные правила объединили в себе множество ранее действующих гигиенических нормативов и санитарных норм в единый документ.
Одним из параметров, который контролировался в значительно меньших объемах в рамках ранее действующих нормативов, является определение общего органического углерода.
Компания ИнтерАналит готова предложить оборудование как для анализа проб в лабораторном режиме, так и для анализа в потоке, в том числе и в режиме многоканального измерения с автоматическим переключением нескольких контролируемых потоков.
• Разработанный специалистами Shimadzu метод термокаталитического окисления при 680°С позволяет избежать стеклования неорганических солей, и, тем самым, увеличить срок службы катализатора и реакционной трубки.
• Ультраширокий диапазон рабочих концентраций от 4 мкг/л до 30 000 мг/л — возможность работы как с высокочистой, так и с сильно загрязненной водой.
• Полностью автоматизированная пробоподготовка обеспечивает удаление неорганического углерода и разбавление образцов. Многофункциональная система дозирования. Предварительная обработка пробы в анализаторе общего органического углерода предотвращает загрязнение атмосферы.
Аксессуары для расширения возможностей приборов
• TNM-L Приставка для определения общего азота методом термического разложения и хемилюминесцентного детектирования для моделей TOC-L
• SSM-5000A Приставка для анализа твердых образцов и газов для моделей TOC-L

Также компания «ИнтерАналит» готова предложить оборудование для газовой и жидкостной хроматографии и хроматомасс-спектрометрии, для элементарного анализа (ААС, ИСП-ОЭС, ИСП-МС), оборудование для пробоподготовки. Больше информации на сайте www.interanalyt.ru. По всем вопросам просим обращаться по адресу [email protected] или к ответственному менеджеру:
Пашовкин Андрей Тимофеевич
Менеджер по продажам
Группа компаний «Интераналит»
Тел.: +7 (499) 350-0870 (доб. 459)
Тел.: +7 (499) 709-81-01 (доб. 459)
Моб.: +7 (917) 578-79-73
E-mail: [email protected]

командлетов PowerShell для веб-развертывания | Документы Microsoft

  • 17 минут на чтение
Эта страница полезна?

Оцените свой опыт

да Нет

Любой дополнительный отзыв?

Отзыв будет отправлен в Microsoft: при нажатии кнопки «Отправить» ваш отзыв будет использован для улучшения продуктов и услуг Microsoft.Политика конфиденциальности.

Представлять на рассмотрение

В этой статье

Овайс Шейх

Web Deploy V3.0 поставляется с командлетами PowerShell для выполнения большинства задач, поддерживаемых API веб-развертывания [Microsoft.Web.Deployment]. Вы можете узнать больше об этом API здесь. Эти командлеты находятся в оснастке WDeploySnapin3.0, который устанавливается и регистрируется как оснастка при стандартной или более поздней установке веб-развертывания. Чтобы использовать эти командлеты, либо добавьте оснастку каждый раз при запуске консоли PowerShell, либо добавьте оснастку в профиль PowerShell, что заставит все консоли автоматически загружать оснастку.

Чтобы добавить, когда консоль PowerShell загружена, выполните следующую команду в окне консоли:

Добавить PSSnapin WDeploySnapin3.0

Чтобы добавить его в профиль PowerShell:

  1. Если у вас уже есть профиль PowerShell, переходите к шагу 4.
  2. Создайте папку WindowsPowerShell в разделе <Мои документы>.
  3. Создайте файл с именем Microsoft.PowerShell_profile.ps1
  4. Добавьте эту строку в файл профиля PowerShell: ‘Add-PSSnapin WDeploySnapin3.0’

Несколько замечаний:

  1. Консоль PowerShell работает в 64-битной версии на 64-битных системах и работает в .Net 2.0, за исключением Windows8. Если вы столкнулись с проблемами из-за одного или обоих из них, обратитесь к разделу «Устранение неполадок» за решениями.
  2. Все командлеты, которые создают пакет веб-развертывания, создают параметры для наиболее распространенных задач, а командлеты, которые его используют, принимают значения параметров.
  3. Существует только один командлет удаления для удаления сайта или приложения под ним.
  4. Web Deploy имеет параметры, но они ортогональны параметрам командлета PowerShell. Когда в этом документе упоминаются параметры, это подразумевает параметры командлета. Параметры веб-развертывания были специально вызваны как параметры веб-развертывания.

I. Публикация файла настроек

Все приведенные ниже командлеты могут выполняться с удаленным артефактом, таким как удаленный сервер или удаленная база данных.Для этого требуется больше, чем просто учетные данные. Например, вам нужно имя удаленного сервера, строка подключения к удаленной базе данных, хотите ли вы разрешить публикацию на сервере с тестовым сертификатом и т.д. который группирует эти настройки вместе. Этот файл называется файлом настроек публикации с расширением .publishsettings. Это используется Visual Studio для публикации, а также WebMatrix.

Чтобы иметь возможность создавать такой файл для использования другими командлетами и редактировать его, можно использовать New-WDPublishSettings cmdlet. Если имя файла не указано, в каталоге документов будет создан новый файл с именем <новый guid> .publishsettings. Этот путь будет отображаться при создании файла. Если имя файла указано, а файл не существует, он будет создан, как описано выше, в папке, указанной путем, однако путь к файлу должен быть действительным.Если файл существует, будут изменены только значения атрибутов, которые вы указали при запуске команды, за исключением неизвестных атрибутов в файле, которые будут удалены

Пример: этот пример получает объект учетных данных и затем передает его новому командлету файла параметров публикации вместе с другими параметрами.

  $ cred = Получить учетные данные
New-WDPublishSettings -ComputerName owais-1 -Site Site1 -Credentials $ cred -AllowUntrusted -SiteUrl "https: //www.mywebsite.com "-Имя файла C: \ pprofiles \ mywebsite.publishsettings -AgentType wmsvc
Командлет Get-WDPublishSettings позволяет загружать значения из файла параметров публикации в объект PublishSettings.
$ publishsettings = Get-WDPublishSettings C: \ pprofiles \ mywebsite.publishsettings
  

II. Резервная копия

Все командлеты резервного копирования имеют позиционный параметр (это второй, за исключением backup-wdserver, где он является первым позиционным параметром), называемый output. Это путь к папке, в которой вы хотите создать резервную копию.Резервное копирование всегда представляет собой zip-пакет веб-развертывания. Вы можете узнать больше о пакетах веб-развертывания на странице поставщика пакетов и пользовательских пакетах. Если путь не указан, резервные копии создаются в папке с именем «Web Deploy Backups» в папке с документами пользователя. Резервные копии называются имя машины_имя_провайдера_ [Siteorapporfoldername (необязательно)] _ timestamp.zip.

Все эти командлеты будут работать локально по умолчанию, если информация об удаленном сервере не будет предоставлена ​​путем передачи файла параметров публикации для параметра SourcePublishSettings.

A. IIS

Все командлеты IIS будут работать с установленным IIS версии 7 или выше

1. Сервер
  Резервное копирование-WDServer
  

Описание: Без каких-либо аргументов выполняется резервное копирование текущего сервера, на котором выполняется эта команда. Для этой операции используется хорошо известный поставщик веб-серверов. Следовательно, созданный пакет содержит все артефакты, которые будут содержаться в пакете веб-сервера. Вы можете узнать больше об этом провайдере здесь.

Параметры командлета

: параметр ConfigOnly позволяет исключить все содержимое, а параметры SkipFileList и SkipFolderList позволяют выборочно исключить один или несколько файлов или папок из пакета.

Примеры:

Это создаст резервную копию всего веб-сервера, кроме содержимого:

  Резервное копирование-WDServer -SourcePublishSettings c: \ profiles \ myserver.publishsettings -ConfigOnly
  

Создайте список файлов, которые следует пропустить. Это стандартные регулярные выражения.

  $ list = @ ('\\ site2 \\ iisstart.htm', '\\ site2 \\ welcome.png')
Backup-WDServer –SkipFileList $ list
  

Вы также можете изменить это, чтобы пропустить все файлы в site2, изменив список на $ list = @ (‘\ site2 \’)

2.Сайт
  Резервное копирование-WDSite
  

Описание. Будет выполнено резервное копирование сайта IIS вместе с его настройками и содержимым с помощью поставщика apphostconfig. Вы можете узнать больше об этом провайдере здесь.

Параметры командлета: создается резервная копия имени сайта, указанного параметром сайта или файлом настроек публикации. Значение параметра сайта переопределяет спецификацию параметров публикации для имени сайта.

ConfigOnly можно использовать для создания резервной копии без содержимого. Если на сайте используется пул приложений, отличный от пула приложений по умолчанию, то для того, чтобы этот пакет работал на других серверах, которые могут не иметь такого же пула приложений, используйте параметр переключателя includeAppPool.Это объединит пул приложений в пакет.

Автоматически сгенерированные параметры веб-развертывания: создаются два типа параметров:

  1. Параметр, позволяющий пользователю изменять имя сайта, на котором будет применяться резервная копия сайта.
  2. Другой параметр, позволяющий пользователю изменять физический путь к сайту и каждому веб-приложению на этом сайте.

Итак, если у меня есть сайт с тремя приложениями ниже, я получу 4 параметра физического пути отдельно и один параметр имени сайта.

Примеры:

  Резервное копирование-WDSite «Веб-сайт по умолчанию» -ConfigOnly
Backup-WDSite MySite –IncludeAppPool
Backup-WDSite MySite -SkipFileList $ list
  
3. Веб-приложение
  Резервное копирование-WDApp
  

Описание: будет выполнено резервное копирование веб-приложения с помощью поставщика iisApp. Подробнее об этом провайдере читайте здесь. Вот хорошая статья, в которой объясняется, что такое веб-приложение и в чем разница между сайтом, приложением и виртуальным каталогом в IIS.

Параметры командлета: создается резервная копия имени приложения, указанного параметром приложения или файлом параметров публикации. Если ни один из них не указан, выдается ошибка. Значение параметра приложения переопределяет спецификацию параметров публикации для имени сайта. Параметры SkipFileList и SkipFolderList позволяют выборочно исключить один или несколько файлов или папок из пакета.

Автоматически сгенерированные параметры веб-развертывания: создается параметр для изменения имени приложения или сайта во время восстановления или установки.

  $ список = @ ('\\ iisstart \ .htm')
Backup-WDApp "Веб-сайт / приложение по умолчанию" -SkipFileList $ list
  

B. База данных

1. MSSql
  Резервное копирование-WDSqlDatabase
  

Описание. Будет выполнено резервное копирование базы данных Microsoft SQL Server с помощью поставщика dbfullsql. Этот поставщик использует SMO для создания сценария базы данных и предоставляет более 100 параметров поставщика для управления способом создания сценария базы данных. Это подробно описано здесь.

Параметры командлета: создается резервная копия строки подключения, указанной параметром Database или SQLServerDBConnectionString в файле параметров публикации.Значение параметра базы данных переопределяет спецификацию параметров публикации для SQLServerDBConnectionString. Параметры поставщика, предоставляемые этим поставщиком dbfullsql, можно передать с помощью параметра SourceSettings. Одна из очень часто используемых настроек — это scriptdropsfirst, которая выполняет сценарии, если объект существует, сценарии перетаскивания объекта. Другой параметр поставщика из параметров сценария SMO — установить для scriptdata значение false, чтобы просто извлечь схему.

Автоматически сгенерированные параметры веб-развертывания: создается параметр для изменения строки подключения к базе данных во время восстановления или установки

Примеры:

  New-WDPublishSettings -ComputerName serverName -MSSqlConnectionString "Data Source = localhost; Initial Catalog = MyDb; User id = MyDbUser; Password = MyPassword" -FileName d: \ SQLdb.PublishSettings -Credential имя_сервера \ Администратор
  
  Резервное копирование-WDSQLDatabase -SourcePublishSettings D: \ SQLdb.PublishSettings
  
  Backup-WDSQLDatabase -Database "Data Source = localhost; Initial Catalog = MyDb; User id = MyDBUser; Password = MyPassword" -SourceSettings @ {copyAllUsers = 'false'; scriptDropsFirst = 'истина'; }
  
2. MySql
  Резервное копирование-WDMySQLDatabase
  

Описание. Будет выполнено резервное копирование базы данных сервера MySql с помощью поставщика dbmysql.Этот провайдер использует mysqldump для создания сценария базы данных. Это подробно описано здесь.

Параметры командлета: создается резервная копия строки подключения, указанной параметром Database или mySQLDBConnectionString в файле параметров публикации. Значение параметра базы данных переопределяет спецификацию параметров публикации для mySQLDBConnectionString. Настройки провайдера можно передать с помощью параметра SourceSettings. Обычно используются параметры includeData и includeSchema. По умолчанию для них установлено значение true.

Автоматически сгенерированные параметры веб-развертывания: создается параметр для изменения строки подключения к базе данных во время восстановления или установки

  New-WDPublishSettings -ComputerName serverName -MySqlConnectionString "Источник данных = localhost; database = MyDb; Uid = MyDbUser; pwd = MyPassword" -FileName d: \ MySQLdb.PublishSettings -Credential serverName \ Administrator
  
  Backup-WDMySQLDatabase -Database 'Server = localhost; Database = MyDb; Uid = MyDbUser; pwd = MyPassword ’
  
  Backup-WDMySqlDatabase –SourcePublishSettings d: \ mysqldb.публиковатьнастройки
  

III. Восстановить

Все командлеты восстановления принимают пакет веб-развертывания для восстановления в качестве первого позиционного параметра.

WebDeploy поддерживает концепцию параметризации пакетов, которая позволяет изменять некоторые аспекты во время восстановления (без изменения пакета). Например, во время восстановления вы можете указать значение строки подключения к базе данных, которое отличается от того, что находится внутри пакета, с помощью параметров WebDeploy (вам необходимо, чтобы параметр строки подключения присутствовал в пакете.)

В зависимости от того, как был собран пакет, пакет веб-развертывания может иметь один или несколько параметров. Эти командлеты восстановления проверяют пакет и добавляют в коллекцию динамические параметры PowerShell. Итак, если в пакете есть параметр веб-развертывания с именем «Parameter1», вы найдете параметр PowerShell с именем «Parameter1». Однако у динамических параметров есть свои проблемы в PowerShell, и это будет работать, только если в имени пакета или в пути к файлу нет пробела.

В качестве альтернативы, все эти командлеты восстановления также имеют параметр «Параметры», который позволяет вручную указывать новые значения параметров во время восстановления.Этот параметр «Parameters» принимает объект PowerShell Dictionary в качестве пар «имя-значение» параметров веб-развертывания.

Чтобы узнать параметры веб-развертывания, определенные в любом пакете веб-развертывания, вы можете просто открыть zip-файл в проводнике Windows и изучить файл parameters.xml, находящийся в корне пакета. Для любого параметра веб-развертывания, не имеющего значения по умолчанию или значения, необходимо указать значение. Добавьте все эти параметры в XML-файл и передайте его как значение параметра ParameterValuesFile.Вы можете создать этот файл, как указано здесь, или вручную. Формат —

  <параметры>
  
  

  
Командлет

Get-WDParameters может читать этот файл и преобразовывать его в объект параметров WebDeploy (словарь), который принимается всеми командлетами восстановления.

Если какой-либо пакет восстанавливается без указания значения для параметров внутри, поведение по умолчанию будет перезаписывать ресурсы, из которых был первоначально создан пакет.Например, если я создаю пакет из site1 с помощью backup-wdsite site1, то когда я восстанавливаю этот пакет с помощью командлета восстановления без указания каких-либо значений параметров в этом пакете, site1 будет перезаписан всем, что содержит пакет, содержимым, а также конфигурацией. То же самое верно для всех командлетов восстановления.

Все эти командлеты восстанавливают локально, за исключением случая, когда указан целевой файл параметров публикации, и в этом случае точно такая же операция будет выполняться на удаленном сервере через службу веб-управления (WMSvc) или службу агента веб-развертывания.

A. IIS

1. Сервер
  Восстановление-WDServer
  

Описание: Восстанавливает пакет веб-сервера. Обычно используется резервное копирование сервера перед внесением изменений, а в случае сбоя сервер можно восстановить, применив пакет резервного копирования веб-развертывания, созданный перед внесением изменений.

  $ folderList = @ («\\ app_data»)
  
  Restore-WDServer D: \ OWAIS-1_WebServer_201204114.zip -DestinationPublishSettings c: \ destinationServer.publishSettings –SkipFolderList $ folderList
  
2. Зона
  Восстановление-WDSite
  

Описание: Восстанавливает пакет сайта IIS. Если в пакете есть два параметра с именами «Физический путь к сайту» и «Имя сайта», они будут представлены как динамический параметр PowerShell SitePhysicalPath и SiteName. Эта команда создаст новый сайт site1 с физическим путем c: \ site1 . Если для этих параметров не указано значение, восстановление будет применено к тому же сайту и контенту, перезаписывая любые изменения, которые могут быть на сайте.

Параметры

: вы можете использовать skipfolderlist и skipfilelist, чтобы исключить некоторые папки и / или файлы из копируемых в содержимое сайта.

  Восстановить-WDSite C: \ defaultsite.zip -SitePhysicalPath c: \ site1 -SiteName site1
  
  Restore-WDSite -Package 'D: \ Users \ Administrator \ Documents \ Web Deploy Backups \ IIS-Server_AppHostConfig_Default Web Site_20120417100827.zip' -skipFolderList @ ('App_Data') -verbose
  
3. Приложение
  Восстановление-WDApp
  

Описание: Это восстановит веб-приложение.Backup-WDApp создает пакет с одним параметром для изменения имени приложения во время установки. Это можно использовать для восстановления приложения в другом приложении во время восстановления. Сайт должен существовать при развертывании в приложении на сайте. Приложение будет создано этим пакетом, но сайт не будет создан.

Примеры:

  Restore-WDApp C: \ myappbackup.zip -ApplicationPathParam1 "Веб-сайт по умолчанию \ app1"
  

B. База данных

  Восстановление-WDDatabase
  

Описание: Если база данных не существует, будет создана новая база данных с именем customers (при условии, что текущий пользователь имеет разрешения на эту операцию) и будет выполнен сценарий для нее.Если это выполняется без каких-либо значений параметров динамического веб-развертывания, исходная база данных, из которой был создан этот пакет, будет перезаписана. Обратите внимание, что если параметр scriptDropsFirst не использовался при создании пакета, то применение к базе данных с конфликтующим существующим содержимым завершится ошибкой. Этот командлет можно использовать для восстановления резервной копии MSSql или MySQL. Вы можете восстановить базу данных MS SQL только с помощью резервной копии, созданной с помощью Backup-WDSQLDatabase, и моей базы данных SQL с резервной копией, созданной с помощью Backup-WDMySqlDatabase.

Примеры:

  Backup-WDSqlDatabase "server =. \ Sqlexpress; Integrated security = SSPI; database = customers" "C: \ dbbackup.zip"
  
  Restore-WDDatabase c: \ dbbackup.zip –DatabaseConnectionStringParam1 "server =. \ Sqlexpress; Integrated security = SSPI; database = customers_copy"
  
  Backup-WDMySqlDatabase "server = localhost; uid = someuser; pwd = somepwd; database = coolDb" "C: \ dbbackup.zip"
  
  Restore-WDDatabase c: \ dbbackup.zip –DatabaseConnectionStringParam1 "server = localhost; uid = someuser; pwd = somepwd; database = coolDb_copy"
  

C. Общий пакет

  Restore-WDPackage
  

Описание: этот командлет можно использовать для применения любого пакета веб-развертывания. Существует несколько способов создать или получить пакет веб-развертывания, например, загрузив пакет галереи приложений с открытым исходным кодом, создав пакет в Visual Studio, используя инструмент командной строки msdeploy.exe (подробнее) или используя Backup- Командлеты WD *, упомянутые ранее в документе.Например, для установки WordPress на веб-сайте IIS Server Default в качестве приложения с именем wordpress загрузите пакет wordpress из галереи приложений в папку с именем packages. Все значения по умолчанию для параметров пакета wordpress будут работать как есть, но нужно просто указать значения для двух обязательных параметров: admin и пароль mysql, не являющийся администратором.

Параметры:

  Restore-WDPackage c: \ Packages \ wordpress.zip -DBAdminPassword mysecretserverpassword –DBPassword mysqllocalpassword
  

IV.Удалить

  Remove-WDSite -Site NonWorkingSite
  

Эта команда удалит сайт, названный определением нерабочего сайта в applicationHost.config, а также содержимое каталога сайта

V. Структура пула приложений Get & Set

Эти командлеты позволяют читать и изменять версию .NET Framework apppool.

  Get-WDAppPoolFx "веб-сайт по умолчанию"
managedRuntimeVersion
---------------------
v2.0
Set-WDAppPoolFx "веб-сайт по умолчанию" -AppPoolFrameworkVersion v4.0
Get-WDAppPoolFx "веб-сайт по умолчанию"
managedRuntimeVersion
---------------------
v4.0
  

VI. Установить WDACL

Этот командлет можно использовать для установки контроля доступа к содержимому сайта. Например, Допустим, у меня есть сайт site1, и я пытаюсь предоставить пользователю u1 доступ для чтения.

Сначала я проверяю текущие разрешения.

  $ ret = Get-Acl C: \ site1
$ ret.Access
Я не вижу u1 в списке. Позвольте мне предоставить пользователю u1 доступ следующим образом
Set-WDAcl "site1" -SetAclUser u1
Проверьте, сработало ли это
$ ret = Get-Acl C: \ site1
$ ret.Доступ
Я вижу, что u1 предоставлен доступ для чтения, как показано ниже. [Я не вставлял другие разрешения в эту папку. Только часть u1]
FileSystemRights: чтение, синхронизация
AccessControlType: Разрешить
IdentityReference: МОШАИХ2 \ u1
IsInherited: False
InheritanceFlags: ContainerInherit, ObjectInherit
PropagationFlags: Нет
  

VII. Вызов

Вы можете вызывать команды или сценарии в удаленной системе, используя настройки destinationpublish, и просматривать результаты удаленного выполнения в режиме реального времени.Вы должны быть администратором удаленной системы, чтобы иметь возможность удаленно выполнять runcommand provider. Вы можете узнать больше об этом провайдере здесь. По умолчанию максимальное время ожидания MWD Api завершения данного сценария или команды составляет 5 секунд. Если вы хотите увеличить это время выполнения, вы можете указать более высокие значения для waitInterval и waitAttempts, как показано в примере ниже.

A. Скрипт

Invoke-WDScript C: \ my.cmd –Verbose

Это запустит сценарий, и вы сможете увидеть вывод команды, если запустите ее с подробным описанием.

B. Команда

  $ settings = @ {waitInterval = 3000; waitAttempts = 25;}
Invoke-WDCommand "dir c: \ mydirectory / s / b" -DestinationSettings $ settings
  

Это выполнит команду, и вывод не будет отображаться, так как подробное описание не было указано. Однако это будет ждать 3 секунды между каждым промежутком времени и будет делать 25 итераций ожидания. В целом выполнение процесса продлится не более 75 секунд.

VIII. Синхронизация

Эти командлеты принимают источник и место назначения и синхронизируются между ними.Источник никогда не изменяется. Причина, по которой я использую слово «источник» вместо «клиент», заключается в том, что термины «клиент» и «сервер» очень сбивают с толку при синхронизации. Вы можете синхронизировать локальный сервер с удаленным сервером. В этом случае удаленный сервер является источником, а локальный сервер — местом назначения. В качестве альтернативы вы можете выполнить командлет PowerShell на компьютере 1 и синхронизировать компьютеры 2 и 3. Чтобы использовать удаленный источник и / или место назначения, вам необходимо предоставить файл параметров публикации, который можно создать с помощью первого командлета, упомянутого в этом документе.Все командлеты синхронизации также поддерживают параметры sourceSettings и destinationSettings, чтобы иметь возможность выборочно устанавливать параметры поставщика либо для источника, либо для пункта назначения, либо для обоих.

A. IIS

1. Сервер

Я хочу синхронизировать два сервера IIS 7.5, Owais-1 и Owais-2. Сначала я создам файл параметров публикации для каждого, а затем синхронизирую серверы. Поскольку я не указал свои учетные данные, это будет успешным, если я буду администратором этих двух систем.

  Новый-WDPublishSettings -ComputerName owais-1 -AgentType MSDepSvc -FileName c: \ owais1.публиковатьнастройки
Файл настроек публикации, созданный по адресу: 'c: \ owais1.publishsettings'.
Новый-WDPublishSettings -ComputerName owais-2 -AgentType MSDepSvc -FileName c: \ owais2.publishsettings
Файл настроек публикации, созданный по адресу: 'c: \ owais2.publishsettings'.
Sync-WDServer -SourcePublishSettings c: \ owais1.publishSettings -DestinationPublishSettings c: \ owais2.publishSettings
  
2. Зона

В следующей команде будет создан сайт site2, если он не существует, и я также изменил физический путь (таким образом, содержимое будет скопировано в новую папку c: \ site2 ) и привязку сайта.

  Sync-WDSite site1 Site2 -SitePhysicalPath c: \ site2 -SiteBinding "*: 8078:" -IncludeAppPool
  
3. Приложение

У меня есть приложение, работающее на веб-сайте по умолчанию. Я хочу переместить это в Site1. Следующая команда сделает это.

  Sync-WDApp «Веб-сайт по умолчанию / drupal» «site1 / drupal»
  

Теперь, когда я протестировал работу моего нового приложения drupal, я удалю исходное приложение drupal с веб-сайта по умолчанию.

  Remove-WDSite «Веб-сайт по умолчанию / drupal»
  

Б.База данных

Предыдущие командлеты показали, как можно создавать резервные копии и восстанавливать базу данных с помощью пакета веб-развертывания, однако вы также можете синхронизировать базу данных с или из сценария .sql или синхронизировать напрямую с другим экземпляром базы данных с помощью Sync-WDSQLDatabase и Sync-WDMySQLDatabase. командлеты.

1. MSSql
  Sync-WDSQLDatabase "server =. \ Sqlexpress; uid = sa; pwd = ********; database = umbracodb" "server =. \ Sqlexpress; uid = sa; pwd = ****** ******; база данных = sometestdb "
  

Это создаст новую базу данных под названием sometestdb (если она еще не существует) и синхронизирует схему и данные.

  Sync- "server =. \ Sqlexpress; uid = sa; pwd = ********; database = umbracodb" c: \ umbraco.sql
  

Это приведет к преобразованию базы данных umbracodb в umbraco.sql по указанному выше пути.

2. MySql
  Sync-WDMySQLDatabase "server = localhost; uid = root; pwd = ********; database = wordpress265" "server = localhost; uid = root; pwd = ********** **; база данных = wordpress265_new "
  

Это создаст новую базу данных с именем wordpress265_new (если она еще не существует) и синхронизирует схему и данные.

  Sync-WDMySQLDatabase "server = localhost; uid = root; pwd = ***************; database = wordpress265" c: \ wordpress.sql
  

Это преобразует базу данных wordpress265 в wordpress.sql по указанному выше пути.

C. Все остальное

Для синхронизации общего назначения, не охватываемой другими приведенными выше командлетами, можно использовать командлет Sync-WDManifest. Это общая синхронизация провайдера манифеста, поддерживаемая MWD API. Вы можете прочитать больше об этом здесь. Манифест — это набор поставщиков, путей к поставщикам и их настроек в XML-файле.Структура такова, что корневой узел XML-файла считается именем поставщика для целей текущей синхронизации. Следовательно, это не может быть имя какого-либо из известных провайдеров, приведенных в приведенном здесь списке. Затем у него могут быть дочерние узлы с именем элемента, соответствующим поставщику, которого вы хотите включить в синхронизацию. Атрибут path представляет путь к этому провайдеру и является обязательным. Затем добавьте пары значений атрибутов для каждого параметра поставщика, который вы хотите использовать для текущей операции синхронизации.

Этому командлету требуется два манифеста: один для источника и один для назначения. Манифест всегда выполняется в указанном порядке. Если провайдер поддерживает операцию фиксации, например провайдер apphostconfig, который работает с сайтами IIS, фиксация не вызывается, если синхронизация не завершена. Следовательно, если у вас есть провайдер, который ожидает, что сайт будет существовать после провайдера, который его создает, тогда это не удастся, поскольку сайт еще не зафиксирован. В следующем примере я синхронизирую приложение и включаю базу данных, которую приложение использует вместе с ней, в манифест.

Исходный манифест:

  
  
  

  

Манифест назначения:

      Sync-WDManifest C: \ sourceManifest.xml C : \ destManifest.xmlПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ: не удается подключиться к базе данных «customers_demo_cpy». Повторная операция «Добавить» для объекта dbFullSql (server =. \ sqlexpress; uid = sa; database = customers_demo_cpy). Попытка 1 из 5.Manifest: C: \ sourceManifest.xmlManifest-Dest: C: \ destManifest.xmlTimeTaken: 0: 10Ошибки: 0Предупреждения: 0BytesCopied: 0ObjectsDeleted: 0ObjectsUpdated: 0ObjectsAdded: 3TotalChanges
  

Первая лекция, посвященная Сан-пин Ваню, запланирована на 2 мая

Архив

18 апреля 2002 г.

В начале мая факультет патобиологии Школы общественного здравоохранения и местной медицины проведет первую лекцию, предоставленную Сан-Пин Ван.Профессорская должность присуждается д-ру Сан-пин Вангу, который был связан с UW в течение 37 лет до своей смерти в 2001 году.

Доктор Пакка Сайкку, который работал с Вангом в 1980-х годах в UW и сейчас работает в Университете Оулу в г. Финляндия, прочтёт первую лекцию. Он говорит о «Недавних наблюдениях за Chlamydia Pneumoniae при атеросклерозе» в 16:00, в четверг, 2 мая, в комнате T-733 Здания медицинских наук. Лекция открыта для всех.

Сайкку, чья работа в UW в 1980-х годах имела решающее значение для открытия тогда еще нового изолята хламидий человека, вызывающего респираторную инфекцию, позже обнаружил связь между антителами к этому организму ( Chlamydia pneumoniae, ) и атеросклерозом, обычно называется затвердением артерий.Возможная роль этой инфекции и других причин воспаления сейчас исследуется во многих лабораториях по всему миру.

Для открытий Сайкку потребовался серологический метод, известный как микроиммунофлуоресцентный тест, который был разработан Вангом и обучен Сайкку.

Ван был близким соратником докторов. Дж. Томас Грейстон, Чо-чжоу Куо и Ли Энн Кэмпбелл, которые много лет работали в команде над исследованием хламидий в отделении патобиологии.

Ван посвятил почти всю свою научную карьеру исследованиям различных штаммов хламидиоза, которые, как известно, трудны для изучения. Разработанный им микроиммунофлуоресцентный тест имел важное значение для определения Chlamydia trachomatis как одного из наиболее распространенных заболеваний, передающихся половым путем, и выявления Chlamydia pneumoniae как важного респираторного патогена.

Ван пришел в Университет штата Вашингтон в 1964 году и вышел на пенсию в 1991 году с должности почетного профессора патобиологии. Он родился на Тайване и получил образование в Японии, получив степень М.Доктор медицины в Школе медицины Университета Кейо в Токио. Он также получил степень магистра общественного здравоохранения в Мичиганском университете и был бывшим медицинским сотрудником в Отделе медицинских исследований ВМС США в Тайбэе, Тайвань.

SNAPIN — SNARE-ассоциированный протеин Snapin — Homo sapiens (Human)

Модифицированный остаток 133
Функциональный ключ Позиция (я) Описание Действия Графическое представление Длина

Этот подраздел PTM / Processing указано, что метионин инициатора отщепляется от зрелого белка.

Подробнее. ..

Инициатор метионин i
Удалено

Подтвержденная вручную информация, полученная на основе экспериментальных и расчетных данных.

Подробнее…

Утверждение, сделанное вручную, получено из комбинации экспериментальных и расчетных данных. i

  • Цитируется для: АЦЕТИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ] НА ALA-2, ОТРЫВ ИНИЦИАТОРА МЕТИОНИНА [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ С ПОМОЩЬЮ МЕТАЛЛИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА], ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ АНАЛИЗ].

  • «Количественная фосфопротеомика выявляет широко распространенную занятость сайта полного фосфорилирования во время митоза.»
    Olsen JV, Vermeulen M., Santamaria A., Kumar C., Miller ML, Jensen LJ, Gnad F., Cox J., Jensen TS, Nigg EA, Brunak S., Mann M.
    Sci. Signal. 3: RA3-RA3 (2010) [PubMed] [Europe PMC] [Реферат]

    Цитируется за: АЦЕТИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ] НА ALA-2, ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ] В SER-10; THR-14 И SER-133, ОТРЫВ ИНИЦИАТОРА МЕТИОНИНА [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ], ИДЕНТИФИКАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ].

  • «Анализ N-концевого ацетилома и функциональное понимание N-концевой ацетилтрансферазы NatB.»
    Ван Дамм П., Ласа М., Полевода Б., Газкес К., Элосеги-Артола А., Ким Д.С., Де Хуан-Пардо Э., Демейер К., Хоул К., Ларреа Э., Тиммерман Э. ., Прието Дж., Арнесен Т., Шерман Ф., Геваерт К., Алдабе Р.
    Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109: 12449-12454 (2012) [PubMed] [Europe PMC] [Abstract]

    Цитируется для: АЦЕТИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ] AT ALA-2, ОТРЫВ МЕТИОНИНА ИНИЦИАТОРА [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ], ИДЕНТИФИКАЦИЯ МАССОВОЙ СПЕКТРОМЕТРИЕЙ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ].

    В этом подразделе раздела «PTM / Обработка» описывается протяженность полипептидной цепи в зрелом белке после процессинга или протеолитического расщепления.

    Подробнее …

    Цепочка i PRO_0000097556
2 — 136 SNARE-связанный белок SnapinAdd BLAST 135
Функциональный ключ Положение (я) Описание Действия Графическое представление Длина

В этом подразделе раздела «PTM / Обработка» указываются положение и тип каждого измененного остатка, за исключением lipids , гликаны и перекрестные ссылки протеина .

Подробнее … Модифицированный остаток i

2 N-ацетилаланин

Ручное утверждение, выведенное из комбинации экспериментальных и расчетных данных i

  • Цитируется для: АЦЕТИЛИРОВАНИЕ [МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ, КЛАССИФИКАЦИЯ] НА ALAVA-2 ИНИЦИАТОР МЕТИОНИН [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ], ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПОМОЩЬЮ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ].

  • «Количественная фосфопротеомика выявляет широко распространенную занятость сайта полного фосфорилирования во время митоза».
    Olsen J.V., Vermeulen M., Santamaria A., Kumar C., Miller M.L., Jensen L.J., Gnad F., Cox J., Jensen T..S., Nigg E.A., Brunak S., Mann M.
    Sci. Сигнал. 3: RA3-RA3 (2010) [PubMed] [Europe PMC] [Реферат]

    Цитируется за: АЦЕТИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ] на ALA-2, ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ] на SER-10; THR-14 И SER-133, ОТРЫВ ИНИЦИАТОРА МЕТИОНИНА [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ], ИДЕНТИФИКАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ].

  • «Анализ N-концевого ацетилома и функциональное понимание N-концевой ацетилтрансферазы NatB».
    Ван Дамм П., Ласа М., Полевода Б., Газкес К., Элосеги-Артола А., Ким Д.С., Де Хуан-Пардо Э., Демейер К., Хоул К., Ларреа Э., Тиммерман Э. , Prieto J., Arnesen T., Sherman F., Gevaert K., Aldabe R.
    Proc. Natl. Акад. Sci. USA 109: 12449-12454 (2012) [PubMed] [Europe PMC] [Резюме]

    Цитируется для: АЦЕТИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ] ПРИ ALA-2, ОТРЫВ МЕТИОНИНА ИНИЦИАТОРА [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ], ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПО МАСС-СПЕКТРАМ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ].

1
Модифицированный остаток i 10 Фосфосерин

Ручное утверждение, сделанное на основе комбинации экспериментальных и компьютерных данных во время митоза «.
Olsen J.V., Vermeulen M., Santamaria A., Kumar C., Miller M.L., Jensen L.J., Gnad F., Cox J., Jensen T.С., Нигг Э.А., Брунак С., Манн М.
Sci. Сигнал. 3: RA3-RA3 (2010) [PubMed] [Europe PMC] [Реферат]

Цитируется за: АЦЕТИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ] на ALA-2, ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ] на SER-10; THR-14 И SER-133, ОТРЫВ ИНИЦИАТОРА МЕТИОНИНА [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ], ИДЕНТИФИКАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ].

1
Модифицированный остаток i 14 Фосфотреонин

Ручное утверждение, выведенное из комбинации экспериментальных и компьютерных данных во время митоза.»
Olsen JV, Vermeulen M., Santamaria A., Kumar C., Miller ML, Jensen LJ, Gnad F., Cox J., Jensen TS, Nigg EA, Brunak S., Mann M.
Sci. Signal. 3: RA3-RA3 (2010) [PubMed] [Europe PMC] [Реферат]

Цитируется за: АЦЕТИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ] НА ALA-2, ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ] В SER-10; THR-14 И SER-133, ОТРЫВ ИНИЦИАТОРА МЕТИОНИНА [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ], ИДЕНТИФИКАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ]. 133, ИДЕНТИФИКАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ [МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ].

1
Модифицированный остаток i 50 Фосфосерин; по PKA

Ручное утверждение, выводимое из сходства последовательностей с i

1
Модифицированный остаток i 126 Фосфосерин

Ручное утверждение, выведенное из комбинации экспериментальных и компьютерных данных

1
Модифицированный остаток i 129 Фосфотирозин

Ручное утверждение, выведенное из комбинации экспериментальных и расчетных данных i

9049 Фосфосерин

Ручное утверждение, выведенное из комбинации экспериментальных и вычислительных данных i

  • Цитируется для: ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ] НА SER-133, ИДЕНТИФИКАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ МАССОВОЙ СПЕКТРОМЕТРИИ.

  • Процитировано для: ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ] НА TYR-129 И SER-133, ИДЕНТИФИКАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ].

  • «Количественная фосфопротеомика выявляет широко распространенную занятость сайта полного фосфорилирования во время митоза».
    Olsen J.V., Vermeulen M., Santamaria A., Kumar C., Miller M.L., Jensen L.J., Gnad F., Cox J., Jensen T..S., Nigg E.A., Brunak S., Mann M.
    Sci. Сигнал. 3: RA3-RA3 (2010) [PubMed] [Europe PMC] [Реферат]

    Цитируется за: АЦЕТИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ] на ALA-2, ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗ] на SER-10; THR-14 И SER-133, ОТРЫВ ИНИЦИАТОРА МЕТИОНИНА [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ], ИДЕНТИФИКАЦИЯ С ПОМОЩЬЮ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБНЫЙ АНАЛИЗ].

  • Процитировано для: ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗА] НА THR-14; SER-126 и SER-133, ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПОМОЩЬЮ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ [БОЛЬШОЙ МАСШТАБ АНАЛИЗА].

1

Snapin Modules — Microsoft Certified Professional Magazine Online

Проф. Powershell

Snapin модули

Powershell 2.0 идет дальше, добавляя концепцию «модуля».

  • Джеффри Хикс
  • 09.03.2010

В PowerShell 1.0 вы могли добавить функциональность, установив PSSnapins. PSSnapin — это двоичный файл, обычно это DLL, разработанный сторонним поставщиком (иногда Microsoft), который содержит новые командлеты, которые вы можете использовать в сеансе, сценарии или функции PowerShell. Используйте команду Get-PSSnapin для просмотра всех загруженных в данный момент снапинов:

PS C: \> Get-PSSnapin

Однако при этом будут отображаться только оснастки, загруженные с помощью Add-PSSnapin.Чтобы увидеть другие оснастки, зарегистрированные в PowerShell, используйте параметр -Registered:

PS C: \> Get-PSSnapin — зарегистрировано

PowerShell 2.0 может продолжать использовать PSSnapins, но теперь предлагает новую концепцию расширения функциональности, называемую модулем. Модуль может быть набором файлов сценария или двоичным файлом, например dll. Модули имеют ряд преимуществ и просты в использовании. Командлет Get-Module отображает все загруженные в данный момент модули:

PS C: \> Get-модуль

Как и в оснастках, у вас могут быть установлены, но не загружены модули.Используйте параметр -ListAvailable для отображения доступных модулей:

PS C: \> Get-модуль -ListAvailable

Когда вы будете готовы использовать модуль, используйте командлет Import-Module:

PS C: \> Импорт-модуль ActiveDirectory

Теперь, если вы запустите Get-Module, вы увидите новый модуль и его команды. Итак, если концептуально оснастка и модуль одинаковы, можем ли мы использовать одну и ту же команду? Конечно.Практически любую оснастку можно импортировать как модуль. Чтобы импортировать снапин, вам нужно получить полный путь к двоичному файлу:

PS C: \> Import-Module (get-pssnapin Quest.ActiveRoles.ADManagement -Registered) .ModuleName

На моем компьютере установлен бесплатный Quest Active Directory PSSnapin. Он не загружен в моем текущем сеансе PowerShell, поэтому мне нужно использовать параметр -Registered с Get-PSSnapin для получения информации о.Мне нужно ModuleName, которое возвращает полный путь к DLL:

C: \ Program Files \ Quest Software \ Оболочка управления для AD \ Quest.ActiveRoles.ArsPowerShellSnapIn.dll

Чтобы импортировать это как модуль, мне просто нужно передать его как значение для Import-Module. Несмотря на то, что инструмент Quest был упакован и предназначен для использования в качестве оснастки, он не отображается, когда я вызываю Get-PSSnapin. Это потому, что я импортировал его как модуль:

PS C: \> get-module
ModuleType Name ExportedCommands
———- —- —————-
Binary Quest.ActiveRoles.ArsP … {Get-QADComputer, New-QADUser, …)

Функционально, разницы нет, за одним исключением: когда вы загружаете PSSnapin, нет возможности выгрузить его. Остается, пока вы не завершите сеанс PowerShell. Но модулей можно выгрузить:

PS C: \> Удалить модуль Quest *

У меня есть только один «модуль» Quest, поэтому я воспользуюсь ярлыком и использую подстановочный знак, чтобы не печатать.

Модули

кажутся предпочтительным методом добавления функций в вашу оболочку, и я уверен, что напишу о них больше в будущем. Снапины, вероятно, не исчезнут в ближайшее время, но вы можете начать использовать Import-Module вместо Add-PSSnapin.


Об авторе

Джеффри Хикс — ветеран ИТ с более чем 25-летним опытом работы, большую часть которого он провел в качестве консультанта по ИТ-инфраструктуре, специализируясь на серверных технологиях Microsoft с упором на автоматизацию и эффективность.Он многолетний обладатель награды Microsoft MVP в области Windows PowerShell. Сегодня он работает как независимый автор, тренер и консультант. Джефф написал статьи для множества онлайн-сайтов и печатных изданий, работает редактором Petri.com и часто выступает на технологических конференциях и в группах пользователей.

границ | SNAPIN регулирует развитие клеточного цикла, способствуя росту β-клеток поджелудочной железы

Введение

Диабет — распространенное заболевание во всем мире, и он стал серьезной проблемой общественного здравоохранения (1).В конечном итоге это приводит к дефициту функциональных β-клеток поджелудочной железы (2). Поддержание количества β-клеток и массы островков необходимо для поддержания нормогликемии (3, 4). Скорость репликации β-клеток человека очень низкая, и клетки способны к репликации только в течение короткого периода после рождения (5).

Сахарный диабет 1 типа (СД1) связан с нарушением массы β-клеток (6). Патогенез диабета 2 типа более разнообразен и состоит из инсулинорезистентности и нарушения секреции инсулина (6).В частности, сахарный диабет 2 типа (СД2) связан с генетической предрасположенностью и факторами окружающей среды, такими как ожирение и диета (7). Во время беременности и на ранних стадиях диабета компенсаторная пролиферация β-клеток поджелудочной железы происходит в ответ на изменение уровня глюкозы в крови (8, 9). Сама глюкоза способна стимулировать репликацию β-клеток (10), и несколько линий доказательств указывают на то, что терминально дифференцированные β-клетки поджелудочной железы сохраняют значительную пролиферативную способность in vivo (11, 12).Эта способность к пролиферации привлекла значительное внимание исследователей с точки зрения разработки терапевтических стратегий при сахарном диабете. Хотя ряд исследований, касающихся дифференцированных β-подобных клеток из эмбриональных стволовых клеток или индуцированных плюрипотентных (взрослых) стволовых клеток, продолжается, низкая эффективность преобразования β-клеток из стволовых клеток остается проблемой для разработки методов лечения на основе клеток (13). Сообщалось, что передача сигналов глюкокиназы, белок, связывающий элемент углеводного ответа (ChREBP), ядерный фактор активированных Т-клеток (NFAT), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), CDK4 / 6 и TCF7L2, стимулируют пролиферацию β-клеток человека (14). –19).Таким образом, были выявлены механизмы, регулирующие массу β-клеток, лежащие в основе развития СД1 и СД2, что важно для разработки новых терапевтических подходов к лечению диабета. Эта способность к пролиферации привлекла значительное внимание исследователей с точки зрения разработки терапевтических стратегий при сахарном диабете.

SNAPIN — это белок, который взаимодействует с комплексами SNARE во время синаптической передачи, о котором впервые сообщил Джеффри М. Иларди в 1999 г., и он был впервые идентифицирован в нейронах и локализован на мембранах синаптических везикул (20).Он также входит в состав комплексов BLOC-1 и BORC (21). Комплекс BLOC-1 необходим для нормального биогенеза связанных с лизосомами органелл (LRO), таких как плотные тромбоциты гранулы и меланосомы (22), а BORC необходим для позиционирования лизосом в клетках млекопитающих (21). Все больше данных показывает, что SNAPIN важен для ретроградного транспорта аксонов (23), позднего эндосомно-лизосомного транспорта (24) и глюкозо-индуцированного экзоцитоза инсулина (25). Также считается, что он участвует во множестве функций передачи сигналов и внутрикапсулярного транспорта / слияния (26).

SNAPIN специфически экспрессируется в эндокринном отделе поджелудочной железы. Наблюдалось диффузное окрашивание цитоплазмы, и клетки были сгруппированы в точечные структуры, которые совмещены с секретирующими инсулин гранулами (27). Секреция инсулина может быть вызвана взаимодействием между c-концевой областью h3 SNAPIN и sn- 1 область snap-25 в комплексе SNARE (27, 28), которая инициирует процесс нацеливания, связывания, инициации и слияния мембран секреции инсулина (27, 29).Эти процессы экзоцитоза опосредуются комплексом Munc18 / SNARE (30).

Кроме того, SNAPIN является мишенью для протеинкиназы A (PKA) (31), которая является важным регулятором глюкозо-стимулированного экзоцитоза инсулина в β-клетках поджелудочной железы, способствуя взаимодействию и сборке белков, связанных с секреторными пузырьками инсулина Snap25 и TMEM27 (32). SNAPIN в значительной степени коррелирует с геном TMEM27, который кодирует мембранный белок, расщепляемый и выделяемый бета-клетками поджелудочной железы, который был предложен в качестве биомаркера массы бета-клеток (33).Это указывает на то, что SNAPIN также может быть биомаркером бета-клеток. Функция SNAPIN в росте β-клеток плохо изучена, и наши результаты показывают, что сверхэкспрессия SNAPIN в клетках Min6 может способствовать пролиферации клеток и является многообещающим для достижения целей регенеративной медицины для лечения диабета.

Материалы и методы

Процедуры клонирования

Снапин полной длины амплифицировали с помощью ПЦР с кДНК и клонировали в сайтах XhoI и BamHI вектора PCDH-3xFlag-3xHA-EF1-пуромицин.Праймеры были созданы с использованием программного обеспечения Primer Premier 5.0 (Premier Biosoft International, Пало-Альто, Калифорния).

Упаковка и заражение лентивирусом

Клетки HEK293T высевали в планшеты для культивирования на 12 часов и трансфицировали лентивирусными векторами вместе с упаковывающими векторами, pMDL, VSVG и REV в соотношении 10: 5: 3: 2 с использованием липофектамина 2000 для 48 часов. Вирус собирали, фильтровали и добавляли к β-клеткам в присутствии 10 мкг / мл полибрена (Sigma, H9268) с последующим центрифугированием в течение 30 минут при 1500 g при 37 ° C.Среда была заменена через 12 часов. Эффективность трансдукции оценивали с помощью анализа иммуноблоттинга.

shRNA Инфекция

Процесс упаковки частиц лентивирусов был таким же, как описано выше. Последовательности праймеров представлены в таблице 1. Временную трансфекцию плазмид в клетки проводили с использованием реагентов Lipofactamine 2000 (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя.

Таблица 1. Целевое секвенирование shRNA и праймеры для клонирования SNAPIN.

Клеточные линии

Клеточные линии Min6 поджелудочной железы мыши, INS1 поджелудочной железы крысы и линии клеток HEK-293T были получены от ATCC. Клетки Min6 поддерживали в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы (BI) с добавлением 15% об. / Об. Фетальной бычьей сыворотки (FBS, BI), 50 ммоль / л 2-меркаптоэтанола и 1% пенициллин-стрептомицина при 37 ° C и 5% СО2 в увлажненной атмосфере в инкубаторе. HEK-293T культивировали в среде DMEM с добавлением 10% об. / Об. Фетальной бычьей сыворотки (FBS, BI) и 1% пенициллин-стрептомицин в инкубаторе при 37 ° C и 5% CO2 в увлажненной атмосфере в инкубаторе.Клетки INS1 поджелудочной железы крысы культивировали в RPMI1640 (Hyclone), содержащей 10% об. / Об. Фетальной бычьей сыворотки (FBS, BI), 1% пенициллин-стрептомицин, 1% глутамин, 1 мМ пируват натрия и 50 мкМ β-меркаптоэтанол (сигма). .

Животные

Самцы мышей KM массой примерно 18-25 г были приобретены в Центре животных Университета Сямэня. Мышей гуманно содержали при температуре 22 ± 2 ° C с 12-часовым циклом свет / темнота. Все животные имели свободный доступ к пище и воде. Все исследования на животных были одобрены комитетом по этике Сямэньского университета и соответствовали положениям руководящих принципов Национального института здравоохранения по уходу и благополучию лабораторных животных.Мыши Db / Db и HFD были получены из лаборатории Ли Мин Ю в Университете Сямэня.

Иммуногистохимия

SNAPIN и инсулин анализировали иммуногистохимическим окрашиванием замороженных срезов поджелудочной железы взрослых мышей, фиксированных O / N в 4% PFA в PBS при комнатной температуре, pH 7,4, криопротектированных 30% сахарозой в PBS, залитых в Tissue-Tek ( Сакура; Верлозе, Дания) и разрезали на срезы 9 мкм на криостате Leica. Извлечение антигена выполняли с помощью микроволновой обработки в течение 4 минут при 600 Вт в 200 мл 0,01 М цитратного буфера, затем 15 минут при 250 Вт и, наконец, оставляли охлаждаться на 20 минут.Срезы тканей промывали в TBS, гасили в 3% h3O2 в течение 5 минут и снова промывали. Затем использовали 10% козью сыворотку для блокирования в течение 1 часа перед инкубацией в течение ночи с очищенными кроличьими антителами против SNAPIN, разведенными 1: 200, и кроличьими антиинсулиновыми антителами, разведенными 1: 400 в 10% блокирующем буфере козьей сыворотки. Срезы промывали трижды по 5 минут каждый в TBS между инкубациями с первичным антителом и следующими инкубациями с биотинилированным вторичным антителом (Zymed; Орхус, Дания) в течение 30 минут.Связанные антитела визуализировали с помощью DAB после 3-минутного инкубационного периода и последующей промывки в TBS, а слайды окрашивали гематоксилином. Изображения были получены с помощью микроскопа Olympus (Токио, Япония) BX51 и сняты с помощью охлаждаемой камеры Hamamatsu C5810 CCD (город Хамамацу, Япония) и программного обеспечения Image Pro Plus 4.5.

Ядерная экстракция клеток

SNAPIN был сверхэкспрессирован в клетках Min6. Все этапы выполнялись на льду с ледяными реагентами в пробирках для предварительного центрифугирования.Сначала мы использовали ледяной 1xPBS для промывания клеток и аккуратного соскоба клеток в 15 мл пробирку. Их центрифугировали 5 минут при 500 об / мин, 4 ° C. Затем осадок ресуспендировали в 1 мл охлажденного льдом BUFFER1 (1 M HEPES, PH 8,0, 1 M Mgcl2, 1 M KCl и 1 M DTT) и инкубировали в течение 15 минут на льду, чтобы клетки могли набухнуть. Np40 добавляли в вортекс на 10 с. Клетки центрифугировали в течение 3 минут при максимальной скорости, затем пипеткой отсасывали супернатант, который представлял собой цитоплазматическую фракцию. Осадок ресуспендировали в холодном буфере BUFFER2 (1 M HEPES, pH 8.0, 1 M Mgcl2, глицерин, 1 M Nacl, 0,5 M EDTA и 1 M DTT), встряхивали 30 S и энергично вращали при 4 ° C в течение 30 минут. Осадок центрифугировали в течение 15 минут на максимальной скорости, супернатант удаляли и переносили в свежую охлажденную пробирку. Анализ концентрации белка для иммуноблоттинга.

Конфокальная иммунофлуоресцентная микроскопия

β-клетки фиксировали в 4% параформальдегиде в течение получаса при комнатной температуре. Затем клетки трижды промывали PBS в течение 5 минут при комнатной температуре.0,1% Тритон-100 добавляли для проникновения в течение 10 минут, и клетки инкубировали в блокирующем буфере (5,0% BSA в PBS) в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем мы провели иммуноокрашивание с использованием первичных антител SNAPIN (1:50) и инсулина (1: 800), инкубированных в течение ночи при 4 ° C, а затем вторичных антител, конъюгированных с флуорофором. Иммуномеченые клетки анализировали с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа Carl Zeiss LSM5 EXITER или Leica TCS SP8 STED. Зеленый канал был получен с помощью лазерной линии с длиной волны 488 нм (120 мВт / см2, 2.5%). Красный канал был получен с помощью лазера с длиной волны 559 нм (120 мВт / см2, 2,0%). Изображения получали с интервалом 4 с (время кадра 3,9 с). Импульсный лазер с длиной волны 375 нм (10 МГц) применялся для экспериментов по снятию каркаса во всем поле зрения для восьми кадров (3,2 с / кадр). Установка двойного сканера позволяла одновременную лазерную стимуляцию и конфокальную визуализацию. Это позволило получить клеточные ответы, которые возникали во время или сразу после лазерной стимуляции.

Цикл клеток и проточная цитометрия

Клетки Min6, которые подверглись сверхэкспрессии или нокдауну SNAPIN, добавляли к 1 мл холодного PBS для повторного суспендирования осадка клеток и осторожно встряхивали и равный объем холодного абсолютного этанола (хранить при -20 ° C). по каплям добавляли к суспензии клеток в той же пробирке на 15 мл.Затем его хранили при -20 ° C не менее 2 часов. Перед окрашиванием клетки дважды промывали холодным PBS и центрифугировали при 4 ° C, 3000 g в течение 5 минут, и супернатант полностью удаляли. Добавляли окрашивающий раствор PI и инкубировали при 37 ° C в течение 15 минут. Данные были получены с помощью проточной цитометрии. Затем мы использовали PI для окрашивания клеток Min6, которые трансфицировали shRNA в течение 15 минут. Клетки или ядра фильтровали через сито 40 мм и проточную цитометрию проводили на 4-лазере LSRII (BD Biosciences). Данные были проанализированы с помощью программного обеспечения FlowJo.

Анализ пролиферации клеток

Клетки Min6, которые подверглись сверхэкспрессии или нокдауну SNAPIN, высевали в 96-луночный планшет и инкубировали со средой в течение 24 часов. Жизнеспособность клеток измеряли с помощью анализа MTS с использованием CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (Promega). Для измерения жизнеспособности клеток на лунку добавляли 500 мкл смеси среда / раствор MTS (20 мкл среды MTS / мл). Планшет инкубировали при 37 ° C в течение 1 часа. Затем измеряли оптическую плотность при 490 нм, используя автоматический ридер для микропланшетов.Жизнеспособность клеток измеряли каждые 24 часа в течение четырех дней подряд.

Анализ этинилдезоксиуридина (EdU)

Пролиферирующие клетки оценивали с помощью Click-iT ™ EdU Proliferation Assay (Invitrogen) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, клетки Min6, которые подверглись нокдауну, высевали в 96-луночный планшет (5000 клеток / лунку). Затем добавляли среду для мечения EdU 10 мкм и клетки инкубировали в течение 24 часов. 50 мкл фиксатора Click-iT ™ EdU добавляли в каждую лунку на 5 минут и 50 мкл реакционной смеси 1X Click-iT ™ в каждую лунку на 30 минут.Затем добавляли 1,5% БСА для блокирования клеток на 5 минут. После промывки несколько раз добавляли 100 мкл реакционной смеси Amplex ™ UltraRed в течение 15 минут, а затем инкубировали с 10 мкл стоп-реагента Amplex ™ UltraRed. Флуоресценцию измеряли с максимумом возбуждения 568 нм и максимумом испускания 585 нм.

Окрашивание аннексином V-FITC / пропидия иодидом (PI)

Апоптоз β-клеток измеряли с помощью аннексина V / FITC (BD Bioscience) в соответствии с протоколом производителя. Клетки собирали и ресуспендировали в 100 мкл связывающего буфера с последующим окрашиванием 5 мкл аннексина V, конъюгированного с FITC, и 5 мкл PI в темноте в течение 15 минут при комнатной температуре.Затем для ресуспендирования клеток добавляли 00 мкл связывающего буфера. Клетки были обнаружены методом проточной цитометрии (BD Biosciences). На ранней стадии апоптоза клеточные мембраны окрашивались FITC- конъюгированным аннексином V, тогда как ядра не окрашивались PI. На поздней стадии апоптоза клетки окрашивали как FITC- конъюгированным аннексином V, так и PI. Результаты были проанализированы с помощью FlowJo vX.0.7 (FlowJo LLC).

Секреция инсулина в клетках bb

Чтобы проверить секреторный ответ на глюкозу, клетки Min6 культивировали на стеклянных покровных стеклах в течение 24 часов.Через 24 часа посева клетки Min6 инкубировали в течение 1 часа при 37 ° C в KIRH BUFFER (136 ммоль / л NaCl, 4,7 ммоль / л хлорида калия (KCl), 1,2 ммоль / л Kh3PO4, 1,2 ммоль / л MgSO4, 5 ммоль / л NaHCO3, 1 ммоль / л CaCl2, 10 ммоль / л HEPES и 0,5% BSA, pH 7,4) с добавлением 2,8 ммоль / л или 16,7 ммоль / л глюкозы. Инсулин определяли с помощью ELISA (набор для иммуноанализа мышиного инсулина широкого диапазона, каталожный номер: 32100). В каждую лунку добавляли 5 мкл стандарта и образца и 100 мкл детектирующего антитела с последующей инкубацией при комнатной температуре в течение 90 минут.После промывки несколько раз в каждую лунку добавляли 100 мкл раствора субстрата при комнатной температуре в течение 15 минут с последующим добавлением 100 мкл стоп-раствора и немедленным обнаружением при 450 нм. Клетки фиксировали 4% параформальдегидом в течение 20 минут, и фиксированные клетки подвергали проницаемости 0,5% тритона-100 в течение 15 минут, обрабатывали 0,1% твина 20 в фосфатно-солевом буфере в течение 5 минут и блокировали 5% FBS в течение 40 минут перед инкубацией. с первичным антителом против SNAPIN (1:50; протеинтех) и инсулином (1: 800; Cell Signaling Technology) в течение ночи при 4 ° C с последующей инкубацией с меченными родамином вторичными антителами против IgG мыши (1: 200; Chemicon, Темекула, США) в течение 1 часа при комнатной температуре.Ядерную локализацию контрастировали с помощью DAPI.

Ткани и клетки Выделение РНК

Ткани мышей выделяли у мышей в течение 5 дней, 2, 3, 4 и 8 недель. Затем суммарную РНК экстрагировали, используя реагент TRIzol (Gibco-BRL) и следуя инструкциям производителя.

Цепная реакция обратной транскриптазы-полимеразы в реальном времени

Вкратце, тотальную РНК экстрагировали с использованием реагента TRIzol (Invitrogen), а комплементарную ДНК генерировали с использованием набора реагентов для обратной транскрипции PrimeScript ™ (Takara, Tokyo, Japan).Из аликвот РНК 1 мкг мы синтезировали кДНК с использованием случайных гексамеров или олиго (dT) и обратной транскриптазы, следуя протоколу производителя. Реакции проводили в течение 40 циклов при 30 ° C в течение 10 минут, 42 ° C в течение 20 минут, 99 ° C в течение 5 минут и 4 ° C в течение 5 минут с использованием системы обнаружения ПЦР в реальном времени (Bio-Rad, Hercules, США) согласно инструкции производителя и проверено на геле. Цепные реакции обратной транскриптазы-полимеразы в реальном времени (ОТ-ПЦР в реальном времени) проводили с использованием Master Mix Power SYBR Green PCR (Roche) и системы обнаружения ПЦР в реальном времени 7500 (Applied Biosystems).Актин использовался в качестве внутреннего контроля. Последовательности праймеров перечислены в таблице 2. Все эксперименты были выполнены в трех экземплярах, и данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Таблица 2 Последовательности праймеров для ПЦР в реальном времени.

Вестерн-блоттинг

Клетки засевали с подходящей плотностью, и общий белок клеток или тканей использовали буфер для лизиса клеток, содержащий (50 мМ Трис-HCl (pH 7,4), 150 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА и 1% Тритон X -100), содержащий коктейль ингибиторов протеаз (сигма, P2714-1BTL), на льду в течение 30 минут с последующим центрифугированием.Концентрации белка определяли с помощью набора для анализа бицинхониновой кислоты (Beyotime Biotechnology). Белок (20 мкг / дорожка) разделяли электрофорезом в 10-15% додецилсульфат-полиакриламидном геле (SDS-PAGE) и переносили на поливинилиденфторидные мембраны (Millipore, Billerica, MA). Мембраны блокировали на 1,5 часа в трис-буферном физиологическом растворе и Твин 20 (TBST, pH 7,6), содержащем 5% обезжиренного сухого молока, при комнатной температуре и инкубировали с первичными антителами при 4 ° C в течение ночи. Затем мембраны трижды промывали TBST по 15 минут каждый и инкубировали с антикроличьими вторичными антителами (1: 5000 в TBST), конъюгированными с HRP, в течение 1 часа при комнатной температуре.Затем блоты проявляли в темноте с использованием набора для определения ECL (Proteintech). Интенсивность полос определяли количественно с помощью программы ImageJ 1.45 (NIH, США). Антитела перечислены в таблице 3.

Таблица 3 Антитела, используемые в вестерн-блоттинге, иммуногистохимии и иммунофлуоресценции.

Анализ иммунопреципитации

Через два дня после трансфекции клетки лизировали в буфере для лизиса (1% Triton X-100, 50 мМ Tris-HCl (pH 7,4), 150 мМ NaCl, 1 мМ EDTA, 1% дезоксихлат натрия) с коктейли с ингибиторами протеазы.Добавляли предварительно промытые бусины Flag-beads. После иммунопреципитации Flag-Beads промывали 4-5 раз буфером для лизиса (содержащим ингибитор протеазы). Flag-пептиды добавляли для элюирования белков, меченных Flag. Загрузочный буфер 4xSDS добавляли в супернатант после обогащения, и образец кипятили в металлической бане в течение 10 минут перед тем, как быть готовым. Затем элюаты подвергали SDS-PAGE и Вестерн-блоттингу.

Анализ ЖХ – МС и поиск в базе данных

Каждую иммунопреципитацию (IP) проводили в трех экземплярах.Клетки Min6, экспрессирующие вектор Flag-SNAPIN или PCDH, выращивали на 15-сантиметровых планшетах до 90% конфлюэнтности, а затем подвергали IP. Элюаты после IP сначала восстанавливали в 20 мМ дитиотреитоле (DTT) (Sigma) при 95 ° C в течение 5 минут, а затем алкилировали в 50 мМ йодацетамида (IAA) (Sigma) в течение 30 минут в темноте при комнатной температуре. После алкилирования образцы переносили на центробежный центробежный фильтр 10 кДа (Millipore) и последовательно промывали 200 мл 8 М мочевины три раза и 200 мл 50 мМ бикарбоната аммония два раза центрифугированием при 14000 g.Затем проводили расщепление трипсином (Promega) в соотношении 1:50 (фермент / субстрат, м / м) в 200 мл 50 мМ бикарбоната аммония при 37 ° C в течение 16 часов. Пептиды выделяли переносом фильтра в новую пробирку для сбора и вращением при 14000 g. Для увеличения выхода пептидов фильтр дважды промывали 100 мл 50 мМ бикарбоната аммония. Пептиды были обессолены с помощью StageTips (34, 35).

Анализ путей GO и KEGG Генная онтология (GO) — онтология, широко используемая в области биоинформатики для аннотирования крупномасштабных генов и генных продуктов (36).KEGG — это практический ресурс базы данных для технологий секвенирования генома и экспериментов с полимерами. Он генерируется информацией на молекулярном уровне, особенно наборами макромолекулярных данных, которые можно использовать для прогнозирования того, какие пути конкретного гена обогащены (37). Он охватывает такие информационные ресурсы, как заболевания и пути распространения, анализ GO и анализ KEGG, выполненный с помощью инструментов DAVID (https://david.ncifcrf.gov/). Статистически значимым считали P <0,01.

Статистический анализ

Групповые данные отображаются как среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM).Различия между группами рассчитывались с помощью непарных двусторонних t-критериев Стьюдента или одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующими апостериорными тестами Тьюки. P <0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Экспрессия SNAPIN увеличивается с возрастом мышей, и SNAPIN снижается у диабетических мышей

Были выделены ткани шести мышей разного возраста с последующей экстракцией белка для определения экспрессии SNAPIN (Рисунки 1A, B ) .Мы обнаружили, что экспрессия SNAPIN была относительно выше в печени (38), почках (39) и поджелудочной железе (25). Уровень экспрессии SNAPIN в поджелудочной железе мышей также сильно увеличивался с возрастом мышей (Фигуры 1C, D ) .

Рисунок 1 Экспрессия SNAPIN в тканях мыши. (A) Экспрессия SNAPIN рассчитывалась с помощью вестерн-блоттинга. SNAPIN был сопоставим в течение 5 дней с 8-недельной мышью. (B) Нормализованные гистограммы белка снапина против актина с использованием программного обеспечения для визуализации. (C) Уровень экспрессии SNAPIN в поджелудочной железе мышей также сильно увеличивался с возрастом мышей. (D) Нормализованные гистограммы белка снапина против актина с использованием программного обеспечения для визуализации. (E) Репрезентативные иммунофлуоресцентные изображения здоровой и преддиабетической поджелудочной железы мышей с использованием антител против SNAPIN и инсулина. Инсулин и SNAPIN мышей HFD и db / db были значительно ниже, чем у мышей дикого типа. (F) Размер β-клеток поджелудочной железы и экспрессия SNAPIN были рассчитаны на основе иммуногистохимических (IHC) срезов, обработанных для инсулина и SNAPIN, путем получения изображений в ярком поле (серия Leica CTR 4000).Размер β-клеток у мышей с высоким содержанием жиров (HFD) был значительно меньше, чем у мышей дикого типа, а экспрессия SNAPIN у мышей HFD была значительно ниже, чем у мышей дикого типа. Шкала: 100 мкм (слева) и 50 мкм (справа). Значения выражены как средние ± S.E.M. P <0,001 по сравнению с контролем. (G) Статистика для размера β-клеток и экспрессии SNAPIN. *** P <0,001.

Далее мы исследуем, имеет ли экспрессия SNAPIN несоответствие в своем участии у здоровых и диабетических мышей.Окрашивание гематоксилином проводили для обнаружения экспрессии инсулина и SNAPIN у мышей дикого типа и мышей с диабетом. Уменьшение массы β-клеток и снижение SNAPIN наблюдались у мышей с диабетом по сравнению с контрольной группой дикого типа. У диабетических мышей было намного меньше SNAPIN по сравнению с контрольными мышами дикого типа (рис. 1E), что имеет тенденцию к снижению на 40%. Мы также исследовали экспрессию SNAPIN с помощью иммуноокрашивания, и у мышей с диабетом было намного меньше SNAPIN по сравнению с контролем WT (Рисунки 1F, G ) .

SNAPIN в основном расположен в цитоплазме и совмещен с секреторными гранулами инсулина

SNAPIN первоначально был обнаружен в нейронах и исключительно на мембране синаптических пузырьков (40).Позднее сообщалось о внепочечной экспрессии в нескольких тканях и клеточных линиях, включая β-клетки поджелудочной железы, клетки INS1, клетки Min6, мозг и т. Д. В адипоцитах 3T3-L1 биохимический и иммунофлуоресцентный микроскопический анализ показал, что он локализуется как в диффузных цитозольных, так и в перинуклеарных тканях. мембранные отсеки (41). Мы обнаружили, что SNAPIN в основном локализован в цитоплазме, и мы обнаружили, что SNAPIN проявляет некоторое диффузное цитозольное окрашивание и группируется в точечные структуры внутри клеточного тела в клетках INS1 и Min6 крысы.Кроме того, картина окрашивания точечных точек была аналогична той, что наблюдалась для инсулинсодержащих секреторных гранул. Затем два поля были наложены друг на друга (рис. 2А). И анализ совместной локализации флуоресценции показал, что SNAPIN и инсулин имели отношения совместной локализации по ImageJ (рис. 2B). Анализ данных подтвердил наличие значительной совместной флуоресценции между точечным инсулином и сигналами SNAPIN, что указывает на совместную локализацию SNAPIN и секреторных гранул инсулина. Мы также использовали клетку Min6 дикого типа для обнаружения субклеточной локализации SNAPIN и обнаружили, что нуклеоцитоплазматическое разделение показало, что SNAPIN преимущественно находится в цитоплазме (рис. 2C).

Рисунок 2 Субклеточная локализация SNAPIN. (А) . Иммунофлуоресценция была проведена для измерения субклеточной локализации SNAPIN. SNAPIN визуализировали в клетках INS-1 и Min6 с использованием антитела против SNAPIN в сочетании с антителом против кролика FITC, тогда как инсулин визуализировали с помощью антител к инсулину и конъюгированных с красным козьих антител против мыши. Слайды устанавливали и флуоресценцию просматривали под лазерным сканирующим конфокальным микроскопом, оснащенным фильтром лазерного возбуждения 488 нм для FITC.Ядра были помечены DAPI (синий) (4ʹ, 6-диамидино-2-фенилиндол), а белок SNAPIN был помечен Alesa Fluor 643 (красный). Шкала шкалы 2 мм. (B) Распределение флуоресценции SNAPIN и инсулина было проанализировано ImageJ. (C) Разделение нуклеоцитоплазмы было выполнено для измерения субклеточной локализации SNAPIN. PARP является ядерным маркером, а HSP60 — цитоплазматическим маркером. SNAPIN в основном находится в цитоплазме.

SNAPIN и его взаимодействующий белок-обогащенный клеточный цикл

SNAPIN в основном находится в цитоплазме, и для выяснения роли SNAPIN в развитии и прогрессировании диабета в этом исследовании использовалась схематическая схема процедуры иммунопреципитации масс-спектрометрии. .Flag-SNAPIN или пустой вектор сверхэкспрессировался в клетках Min6 и подвергался иммунопреципитации с использованием лизатов цельных клеток в трех повторностях. Клетки Min6, экспрессирующие только пустой вектор, служили отрицательным контролем. Чтобы идентифицировать предполагаемые биологические процессы, связанные с белками, взаимодействующими с SNAPIN, мы выполнили анализ обогащения в области генной онтологии (GO) «Биологический процесс» (рис. 3A) и пути KEGG (рис. 3B). Этот анализ идентифицировал клеточный цикл, связанный с ростом клеток.

Рисунок 3 Результаты протеомного анализа белков, измененных по SNAPIN.Идентичность белков, связывающих SNAPIN. Экспериментальный процесс идентификации белков, взаимодействующих с SNAPIN. Клетки Min6 трансдуцировали SNAPIN со специфическими последовательностями, содержащими тег 3xFlag. Полученный клеточный лизат подвергали реакции с шариками-флажками. Связанную фракцию элюировали и отправляли на ЖХ-МС / МС с дробовиком. (A, B) Пути были обогащены для общих генов с использованием базы данных для аннотаций, визуализации и интегрированного обнаружения (DAVID) вер. 6.8, путь KEGG и путь GO, которые представляют функциональные классы белков, взаимодействующих с SNAPIN. (C) Белки, значительно взаимодействующие с SNAPIN, были классифицированы на различные белковые комплексы. (D) IP было выполнено для измерения эффективности раскрытия флага. BLOCS1 был положительным контролем. (E) SNAPIN-связывающие белки были идентифицированы с помощью раскрывающегося списка Flag Immunoprecipitation. Тепловая карта показывает оценку секвестра HT, где интенсивности синим цветом указывают относительное содержание белка в образце.

Иммуноблот-анализ иммунопреципитированных фракций показал, что tagged-SNAPIN был обогащен в раскрывающемся списке (рис. 3C).Напротив, в векторном контроле в раскрывающемся списке не было обнаружено SNAPIN. В некоторых работах ранее было показано, что SNAPIN связывается с Bloc1s1 с помощью иммуноблоттинга (42). Как и ожидалось, Bloc1s1 был обнаружен в текущем исследовании IP-MS (рис. 3C). Эти данные демонстрируют, что меченый SNAPIN может быть эффективно и специфично иммунопреципитирован из клеточных экстрактов.

Белки, значительно взаимодействующие с SNAPIN, были разделены на различные белковые комплексы. Результаты этого анализа идентифицировали двадцать преобладающих комплексов: (1) Nop56p-ассоциированный комплекс пре-рРНК, (2) Большой комплекс Дроша, (3) комплекс CCT (шаперонин, содержащий комплекс TCP1), (4) комплекс SNW1, (5) PA700 комплекс, (6) комплекс сплайсосома C, (7) комплекс CDC5L, (8) сигнальный комплекс TNF-альфа / NF-Kappa B и другие известные комплексы: комплекс BLOC1 (биогенез связанного с лизосомами комплекса органелл1) и комплекс белка Arp2 / 3 (Рисунок 3D).

Наши эксперименты показали, что SNAPIN может влиять на пролиферацию клеток и клеточный цикл, и мы проанализировали пути клеточного цикла, которые тесно связаны с ростом клеток (рис. 3E).

Сверхэкспрессия SNAPIN вызывает пролиферацию β-клеток

SNAPIN и его взаимодействующие белки могут обогатить путь клеточного цикла, что может привести к повышенной клеточной пролиферации. Чтобы напрямую оценить роль SNAPIN в пролиферации β-клеток, мы трансфицировали клетки Min6 лентивирусом в течение 24 часов.MTS-анализ применялся для обнаружения пролиферации клеток. Мы наблюдали значительное увеличение содержания белка SNAPIN в обработанных лентивирусом клетках Min6 с помощью вестерн-блоттинга (рис. 4A). Сверхэкспрессия SNAPIN вызвала пролиферацию β-клеток (фиг. 4B) и увеличила образование клонов клеток Min6 по сравнению с контрольной группой (фиг. 4C). На рисунке 4D показана статистика клонов.

Рисунок 4 Сверхэкспрессия SNAPIN индуцирует пролиферацию β-клеток. Клетки Min6 трансдуцировали неспецифическими и специфичными для SNAPIN последовательностями. (A) Клетки Min6 обрабатывали лентивирусом. Значительное увеличение белка SNAPIN по данным вестерн-блоттинга. (B) Анализ MTS проиллюстрировал пролиферацию клеток Min6, индуцированную после сверхэкспрессии SNAPIN. (C, D) Образование клона показало, что сверхэкспрессия SNAPIN индуцирует пролиферацию β-клеток. (E) Клетки окрашивали окрашиванием PI. Собирали прикрепленные клетки и проводили анализ клеточного цикла с помощью проточной цитометрии. Сверхэкспрессия SNAPIN увеличивала популяцию клеток в S-фазе. (F) Уровни экспрессии белков CyclinD1, CDK2 и CDK4 проверяли вестерн-блоттингом с указанными антителами. (G) Нормализованные гистограммы белка снапина против актина с использованием программного обеспечения для визуализации. * P <0,05, ** P <0,01, **** P <0,0001.

Наши данные MS показали обогащение SNAPIN и его взаимодействующими белками, которые, как известно, регулируют клеточный цикл. Чтобы предоставить прямые доказательства того, что SNAPIN регулирует клеточный цикл, мы трансфицировали клетки Min6 лентивирусом, чтобы количественно определить содержание клеточной ДНК с помощью проточной цитометрии (рис. 4E).По сравнению с контрольной группой сверхэкспрессия SNAPIN привела к увеличению популяции клеток в S-фазе с 6,85% до 27,13%. Мы оценили β-клетки на предмет экспрессии CDK2, CDK4 и CCND1, которые отмечают фазу S клеточного цикла. Все экспрессии CDK2, CDK4 и CCND1 были активированы (фиг. 4F, G ) . Наши результаты показали, что сверхэкспрессия SNAPIN может способствовать пролиферации β-клеток.

Нокдаун SNAPIN подавляет пролиферацию β-клеток

КшРНК лентивируса подавляет SNAPIN и трансфицировали клетки Min6 лентивирусом в течение 24 часов.MTS-анализ применялся для определения разновидности клеток. Мы наблюдали значительное снижение содержания белка SNAPIN в обработанных лентивирусом клетках Min6 с помощью вестерн-блоттинга (рис. 5А). Нокдаун SNAPIN ингибировал пролиферацию β-клеток (фиг. 5B, ), и ингибировал образование клона клеток Min6 по сравнению с таковым в контрольной группе (фиг. 5E). На рисунке 5F показана статистика клонов. Клеточная фотография также показала, что нокдаун SNAPIN может вызвать гибель клеток Min6 (рис. 5G).

Рисунок 5 Нокдаун SNAPIN подавляет пролиферацию β-клеток. (A) Клетки Min6 мыши трансдуцировали лентивирусом, экспрессирующим кшРНК и неспецифические последовательности. Значительное снижение белка SNAPIN по данным вестерн-блоттинга. (B) Анализ MTS показал, что пролиферация клеток Min6 ингибировалась после нокдауна SNAPIN. (C) Click-iT ™ EdU Proliferation Assay показал, что пролиферация клеток Min6 ингибировалась после нокдауна SNAPIN. (D) Статистика интенсивности флуоресценции при 585 нм. (E) Образование клона показало, что нокдаун SNAPIN ингибировал пролиферацию β-клеток. (F) Статистика образования клонов. (G) Клеточная фотография показывает, что клетки Min6 погибают в результате нокдауна SNAPIN. (H) Клетки окрашивали окрашиванием PI. Собирали прикрепленные клетки и проводили анализ клеточного цикла с помощью проточной цитометрии. Нокдаун SNAPIN приводил к снижению популяции клеток в S-фазе. (I) Уровни экспрессии белков CyclinD1, CDK2 и CDK4 проверяли вестерн-блоттингом с указанными антителами. (J) Нормализованные гистограммы белка снапина против актина с использованием программного обеспечения для визуализации. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001, **** P <0,0001.

Мы также количественно определили содержание клеточной ДНК с помощью проточной цитометрии (рис. 5H ) . По сравнению с контрольной группой, нокдаун SNAPIN привел к снижению популяции клеток в S-фазе с 47% до 40% и 42,25%. Мы оценили β-клетки на предмет экспрессии CDK2, CDK4 и CCND1, которые отмечают фазу G1 / S клеточного цикла.Экспрессия CDK2, CDK4 и CCND1 подавлялась (рис. 5I, J ) . Click-iT ™ EdU Proliferation Assay измеряет пролиферацию β-клеток (рис. 5C). статистика интенсивности флуоресценции в 585 нм (рис. 5D). Наши результаты показали, что нокдаун SNAPIN может ингибировать пролиферацию β-клеток.

Нокдаун SNAPIN вызывает апоптоз β-клеток

Апоптоз — это особый способ запрограммированной гибели клеток (43). Неправильный апоптоз может вызывать множество заболеваний, поэтому регулирование апоптоза имеет большой терапевтический потенциал (44).Как субстрат каспазы 3, PARP расщепляется во время инициации программы апоптоза (45). Итак, расщепленный PARP — это сигнатурный белок апоптоза. Чтобы изучить влияние SNAPIN на апоптоз β-клеток, мы использовали shRNA, чтобы препятствовать экспрессии SNAPIN, и детектировали апоптоз клеток на основе окрашивания аннексином V-FITC / PI. Доля апоптотических клеток в контрольной группе составляла 10,32%, а доля апоптотических клеток после интерференции SNAPIN составляла 50,1% (Фигуры 6A, B ) . Этот результат показал, что вмешательство в экспрессию SNAPIN индуцировало апоптоз клеток.мы также проанализировали уровень экспрессии PARP и SNAPIN (Фигуры 6C, D ) .

Рисунок 6 Нокдаун SNAPIN вызывает апоптоз β-клеток. (A) Анализ апоптоза показывает, что апоптоз β-клеток индуцировался после нокдауна SNAPIN. (B) Статистика для FITC и PI апоптотических β-клеток. (C) Клетки Min6 мыши трансдуцировали лентивирусом, экспрессирующим shРНК и неспецифические последовательности. Значительное снижение экспрессии SNAPIN. (D) Нокдаун SNAPIN индуцировал расщепление PARP апоптотического маркерного белка. **** P <0,0001.

SNAPIN Knockdown Inhibit Insulin Уровень белка / мРНК

Для того, чтобы оценить влияние SNAPIN на уровень мРНК инсулина, мы использовали shRNA для подавления SNAPIN и трансфицировали клетки Min6 лентивирусом в течение 24 часов. Мы наблюдали значительное уменьшение количества мРНК SNAPIN в обработанных лентивирусом клетках Min6 с помощью анализа QPCR (рис. 7A). Полученные инсулином INS1 и INS2 ингибировались после нокдауна SNAPIN (Фигуры 7B, C ) .Мы также трансфицировали клетки Min6 лентивирусом для количественного определения уровня мРНК инсулина. Мы наблюдали увеличение количества мРНК SNAPIN в клетках Min6, обработанных лентивирусом, с помощью анализа QPCR (фигура 7D), а инсулин показал лишь небольшое увеличение (фигуры 7E, F ) .

Рисунок 7 SNAPIN влияет на мРНК инсулина и уровни белка. (A) Эффективность нокдауна SNAPIN в β-клетках. (B, C) Нокдаун SNAPIN подавляет экспрессию мРНК инсулина в β-клетках. (D) Эффективность сверхэкспрессии SNAPIN в β-клетках. (E, F) Сверхэкспрессия SNAPIN увеличивала экспрессию мРНК инсулина в β-клетках. QPCR выполняли для измерения экспрессии мРНК инсулина. Данные представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение, n = 3. (G) Нокдаун SNAPIN подавляет экспрессию белка инсулина в клетках INS1. Секреция инсулина, индуцированная глюкозой, измеренная с помощью ELISA. (H) Нокдаун SNAPIN подавляет экспрессию белка инсулина в клетках Min6. Клетки INS1 трансдуцировали лентивирусом, экспрессирующим shRNA, который давал GFP. Вектор был Psicor-GFP.Уровни экспрессии белка инсулина измеряли с помощью иммунофлуоресценции. Ядра метили DAPI (синий) (4ʹ, 6-диамидино-2-фенилиндол), белок инсулина метили Alesa Fluor 643 (красный), а shSNAPIN метили GFP (желтовато-зеленый). ** P <0,01, **** P <0,0001.

Клетки Min6 обрабатывали двумя shРНК для вмешательства в SNAPIN. Секрецию инсулина, индуцированную глюкозой, измеряли с помощью ELISA. Клетки Min6 стимулировали растворами глюкозы 2,8 ммоль / л и 16,7 ммоль / л в течение 2 часов, и супернатант собирали для определения содержания инсулина.После вмешательства SNAPIN экспрессия инсулина снизилась (рис. 7G). Затем мы обработали клетки INS1 двумя shРНК, чтобы вмешаться в SNAPIN, и детектировали инсулин с помощью иммунофлуоресценции. SNAPIN визуализировали с помощью GFP, а инсулин визуализировали с использованием антиинсулиновых антител в сочетании с козьим антимышиным cy3. Секреция инсулина снижалась при отключении SNAPIN (фигура 7H).

Обсуждение

Сахарный диабет — очень распространенное нарушение обмена веществ, его острые и хронические осложнения серьезно влияют на здоровье человека (46).Β-клетки поджелудочной железы — единственные клетки, которые могут вырабатывать инсулин в организме человека. Когда β-клетки становятся дисфункциональными, организм не может производить достаточно инсулина для поддержания стабильности глюкозы в крови, и длительная гипергликемия организма вызывает множественную дисфункцию органов (47). Скорость репликации β-клеток очень низкая, и ученые пытались вызвать дифференцировку β-клеток из клеток-предшественников, стволовых клеток или из других линий островковых клеток, но клинический прогресс все еще очень затруднен.Многие ученые пытаются идентифицировать небольшие молекулы или биомакромолекулы, которые могут побуждать β-клетки к саморепликации. Однако не существует эффективного лекарства, которое могло бы эффективно индуцировать репликацию β-клеток. Поэтому важно найти новые терапевтические цели и новые терапевтические методы лечения диабета.

Первоначально сообщалось, что SNAPIN является белком, связанным с SNAP25, который в основном взаимодействует с комплексами SNARE для транспорта везикул и регуляции секреции инсулина (29). Мы сравнили аминокислотные последовательности SNAPIN у людей, мышей и крыс, и SNAPIN является высококонсервативным и гомологичным, что позволяет предположить, что SNAPIN выполняет очень согласованные биологические функции у людей, мышей и крыс.Мы извлекали различные ткани мышей разного возраста. SNAPIN был в изобилии в поджелудочной железе, и его экспрессия увеличивается с возрастом мышей, что может указывать на то, что SNAPIN связан с развитием поджелудочной железы. Однако необходимы дополнительные эксперименты, чтобы подтвердить это, мы можем извлечь островки мышей разного гестационного возраста, чтобы вмешиваться или сверхэкспрессировать SNAPIN, чтобы исследовать функцию SNAPIN в развитии островков. SNAPIN значительно коррелирует с геном TMEM27, который кодирует мембранный белок, который расщепляется и выделяется β-клетками поджелудочной железы, и этот белок был предложен в качестве биомаркера качества β-клеток (33).Это предполагает, что SNAPIN также может быть биомаркером β-клеток.

Кроме того, мы использовали SNAPIN в качестве приманки для обнаружения белков, взаимодействующих с SNAPIN, и были обогащены различные белковые комплексы, включая BLOC1, BORC, Arp2 / 3, Dynactin Complex.Snap23, Snap47 и другие члены семейства SNAP, описанные в статье, которые взаимодействуют с SNAPIN. Мы проверяем наши результаты, используя Bloc1s1 в качестве положительного контроля. Белки с высокими оценками были проанализированы с помощью Metascope и дополнительно обогащены путем BO / KEGG. Мы обогатили BLOC1 / BORC, который является членом семейства SNAPIN, и клеточный цикл и процессинг белка в эндоплазматическом ретикулуме и т. Д. Могут дополнительно изучить механизм.По результатам обогащения KEGG мы обнаружили изменения в основных белках пути UPR. Результаты нашего эксперимента показывают, что SNAPIN влияет на клеточный цикл Min6 и уровень маркеров клеточного цикла. Мы продолжим изучать, регулирует ли SNAPIN пролиферацию β-клеток, взаимодействуя с белком, связанным с клеточным циклом, в последующих исследованиях.

Как единственный глюкозоснижающий гормон в организме, инсулин также может способствовать росту тела (48). Наше исследование показывает, что SNAPIN может способствовать секреции инсулина, что согласуется с другими сообщениями (25).Мы обнаружили, что SNAPIN способствует росту β-клеток, и еще предстоит выяснить, является ли этот эффект стимулирования роста за счет SNAPIN или из-за увеличения секреции инсулина.

В заключение мы показали, что избыточной экспрессии SNAPIN достаточно, чтобы вызвать пролиферацию β-клеток. Поэтому мы можем попытаться разработать агонисты для последовательности SNAPIN в качестве нового средства лечения диабета. Это огромная проблема, но она может дать новые стратегии лечения диабета. В более широкой перспективе сверхэкспрессия SNAPIN, способствующая пролиферации клеток, может открыть новое направление исследований в области регенерации тканей.

Наконец, важно подчеркнуть, что существует множество методов лечения, помимо пролиферации В-клеток. Например, многие из путей, активирующих пролиферацию, также активируют пути выживания, что является еще одной важной терапевтической целью. Кроме того, экспансия β-клеток может быть достигнута с помощью других подходов, в частности, повторной дифференцировки β-клеток и транс-дифференцировки от α- или d-клеток к β-клеткам (49, 50). Конечно, создание новых β-клеток также требует эффективного решения проблемы аутоиммунитета.Все это важные, плодородные и активные области терапевтических исследований β-клеток.

Заявление о доступности данных

Данные, представленные в исследовании, хранятся в репозитории PRIDE, номер доступа PXD023786.

Заявление об этике

Исследование на животных было рассмотрено и одобрено Комитетом по уходу и использованию животных Университета Сямэнь. Письменное информированное согласие было получено от владельцев на участие их животных в этом исследовании.

Вклад авторов

MJ спроектировал и провел эксперименты, проанализировал данные и составил рукопись.ZK разработал и провел эксперименты и проанализировал данные. WW, WL и JC разработали и разработали эксперименты, проанализировали и интерпретировали данные и отредактировали рукопись. Все авторы прочитали и одобрили рукопись. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Эта работа была поддержана грантами Китайского фонда естественных наук (81471081, WW,

114, 81761128015, 81861130370, 31871319, WL), Фонда естественных наук провинции Фуцзянь, Китай (2019J01010, WW), Сямынь Научно-технический проект (3502Z20194037, WW) и Научно-исследовательский фонд передовых талантов, Больница Сянъань Университета Сямэнь (PM20180

05, WW).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы благодарят Мин Ю Ли за техническую помощь мышам db / db и мышам HFD в этом исследовании. Плазмида Psicor-GFP была подарком Туан Лао Ванга.

Ссылки

1. Wu X, Liang WW, Guan HY, Liu J, Liu LH, Li H, et al.Эксендин-4 способствует пролиферации бета-клеток поджелудочной железы путем ингибирования экспрессии Wnt5a. Эндокринная (2017) 55 (2): 398–409. doi: 10.1007 / s12020-016-1160-x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

2. Chen CG, Cohrs CM, Stertmann J, Bozsak R, Speier S. Масса и функция бета-клеток человека при диабете: последние достижения в знаниях и технологиях для понимания патогенеза заболеваний. Mol Metab (2017) 6 (9): 943–57. DOI: 10,1016 / мольметр.2017.06.019

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

3. Ван Р, Муньос Э., Чжу С., МакГрат Британская Колумбия, Кавенер Д. Дозировка гена Perk регулирует гомеостаз глюкозы, модулируя функции бета-клеток поджелудочной железы. PloS One (2014) 9 (6): e99684. doi: 10.1371 / journal.pone.0099684

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

5. Ван П., Альварес-Перес Дж. К., Фельзенфельд Д. П.. Индукция репликации бета-клеток поджелудочной железы человека ингибиторами киназы, регулируемой тирозином двойной специфичности. Nat Med (2015) 21: 383–8. DOI: 10,1038 / нм.3820

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

9. Симмонс Р.А., Темплтон Л., Ниу Х. Замедление внутриутробного развития у крыс приводит к снижению пролиферации и увеличению апоптоза В-клеток. Pediatr Res (1999) 45 (4): 62a – a. doi: 10.1203 / 00006450-199

0-00374

CrossRef Полный текст | Google Scholar

10. Дадон Д., Торновский-Бабай С., Фурт-Лави Дж., Бен-Цви Д., Зив О., Шир-Бен-Харуш Р.Метаболизм глюкозы: ключевой эндогенный регулятор репликации и выживания β-клеток. Диабет, ожирение, метаболизм (2012) 14: 101–8. doi: 10.1111 / j.1463-1326.2012.01646.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

11. Столович-Рейн М., Хиджа А., Гримсби Дж., Глейзер Б., Дор Ю. Бета-клетки поджелудочной железы у очень старых мышей сохраняют способность к компенсаторной пролиферации. J Biol Chem (2012) 287 (33): 27407–14. doi: 10.1074 / jbc.M112.350736

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

12.Ямамото Дж., Имаи Дж., Изуми Т., Такахаши Х., Кавана Ю. Нейронные сигналы регулируют индуцированную ожирением пролиферацию β-клеток с помощью механизма, зависимого от FoxM1. Нац Коммун (2017) 8: 1930. DOI: 10.1038 / s41467-017-01869-7

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

14. Лу Б., Муньос-Гомес М., Икеда Ю. Две основные изоформы глюкокиназы демонстрируют сохраненную функциональность в β-клетках, несмотря на различное внутриклеточное распределение. Biol Chem (2018) 399 (6): 565–576. DOI: 10.1515 / hsz-2018-0109

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

16. Дай К., Ханг Й., Шостак А. Возрастная пролиферация бета-клеток человека, вызванная глюкагоноподобным пептидом 1 и передачей сигналов кальциневрина. J Clin Invest (2017) 127 (10): 3835–44. doi: 10.1172 / JCI

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

18. Тивари С., Роэл С., Уиллс Р., Казинелли Дж., Танвир М., Такане К.К. и др. Ранние и поздние циклины G1 / s и Cdks действуют комплементарно, усиливая подлинную пролиферацию и рост бета-клеток человека. Диабет (2015) 64 (10): 3485–98. doi: 10.2337 / db14-1885

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

19. Nguyen-Tu MS, da Silva Xavier G, Leclerc I., Rutter GA. Ген фактора транскрипции-7-подобный 2 (TCF7L2) действует ниже киназы Lkb1 / Stk11, чтобы контролировать передачу сигналов mTOR, рост бета-клеток и секрецию инсулина. J Biol Chem (2018) 293 (36): 14178–89. doi: 10.1074 / jbc.RA118.003613

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

22.Hartwig C, Monis WJ, Chen X. Механизмы нервного развития, первичные реснички и эндосомы сходятся в комплексах BLOC-1 и BORC. Dev Neurobiol (2018) 78 (3): 311–30. doi: 10.1002 / dneu.22542

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

23. Чжоу Б., Цай Ц., Се И, Шэн З.-Х. Snapin привлекает динеин к сигнальным эндосомам BDNF-TrkB для ретроградного транспорта аксонов и необходим для роста дендритов кортикальных нейронов. Cell Rep (2012) 2 (1): 42–51.doi: 10.1016 / j.celrep.2012.06.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

24. Чжоу Б., Чжу И-Б, Линь Л., Цай Ц., Шэн Ц. Дефицит Snapin связан с пороками развития центральной нервной системы. Biosci Rep (2011) 31 (2): 151–8. doi: 10.1042 / BSR20100110

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

25. Сонг В.Дж., Сешадри М., Ашраф Ю., Мдлули Т., Мондал П., Кейл М. и др. Snapin опосредует действие инкретина и увеличивает глюкозозависимую секрецию инсулина. Cell Metab (2011) 13 (3): 308–19. doi: 10.1016 / j.cmet.2011.02.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

27. Somanath S, Partridge CJ, Marshall C. Snapin опосредует стыковку секреторных гранул инсулина, но не образование комплекса Trans-SNARE. Biochem Biophys Res Commun (2016) 473 (2): 403–7. doi: 10.1016 / j.bbrc.2016.02.123

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

28. Yu SC, Klosterman SM, Martin AA, Gracheva EO, Richmond JE.Дифференциальная роль снапина и синаптотагмина в цикле синаптических пузырьков. PloS One (2013) 8 (2): e57842. doi: 10.1371 / journal.pone.0057842

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

31. Такур П., Стивенс Д. Р., Шенг З. Х., Реттиг Дж. Эффекты PKA-опосредованного фосфорилирования Snapin на синаптическую передачу в культивируемых нейронах гиппокампа. J Neurosci (2004) 24 (29): 6476–81. doi: 10.1523 / JNEUROSCI.0590-04.2004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

32.Фукуи К., Ян К., Цао И, Такахаши Н. Целевой коллектрин HNF-1 контролирует экзоцитоз инсулина путем образования комплекса SNARE. Cell Metab (2005) 2 (6): 373–84. doi: 10.1016 / j.cmet.2005.11.003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

33. Альтирриба Дж., Гаса Р., Касас С., Рамирес-Бахо М.Дж., Рос С., Гутьеррес-Далмау А. и др. Роль трансмембранного белка 27 (TMEM27) в физиологии островков и его потенциальное использование в качестве биомаркера массы бета-клеток. Диабетология (2010) 53 (7): 1406–14.doi: 10.1007 / s00125-010-1728-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

34. Gao WW, Xiao RQ, Zhang WJ, Hu YR, Peng BL, Li WJ, et al. Jmjd6 лицензирует Eralpha-зависимый энхансер и активацию кодирующего гена путем модуляции рекрутирования комплекса соактиваторов CARM1 / MED12. Mol Cell (2018) 70 (2): 340–357 e8. doi: 10.1016 / j.molcel.2018.03.006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

35. Peng BL, Li WJ, Ding JC, He YH, Ran T, Xie BL, et al.Стратегия гиперметилирования, используемая связанным с энхансером CARM1 для стимулирования альфа-зависимой транскрипционной активации эстрогенового рецептора и канцерогенеза молочной железы. Theranostics (2020) 10 (8): 3451–73. DOI: 10.7150 / thno.39241

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

37. Канехиса М., Фурумичи М., Танабе М., Сато Й., Моришима К. КЕГГ: новые взгляды на геномы, пути развития, болезни и лекарства. Nucleic Acids Res (2017) 45 (D1): D353–61. DOI: 10.1093 / nar / gkw1092

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

38. Юань X, Шань Y, Zhao Z, Chen J, Cong Y. Взаимодействие между Snapin и рецептором G-CSF. Цитокин (2006) 33: 219e225. doi: 10.1016 / j.cyto.2006.01.008

CrossRef Полный текст | Google Scholar

39. Ван Г, Рен Г, Цуй Х, Лу Зи, Ма Й, Ци Й и др. Snapin белка-хозяина взаимодействует с цитомегаловирусом человека pUL130 и влияет на репликацию вирусной ДНК. J Biosci (2016) 41 (2): 173–82.doi: 10.1007 / s12038-016-9604-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

41. Бакстон П., Чжан XM, Уолш Б., Шриратана А., Шенберг И., Маникам Э. и др. Идентификация и характеристика снапина как повсеместно экспрессируемого SNARE-связывающего белка, который взаимодействует с SNAP23 в ненейрональных клетках. Biochem J (2003) 375: 433-40. DOI: 10.1042 / Bj20030427

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

42. Старчевич М., Dell’Angelica EC.Идентификация Snapin и трех новых белков (BLOS1, BLOS2 и BLOS3 / снижение пигментации) как субъединиц биогенеза комплекса-1 связанных с лизосомами органелл (BLOC-1). J Biol Chem (2004) 279 (27): 28393-401. doi: 10.1074 / jbc.M402513200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

43. Формигли Л., Папуччи Л., Тани А., Скьявоне Н., Темпестини А., Орландини Г. Е. и др. Апонекроз: морфологическое и биохимическое исследование синкретического процесса клеточной смерти, разделяющей апоптоз и некроз. J Cell Physiol (2000) 182 (1): 41–9. doi: 10.1002 / (SICI) 1097-4652 (200001) 182: 1 <41 :: AID-JCP5> 3.0.CO; 2-7

PubMed Реферат | CrossRef Полный текст | Google Scholar

48. Менон Р.К., Сперлинг М.А. Инсулин как фактор роста. Endocrinol Metab Clinics North America (1996) 25 (3): 633–. doi: 10.1016 / S0889-8529 (05) 70344-3

CrossRef Полный текст | Google Scholar

49. Bensellam M, Jonas JC, Laybutt DR. Механизмы дифференцировки бета-клеток при диабете: последние результаты и направления будущих исследований. J Эндокринол (2018) 236 (2): R109–43. doi: 10.1530 / JOE-17-0516

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

50. Talchai C, Xuan S, Lin HV, Sussel L, Accili D. Дедифференцировка бета-клеток поджелудочной железы как механизм отказа бета-клеток при диабете. Ячейка (2012) 150 (6): 1223–34. doi: 10.1016 / j.cell.2012.07.029

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Педикулез в дау санпин. Новый санпин для профилактики педикулеза.Vii. Меры по профилактике гельминтозов, передаваемых через рыбу, ракообразных, моллюсков, земноводных, рептилий и продукты их переработки

Сегодня, когда наука и технологии развиваются семимильными шагами, появляются новые возможности в лечении и профилактике смертельных заболеваний. Вопрос о распространенности вшей в дошкольных учреждениях и школах по-прежнему стоит на повестке дня. Принят на вооружение новый Санпин от головных вшей 2016 года.

Согласно СанПиН 3.2.3215-14 с поправками на 15 и 16 лет профилактика состоит из:

  • обследований населения, которые должны проводиться согласно утвержденному плану;
  • обеспечение всех дошкольных организаций (детские сады и детские дома, детские дома и стационарные организации, берущие на себя функцию обеспечения отдыха и оздоровления детей) дополнительным комплектом постельного белья, средствами личной гигиены, а также необходимыми моющими и дезинфицирующими средствами;
  • поставка технических устройств для дезинфекции и дезинфекции в организации, занимающиеся лечением и профилактикой больных, приемно-распределительные пункты, учреждения систем социальной защиты, тюрьмы, ночлежки, центры временного содержания мигрантов, санитарно-пропускные пункты, прачечные и бани.

Три вида вшей могут питаться человеческой кровью:

  • При появлении зуда место укуса расчесывается до кровотечения;
  • кожа затвердевает за счет действия слюны во время;
  • изменил цвет кожи из-за незначительных кровоизлияний и воспалений;
  • Волосы со следами гноя запутываются, кожа превращается в корку, под которой скапливается жидкость.

При обследовании у моего ребенка в школе обнаружили головные вши.Пока нам это не удалось, ему не разрешили учиться. С этим полностью согласен. Я чувствую себя виноватым, что не заметила вшей после того, как ребенок вернулся из оздоровительного лагеря.

Галина, Кировоград


Распоряжение о головных вшах, разосланное школам, представляет собой инструкцию о том, как действовать медицинскому работнику … Во время общения с родителями больного ученика медицинский работник обязан дать все необходимые рекомендации по профилактике и лечению:

  • как обращаться с ребенком;
  • как правильно выносить вещи и спальные места в том месте, где проживает ученик.

Лечение болезни

Если поражение насекомыми не очень сильное, то можно механически использовать тонкую расческу или подстричь (сбрить) волосы. Волосы вместе с насекомыми и гнидами сжигаются.


При обнаружении инфицированных лобковых вшей их направляют в дерматовенерологический диспансер, расположенный на территории их проживания.

  • обязательное и регулярное мытье тела;
  • смена белья и постельного белья каждые 7-10 дней;
  • стрижка
  • с использованием только вашей личной расчески для ухода за волосами;
  • стирка белья, постельных принадлежностей
  • регулярная уборка дома, всех комнат и прилегающих территорий;
  • постоянное поддержание чистоты всей окружающей обстановки.

Постоянно проверяю голову ребенка, приучила его пользоваться только моей личной расческой и никому не давать и не брать у других детей. Пока с такой проблемой как вши не сталкивались

Екатерина, Орёл

Надо рассказать подрастающему поколению об опасности, которая таится в таких, казалось бы, мелких и безобидных насекомых. Распечатайте тематические брошюры, информационные листы, проведите обучающие мероприятия по профилактике, которые наглядно покажут, как выглядят вши и как с ними можно и нужно бороться.Только такое широкое наступление по всем направлениям даст положительный и быстрый результат в борьбе с этой болезнью, которая пришла к нам с начала двадцатого века и до сих пор преследует двадцать первое.

Как правило, вши появляются из-за неопрятности людей, особенно когда им тесно. Заражение может произойти как при непосредственном контакте с больными головными вшами, так и при совместном использовании предметов домашнего обихода и вещей (головных уборов, гребней, постельного белья, полотенец и т. Д.).

и др.). Вши не боятся воды, отлично плавают и бегают.

Эти насекомые могут преодолеть расстояние в 20 см менее чем за секунду.

Прокалывая его хоботком, насекомое вводит в рану особый секрет слюнных желез, вызывающий длительный зуд и раздражение кожи.

Это заболевание известно многим родителям маленьких детей, если ребенок ходит в бассейн, начальную школу или детский сад. Головные вши — это дерматологическое заболевание кожи головы, вызываемое вшами.

Ребенок может чесать кожу головы, пока она не превратится в твердые раны. Области обильных поражений — это область за ушами, висками и затылком.

Они могут выделять в кровоток вещество, вызывающее аллергию. Гниды очень плотно прилегают к основанию волос.

Узнайте, какие меры необходимо предпринять, чтобы обезопасить ребенка от головных вшей.

Причины возникновения

Лишайник передается следующими путями:

  • при контакте с больным человеком;
  • в сауне, бассейне и других помещениях с повышенной влажностью; в таких условиях особенно быстро размножаются возбудители болезней;
  • при использовании чужих средств личной гигиены, предметов общего пользования (лестничные перила, поручни в метро).

Ребенок тоже может заразиться от больного животного. Но если у ребенка сильная иммунная система, заражение может и не произойти. Проблема в том, что иммунитет большинства детей ослаблен многими факторами, поэтому организм становится более восприимчивым к болезнетворным микробам.

Классификация

Лишайник — общее название целой группы болезней, преимущественно грибкового характера.

Существует два основных варианта отделения данной патологии. Первая классификация основана на площади, пораженной грибком.Заболевание этого типа делится на три варианта:

  • микроспория гладкой кожи;
  • волосистой части головы;
  • повреждения ногтевых пластин (крайне редко).

Врачи выявляют еще 3 формы патологии, которые классифицируются по типу возбудителя, спровоцировавшего развитие болезни:

Карантин с лишением детского сада и школы составляет не менее 45 дней. В этом случае все дети из школы (детского сада) в течение следующих 5 дней проходят обязательное обследование у дерматолога.Если заболевают несколько малышей, карантин продлевается. Помещения заведения полностью продезинфицированы, мягкие игрушки выброшены, ковры тщательно очищены.

Больничный лист прекращается только после исчезновения у ребенка внешних признаков заболевания. Также решающую роль играют исследования грибков под лампой Вуда. Этот тест проводится 3 раза и каждый раз должен быть отрицательным.

Наиболее подвержены головным вшам дети, гораздо реже они заражаются вшами.Педикулез быстро распространяется среди детей в возрасте 4-11 лет. Заболевание передается в детских коллективах от ребенка к ребенку при тесном контакте, через личные вещи во время игр и драк.

Профилактика в домашних условиях

Педикулез чаще всего диагностируется у детей, так как они находятся в тесном контакте друг с другом и не могут самостоятельно принимать надлежащие меры предосторожности. Ответственность за здоровье ребенка лежит на родителях и, в определенной степени, на администрации детских садов и школ.

Вши доставляют детям большой дискомфорт, поэтому их симптомы очень выражены. Малыш практически не перестает чесать пораженные участки и тем самым способствует более быстрому размножению насекомых.

За профилактикой педикулеза в детском саду нужно следить с особой тщательностью, так как дети в силу возраста практически не могут соблюдать правила личной гигиены без помощи взрослых. В отношении администрации законом установлены строгие правила, а именно:

Продолжительность этой стадии зависит от типа грибка, вызвавшего микроскопию.Например, геофильные и зоофильные споры развиваются в течение 5-14 дней. Если антропофильные формы грибка попадут под кожу, то инкубационный период продлится дольше — 4-6 недель. Как правило, заражение происходит от больных животных, поэтому заболевание проявляется у человека через 1-2 недели.

Определение лечебной тактики для ребенка возможно только после записи на прием к врачу и диагностики заболевания. Если поражена только гладкая кожа, то достаточно местных противогрибковых препаратов (растворов, мазей, кремов, спреев).

Эти лекарства применяют до полного исчезновения высыпаний. Если патология затронула кожу головы, то тактика терапии меняется.

Требуется системная терапия противогрибковыми средствами и лекарствами местного действия. Из общих рекомендаций можно выделить следующие моменты:

  1. На гладкой коже нужно сбривать волосы 1 раз в неделю, можно использовать пластыри с гризеофульвином.
  2. При локализации на коже головы, перед лечением нужно сбрить волосы с пораженного участка.Повторяйте эту процедуру 2 раза в неделю до полного выздоровления.
  3. Голову лучше мыть специальным аптечным шампунем, содержащим кетоконазол, повидон йод, сульфид селена или дегтярное мыло

Препараты для внутреннего применения для детей

Существуют разные виды лекарств для лечения этого недуга. Целесообразность их применения должен определять врач, исходя из типа заболевания, стадии и индивидуальных особенностей ребенка. Наиболее оптимальными считаются следующие варианты:

  • препаратов тербинафина;
  • Ламизил;
  • Trebizil.

Если нет противопоказаний, то предпочтительным считается первый вариант. Дозировка определяется врачом в зависимости от массы тела ребенка. Существуют следующие рекомендации по дозировке тербинафина:

  • 10-20 кг — от 125 мг таблеток препарата;
  • 20-40 кг — 1,5 таблетки по 125 мг;
  • свыше 40 кг — 2 таблетки.

Препараты для местной терапии

Необходимо использовать лекарственные средства для наружного (местного) применения.Наружное лечение необходимо как для гладкой кожи, так и для кожи головы. Как правило, назначают следующие препараты:

  • Залаин;
  • Травоген;
  • изоконазол;
  • Травокорт;
  • Тербизил;
  • мазь серно-дегтярная;

Кроме противогрибковых мазей, йода можно применять народные рецепты. Пораженные участки нужно обрабатывать ежедневно утром и вечером.

Например, после пробуждения смазать настойкой йода, а перед сном нанести слой мази Ламизил.Если заболевание дошло до стадии сильного воспаления, то на 3-5 дней для начальной терапии назначается местная гормональная мазь Травокорт, обладающая мощным действием на возбудителя.

Применяйте продукт один раз в день.

Для исключения заражения нужна профилактика вшей у детей, меры профилактики … При отправке ребенка в лагерь, общественный кружок следует вести беседу в семье.

Объясните, что вши — переносчики опасных инфекций.Запретите девушке, особенно с длинными волосами, пользоваться чужими гребнями и объясните, почему другим нельзя позволять пользоваться их гребнями.

  • появился зуд и место укуса расчесывают до кровотечения;
  • кожа затвердевает из-за действия слюны при укусах вшей;
  • изменил цвет кожи из-за незначительных кровоизлияний и воспалений;
  • Волосы со следами гноя запутываются, кожа превращается в корку, под которой скапливается жидкость.

Симптомы

Симптомы инфекции:

  1. Голова чешется.После расчесывания появляется припухлость, а после язвочки.
  2. Если вы посмотрите на кожу, вы найдете укусы насекомых. Проколы, покраснение кожи вокруг места укуса, есть небольшие участки серо-голубого или серого цвета.
  3. На затылке и висках сразу за ушами появляются бляшки, которые отслаиваются.

Диагностика

Диагностика основывается на визуальном осмотре участков поражения врачом с использованием люминесцентной лампы. Если специалист не уверен, то для подтверждения, для точного определения типа возбудителя назначают обследование под микроскопом и исследование посева.

Используя лампу Вуда в темной комнате, врач осматривает поражение. Участки, пораженные болезнью, начинают мерцать ярко-зеленым цветом.

Этот фен до конца не изучен, но это один из самых быстрых способов диагностики микроспории. Для лабораторных исследований врач аккуратно соскребает чешуйки скальпелем и передает материал для исследования под микроскопом. Перед процедурой необходимо обработать пораженное место 96% спиртом.С гладкой кожи берутся только чешуйки, а с волосистой части нужны еще и фрагменты волос.

Собранный материал помещают под предметное стекло, капают 20% гидроксид калия, через 30 минут результат уже можно увидеть под микроскопом. В чешуях можно увидеть нити мицелия, а на поверхности волоса имеется большое количество спор, которые, как маленькие шарики, прикрепляются к нему по всему внешнему периметру. Это становится причиной того, что волосы не имеют четкой границы, они более размытые.

Посевной метод диагностики необходим при положительном результате после люминесцентного и микроскопического исследования для определения типа грибка. Это поможет определить наиболее эффективную тактику лечения. Чешуйки, собранные с пораженного участка, помещают в питательную среду. При наличии грибка колония разрастается в виде диска с пухом.

Действия после заражения

Карантин от головных вшей в школе по решению администрации длится не более недели.Если в процесс вовлечена государственная СЭС, они могут закрыть школу до тех пор, пока ситуация полностью не нормализуется.

Куда деваться после заражения ребенка в школе — вопрос крайне актуальный. Поскольку многие родители просто лечат ребенка, не привлекая лишнего внимания.

Интересно! Классный руководитель должен известить всех родителей о ситуации. Чтобы провести профилактику педикулеза, не допустили распространения болезни. На практике это не всегда так.Родители зараженного ребенка проводят лечение втихаря, родители остальных детей узнают об угрозе совершенно случайно.

Лечение болезни

Рекомендуется использовать современные препараты от вшей. Продается в аптеке в виде шампуня, спрея, раствора. При правильном подходе вывести вшей можно за 1 процедуру, но для закрепления результата повторная обработка проводится через 14 дней.

Препараты от вшей — Педилин, Хигия, Ньюда.Специальные средства- Чемеричная вода, бензилбензоатная эмульсия. Перед применением любого препарата необходимо провести тест на чувствительность. Избавьтесь от гнид, расчесав их. Купите специальную расческу с мелкими зубьями, если в ее составе нет средства от головных вшей.

Примечание! Современные средства правовой защиты действуют быстро, безопасны для здоровья. Пользоваться легко, процедура длится не более 30 минут. Бороться с вшами народными средствами уйдет гораздо дольше. Чтобы уберечь ребенка от лишних эмоций, лучше сразу использовать профессиональные препараты.

Дома надо лечить со всеми живущими под одной крышей, проводить генеральную уборку. Детское заболевание легко передается взрослым.

Если заражение насекомыми не очень серьезное, то вы можете механически вычесать вшей и их яйца тонкой расческой или подстричь (сбрить) волосы. Волосы вместе с насекомыми и гнидами сжигаются.

От вшей проводится термообработка: белье кипятят и гладят горячим утюгом. Если такой возможности нет, то вещи обрабатывают в специальных дезинфекционных камерах.

Наличие головных вшей не пощадило нашу участь. Этих вшей ребенок принес из детского сада, поделилась новостью воспитатель. Чего я только не делал: вычесывал и использовал керосин. Посоветовали купить Медифокс. Может, все в комплексе помогло, но мы вылечили вшей. Татьяна, Владимир

Для лечения данной формы патологии часто назначают гризеофульвин. Это антибиотик, который вырабатывается плесенью.

Средства выпускаются в форме таблеток (125 мг) и принимают препарат ежедневно в 3-4 приема после или во время еды вместе с чайной ложкой растительного масла.Эта мера нужна для увеличения растворимости средства, увеличения времени его действия.

Микроспорию кожи головы у детей до 3 лет желательно лечить суспензией гризеофульвина.

Необходимо проводить терапию непрерывно, пока исследования не покажут отрицательный результат на грибы. После этого еще 2 недели придерживайтесь той же дозировки препарата, а затем принимайте его 2 раза в неделю еще 14 дней.

Курс лечения от 1 до 2 месяцев, волосы нужно сбривать каждые 7 дней, волосы мыть — 2 раза в неделю.Дополнительно необходимо использовать любую противогрибковую мазь (втирать в поверхность головы).

Гризеофульвин имеет ряд побочных эффектов:

  • аллергические высыпания;
  • головная боль;
  • дискомфорт в поджелудочной железе;

Нельзя назначать этот препарат ребенку, если он перенес гепатит, страдает патологией печени и почек, язвенными недугами, болезнями крови и невритом. При необходимости можно использовать альтернативу гризеофульвину — Ламизил (тербинафин).

Препарат применяется в форме таблеток в дозировке 125 и 150 г. Дозировка средства устанавливается в соответствии с массой тела, принимать медикамент нужно один раз в сутки.

Средства профилактики

Педикулез гораздо чаще встречается у детей, чем у взрослого населения. Поэтому профилактика педикулеза у детей имеет особое значение. Для предотвращения инфекции можно использовать лекарственные и природные средства.

Домашние рецепты можно использовать в качестве дополнительной терапии с согласия врача.Народные средства могут помочь только на начальных стадиях патологии или использоваться для профилактики. Можно использовать следующие рецепты:

  • отжать сок из лука, смочить салфетки и ежедневно прикладывать к пораженным участкам;
  • настойка цветков сирени: на 100 мл 70% спирта положить 2 ст. л. подсушить цветки, затем процедить и смазать воспаленные очаги;
  • Промыть пораженные места отваром чистотела: 1 ст. л. высушить зелень, взять стакан кипятка и подержать на слабом огне 10 минут, затем остудить, процедить.

Богатый выбор средств для профилактики вшей порой ставит родителей перед непростым выбором. Есть растительные и химические препараты.

Если в школе, детском саду часто наблюдаются головные вши, периодически лечите ребенка. Профилактика болезней лучше лечения.

Шампуни

Профилактика вшей и гнид в домашних условиях

Иногда больной ребенок не знает о своей болезни, поэтому после каждого купания внимательно осматривайте тело и волосы на предмет наличия гнид и вшей.Запретить ребенку:

  • находится рядом с детьми из неблагополучных семей, тесно общаться с ними;
  • играть рядом со строительными площадками, заброшенными зданиями;
  • плетение косичек другим девочкам;
  • использовать в играх старые матрасы, одеяла, подушки и мебель.

Регулярная профилактика вшей и гнид в домашних условиях принесет хорошие результаты. Обработать кожу малыша народными средствами или фармацевтическими препаратами можно в домашних условиях.

При соблюдении общих правил гигиены ребенок не заразится.

Профилактика

Чтобы избежать заражения опоясывающим лишаем и других инфекций, необходимо укрепить иммунную систему. В рацион ребенка должны входить фрукты, овощи, мясо, рыба, кисломолочные продукты.

Также нужно заниматься спортом, закалять (только если малыш полностью здоров), высыпаться, вовремя лечить различные заболевания, даже если это обычный кашель. Не позволяйте ребенку переутомляться, тратить слишком много времени на учебу.

Помимо сохранения иммунитета, следует придерживаться следующих правил:

  • Используйте только свои предметы личной гигиены.
  • Не вступать в контакт с бездомными животными.
  • Отказаться от использования антибактериальных средств гигиены. В них содержится антибиотик триклозан, который может спровоцировать различные патологические состояния. Также эти агенты действуют очень агрессивно и могут разрушить гидролипидную мантию эпидермиса. Рекомендуется отдавать предпочтение влажным салфеткам.
  • Носите только свою одежду.
  • Прививайте домашних животных вовремя.

Профилактика педикулеза — это применение комплексных мер в борьбе с распространением этого заболевания. Первое, что нужно сделать для выявления инфицированных детей или взрослых, — это внимательно осмотреть кожу головы.

При обнаружении инфицированных лобковых вшей их направляют в кожно-венерологический диспансер, расположенный на территории их проживания.

  • обязательное и регулярное мытье тела;
  • смена белья и постельного белья каждые 7-10 дней;
  • стрижка
  • с использованием только вашей личной расчески для ухода за волосами;
  • стирка белья, постельных принадлежностей
  • регулярная уборка дома, всех комнат и прилегающих территорий;
  • постоянное поддержание чистоты всей окружающей обстановки.

В век огромных скоростей, сенсационных открытий в медицине очень обидно осознавать, что проблема педикулеза все еще актуальна в школах, детских садах, больницах и эмиграционных центрах.

Приказ 342 «Профилактика педикулеза и сыпного тифа» был издан Минздравом РФ еще в 1998 году. Причиной принятия этой меры послужило то, что в детских садах и школах профилактика головных вшей проводилась недостаточно, зафиксирован ряд нарушений, которые привели к массовому заражению студентов.

Основным профилактическим направлением должна быть личная гигиена ребенка, за которой следят родители. Избегайте контакта с незнакомыми животными, людьми, у которых есть явные признаки стригущего лишая.

Если детская площадка выглядит грязной, по ней гуляют собаки и кошки, не позволяйте ребенку играть в песок или ходить по нему босиком. Если в семье появляется больной, то его изолируют от остальных членов до полного выздоровления, а в квартире проводят дезинфекцию.

Карантин микроспории в детском саду

Вероятность заразиться от другого ребенка очень высока, поэтому существуют определенные правила при обнаружении инфекции. Санпин на микроспорию в детском саду следующие:

  1. Врач должен подать срочное уведомление в СЭС.
  2. Больного ребенка отстраняют от посещения коллектива до полного выздоровления. Отсутствие грибков под лампой Вуда необходимо подтверждать трижды.
  3. Группа отправляется на карантин в течение 45 дней.Каждые 5 дней дети проходят обследование, при обнаружении повторных случаев карантин продлевается еще на 45 дней.

От 30.03.1999 N 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения» (Собрание законодательства РФ, 1999 г., N 14, ст. 1650; 2002, N 1 (часть 1), ст. 2; 2003, N 2, ст. 167; N 27 (ч. 1), ст. 2700; 2004, N 35, ст. 3607; 2005, N 19, ст. 1752; 2006, N 1, ст. 10; № 52 (часть 1), ст. 5498; 2007, N 1 (часть 1), ст.21, арт. 29; № 27, ст. 3213; 46, ст. 5554; 49, ст. 6070; 2008, N 24, ст. 2801; N 29 (часть 1), ст. 3418; № 30 (часть 2), ст. 3616; 44, ст. 4984; №52 (часть 1), ст. 6223; 2009, N 1, ст. 17; 2010, № 40 Ст. 4969; 2011, N 1, ст. 6; № 30 (часть 1), ст. 4563, арт. 4590, арт. 4591, арт. 4596; N 50, ст. 7359; 2012, N 24, ст. 3069; № 26, ст. 3446; 2013, N 27, ст. 3477; № 30 (часть 1), ст. 4079; 48, ст. 6165; 2014, N 26 (часть 1), ст. 3366, арт.3377 и Правительством Российской Федерации от 24 июля 2000 г. N 554 «Об утверждении Положения о государственной санитарно-эпидемиологической службе Российской Федерации и Положения о государственной санитарно-эпидемиологической стандартизации» (Собрание законодательства Российской Федерации , 2000, N 31, ст. 3295; 2004, N 8, ст. 663; N 47, ст. 4666; 2005, N 39, ст. 3953) заявляю:

1.1. Настоящие санитарно-эпидемиологические правила и нормы (далее — санитарные правила) разработаны в соответствии с законодательством Российской Федерации.

1,3. Соблюдение санитарно-эпидемиологических правил обязательно на всей территории Российской Федерации для государственных органов, органов государственной власти субъектов Российской Федерации, муниципальных образований, должностных лиц государственных органов, должностных лиц органов государственной власти субъектов Российской Федерации, должностных лиц органов местного самоуправления. государство, граждане, индивидуальные предприниматели и юридические лица.

1,4. Контроль за исполнением настоящих санитарных правил осуществляется органами, уполномоченными на осуществление федерального государственного санитарно-эпидемиологического надзора в соответствии с законодательством Российской Федерации.

3,5. Оперативный эпидемиологический анализ проводится в условиях эпидемического роста заболеваемости или регистрации эпидемических очагов групповой заболеваемости. Эпидемиологический анализ включает постоянный мониторинг динамики заболеваемости с учетом конкретного этиологического агента, оценку санитарно-эпидемиологической ситуации, постановку предварительного и окончательного эпидемиологического диагноза с установлением причин и условий повышения заболеваемости. заболеваемость или формирование очага эпидемии.

3,6. По эпидемиологическим (внеплановым) показаниям должностными лицами, уполномоченными на осуществление федерального государственного санитарно-эпидемиологического надзора, принимается решение о периодичности и объеме лабораторных исследований почв, сточных вод и их отложений, поверхностных водоемов, используемых в рекреационных и оздоровительных целях. как источники питьевого водоснабжения, воды плавательных бассейнов, питьевая вода на различных стадиях водоподготовки.

Обследованию на гельминтозы и кишечные простейшие сдают: дети, посещающие дошкольные образовательные организации; персонал дошкольных образовательных организаций; учащиеся младших классов, дети, подростки, декретированные и приравненные к ним группы населения при диспансеризации и профилактических осмотрах; детям, подросткам по эпидемическим показаниям; дети и подростки, поступающие в дошкольные и другие образовательные организации, детские дома, детские дома, детские дома, школы-интернаты, на санаторно-курортное лечение, организации здравоохранения, детские отделения больниц; дети всех возрастов детских организаций закрытого типа и круглогодичного пребывания, больные дети и взрослые в поликлиниках и больницах, люди, которые общались с пациентами.

Таким образом, внешне безобидные головные вши — это общественно опасное заболевание, способное за короткое время перерасти в эпидемию. Не забывайте об опасности того, что болезнь нарушает слаженную работу кровеносной и нервной систем. Если образуется легочный тромб, то он фатален. №

Приказ № 342 о головных вшах (одна из составляющих — упаковка от вшей) был принят Минздравом РФ в 1998 году. Его действие направлено на комплексную борьбу с возбудителями педикулеза. и эпидемия тифа.Он содержит следующие компоненты:

  • Профилактика брюшного тифа.
  • Лечение вшей.
  • Борьба с болезнетворными микроорганизмами.
  • Мероприятия по улучшению эпидемиологической ситуации, санитарно-гигиенических условий в государственных учреждениях.

Разберем подробно укладку от вшей, порядок от вшей.

Профилактика вшей

Приложением № 4 к настоящему приказу предусмотрены следующие меры по предотвращению распространения вшей:

  • Плановые осмотры населения медицинскими работниками в детских садах, школах, общежитиях, интернатах, домах престарелых и т. Д.
  • Создание необходимых условий для предотвращения распространения вшей в коллективном проживании: бани, душевые, прачечные с горячей водой, санпропускники.
  • Наличие квалифицированного медицинского персонала для проведения обследований.
  • Соответствующие меры в очагах педикулезной инфекции.
  • Разъяснительная образовательная программа среди населения.

Обследование на вшей

В соответствии с Приказом № 342 о головных вшах можно избежать наложения средств от вшей, предотвратив распространение инфекции.Осмотр считается лучшей профилактикой. Проводится в хорошо освещенном помещении с помощью лупы или лупы. Врач должен уделять большое внимание затылку, вискам и лбу.

  • воспитанники детских садов, интернатов;
  • учащихся школ, средних и высших профессиональных учебных заведений;
  • коллективов организаций, предприятий;
  • госпитализировано
  • больных;
  • жильцов «коммунальных квартир» и общежитий;
  • медицинских работников, контактирующих с больными.

От головных вшей № заказа 342: укладка против вшей

  • Сумка для сбора личных вещей пациента: хлопчатобумажная или клеенка.
  • Оцинкованный поддон или ведро, в котором будут дезинфицироваться волосы.
  • Клеенка для манипуляций.
  • Перчатки латексные.
  • Частая металлическая гребенка.
  • Ножницы и / или машинка для стрижки волос.
  • Спиртовая лампа.
  • 2-3 косынки.
  • Халат одноразовый.
  • Ватные диски.
  • Столовый уксус.
  • Основными элементами в составе средства для укладки от вшей являются средства уничтожения лобковых и головных вшей:
    • Овициды для одноразового лечения: шампуни, лосьоны, концентраты эмульсий и др.
    • Неовициды (средства с неполным овицидным действием) для 2-кратного лечения в течение недели до десяти дней. Это специальные мыла, шампуни и другие продукты.
  • Средства, уничтожающие вшей: овициды и неовициды.
  • Аэрозоли и ряд других средств, применяемых для дезинсекции помещений.

Использование укладки от вшей

В соответствии с Приказом № 342 от головных вшей рекомендуется использовать укладку от вшей следующим образом:

  • Лицо, проводящее лечение, должно носить халат, a защитный платок и перчатки.
  • Больного заворачивают в клеенку.
  • Глаза больного защищают сложенным в несколько слоев полотенцем для защиты от попадания лекарств.
  • Тщательно обработайте волосы пациента средством, затем накройте его голову шапочкой на время, указанное в инструкции к препарату.
  • После обработки волосы необходимо промыть под проточной водой.
  • Далее — использование шампуня, входящего в состав укладки.
  • После того, как волосы высохнут, каждую прядь нужно вычесать редким гребнем на предмет яиц, мертвых вшей.
  • Повторное обследование пациента на успех процедуры.
  • Обработка гребня спиртом или кипятком.
  • Обработка помещений дезинсекционным составом.
  • Вещи пациента помещаются в специальный мешок для дальнейшей дезинфекции.
  • Халат, перчатки, платок процессора, а также другие одноразовые предметы, использованные в процедуре, помещаются в отдельный пакет и утилизируются.

Действенные средства

В составе укладки эффективны следующие средства:

  • раствор уксуса;
  • 20% эмульсия бензилбензоната;
  • порошок пиретрума;
  • 5% борная мазь;
  • 0,15% раствор карбофоса;
  • мыло пыль или дегтя;
  • «Медифокс»;
  • лосьон «Нитилон», «Лонцид», «Ниттифор».

Для вещей:

  • сода кальцинированная;
  • «Медифокс-Супер»;
  • 50% концентрат сульфидоса, карбофоса;
  • порошок пиретрума;
  • 20% водно-керосин-мыльная эмульсия.

Профилактика вшей и головных вшей

Мы исследовали Заказ № 342, средства защиты от вшей. Напоследок посмотрим, какие эффективные профилактические меры рекомендует этот документ:

  • Периодическое купание с обязательным мытьем шампунем — не реже одного раза в 10 дней.
  • Смена комплекта постельного белья — не реже двух раз в месяц.
  • Систематическая стирка одежды, личных вещей по мере загрязнения с последующей обработкой утюгом с функцией «пар».
  • Ежедневное расчесывание волос, стрижка по необходимости.
  • Чистка предметов верхней одежды, соблюдение правил ее хранения.
  • Периодическая влажная уборка в доме.
  • Поддержание чистоты в доме.

Приказ № 342 Минздрава РФ предлагает эффективные меры по профилактике, лечению и выявлению вшей и сыпного тифа.Также в его состав входит состав специальной укладки против вшей, помогающий быстро справиться с проблемой.

13.1. Меры по предотвращению педикулеза и чесотки включают:

Плановые обследования населения на вшей;

Обеспечение организованных коллективов (дошкольных образовательных организаций, детских домов, детских домов, стационарных организаций отдыха и оздоровления детей) съемным постельным бельем, средствами личной гигиены, дезинфицирующими и моющими средствами;

Оснащение дезинфицирующим оборудованием и обеспечение дезинфицирующими средствами медицинских организаций, приемных пунктов, организаций системы социальной защиты, следственных изоляторов, ночлежек, временного проживания мигрантов, санпропускников, бань, прачечных.

13,2. Обследованию на вшей и чесотке подлежат:

Детям дошкольных образовательных организаций — ежемесячно;

Студенты общеобразовательных и профессиональных образовательных организаций — 4 раза в год;

Воспитанники школ-интернатов, воспитанников детских домов, детских домов — в соответствии с законодательством Российской Федерации;

Дети, отправляющиеся на отдых в организации здравоохранения — перед отъездом;

Дети в детской оздоровительной организации — еженедельно;

Пациенты, поступившие на стационарное лечение — при поступлении и далее 1 раз в 7 дней;

Лица, состоящие в организациях системы социальной защиты — 2 раза в месяц;

Амбулаторно — после лечения;

Работники организаций — при медицинских осмотрах и профилактических осмотрах.

13,3. При обнаружении вшей у лиц, поступивших в стационар, санация проводится в приемном отделении. Вещи заболевших и спецодежда персонала, проводившего лечение, помещаются в клеенку и отправляются в дезинфекционную камеру на дезинфекцию.

13,4. При поступлении детей в дошкольную образовательную организацию проводится обследование на педикулез и чесотку.

13,5. При выявлении вшей у детей их направляют на реабилитацию с отстранением от посещения дошкольной образовательной организации.Прием детей в дошкольные образовательные организации после реабилитации допускается при наличии медицинской справки об отсутствии педикулеза.

13,6. Если обнаруживаются головные вши, студенты отстраняются от посещения организации на время лечения. Их можно принять в образовательные организации только после прохождения комплекса лечебно-профилактических мероприятий при наличии справки от врача.

13,7. Для лиц, контактировавших с больным педикулезом, медицинское наблюдение устанавливается сроком на 1 месяц с осмотрами 1 раз в 10 дней с занесением результатов обследования в журнал.

13,8. Результаты обследования на вшей и чесотку лиц, поступающих на стационарное лечение и (или) обращающихся на амбулаторное лечение, фиксируются в медицинских документах.

13,9. Больной чесоткой, поступающий на лечение из отделения неотложной помощи (или выявленный в отделении), изолируется в отдельную палату (изолятор). После консультации дерматовенеролога и подтверждения диагноза пациенту (взрослым и детям старше 1 года) выдается лечение и выдаются предметы индивидуального пользования (полотенце, мочалка, мыло в небольшой упаковке).Питание организовано в палате. Белье и постельные принадлежности пациента обрабатываются.

13.10. Манипуляции в отношении больных чесоткой, а также уборка помещений проводятся с использованием средств индивидуальной защиты — резиновых перчаток, отдельных халатов. Резиновые перчатки и оборудование для уборки дезинфицируют после очистки.

13.11. При обнаружении чесотки у детей, посещающих дошкольные образовательные и общеобразовательные организации, у одиноких, пожилых людей, инвалидов, лиц, проживающих в общежитиях, членов многодетных семей, мигрантов, лиц без определенного места жительства, обработка осуществляется специализированными организациями по запросу организации и частные лица, в том числе с камерной обработкой белья и постельного белья.

13.12. Лица, у которых есть лобковые вши, направляются в кожно-венерологический диспансер по месту жительства для подтверждения диагноза и проведения комплекса противоэпидемических мероприятий.

13,13. При обнаружении чесотки у детей дошкольного и школьного возраста на время лечения им отстраняется посещение дошкольных образовательных и общеобразовательных организаций. Их можно принять в образовательные организации только после завершения комплекса лечебно-профилактических мероприятий при наличии справки от врача.

13,14. Вопрос о профилактическом лечении лиц, контактировавших с больным чесоткой, решает врач с учетом эпидемиологической ситуации. В этом лечении участвуют лица, которые контактировали с пациентом, а также представители организаций, в которых зарегистрировано несколько случаев чесотки или в которых в течение (1 месяца) выявляются новые пациенты в ходе мониторинга вспышки. В организациях, где профилактическое лечение контактных лиц не проводилось, обследование кожи студентов проводят трехкратно с интервалом в 10 дней.

13,15. При обнаружении чесотки в организации проводится текущая дезинфекция.

13,16. В приемных отделениях медицинских организаций белье и одежда поступающих пациентов обрабатываются в дезинфекционной камере, либо дезинфицируются инсектицидом, либо временно выводятся из эксплуатации (белье и одежда помещаются в полиэтиленовые пакеты на срок не менее трех суток). . Постельное белье, используемое больными чесоткой в ​​больницах, обрабатывается в дезинфекционных камерах или дезинфицируется инсектицидом.

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *