Методы санитарно паразитологических исследований: Библиотека государственных стандартов

Разное
alexxlab0

Содержание

Методы санитарно-паразитологических исследований [Текст] : 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы : методические указания : МУК 4.2.2661-10 : [утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 23 июлю 2010 г. : издание официальное]

Поиск по определенным полям
Чтобы сузить результаты поисковой выдачи, можно уточнить запрос, указав поля, по которым производить поиск. Список полей представлен выше. Например:

author:иванов

Можно искать по нескольким полям одновременно:

author:иванов title:исследование

Логически операторы
По умолчанию используется оператор AND.
Оператор AND означает, что документ должен соответствовать всем элементам в группе:

исследование разработка

author:иванов title:разработка

оператор OR означает, что документ должен соответствовать одному из значений в группе:

исследование OR разработка

author:иванов OR title:разработка

оператор NOT исключает документы, содержащие данный элемент:

исследование NOT разработка

author:иванов NOT title:разработка

Тип поиска
При написании запроса можно указывать способ, по которому фраза будет искаться. Поддерживается четыре метода: поиск с учетом морфологии, без морфологии, поиск префикса, поиск фразы.
По-умолчанию, поиск производится с учетом морфологии.
Для поиска без морфологии, перед словами в фразе достаточно поставить знак «доллар»:

$исследование $развития

Для поиска префикса нужно поставить звездочку после запроса:

исследование*

Для поиска фразы нужно заключить запрос в двойные кавычки:

«исследование и разработка«

Поиск по синонимам
Для включения в результаты поиска синонимов слова нужно поставить решётку «#» перед словом или перед выражением в скобках.
В применении к одному слову для него будет найдено до трёх синонимов.
В применении к выражению в скобках к каждому слову будет добавлен синоним, если он был найден.
Не сочетается с поиском без морфологии, поиском по префиксу или поиском по фразе.

#исследование

Группировка
Для того, чтобы сгруппировать поисковые фразы нужно использовать скобки. Это позволяет управлять булевой логикой запроса.
Например, нужно составить запрос: найти документы у которых автор Иванов или Петров, и заглавие содержит слова исследование или разработка:

author:(иванов OR петров) title:(исследование OR разработка)

Приблизительный поиск слова
Для приблизительного поиска нужно поставить тильду «
~» в конце слова из фразы. Например:

бром~

При поиске будут найдены такие слова, как «бром», «ром», «пром» и т.д.
Можно дополнительно указать максимальное количество возможных правок: 0, 1 или 2.4 разработка

По умолчанию, уровень равен 1. Допустимые значения — положительное вещественное число.
Поиск в интервале
Для указания интервала, в котором должно находиться значение какого-то поля, следует указать в скобках граничные значения, разделенные оператором TO.
Будет произведена лексикографическая сортировка.

author:[Иванов TO Петров]

Будут возвращены результаты с автором, начиная от Иванова и заканчивая Петровым, Иванов и Петров будут включены в результат.

author:{Иванов TO Петров}

Такой запрос вернёт результаты с автором, начиная от Иванова и заканчивая Петровым, но Иванов и Петров не будут включены в результат.
Для того, чтобы включить значение в интервал, используйте квадратные скобки. Для исключения значения используйте фигурные скобки.

паразитологический мониторинг за объектами окружающей среды г. Астрахани и прилежащих территорий – тема научной статьи по экологическим биотехнологиям читайте бесплатно текст научно-исследовательской работы в электронной библиотеке КиберЛенинка

УДК 614.445+616.99

САНИТАРНО — ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ ЗА ОБЪЕКТАМИ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ Г. АСТРАХАНИ И ПРИЛЕЖАЩИХ ТЕРРИТОРИЙ

Хуторянина И.В, Хроменкова Е.П., Димидова Л.Л.

ФБУН «Ростовский НИИ микробиологии и паразитологии» Роспотребнадзора

Введение. В последние годы для изучения рисков заражения гельминтозами и его снижения проводят санитарно-паразитологический мониторинг за объектами окружающей среды.

Результаты санитарно — паразитологических исследований играют существенную роль в оценке активности эпидемического процесса при паразитарных болезнях, так как позволяют определить состояние одного из ключевых элементов паразитарной подсистемы этих заболеваний — механизма передачи заразного начала. Они создают необходимые условия для результативного проведения профилактики паразитарных заболеваний [2].

Значимыми являются результаты наблюдений за очисткой сточных вод, качеством воды поверхностных водных объектов и почвой, как основных факторов передачи паразитозов [3, 4].

Материалы и методы. Работа проводилась совместно с органами и учреждениями Роспотребнадзора по Астраханской области во время экспедиционных выездов. В период 2011-2014 гг. проведено 179 санитарно-паразитологических исследований почвы селитебных зон, песка песочниц и почвы с территории ДОУ, сточных вод и их осадков, воды поверхностных водных объектов в отдельных районах Астраханской области. Исследования осуществляли в соответствии с МУК 4.2.2661-10 «Методы санитарно-паразитологических исследований», МУ 2.1.7.2657-10 «Энтомологические методы исследования почвы населенных мест на наличие преимагинальных стадий синантропных мух», МУК 4.2.1884-04 «Санитарно -микробиологический и санитарно — паразитологический анализ воды поверхностных водоемов».

Результаты и обсуждение. Установлены показатели контаминации сточных вод и их осадков возбудителями паразитозов, как эпидемиологически значимых субстратов на изученной территории. Исследования проводили на 4-х очистных сооружениях города Астрахани на протяжении всего периода наблюдений. За время проведения специальных санитарно — паразитологических исследований (2011-2014 гг.) средний экстенсивный показатель контаминации паразитарными патогенами сточных вод до очистки составил 62,5%. Это свидетельствует о зараженности населения гельминтами.

Параллельно проведены исследования стоков после очистки. Средний показатель доли положительных проб, от общего числа исследованных,

500

составил на очистных сооружениях канализации города Астрахань 41,6%. Эффективность дегельминтизации недостаточна для освобождения от паразитарных патогенов. При этом доля проб с жизнеспособными возбудителями паразитозов (не соответствующих эпидемиологическим требованиям) 16,7%. Интенсивность контаминации стоков после очистки составила 0,25 экз./л. Определена недостаточная эффективность дезинвазии сточных вод.

Для анализа материалов санитарно — паразитологических исследований воды водоемов в зонах выпуска сточных вод с ОСК были выделены 3 группы точек санитарно — паразитологического контроля в водоемах: место выпуска сточных вод, выше выпуска сточных вод, ниже выпуска сточных вод с очистных сооружений канализации.

На изучаемой территории экстенсивные показатели контаминации воды водоемов в месте выпуска стоков, выше него и ниже были соответственно: 0; 0; 25,0%, нестандартных проб 0; 0; 25,0%. Интенсивные показатели соответственно: 0; 0; 1 экз./25л с жизнеспособностью 18,7%. Видовой состав возбудителей представлен яйцами токсокар и лентеца широкого. Наличие положительных проб сточных вод ниже сброса с очистных сооружений канализации свидетельствует о риске загрязнения воды поверхностных водных объектов возбудителями паразитарных болезней.

Результаты санитарно — паразитологических исследований почвы и песка за период наблюдения с 2011 по 2014 гг. показали, что доля положительных проб колебалась от 0 до 15,6%. Нестандартные пробы (не соответствующие эпидемиологическим требованиям) определены в 2012 году в 11,1% и в 2014 году — 3,1%. На изучаемой территории в почве и песке выявляли, преимущественно, яйца аскарид и токсокар. Интенсивность обсеменения почвы за годы наблюдения составила от 0,5 до 2,8 экз./кг. В соответствии с СанПиНом 2.1.7.1287-03 [1] и данными проведенного анализа установлено, что почва обследованной территории может быть отнесена к эпидемически умеренно опасной (до 10 яиц/кг). Ни в одной из проб почвы в отдельных районах, песка песочниц и почвы с территории ДОУ не выявлено личинок и куколок синантропных мух.

Заключение. Полученные данные подтверждают недостаточную эффективность дезинвазии сточных вод, вероятность негативного воздействия очистных сооружений канализации на окружающую природную среду, а также возможный риск дальнейшего распространения паразитарных патогенов, в том числе в поверхностные водоемы.

Отсутствие личинок и куколок синантропных мух в песке и почве является показателем безопасности качества почвы, хорошей санитарной очистки территории, своевременного сбора отходов, удаления и обезвреживания их. По установленному наличию яиц и личинок гельминтов почва отнесена к умеренно опасной. Представленные данные свидетельствуют об эпидемиологической значимости исследованных субстратов в поддержании потенциального риска заражения людей геогельминтами.

Литература: 1. СанПиН 2.1.7.1287-03 «Санитарно — эпидемиологические требования к качеству почвы». 2.Степанова Т.Ф., Корначев А.С. Подходы к совершенствованию системы надзора и управления эпидемическим процессом паразитарных заболеваний. Тюмень.2012. 147с. З.Хроменкова Е.П. и др. //Сб. мат.научн.конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями».-М.-2014.- Вып. 15.- С. 341-343. 4.Хроменкова Е.П. и др.// Здоровье населения и среда обитания. — 2015. — №7 (268). — С. 46-49.

Sanitary-parasitological monitoring of environment objects in the city of Astrakhan and the surrounding areas. Hutoryanina I.V., СЬгошепкоуа E.P., Dimidova L.L. Rostov Scientific Research Institute of Microbiology and Parasitology.

Summary. One represented the detailed analysis of effectiveness of sanitary-parasitological monitoring of the environmental objects at the example of the Astrakhan city.

СРАВНИТЕЛЬНЫЕ ДАННЫЕ РЕЗУЛЬТАТИВНОСТИ УТВЕРЖДЁННОГО МЕТОДА ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ПОЧВЫ НА НАЛИЧИЕ ЯИЦ ГЕЛЬМИНТОВ И ЕГО МОДИФИКАЦИИ | Кузнецова

1. Асланова М.М., Кузнецова К.Ю., Морозов Е.Н. Эффективная лабораторная диагностика — основа мониторинга паразитарных болезней. Здоровье населения и среда обитания. 2016; (1): 34-7.

2. Долбин Д.А., Хамзина Е.В., Идрисов А.М., Лутфуллин М.Х., Лутфуллина Н.А. Способ выявления яиц гельминтов, клещей и ооцист простейших в пробах почвы-грунтов. Патент РФ; № 2466388; 2012.

3. Методические указания МУК 4.2.2661-10. «Методы санитарно-паразитологических исследований». М.; 2010.

4. ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006. «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий». М.; 2006.

5. Онищенко Г.Г. Критерии опасности загрязнения окружающей среды. Гигиена и санитария. 2003; 82(6): 3-4.

6. Постановление Правительства Российской Федерации № 426 «Об утверждении Положения о социально-гигиеническом мониторинге». М.; 2000.

7. Сайт Роспотребнадзора. Available at: http://www.rospotrebnadzor.ru/

8. Черникова Е.А., Миглиорини Л., Литвинов С.К., Дарченкова Н.Н., Новожилов К.А. Геогельминтозы в Российской Федерации. Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2015; (2): 51-4.

9. WHO Expert committee on biological standartization. World health organization technical report series 658/33. Geneva; 1981


Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория

В период с 24 мая по 4 июня 2021 года в Учебном центре ФГБУ ЦНМВЛ пройдут курсы повышения квалификации по теме «Методы санитарно-паразитологической экспертизы мяса, рыбы, плодоовощной, растительной продукции, воды, почвы».

В рамках обучения слушатели ознакомятся с видами паразитов и хозяев паразитов, источниками и путями заражения животных инвазивными заболеваниями, правилами отбора проб для санитарно-паразитологических исследований, эпизоотологией, патогенезом, симптомами и диагностикой таких заболеваний, как фасциолиз, дикроцелиоз, цистицеркоз, трихинеллёз, токсоплазмоз и другие. Также учащимся будет представлена информация о методах лабораторного контроля за объектами окружающей среды (почвы, воды, бытовых и ливневых стоков, их осадков, предметов обихода).

Кроме того, на практических занятиях учащиеся получат навыки визуальной оценки вероятной жизнеспособности цист патогенных простейших кишечника и яиц гельминтов, исследования рыбы на наличие личинок паразитов, микроскопического анализа мяса, применения флотационного метода исследования воды, проведения биохимических испытаний, а также многие другие.

Заключительной частью учебного цикла станет итоговая аттестация, по результатам которой слушателям будут выданы удостоверения о повышении квалификации.

Cправки по телефону: +7 (495) 700-01-34.

Читать также: О работе отдела пищевой микробиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБУ ЦНМВЛ с 3 по 6 апреля 2017 года 10.04.2017 подробнее Специалисты ЦНМВЛ помогают рязанским предприятиям внедрить систему ХАССП 03.02.2017 подробнее О прохождении повышения квалификации сотрудниками ФГБУ ЦНМВЛ 16.06.2017 подробнее

ДЕФЕКТЫ И АРТЕФАКТЫ, ВЫЯВЛЯЕМЫЕ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ | Опубликовать статью ВАК, elibrary (НЭБ)

ДЕФЕКТЫ И АРТЕФАКТЫ, ВЫЯВЛЯЕМЫЕ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Научная статья

Ирдеева В.А.1, Аракельян Р.С.2, *, Кудаев С.В.3, Маслянинова А.Е.4, Липсон А.Д.5,
Исмагамбетова С.Г.6, Джабраилова У.Ш.7, Чистохина О.И.8

1 ORCID: 0000-0003-2722-4074;

2 ORCID: 0000-0001-7549-2925;

3 ORCID: 0000-0002-7637-3394;

4 ORCID: 0000-0003-0908-950X;

5 ORCID: 0000-0002-7293-7092;

6 ORCID: 0000-0003-4707-9142;

7 ORCID: 0000-0002-2083-9159;

1 Городской клинический родильный дом им. Ю.А. Пасхаловой, Астрахань, Россия;

2, 4, 5, 6, 7, 8 Астраханский государственный медицинский университет Минздрава России, Астрахань, Россия;

3 Паталогоанатомическое бюро г. Астрахани, Астрахань, Россия

* Корреспондирующий автор (rudolf_astrakhan[at]rambler.ru)

Аннотация

Цель исследования: проанализировать собранную коллекцию микропрепаратов, приготовленных при проведении санитарно-паразитологических исследований объектов окружающей среды.

Материалы и методы. Исследовательская работа проводилась на базе кафедры инфекционных болезней и эпидемиологии ФГБОУ ВО «Астраханский ГМУ» Минздрава России и отделения общей и инфекционной патологии ГБУЗ АО «Паталогоанатомическое бюро г. Астрахани» в 2019 – 2020 гг.

Результаты исследования и обсуждение. В 2019 – 2020 гг. целенаправленно проводился отбор препаратов с различными артефактами, полученными при проведении санитарно-паразитологических исследований окружающей среды (вода, почва, смывы с твердых поверхностей, исследования плодоовощной и рыбной продукции). Всего за анализируемый период членами студенческого научного кружка по инфекционным и паразитарным болезням Астраханского ГМУ были проведены исследования 635 проб, отобранных с различных объектов окружающей среды, в том числе 152 пробы почвы (23,9%), 53 пробы воды (8,3%), 60 проб смывов с твердых поверхностей (9,4%), 88 проб плодоовощной продукции (13,9%) и 282 пробы рыбы и рыбопродуктов (44,4%). Число проб, не отвечающих санитарно-паразитологическим показателям составило 4,7%.

В это же время была собрана коллекция артефактов различных микропрепаратов, полученных при проведении санитарно-паразитологических исследований объектов окружающей среды.

В наших наблюдениях старые стекла отмечались в 31 случае (18%). Как правило, это были стекла, имеющие царапины. Кроме этого, в других случаях в микропрепаратах наблюдались посторонние частички и микроэлементы, а также присутствие условно-патогенных или свободноживущих микроорганизмов. Все эти включения могут приниматься специалистами за яйца или личинки гельминтов, что в свою очередь считается ошибкой микроскописта.

Выводы. Собранная коллекция не способна отразить масштабные дефекты и артефакты, выявляемые при проведении различных лабораторных исследований, проводимых различными лабораторными подразделениями Астраханской области, но может служить наглядным примером недопущения возникновения представленных выше ошибок при проведении санитарно-паразитологических исследований объектов окружающей среды. Принятые специалистом за возбудителя дефекты и артефакты санитарно-паразитологических исследований могут негативно отразиться на выдаче неправильного санитарно-эпидемиологического заключения по обсемененности того или иного объекта окружающей среды яйцами и личинками гельминтов, а также цистами патогенных кишечных простейших.

Ключевые слова: санитарно-паразитологические исследования, артефакты, дефекты окраски, почва, микропрепараты, вода, смывы с твердых поверхностей, рыбная продукция, пыльца растений, старые стекла, пузырьки воздуха.

DEFECTS AND ARTIFACTS DETECTED DURING LABORATORY TESTS ON ENVIRONMENTAL SAMPLES

Research article

Irdeeva V.A.1, Arakelyan R.S.2, Kudaev S.V.3, Maslyaninova A.E.4, LipsonA.D.5,
Ismagambetova S.G.6, Dzhabrailova U.Sh.7, Chistokhina O.I.8

1 ORCID: 0000-0003-2722-4074;

2 ORCID: 0000-0001-7549-2925;

3 ORCID: 0000-0002-7637-3394;

4 ORCID: 0000-0003-0908-950X;

5 ORCID: 0000-0002-7293-7092;

6 ORCID: 0000-0003-4707-9142;

7 ORCID: 0000-0002-2083-9159;

1 City Clinical Maternity Hospital named after Yu. A. Paskhalova (Gorodskoy klinicheskiy rodilny dom
imeni Yu. A. Paskhalovoy), Astrakhan, Russia;

2, 4, 5, 6, 7, 8 Astrakhan State Medical University, Astrakhan, Russia;

3 Pathoanatomic Bureau of Astrakhan, Astrakhan, Russia

* Corresponding author (rudolf_astrakhan[at]rambler.ru)

Abstract

The purpose of the studyis to analyze the collected set of micro-preparations prepared during sanitary and parasitological studies on environmental samples.

Materials and methods. The research is carried out on the basis of the Department of Infectious Diseases and Epidemiology of the Astrakhan State Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation and the Department of General and Infectious Pathology of the State Medical Institution of JSC “Pathoanatomic Bureau of Astrakhan” (AO “Patalogoanatomicheskoe byuro goroda Astrakhani) in the period from 2019 to 2020.

Results and discussion. In 2019-2020, a selection of preparations with various artifacts obtained during sanitary and parasitological studies of the environment (water, soil, samples from hard surfaces, studies of fruit and vegetable and fish products) was carried out. The total of the conducted studies conducted by the members of the student research circle of infectious and parasitic diseases of the Astrakhan state medical University amounts to 635 samples selected from various environmental objects, including 152 soil samples (23,9%), 53 water samples (8.3%) of 60 samples from hard surfaces (9,4%), 88 samples of fruits and vegetables (13.9%) and 282 samples of fish and fish products (44,4%). The number of samples that do not meet sanitary and parasitological indicators equaled 4.7%.

At the same time, a collection of artifacts of various micro-preparations was obtained during sanitary and parasitological studies of environmental samples.

Old glass was observed in 31 cases (18%). As a rule, the glass had scratches. In other cases, foreign particles and trace elements as well as the presence of conditionally pathogenic or free-living microorganisms were observed in micro-preparations. All these inclusions might be taken by specialists for eggs or larvae of helminths, which in turn is considered an error of the microscopist.

Conclusions. The collected samples are not able to reflect the large-scale defects and artifacts detected during various laboratory studies conducted by various laboratory units of Astrakhan Oblast, but it can serve as a clear example of preventing the occurrence of the above errors when conducting sanitary and parasitological studies of environmental samples. Defects and artifacts of sanitary and parasitological studies taken by a specialist for the pathogen can negatively affect the issuance of an incorrect sanitary and epidemiological conclusion on the contamination of a particular environmental object with eggs and larvae of helminths as well as cysts of pathogenic intestinal protozoa.

Keywords: sanitary and parasitological studies, artifacts, color defects, soil, micro-preparations, water, samples from hard surfaces, fish products, plant pollen, old glass, air bubbles.

Введение

Важность качественной лабораторной диагностики инфекционных [1], [2], [4] и паразитарных заболеваний определяется трудностью их клинической диагностики. Многие инфекции/инвазии человека не имеют патогномоничных симптомов и протекают субклинически.

Достоверность паразитологической диагностики зависит не только от неукоснительного выполнения требований методики исследования, но и от правильного выбора материала, знания биологии предполагаемого паразита, морфологического строения яиц гельминтов и различных форм простейших. На результат анализа также влияет неправильный забор и хранение материала для исследования, отсутствие должной подготовки больного лечащим врачом.

Так, по мнению профессора С.С. Козлова [5], до настоящего времени во многих лечебно-диагностических учреждениях нашей страны эффективность лабораторной диагностики паразитозов остается на низком уровне. Такая ситуация обусловлена рядом причин, из которых ведущими являются: во-первых, многие клинические лаборанты не обладают достаточным опытом практической работы по определению паразитических простейших и гельминтов, что нередко приводит к получению ими ложноотрицательных результатов паразитологических исследований. Во-вторых, в обычной практике большинства лабораторий используются наиболее простые методы либо старые методы диагностики [3].

Вместе с тем, нередки случаи получения и ложноположительных результатов копрологических исследований, когда за паразитарные объекты принимаются пыльцевые зерна, дрожжеподобные грибки, элементы растительной клетчатки, зерна крахмала, споры грибов, дефекты предметных стекол и другие артефакты. В этих случаях пациенту может быть установлен неверный диагноз, с которым он начинает обращаться к врачам различных специальностей, пытаясь избавится от несуществующих паразитов, принимая большие дозы совершенно не нужных противопаразитарных препаратов [3], [6].

Цель исследования: проанализировать собранную коллекции микропрепаратов, приготовленных при проведении лабораторных исследований с объектов окружающей среды (почва, вода, продукты питания) с систематизацией возможных артефактов в данном микропрепарате. 

Материал и методы

Исследовательская работа проводилась на базе кафедры инфекционных болезней и эпидемиологии ФГБОУ ВО «Астраханский ГМУ» Минздрава России и отделения общей и инфекционной патологии ГБУЗ АО «Паталогоанатомическое бюро г. Астрахани» в 2019 – 2020 гг.

Исследования объектов окружающей среды проводили согласно МУК 4.2.2664-10 «Методы санитарно-паразитологических исследований» [7].

Результаты исследования и обсуждение

За анализируемый период мы целенаправленно проводили отбор препаратов с различными артефактами, полученными при проведении санитарно-паразитологических исследований окружающей среды (вода, почва, смывы с твердых поверхностей, исследования рыбы и рыбопродуктов). Так, за анализируемый период были проведены исследования 635 проб, в т.ч. 152 пробы почвы (23,9%), 53 пробы воды (8,4%), 60 проб смывов с твердых поверхностей (9,4%), 88 проб плодоовощной продукции (13,9%) и 282 пробы рыбы и рыбопродуктов (44,4%). Число проб, не отвечающих санитарно-паразитологическим показателям составило 4,7% (30 проб) – были обнаружены яйца и личинки гельминтов (таблица 1).

 

Таблица 1 – Объем санитарно-паразитологических исследований, проведенных в 2019 – 2020 гг.

№Количество проб,

шт.

Число проб санитарно-паразитологических исследованийВсего
Почвы,

шт.

Воды,

шт.

Смывов с твердых объектов,

шт.

Пищевых продуктов, шт.
Рыба и рыбопродуктыОвощи, фрукты, зелень
1Всего исследовано152536028288635
2Неудовлетворит. пробы15––12330
3Процент9,9––4,33,44,7

 

В результате проведенного лабораторного исследования в смывах с капусты и со свеклы (по 1 пробе) были обнаружены личинки Strongyloides stercoralis (рис. 1). В остальных пробах результат исследования был отрицательный.

Рис. 1 – Личинка Strongyloides stercoralis, обнаруженная в смывах с капусты

Примечание: фото Аракельян Р.С.; увеличение х 40

 

Также при исследовании рыб и рыбной продукции в 12 пробах рыб (4,3%) были обнаружены личинки метацеркарий, одетые черным пигментом (рис. 2).

Рис. 2 – Личинка метацеракарии трематод, одетая черным пигментом, обнаруженная при исследовании проб рыбы

Примечание: фото Аракельян Р.С.; увеличение х 40

 

А при исследовании 152 проб почвы (23,9%), отобранной из разных мест г. Астрахани, в 14 из них (9,2%) были обнаружены мертвые личинки нематод и в 1 пробе (0,7%) обнаружены яйца аскарид.

Таким образом, подводя итог вышеописанному, можно сделать заключение о том, что наличие личинок в почве свидетельствует о фекальном заражении инвазированных нематодами животных данного объекта исследования. А наличие яиц аскарид в почве свидетельствует о загрязнении данного объекта фекалиями человека, инвазированного аскаридами либо о загрязнении данного объекта канализационными стоками. Что касается присутствия личинок стронгилид на плодоовощной продукции, то это может свидетельствовать о загрязнении почвы, имеющий непосредственный контакт с капустой и свеклой, фекалиями инвазированных животных.

Нередко в микропрепаратах, полученных при проведении санитарно-паразитологических исследований наряду с возбудителями паразитарных болезней животных и человека, можно обнаружить различные артефакты (частички волос, попавшие в препарат извне, споры растений, пыльца цветов).

При микроскопировании нужно грамотно и правильно подсчитать число паразитарных патогенов во всем объеме осадка, что соответствует их числу во всей исследованной пробе. Одновременно определяют систематическую принадлежность обнаруживаемых паразитических организмов: размеры, наличие ядер, внутриклеточные включения.

За анализируемый период работы (2018 – 2019 гг.) нами была собрана коллекция артефактов различных микропрепаратов, полученных при проведении санитарно-паразитологических исследований с объектов окружающей среды (таблица 2).

 

Таблица 2 – Артефакты, полученные при проведении санитарно-паразитологических исследований
объектов окружающей среды

№АртефактыЧисло проб, шт.Всего
ПочвыВодыСмывов с твердых объектовПищевых продуктов
Рыба и рыбопродуктыОвощи, фрукты, зелень
1Частички волос71317––37
2Фрагменты растений91–––10
3Фрагменты почвы15–––722
4Пыльца растений2––––2
5Споры растений7––––7
6Фрагменты насекомых4––––4
7Пузырьки воздуха49814237
8Старые стекла31248431
9Водоросли–5–––5
10Условно-патогенные микроорганизмы–4–––4
11Элементы пыли––10––10
 Всего5144392213169

 

 

Из приведенной выше таблицы видно, что очень часто при проведении различных санитарно-паразитологических исследований объектов окружающей среды были получены и обнаружены различные дефекты и артефакты, связанные с ошибками приготовления препарата и ошибками специалиста, проводящего исследований.

Ошибками приготовления препарата чаще всего являются низкое качество стекол, наличие царапин. Такие дефекты очень часто возникают от многократного употребления и серьезно затрудняют исследование, что в дальнейшем может привести к неправильной интерпретации результатов.

В наших наблюдениях старые стекла отмечались в 31 случае (18%). Как правило, это были стекла, имеющие царапины на одном предметном стекле.

Подобные дефекты на стеклах отмечались при проведении исследований со всех объектов окружающей среды, в т.ч. при исследовании почвы – 3 стекла, воды – 12, смывов с твердых поверхностей – 4, исследовании рыбы и рыбопродуктов – 8 и исследованиях продовольственного сырья – 4 стекла.

В большинстве случаев в микропрепаратах наблюдались посторонние частички и микроэлементы, а также присутствие условно-патогенных или свободноживущих микроорганизмов на различных объектах окружающей среды (почва и вода). Все эти включения нередко принимаются специалистами за яйца или личинки гельминтов, что в свою очередь считается ошибкой микроскописта.

Так, частички волос отмечались в 37 случаях (21,5%), в т.ч. при исследовании – воды – 13 и смывов с твердых поверхностей – 17 штук. Фрагменты растений отмечались в 10 случаях (5,8%), отмечаясь в препаратах почвы – 9 и воды – 1 штука.

В незначительных количествах отмечались такие артефакты, как фрагменты нерастворенной почвы – 22 случая (12,8%) в микропрепаратах при исследовании почвы – 15 и в смывах при исследовании фруктов, овощей и столовой зелени – 7 штук.

Другими незначительными артефактами являлись пыльца – 2 (1,2%) и споры растений – 7 (4,1%) случаев, а также фрагменты насекомых – 4 (2,3%), которые отмечались только в препаратах почвы. Водоросли – 5 (2,9%) и условно-патогенные микроорганизмы – 4 (2,3%) отмечались при исследовании проб речной воды; элементы пыли – 10 (5,8%) отмечались при исследовании проб смывов с твердых поверхностей.

Одним из существенных артефактов, возникающим при проведении любых лабораторных исследования, является наличие пузырьков воздуха в микропрепарате либо под покровным стеклом. Так, наличие пузырьков воздуха отмечалось в 40 случаях (23,3%), в т.ч. при исследовании почвы – 4 случая, воды – 2, смывов с твердых поверхностей – 8, овощей, фруктов, зелени и столовой зелени – 2 и при исследовании рыбы и рыбопродуктов 14 случаев.

Так, при исследовании почвы в наших наблюдениях отмечались следующие артефакты: частички волос в препарате, фрагменты растений, фрагменты нерастворенной почвы, пыльца, споры растений, фрагменты насекомых и пузырьки воздуха (рис. 3).

Рис. 3 – Пузырьки воздуха в препарате, образовавшиеся при исследовании почвы

Примечание: фото Аракельян Р.С.; увеличение х 10

 

При исследовании воды в наших наблюдениях отмечались следующие артефакты: наличие частичек волос, фрагменты растений, пузырьки воздуха, водоросли, произрастающие на речном дне и условно-патогенные и свободноживущие микроорганизмы (рис. 4, рис. 5).

 

Рис. 4 – Условно-патогенные микроорганизмы, обнаруженные при исследовании воды

Примечание: фото Аракельян Р.С.; увеличение х 40

Рис. 5 – Условно-патогенные микроорганизмы, обнаруженные при исследовании воды

Примечание: фото Аракельян Р.С.; увеличение х 10

 

При исследованиях смывов с твердых поверхностей нами отмечались следующие дефекты и артефакты: частички волос, пузырьки воздуха и элементы пыли. При проведении исследований рыбы и рыбопродуктов отмечался дефект в виде наличия пузырьков воздуха в микропрепарате.

При исследованиях плодоовощной продукции (фрукты, овощи, зелень, ягоды) отмечались дефекты: наличие фрагментов почвы и наличие пузырьков воздуха. 

Выводы

В результате проделанной работы была собрана коллекция лабораторных дефектов и артефактов, возникающих при проведении санитарно-паразитологических исследований с различных объектов окружающей среды.

  1. Наличие посторонних элементов (частички волос, элементы пыли, фрагменты растений и насекомых, пыльца и споры растений, водоросли) в микропрепаратах свидетельствует о нарушении правил приготовления данных препаратов, в результате чего произошел занос извне данных микроэлементов.
  2. Наличие пузырьков воздуха под покровными стеклами свидетельствует о неполной компрессии препарата.
  3. Наличие фрагментов нерастворенной почвы в микропрепарате свидетельствует о некачественно-проведенном исследовании.
  4. Четкое знание специалистом возбудителей паразитарной инвазии (яйца и личинки гельминтов, а также цисты патогенных кишечных простейших) не позволит перепутать данных возбудителей с условно-патогенными микроорганизмами.
  5. Собранная коллекция не способна отразить масштабные дефекты и артефакты, выявляемые при проведении различных лабораторных исследований, проводимых различными лабораторными подразделениями Астраханской области, но может служить наглядным примером недопущения возникновения представленных выше ошибок при проведении санитарно-паразитологических исследований объектов окружающей среды.
  6. Принятые специалистом за возбудителя дефекты и артефакты санитарно-паразитологических исследований могут негативно отразиться на выдаче неправильного санитарно-эпидемиологического заключения по обсемененности того или иного объекта окружающей среды яйцами и личинками гельминтов, а также цистами патогенных кишечных простейших.
Конфликт интересов

Не указан.

Conflict of Interest

None declared.

Список литературы / References

  1. Аракельян Р.С. Аскаридоз в Астраханской области / Р.С. Аракельян // В сборнике: Профилактическая медицина как научно-практическая основа сохранения и укрепления здоровья населения Сборник научных трудов. под общей редакцией М.А. Поздняковой. Нижний Новгород, 2014. С. 67-70.
  2. Аракельян Р.С. Дирофиляриоз в Астраханской области: современное состояние проблемы / Р.С. Аракельян, Х.М. Галимзянов, А.С. Аракельян // Актуальная инфектология. 2014. № 4 (5). С. 81-85.
  3. Думбадзе О.С. Особенности специфической лабораторной диагностики паразитозов человека / О.С. Думбадзе // Главный врач Юга России. – 2013. – № 5 (36). – С. 76-78.
  4. Карпенко С.Ф. Динамика клинических проявлений и каталазной активности сыворотки крови у больных коксиеллезом моложе 50 лет / С.Ф. Карпенко, Х.М. Галимзянов, Н.Б. Касимова и др. //Астраханский медицинский журнал. – 2012. – Т. 7. – № 2. – С. 64-68.
  5. Козлов С.С. Диагностика паразитозов. Мифы современности / С.С. Козлов, В.С. Турицын, А.В. Ласкин // Журнал инфектологии. – 2011. – Т. 3. – № 1. – С. 64-68.
  6. Кудаев С.В. Ошибки и артефакты, возникающие при лабораторной диагностике кровепаразитозов животных и человека / С.В. Кудаев, М.В. Стулова, Е.В. Мирекина // В сборнике: «Комариные Паразитозы: Эпидемиология, Клиника, Диагностика – 2016. – С. 62-65.
  7. Методические указания МУК 4.2.2664-10 «Методы санитарно-паразитологических исследований» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 23 июля 2010 г.). М. 2010.

Список литературы на английском языке / References in English

  1. Arakelyan R. S. Askaridoz v Astrakhanskojj oblasti [Ascariasis in Astrakhan Oblast] / R. S. Arakelyan // V sbornike: Profilakticheskaja medicina kak nauchno-prakticheskaja osnova sokhranenija i ukreplenija zdorov’ja naselenija Sbornik nauchnykh trudov [Preventive medicine as a scientific and practical basis for preserving and strengthening the health of the populationa Collection of scientific papers] / Edited by M. A. Pozdnyakov. Nizhny Novgorod, 2014. Pp. 67-70 [in Russian]
  2. Arakelyan R. S. Dirofiljarioz v Astrakhanskojj oblasti: sovremennoe sostojanie problemy [Dirofilariasis in the Astrakhan region: the current state of the problem] / R. S. Arakelyan, H. M. Galimzyanov, A. S. Arakelyan // Aktual’naja infektologija [Actual Infectology]. 2014. № 4 (5), pp. 81-85 [in Russian]
  3. Dumbadze O. S. Osobennosti specificheskojj laboratornojj diagnostiki parazitozov cheloveka [Features of specific laboratory diagnostics of human parasitoses] / O. S. Dumbadze // Glavnyjj vrach Juga Rossii [Chief Doctor of the South of Russia]. – 2013. – № 5 (36). – pp. 76-78 [in Russian]
  4. Karpenko S. F. Dinamika klinicheskikh projavlenijj i katalaznojj aktivnosti syvorotki krovi u bol’nykh koksiellezom molozhe 50 let [Dynamics of clinical manifestations and catalase activity of blood serum in patients with coxyellosis younger than 50 years] / S. F. Karpenko, H. M. Galimzyanov, N. B. Kasimova, et al. // Astrakhanskijj medicinskijj zhurnal [Astrakhan Medical Journal]. – 2012. – Vol. 7. – No. 2. – pp. 64-68 [in Russian]
  5. Kozlov S. S. Diagnostika parazitozov. Mify sovremennosti [Diagnostics of parasitoses. Myths of modernity] / S. Kozlov, V. S. Turitsyn, A.V. Laskin // Zhurnal infektologii [Journal of Infectology]. – 2011. – Vol. 3. – No. 1. – pp. 64-68 [in Russian]
  6. Kudaev S. V. Oshibki i artefakty, voznikajushhie pri laboratornojj diagnostike kroveparazitozov zhivotnykh i cheloveka [Errors and artifacts that occur during laboratory diagnostics of animal and human blood parasitoses] / S. V. Kudaev, M. V. Stulova, E. V. Mirekina // Komarinye Parazitozy: Ehpidemiologija, Klinika, Diagnostika [Mosquito Parasitoses: Epidemiology, Clinic, Diagnostics]-2016. – PP. 62-65 [in Russian]
  7. Metodicheskie ukazanija MUK 4.2.2664-10 «Metody sanitarno-parazitologicheskikh issledovanijj» (utv. Glavnym gosudarstvennym sanitarnym vrachom RF G.G. Onishhenko 23 ijulja 2010 g.) [Methodological guidelines of the MUC 4.2.2664-10 “Methods of sanitary and parasitological research” (approved by Chief State Sanitary Doctor of the Russian Federation G. G. Onishchenko July 23, 2010)]. M. 2010 [in Russian]

Принципы и методы санитарно-микробиологических исследований

Принципы, которыми руководствуются микробиологи при санитарно-микробиологических исследованиях, исходят из основной задачи, разрешаемой ими: определение возможности присутствия в исследуемом объекте патогенных микроорганизмов или токсинов, образующихся при их жизнедеятельности, а также обнаружение и оценка степени порчи пищевых продуктов.

Первым принципом является правильное взятие проб для санитарно-микробиологических исследований с соблюдением всех необходимых условий, регламентированных для каждого исследуемого объекта, и правил стерильности. Ошибки, допущенные при взятии проб, приводят к получению неправильных результатов, и исправить их уже нельзя. При упаковке и транспортировке проб необходимо создавать такие условия, чтобы не допустить гибели или размножения исходной микрофлоры в исследуемом объекте, что может исказить результаты исследований. Поэтому одним из правил является, возможно, быстрое проведение исследований, и, если необходимо, сохранение материала только в условиях холодильника и не более 6-8 часов. Каждая проба сопровождается документом, в котором указывают название исследуемого материала, номер пробы, время, место взятия, характеристика объекта, подпись лица, взявшего пробу.

Второй принцип – проведение серийных анализов исходит из особенностей исследуемых объектов. Как правило, вода, почва, воздух и другие объекты содержат разнообразные микроорганизмы, распределение которых неравномерно. К тому же микроорганизмы, находясь в биоценотических отношениях, подвергаются взаимному влиянию, что ведет к гибели одних и активному размножению других. Поэтому берут серию проб из разных участков исследуемого объекта, по возможности большее количество проб, что позволит получить более достоверную характеристику объекта. Доставленные в лабораторию пробы смешивают, затем точно отмеряют необходимое количество материала – среднее по отношению к исследуемому материалу в целом.

Третий принцип – повторное взятие проб – необходимо для получения сопоставимых результатов. Это связано, прежде всего, с тем, что исследуемые объекты весьма динамичны (вода, воздух и т.п.), сменяемость микрофлоры в них во времени и пространстве очень велика. Патогенные микроорганизмы попадают в окружающую среду, как правило, в небольшом количестве, да и распределяются в ней равномерно. Поэтому повторное взятие проб позволяет более точно определить биологическую контаминацию объектов окружающей среды.

Четвертый принцип – применение стандартных и унифицированных методов, утвержденных соответствующими ГОСТами и инструкциями, что дает возможность получить сравнимые результаты.

Пятый принцип – использование при оценке исследуемых объектов одновременно комплекса тестов для получения разносторонней санитарно-микробиологической характеристики. Применяют прямой метод обнаружения патогенных микроорганизмов и косвенный — позволяющий судить о загрязнении объектов окружающей среды выделениями человека и животных и его степени. К косвенным тестам относится определение общего микробного числа, количественного и качественного состава санитарно-показательных микроорганизмов. Применение косвенных методов оценки потенциальной возможности загрязнения объектов окружающей среды патогенными микроорганизмами, использование как бы обходного пути для изучения обсемененности материалов, является особенностью санитарно-микробиологических исследований.

Шестой принцип – заключается в проведении оценки исследуемых объектов по совокупности полученных результатов при использовании санитарно-микробиологических тестов других гигиенических показателей, указанных в соответствующих ГОСТах и нормативах (органолептических, химических, физических и т.д.). Всегда необходимо учитывать, что развитие микробов тесно связано с другими факторами окружающей среды, которые могут оказывать как благоприятное, так и неблагоприятное влияние, усиливая или ограничивая возможности размножения патогенных микроорганизмов и накопления их токсинов. Следует учитывать и то, что почти любой объект исследования имеет собственную микрофлору, которая вызывает специфические биохимические процессы, и те изменения в объектах, которые обусловливаются посторонними микроорганизмами. Санитарный микробиолог должен хорошо знать ход биохимических процессов, происходящих в норме и в исследуемом объекте (сырье, пищевые продукты, готовом изделии и т.д.), технологию производства, уметь определить характер вредного воздействия попавших микробов, возможные последствия такого воздействия и рекомендовать конкретные мероприятия по их предупреждению. Нередко врачу приходится прибегать к помощи специалистов в области общей, сельскохозяйственной, промышленной, ветеринарной микробиологии и решать вопрос при непосредственном участии соответствующих специалистов.

Седьмой принцип – ответственность врачей санитарной службы за точность обоснования выводов и заключений о состоянии исследуемых объектов. При санитарно-микробиологическом исследовании выявляется степень порчи пищевых продуктов (или других объектов), пригодность их к употреблению, возможная опасность для здоровья населения. Если пищевые продукты возможно реализовать, врач должен дать обоснованную рекомендацию о наиболее рациональном способе их обработки и употреблении. Запрещается использовать пищевые продукты, воду водоемов и др. Закрытие предприятия из-за санитарного неблагополучия наносит определенный экономический ущерб. Ответственность за такое решение несет врач санитарной службы. Для большей объективности в оценке полученных результатов и заключениях врачи пользуются специальными инструкциями, нормативами, ГОСТами, разработанными профильными санитарно-микробиологическими учреждениями и утвержденными Министерством Здравоохранения. Эти стандарты периодически пересматриваются и приводятся в соответствие с изменениями, которые вытекают из практического опыта, материальных возможностей, современного уровня знаний и развития техники.

Санитарно микробиологический анализ и исследования воды на микробиологию

При создании собственной скважины на загородном участке встает вопрос о безопасности употребления воды в пищу. Важно проверить чистоту также бутилированной, водопроводной или воды из бассейна. Загрязненная и с примесями она может быть опасной для здоровья и содержать опасные элементы. Санитарно микробиологический анализ питьевой воды позволяет избавиться от сомнений и начать пользоваться колодцем по назначению.


Как производится исследование

На начальном этапе берутся пробы воды, хозяин скважины может доставить образец самостоятельно или заказать выезд лаборанта со стерильной посудой к месту забора. Для чистоты эксперимента важно, чтобы при сдаче на анализ воды на микробиологию посуда была стерильной.

Далее лаборатория производит:

  • заключение договора на проведение исследований;
  • выполняет согласованные измерения в нужные сроки;
  • оформление отчета с протоколами проведенных экспериментов;
  • рекомендации по безопасности использования воды;
  • выдачу документов, имеющих юридическую силу.

Когда проводится микробиологический анализ воды на микробиологию, то используется комплекс методов: посев материала на питательные среды, пропускание воды через мембранные фильтры, используется серологический, иммунолюминисцентный и радиоиммунный анализ.

Для получения правдивого результата крайне важно соблюдать условия забора, упаковки и транспортировки материала. Если получен сомнительный результат производится повторное взятие проб, которое позволяет получить точный ответ. Поэтому к процедуре химический и микробиологический анализ воды нужно отнестись серьезно

Важно
Водная среда является средой для размножения множества инфекционных заболеваний. Ежедневно скважина может заливаться ливневыми, сточными и талыми водами. В нее попадают кишечные палочки и энтеробактерии, возбудители кишечных инфекций. Поэтому очень важно проводить периодический контроль качества воды.

Видео

Таблица показателей норм воды по Москве

Что следует из микробиологического исследования воды

В результате изучения состава воды в лаборатории готовятся протоколы, оформляется технический отчет и дается подробная экспертная оценка. Измерения производятся в соответствии с государственными нормативами. Лаборатория дает прогноз о возможных последствиях использования воды в технических и пищевых целях в соответствии с экологическими параметрами. После проведения микробиологического исследования воды заказчик получает:

  • показатель количества колиформных бактерий;
  • расчет вероятного числа калифагов;
  • наличие в среде синегнойной палочки;
  • присутствие возбудителей кишечных инфекций;
  • споры сульфитредуцирующих клостридий.

При бурении новой скважины исследование должно проводиться дважды – сразу после создания углубления, и через четыре недели после начала запуска скважины в работу. До получения результатов микробиологического анализа воды употреблять ее не рекомендуется. В дальнейшем рекомендовано повторять исследование ежегодно, а также в случае происхождения чрезвычайных ситуаций (экологических загрязнений или сбросов).

Лабораторные исследования необходимо производить при выборе центрального водоснабжения, контроле проведенного обеззараживания, начале пользования артезианской скважиной, родником или колодцем. Анализ важно произвести для определения безопасности естественного водоема, бассейна или сточных вод, а также при вспышке инфекционных болезней в регионе. Потребители также могут обратиться в лабораторию для подтверждения безопасности бутилированной воды.

Отзыв
Лабораторные результаты позволили развеять все сомнения, теперь мы с удовольствием пьем колодезную воду, она оказалась чистейшей. Спасибо, через год вернемся к вам снова.

Санитарно-паразитологическая и экономическая оценка методов обеззараживания сточных вод и навоза свиноводческих хозяйств

Цель исследования: санитарно-ветеринарная и экономическая оценка обеззараживающего действия различных технологий обеззараживания навоза и сточных вод от инвазивных патогенов свиней. а также для переработки этих отходов. Материалы и методы: Степень загрязнения жидкого навоза свиноводческих хозяйств яйцами и личинками гельминтов, цистами и ооцистами паразитарных простейших исследована на пробах, отбираемых один раз в месяц в хозяйствах Подмосковья и один раз в два месяца в хозяйствах. Республики Мордовия.Отбор, транспортировка и исследование образцов проводились по методике А. Черепанова (1972). Пробы отбирались утром в 3-5 точках с использованием пробоотборника IMOP 1000. В точке отбора пробы была создана инвентаризация, в которой указывались дата, место, точка отбора и ее объем пробы. Чтобы предотвратить развитие микрофлоры в образцах, было добавлено определенное количество консерванта. При отборе пробы твердой фракции навоза с поверхности, среднего и нижнего уровня навозную массу отбирали по горизонтали на каждом уровне из 3-5 точек, тщательно перемешивали, затем усредненную пробу (1.0 кг) помещали в полиэтиленовый пакет. Для подтверждения жизнеспособности яиц гельминтов, обнаруженных копровоскопическими исследованиями, яйца переносили микропипеткой в ​​чашки Петри и культивировали в термостате при температуре 26 ° C во влажной среде, периодически аэрируя и наблюдая за развитием зародыша. Сравнительная оценка эффективности очистных сооружений на выбранных свинофермах проводилась путем сравнения количества инвазивных элементов в 1 литре жидкого навоза, поступающего и вытекающего из очистных сооружений.Результаты и обсуждение: на всех трех выбранных свинофермах наиболее интенсивные заражения яйцами гельминтов, цистами и ооцистами паразитарных простейших были обнаружены в неочищенных сточных водах, что свидетельствует о недостаточной эффективности антипаразитарных мероприятий на ферме. ОАО «Мордовский бекон» с производительностью 54 тыс. Голов свиней в год — единственное из трех проинспектированных хозяйств, где жидкий навоз разделяется на фракции с последующей дезинсекцией твердой фракции на бетонных подушках с дальнейшим внесением навоза в качестве органического удобрения.Благодаря механическому разделению жидкого навоза на фракции, вносимого в этом хозяйстве, количество паразитических элементов внутренних паразитов свиней (яйца аскарид, трихоцефала, эзофагита, ооцисты кокцидий и цисты балантидий) в 1 кг твердой фракции составило 586 экз. Эффективность обеззараживания жидкого навоза от паразитарных элементов с учетом данного метода обработки составила 53,6-73,4%. Биотермическое обеззараживание твердой фракции навозных куч достигается в течение 3-5 месяцев (100%) в зависимости от сезона и используется на полях как органическое удобрение.

Методы диагностики гельминтов, передающихся через почву

Введение

Более 1,5 миллиарда человек, что составляет почти четверть населения мира, инфицированы гельминтами, передаваемыми через почву (ППГ). 1 Инфекции, передаваемые половым путем, широко распространены в тропических и субтропических регионах мира, причем самые высокие показатели распространены в странах Африки к югу от Сахары, Китае, Южной Америке и Азии. Более 267 миллионов детей дошкольного возраста и 568 миллионов детей школьного возраста проживают в этих районах и нуждаются в лечебных и профилактических мероприятиях. 1 Эти инфекции чаще всего регистрируются у людей, проживающих или путешествующих в регионы с плохим доступом к чистой питьевой воде, санитарии и гигиене, обычно в странах с низким или средним уровнем дохода; или среди уязвимых групп населения в странах с высоким уровнем дохода. 2 Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) выявила инфекции, вызываемые четырьмя видами ППГ, а именно. Ascaris lumbricoides , анкилостомы (например, Necator americanus и Ancylostoma duodenale ) и Trichuris trichiura среди забытых тропических болезней (NTD). 1 Совсем недавно в некоторых районах Юго-Восточной Азии были зарегистрированы зоонозные анкилостомы Ancylostoma ceylanicum , а также анкилостомы человека. 2 Хотя Strongyloides stercoralis еще не включен в этот список ЗТБ ВОЗ, он также является важным ЗПГ, учитывая значительную заболеваемость, вызванную им, и его географическое совпадение с другими ЗПГ. По оценкам, более 600 миллионов человек во всем мире инфицированы S. stercoralis . 1

Инфекции ППГ обычно клинически бессимптомны, хотя могут наблюдаться неспецифические желудочно-кишечные симптомы и / или эозинофилия. Поскольку ППГ редко вызывают смертность, их влияние на здоровье измеряется с использованием лет жизни с поправкой на инвалидность (DALY). Инфекции ППГ являются причиной высокого глобального бремени и значительной заболеваемости. 3,4 Недавние данные показали, что в 2019 году ПГП вызвала 2090 случаев смерти с 1,97 миллиона (1,26–3,00) DALY, при этом преобладающей причиной была анкилостомическая болезнь. 5 Фактически, заболеваемость прямо пропорциональна интенсивности инфекции, и такие изнурительные исходы, как анемия, кишечная непроходимость, задержка физического или когнитивного развития, наблюдаются у сильно инфицированных людей, особенно у детей. 6–8 Железодефицитная анемия, вызванная анкилостомозом во время беременности, была связана с неблагоприятными исходами для матери и плода, включая недоношенных детей и детей с низкой массой тела, нарушение лактации и т. Д. 9

На рубеже нового тысячелетия профилактическая химиотерапия (ПК) у детей школьного возраста была одобрена ВОЗ для борьбы с ППГ и дополнительно оговорена в Лондонской декларации о ДНТ 2012 г. с конечной целью положить конец передаче ППГ. 10–12 ВОЗ рекомендует комплексный подход, который включает доступ к чистой воде, продвижение санитарии, гигиены и санитарное просвещение, а также массовое введение лекарств детям, и ожидается, что при постоянных усилиях элиминация ППГ будет достигнута к 2030 году. 11 Следует отметить, что каждый вид ГПГ имеет отличные эпидемиологические особенности и возрастные модели распространенности инфекции (максимальная распространенность A. lumbricoides и T. trichiura обычно наблюдается у детей младшего возраста, тогда как максимальная распространенность анкилостомы наблюдаются в подростковом или раннем взрослом возрасте), частота повторного заражения (короткоживущие гельминты реинфекция быстрее), 12 и различная чувствительность к альбендазолу, 13 , которые могут влиять на эффективность стратегий ПК. 13 Более того, взрослые не являются мишенями для ПК и остаются важным резервуаром для повторного заражения леченных детей. Хотя ПК внедряется без необходимости оценивать индивидуальный статус инфекции, точные оценки распространенности с использованием высокочувствительной диагностики важны для определения интенсивности инфекции в различных регионах. Диагностика также информирует о выполнении контрольных мер с точки зрения снижения распространенности и / или интенсивности инфекций, что может определять частоту профилактической химиотерапии.

Эпидемиологические данные свидетельствуют о повышении распространенности инфекций, вызываемых ППГ, связанных с прямым контактом со сточными водами, загрязненной почвой и / или употреблением овощей, орошаемых ими. 14 Таким образом, помимо выявления клинических инфекций, обнаружение СТГ в таких образцах также важно. В этом обзоре мы подробно рассказываем о различных инструментах диагностики ППГ в клинических образцах, сточных водах и сточных водах.

Обычно диагностику СТГ проводят путем исследования кала или других образцов желудочно-кишечного тракта на предмет яиц, личинок или взрослых гельминтов под микроскопом.Однако выбор диагностического метода также зависит от того, используется ли он в высокоэндемичных или низкоэндемичных условиях, поскольку высокочувствительные методы потребуются для эпиднадзора в малоэндемичных районах, путешественниках из этих регионов или на этапе элиминации.

Методы на основе микроскопии

Обнаружение СТГ с помощью микроскопии, несмотря на простоту и дешевизну, не имеет разумной чувствительности из-за многих факторов, включая периодическое выделение яиц паразита, низкую интенсивность инфекции ниже предела обнаружения, неправильную транспортировку или хранение образца, приводящую к дезинтеграции паразитов и т. Д. .Морфология паразита может быть искажена из-за хранения или лечения лекарственными препаратами. Таким образом, в течение 10 дней необходимо исследовать не менее трех свежих образцов фекалий и использовать некоторые методы концентрации паразитов. 15–17 Различные диагностические тесты, основанные на микроскопии, для диагностики ППГ приведены на рисунке 1.

Рис. 1 Краткое изложение преимуществ (оранжевый) и недостатков (фиолетовый) диагностических тестов на гельминты, передаваемые через почву, на основе микроскопии.

Подготовка к влажной установке

Гладкий жидкий препарат кала с физиологическим раствором и йодом исследуют на наличие личинок или яиц гельминтов. Характеристики различных яиц или личинок STH приведены на Рисунке 2.

Густой мазок Като – Каца

16

В настоящее время метод Като – Каца (KK) является рекомендованным ВОЗ «золотым стандартом» для обнаружения яиц STH, а также для выявления яиц Schistosoma , особенно когда требуется количественное определение яиц.Используются несколько модификаций Като – Каца. Вкратце, крупные частицы удаляются путем продавливания фекалий через сетчатый экран с последующим переносом известного количества образца на предметное стекло через шаблон с отверстием, которое удерживает фиксированное количество фекального материала (например, отверстие 9 мм на шаблон толщиной 1 мм вмещает около 50 мг фекалий). Шаблон удаляется, и целлофан, пропитанный раствором глицерин-метиленового синего, используется для покрытия оставшегося образца. Предметные стекла следует хранить при комнатной температуре или в инкубаторе при 40 ° C (за исключением анкилостомов), чтобы очистить фекальный мусор.Микроскопическое исследование лучше всего проводить через 24–48 часов. Количество яиц гельминтов на грамм стула (EPG) рассчитывается как: Количество яиц в мазке × 20 (для шаблона 50 мг) для измерения интенсивности инфекции. 17 Яйца T. trichiura, A. lumbricoides и Schistosoma легко обнаруживаются и остаются распознаваемыми в течение нескольких месяцев с помощью метода Като-Каца, но он неэффективен для обнаружения анкилостомоза, поскольку эти яйца имеют тенденцию к раннему распаду (в течение 60 мин), что приводит к ложноотрицательным результатам. 18 Более того, личинок S. stercoralis также остаются необнаруженными. Хотя метод Като-Кац является экономически эффективным и простым в выполнении, образцы с низкой интенсивностью заражения и переменным временем очищения / дезинтеграции могут препятствовать одновременному обнаружению различных СТГ. 16 Сводка репрезентативных исследований, оценивающих эффективность Като – Каца с другими методами микроскопии, представлена ​​в таблице 1. 18–29

Таблица 1 Сводка репрезентативных исследований по оценке эффективности исследования толстого мазка Като – Каца

Методы концентрации паразитов в стуле

Микроскопическое обнаружение паразитов можно улучшить, используя различные методы, которые концентрируют паразита в образце и удаляют фекальные остатки.Эти методы основаны либо на принципе флотации, либо на центробежном осаждении.

Технологии на основе центрифугирования

Метод концентрирования эфира формола или этилацетата (FEC) может использоваться как для свежих, так и для консервированных образцов и позволяет извлекать паразитов центрифугированием в фекальный осадок. Вкратце, небольшому количеству образца стула позволяют пройти через два слоя марли в коническую трубку, содержащую 0,85% физиологического раствора или 10% формалина, а затем перемешивают. Этилацетат добавляют к фекальной суспензии для извлечения жира и мусора, и пробирку центрифугируют (500 г в течение минимум 10 мин), оставляя паразитов в осадке.Супернатант декантируют, осадок ресуспендируют в физиологическом растворе или 10% формалине и исследуют как влажный препарат с использованием объективов 10x и 40x, с йодом или без него. Разбавленный формалин или формалин ацетат-уксусная кислота-натрия (СНФ) используется для инактивации микроорганизмов и минимизации риска лабораторной инфекции с фекалиями. Образцы стула FEC можно исследовать через несколько часов или дней после хранения образца в формалине. Однако этот метод имеет недостатки из-за использования эфира, который является взрывоопасным, раздражает дыхательные пути и может быть вредным для персонала лаборатории, а также требует много времени. 16 Николай и др. (2014) выполнили метаанализ чувствительности различных диагностических методов для STH в отсутствие истинного золотого стандарта. 30 Несколько исследований, в которых сравнивали различные микроскопические методы с Като-Кацем, представлены в таблице 1.

Недавно компания DiaSys Europe разработала закрытый одноразовый метод концентратора фекальных паразитов Parasep ® SF. Это удаляет мусор и жир образца с помощью двухступенчатой ​​фильтрующей матрицы. В нем не используются потенциально опасные химические вещества, а кроме того, он удобен для пользователя, экономит время и рентабелен для диагностики гельминтозов в крупномасштабных эпидемиологических исследованиях. 31 Была разработана модификация этого метода — концентратор фекальных паразитов Mini Parasep ® SF. Хотя эта модификация широко оценивалась на предмет протозойных инфекций, ее эффективность для диагностики ППГ сообщается лишь в нескольких исследованиях. 29–32 Более четкий фон с меньшим количеством фекалий и лучшим урожаем T. trichiura был отмечен с Mini Parasep ® . 29,31–34 Кроме того, среднее время обработки с Parasep ® намного быстрее, чем при обычной концентрации формол-эфир-ацетат (4–5 мин против 10–15 мин / образец), что является значительным временем -забавка.Однако обычный FEC стоит меньше, чем Parasep® (0,30 против 0,9 долл. США за образец). 33 Более высокая чувствительность Mini Parasep ® SF отмечена для A. lumbricoides , Като-Каца для T. trichiura и McMaster для яиц анкилостомы. 34

Флотационные технологии

Большинство яиц паразитов имеют удельный вес 1,05–1,20, что позволяет им плавать, когда образец стула смешивается с раствором с высоким удельным весом (диапазон 1.18–1.27). Обычно используемые флотационные растворы — это сульфат цинка или солевой раствор. Технологии, последовавшие за методом центробежной флотации в Корнелле, штат Висконсин, а именно метод Макмастера и FLOTAC / Mini-FLOTAC, оказались многообещающими. 17,28,35,36

Техника Макмастера

В этом методе используется счетная камера, которая позволяет исследовать известный объем фекальной суспензии (2 × 0,15 мл) под микроскопом. Камера Макмастера состоит из двух отсеков, на каждой из которых выгравирована сетка на верхней поверхности.При заполнении суспензией фекалий во флотационной жидкости большая часть мусора тонет, а яйца всплывают на поверхность под решеткой, где их можно легко увидеть и относительно быстро подсчитать. При известном весе фекалий и объеме флотационной жидкости, использованной для приготовления суспензии, количество яиц в EPG можно легко вычислить, умножив количество яиц в отмеченных областях на простой коэффициент пересчета. 21 Метод Макмастера недорог, прост и широко используется в ветеринарной паразитологии и даже в исследованиях на людях для оценки эффективности лечения глистогонными препаратами. 35 Общие диагностические характеристики метода Макмастера и Като – Каца сопоставимы для STH согласно недавнему метаанализу. 30 В исследовании Periago et al., Като-Кац превзошел метод Макмастера для всех трех ГП, особенно при обнаружении неоплодотворенных яиц A. lumbricoides . 21 Причина плохой работы методов флотации для обнаружения неоплодотворенных яиц Ascaris заключается в их высоком удельном весе (SG = 1.18) и отсутствие липоидальной мембраны, которая препятствует уравновешиванию яйца с внешней средой флотации, в результате чего яйцо тонет, а не плавает в физиологическом растворе. 21,22,36 Этот недостаток и необходимость специальной счетной камеры являются недостатками данной техники.

FLOTAC

Центробежная флотация является основой технологии FLOTAC и состоит из цилиндрического устройства с двумя флотационными камерами объемом 5 мл, позволяющими анализировать больше фекального материала по сравнению с методом Като-Каца (100 мг против 42 мг). 37–39 Он обладает высокой чувствительностью с дополнительным преимуществом, заключающимся в том, что он представляет собой закрытую систему, которая защищает операторов, сохраняет образец и даже позволяет повторять последующие исследования образцов. Однако методологическая сложность и необходимость в конкретном устройстве для центрифугирования проб могут ограничить его применимость в лабораториях с ограниченными ресурсами. Mini-FLOTAC — это упрощенная версия этого устройства без стадии центрифугирования. 20,22,37–39 Недавний метаанализ показал чувствительность прибл.92,7% для FLOTAC против 42,8% для прямой микроскопии. 30 Метод Като – Каца имел чувствительность 74–95% для обнаружения всех СТГ при высокой интенсивности инфекции, которая снижается до 53–80% в условиях низкой интенсивности инфекции, с самой низкой эффективностью для A. lumbricoides и анкилостомы. Метод FLOTAC имеет наивысшую чувствительность в условиях как низкой, так и высокой интенсивности заражения; однако среднее количество яиц значительно ниже по сравнению с методом Като – Каца. 25,26,30 Следовательно, проверка этого метода в различных эпидемиологических условиях с различной интенсивностью инфекций необходима, прежде чем рекомендовать его для широкомасштабного использования в сообществе.

Цифровая микроскопия

Для обеспечения объективной оценки текущих технологий и определения приоритетов продуктов для использования в программах борьбы с ГПН была сформулирована подробная структура, позволяющая связать точки принятия решения по программе с аналогичными профилями целевых продуктов (TPP). 40 Были предложены три возможности для улучшения диагностики ППГ: «Во-первых, интеграция контроля / обеспечения качества обработки проб и подсчета яиц; во-вторых, увеличение пропускной способности образца, и; в-третьих, подключение к Интернету, чтобы результаты тестов были доступны для удаленной интерпретации.” 40 Этим техническим требованиям соответствует FECPAK G2 , инструмент, разработанный для подсчета яиц гельминтов в образцах фекалий овец, крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов и т. Д. 40 В FECPAK образец стула, растворенный во флотационном растворе, заполняется трубка с центральной опорой и яйца могут сконцентрироваться в одном микроскопическом поле зрения. Затем вложение позволяет получить изображения яиц, которые собраны в единую область просмотра, и это цифровое изображение сохраняется и загружается в онлайн. 41 В исследовании Moser et al. чувствительность 75,6%, 71,5% и 65,8% для обнаружения A. lumbricoides , анкилостомы и T. trichiura , соответственно, наблюдалась для FECPAK G2 , что было намного ниже, чем у метода Като-Каца. 42 Однако при тщательной разработке это может быть интересным эпидемиологическим и диагностическим инструментом.

Технология Lab-On-A-Disk

Еще одна технология, соответствующая TTP, — это технология lab-on-a-disk (LOD).Это микрожидкостная платформа, основанная как на центрифугировании, так и на флотации яиц для концентрации в зоне визуализации с последующим захватом изображения. 43 Этот метод имеет потенциал для применения в местах оказания медицинской помощи, однако необходимо обеспечить соответствующее обучение и обучение пользователей и аспекты управления качеством с точки зрения калибровки и обслуживания устройства. Полевая оценка технологии LOD в образцах людей из Эфиопии показала успешный захват яиц STH в зоне просмотра изображений устройства LOD даже в условиях низкой интенсивности заражения. 43 Было замечено почти полное соответствие с Mini-FLOTAC (оценка Каппа: 0,91); Фактически, с помощью метода LOD было подсчитано больше яиц.

Культуральные методы

Использование паразитарных культур при инфекциях, передаваемых половым путем, редко является основой диагностики и в основном применяется в исследовательских учреждениях, за исключением выделения S. stercoralis. 44–46 Однако следует проявлять большую осторожность, поскольку личинки заразны и могут представлять биологическую опасность для персонала лаборатории.Сводка различных используемых методов обнаружения личинок приведена в таблице 2.

Таблица 2 Характеристики методов обнаружения личинок для диагностики стронгилоидоза или анкилостомоза

Серологические методы

Обнаружение антител

Обнаружение антител в сыворотке не особенно полезно для диагностики ППГ, за исключением S. stercoralis . Хотя непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия (IFAT) и тест агглютинации желатиновых частиц (GPAT) обладают высокой чувствительностью (81–98%) и специфичностью (74%), потребность в большом количестве живых инфекционных личинок ограничивает их использование. 44,47 Иммуноблот-анализ с использованием антигенов S. stercoralis и S. ratti был использован в исследовании 2003 года для преодоления этого недостатка и показал чувствительность в диапазоне 65–100%. 48 Однако дальнейших отчетов об оценке этих тестов нет, и поэтому их достоверность сомнительна.

Неочищенные экстракты нитевидных личинок из S. stercoralis / S. venezuelensis или S. ratti использовались в нескольких собственных иммуноферментных анализах (ELISA) и коммерческих наборах с чувствительностью в диапазоне 73–100%. 44 , однако, перекрестная реактивность с другими нематодами, особенно с филяриатными червями. , и наблюдаются плохие показатели у лиц с ослабленным иммунитетом. 49 Ложноположительные результаты при инфекциях, вызванных Echinococcus и Toxocara , реже наблюдаются с помощью ELISA по сравнению с IFAT. Стоит упомянуть, что исследования на основе ELISA проводились в дизайнах исследований случай-контроль с использованием образцов сыворотки от пациентов с известным стронгилоидозом по сравнению со здоровыми людьми из контрольной группы, а не с людьми, укрывающими другие инфекции нематод, что приводило к ложно завышенным оценкам эффективности. Другой проблемой является переоценка бремени болезни серологическими исследованиями по сравнению с недооценкой паразитологическими методами, поскольку исследование кала само по себе является несовершенным золотым стандартом.Хотя наблюдается повышенная специфичность на 13,3% при замене IgG на IgG4 в ELISA Strongyloides , очень мало исследований было сосредоточено на обнаружении других изотипов антител. 50

Система иммунопреципитации люциферазы (LIPS) была разработана с использованием рекомбинантного антигена Strongyloides (NIE). 51,52 Это быстрый тест (<3 часов), он имеет хорошую чувствительность (97%) и специфичность (100%) без перекрестной реакции. 52 Кроме того, он использует рекомбинантный антиген, что делает возможным массовое производство и очистку по сравнению с трудоемким приготовлением неочищенного антигена, которое зависит от сбора стула у инфицированных людей / животных.Обнаружение IgG и IgG4-специфических антител с использованием меченного люциферазой рекомбинантного белка Ss-NIE-1 из S. stercoralis с помощью LIPS показало чувствительность и специфичность 93% и 95% соответственно. 53 Недавно был разработан тест-полоска латерального потока с использованием рекомбинантных белков NIE (rNIE) и рекомбинантных белков Ss1a (rSs1a). Он продемонстрировал чувствительность 91,3% и специфичность 100% для серодиагностики стронгилоидоза и заслуживает дальнейшей оценки. 54

Обнаружение копроантигенов

Обнаружение копроантигенов может иметь потенциал для использования в иммуноферментных тестах в местах оказания медицинской помощи, таких как тесты на малярию.Сообщалось, что обнаружение копроантигена S. stercoralis с помощью ELISA имеет хорошую чувствительность и специфичность, но дальнейшие результаты его оценки недоступны. 55 Недавно ВА-1, экскреторно-секреторный продукт A. lumbricoides , был исследован в качестве копроантигенного маркера инфекции с помощью ELISA. 56 ИФА Ascaris BA-1 имел нижний предел количественного определения 2,74 нг / г стула, и его оценка на панели образцов стула детей школьного возраста, проживающих в Кении, показала чувствительность и специфичность 91.5% и 95,3% соответственно. Помимо качественной оценки инфекции, было также замечено количественное отражение в интенсивности инфекции, и было обнаружено, что значение ABA-1 в 18,2 нг / г стула является пределом между низкой и средней интенсивностью инфекции. Также было замечено, что уровни ABA-1 сильно снизились после лечения. Коммерческий набор для обнаружения антигенов Ascaris , анкилостомы и Trichuris был запатентован и продан лабораториями IDEXX для использования в ветеринарии. 57

Недавно были оценены биомаркеры в моче инфекции A. lumbricoides , такие как 2-метилбутирамид, 2-метилпентаноилкарнитин (2-MPC) и метаболиты 2-метилвалерамида. 58,59 Из них было установлено, что 2-MPC имеет точность 85,7% для обнаружения инфекции с лучшей производительностью (точность 90,5%) для умеренной и тяжелой инфекции. 58 Значительное снижение после лечения альбендазолом также наблюдалось со значительной ассоциацией между уровнями 2-ПДК в моче и количеством гельминтов / яиц. 58 Однако те же авторы не обнаружили этот биомаркер у инфицированных индонезийских субъектов. 59

Молекулярные методы

За последнее десятилетие усилия по разработке и оценке молекулярной диагностики ППГ приобрели импульс для эпидемиологических исследований, направленных на выработку интервенционных стратегий и диагностики у путешественников, возвращающихся из эндемичных районов. 60 Однако до сих пор не хватает молекулярных платформ для обнаружения СТГ. Отчасти сложность оценки эффективности молекулярных тестов заключается в отсутствии оптимального золотого стандарта, поскольку обычно методы микроскопического исследования кала используются в качестве эталона, хотя и имеют низкую чувствительность.До сих пор нет четких критериев для валидации лабораторных ПЦР. Диагностическая надежность молекулярных методов также зависит от эффективности выделения ДНК и сохранности образцов перед анализом образцов. В образцах стула много ингибиторов, влияющих на чувствительность ПЦР. Более того, хранение образцов в формалине также ингибирует ПЦР. Следует отметить, что яйца глистов, особенно яйца T. trichiura , разрушить сложнее, что влияет на эффективность экстракции ДНК и ПЦР. 60,61 Ayana et al. (2019) сравнили четыре метода экстракции и сохранения ДНК для молекулярного обнаружения и количественной оценки гельминтов, передаваемых через почву, в образцах фекалий и обнаружили значительные различия в извлечении ДНК 60 . Однако, если образцы хранились в консервантах, не было потери чувствительности, связанной с задержкой выделения ДНК, что делает его пригодным для сбора образцов в консервантах из отдаленных районов и их последующего анализа в удаленной лаборатории. 60

Большие успехи в секвенировании геномов нематод с доступностью данных о последовательностях нематод способствовали открытию и разработке анализов, основанных на более чувствительных и видоспецифичных геномных мишенях. 61,62 Рибосомные последовательности и митохондриальные мишени, такие как цитохромоксидаза, обнаружены в большинстве эукариотических клеток, что делает их привлекательными мишенями для выбора. 62 В STH большая часть генома состоит из повторяющихся некодирующих элементов ДНК, которые являются полезными мишенями для ПЦР для STH. 63 Следует отметить, что некоторые типы повторяющейся ДНК, такие как простые короткие нуклеотидные повторы или вариации последовательности внутри повтора, влияют на пригодность основанных на повторах молекулярных анализов. 63,64 Повторы могут быть вариабельного типа (т. Е. Число копий не согласуется внутри видов) или постоянного типа (количество копий согласуется внутри видов), и понимание этой вариации для каждого вида и его влияния на чувствительность любого молекулярного анализа не требуется. 64 Разработка новых мишеней для количественных ПЦР на основе повторов становится проще с использованием новых биоинформатических инструментов, таких как RepeatExplorer, TAREAN и т. Д., Которые могут помочь в амплификации всего лишь 20 аг (аттограмма) геномной ДНК. 63

Гены-мишени, используемые в ПЦР для обнаружения СТГ, показаны в таблице 3.

Таблица 3 Генные мишени , используемые для молекулярной диагностики гельминтов, передаваемых через почву

Основное преимущество анализов на основе ПЦР заключается в их более высокой чувствительности и возможности мультиплексирования для выявления одновременных инфекций, хотя одноплексная ПЦР немного более чувствительна по сравнению с мультиплексными анализами. 65,66 Использование количественной ПЦР (кПЦР) дает даже более точные оценки распространенности по сравнению с микроскопией и поддается мультиплексированию. 69,70 Более того, поскольку частота массового лечения лекарственными препаратами населения определяется распространенностью заболевания в сообществе, что, в свою очередь, в значительной степени зависит от чувствительности используемого диагностического теста, количественная ПЦР играет большую роль в поиграйте для точных оценок, а также после завершения MDA, когда критически важно определить порог, ниже которого может произойти рецидив заболевания. 69 Однако кПЦР может быть технически сложным, сложным и дорогим, а в различных лабораториях отсутствует стандартизация. Кроме того, не очень просто сопоставить копии молекулярной мишени с количеством яиц в кале и количеством червей в кишечнике, поскольку количество копий этой мишени и разница в плоидности неоплодотворенных и оплодотворенных яиц различаются. 69 Эти препятствия все чаще устраняются, и предпринимаются попытки коммерциализировать эти тесты.

В недавнем исследовании по оценке диагностической эффективности Kato – Katz, Mini-FLOTAC, FECPAK G2 и кПЦР все диагностические методы показали чувствительность ≥90% для всех инфекций ППГ от средней до тяжелой степени.Однако только кПЦР имела чувствительность, превосходящую чувствительность одного метода Като-Каца для всех ППГ или инфекций очень низкой интенсивности. Для количественной ПЦР была выявлена ​​значимая положительная корреляция между количеством яиц одного Като-Каца и концентрацией ДНК. qPCR — единственный метод, который может быть рассмотрен на этапе, который направлен на поиск подтверждения прекращения программы. 35 Кроме того, объединение образцов было протестировано в качестве стратегии сокращения затрат и времени и признано рентабельным, экономичным по времени и трудозатратам без потери чувствительности или точности. 71

Новый молекулярный инструмент, анализ петлевой амплификации (LAMP), представляет собой одностадийный метод изотермической амплификации последовательностей ДНК-мишени. 72–76 Для этого требуется только тепловой блок или инкубатор / водяная баня, и он более устойчив к биологическому ингибированию. Для повышения чувствительности можно использовать флуоресцентные зонды, ДНК-функционализированные наночастицы золота и т. Д. Однако из-за трудностей с конструированием праймеров, ложноположительных результатов и перекрестного загрязнения переносчиками необходима дальнейшая валидация анализов LAMP.Недавно был разработан колориметрический изотермический анализ с использованием праймера SmartAmp2 для идентификации STH путем нацеливания на амплификацию конкретной последовательности гена β-тубулина, визуализируемой красителем гидроксинафтоловым синим (HNB) в формате LAMP. 73 Уникальная асимметричная конструкция праймера делает этот анализ очень специфичным с легким визуальным контролем результатов, что дает возможность его разработки в качестве портативного инструмента для полевых исследований.

Другие вспомогательные средства в клинической диагностике

Низкий уровень гемоглобина, низкий уровень ферритина и эозинофилия (> 600 мкл или> 6% тонкослойной хроматографии) могут использоваться как косвенные индикаторы инфекции STH. 16 Скрытая кровь в кале использовалась в качестве суррогатного маркера хронической анкилостомической инфекции. 77 При аскаридозе кристаллы Шарко-Лейдена и эозинофилы могут быть обнаружены в мокроте. В случае S. stercoralis № материал двенадцатиперстной кишки может быть исследован на наличие личинок с помощью струнного теста (или капсулы для энтеротеста). 44 Сообщалось также об использовании других исследований, таких как диагностическая радиология, гистопатология и внутрикожные кожные тесты, но они редко используются в плановом порядке. 16

Выбор правильной диагностической техники

Несмотря на значительный прогресс в борьбе с ГПГ за несколько десятилетий, мы все еще далеки от определения полностью адекватного диагностического теста. В целом консенсус по-прежнему заключается в стремлении к разработке новых чувствительных технологий или дальнейшей оптимизации существующих методов. Чтобы выбрать из имеющегося в настоящее время арсенала диагностических тестов, следует рассмотреть несколько аспектов: диагностические характеристики, рентабельность, простота выполнения, быстрота и применимость в полевых условиях.Помимо эффективности техники как таковой, адекватное обучение и строгие меры контроля / обеспечения качества значительно улучшают эффективность любого диагностического анализа. Важно отметить, что на разных этапах программ борьбы с ГПГ потребуются разные методы; микроскопии было бы достаточно, чтобы составить карту распространенности в географическом районе, но для наблюдения после MDA и для оценки успешности программ контроля потребуются более чувствительные молекулярные тесты.

Обнаружение СТГ в пробах окружающей среды

Обнаружение яиц STH и количественное определение в других типах проб, таких как сточные воды, ил, растения и т. Д., также важен для борьбы с этими инфекциями. К сожалению, из-за различий в содержании влаги и количестве твердых частиц или частиц почвы и т. Д. В пробах окружающей среды существует значительная неоднородность в обнаружении СТГ в этих пробах. 78 Обычные микроскопические методы в значительной степени нечувствительны, отнимают много времени и трудозатратны для образцов окружающей среды. Таким образом, в настоящее время все шире применяются различные модификации традиционных методов и новые молекулярные технологии.Из-за растворения в окружающей среде концентрации яиц гельминтов в сточных водах обычно очень низкие, что требует использования больших объемов (1–10 л) для обнаружения. Основным препятствием для молекулярного обнаружения яиц СТГ является извлечение нуклеиновой кислоты хорошего количества и качества из-за выносливости яичной скорлупы и большого количества взвешенных твердых частиц или ингибиторов ПЦР в большинстве образцов. Высокая концентрация СТГ может наблюдаться в иле, твердых биологических веществах и компосте, поскольку яйца прикрепляются к твердому материалу, и, таким образом, обычно отбирается около 2–5 г сухого веса ила.Достаточное количество пробы почвы колеблется от 10–50 г сухой почвы, в основном из верхнего слоя 0–5 см. В песке наблюдается более высокий выход яиц и меньшие различия в количестве яиц, чем в глине и иле. 80 Для образцов овощей предпочтительный вес составляет 100–250 г (ниже для травы). Однако следует отметить, что даже при одинаковых объемах образца концентрация яиц гельминтов различается по регионам в зависимости от местной распространенности инфекции и содержания твердых веществ в образце. 78 Также важно определить количество жизнеспособных яиц ГПГ для оценки риска в соответствии с международными рекомендациями. 78–81 Схематическая диаграмма, изображающая этапы обнаружения STH в пробах окружающей среды, показана на рисунке 3.

Рис. 3 Схематическая диаграмма, изображающая этапы обнаружения СТГ в пробах окружающей среды. * фазовая экстракция может быть проведена после стадии флотации.

Вкратце, образцы необходимо сначала гомогенизировать, чтобы разбить крупный материал на более мелкие частицы, а затем отделить яйца от частиц с использованием различных растворов (в основном анионных детергентов).Затем образцы фильтруются, что позволяет яйцам пройти через них для дальнейшего анализа. Образцы концентрируют седиментацией или флотацией. Фазовая экстракция для удаления материала, растворимого в липиде / эфире, из образцов может быть проведена после флотации с использованием этилацетата и диэтилового эфира (для липофильной экстракции) и буфера серной кислоты и ацетоуксусной кислоты (для гидрофильной экстракции). Время воздействия должно быть минимальным, чтобы уменьшить вредное воздействие химикатов на морфологию и восстановление яйца.

После этого оценивают жизнеспособные яйца ГПГ в образце. Оценка жизнеспособности может быть проведена путем инкубации развития личинок, что отнимает много времени и требует экспертизы наблюдателя. Жизнеспособные и нежизнеспособные яйца также можно отличить с помощью жизнеспособных красителей. Другой развивающийся и быстрый метод основан на дифференциальной целостности жизнеспособных и нежизнеспособных клеточных мембран с использованием набора BacLight LIVE / DEAD Viability Kit, который изначально был разработан для подсчета жизнеспособных бактерий. 82

Недавно было разработано программное обеспечение или системы анализа изображений для идентификации и количественного определения яиц гельминтов в сточных водах с использованием различных инструментов обработки изображений и алгоритмов распознавания образов. 82 Они имеют чувствительность 80–90% и специфичность 99% в зависимости от общего содержания взвешенных твердых частиц в пробах сточных вод, а время, необходимое для исследования каждой пробы, составляет менее минуты. Следует помнить, что даже при использовании такого программного обеспечения возможная идентификация все еще зависит от правильной обработки образца.Улучшение оптики с обеспечением более качественных изображений может потенциально использовать смартфоны, давая возможность консультации удаленно расположенных экспертов для интерпретации тестов, особенно для опросов в удаленных районах и районах с низким уровнем дохода.

Молекулярные методы, такие как ПЦР в реальном времени (qPCR), цифровая / капельная ПЦР (ddPCR) и т. Д., Также позволяют точно определять яйца STH в образцах окружающей среды. 76 Применение ddPCR в образцах воды домашней птицы показало лучшую эффективность по сравнению с qPCR и методами культивирования для обнаружения зоонозных патогенов. 82,83 Тем не менее, необходимы дальнейшие исследования по оптимизации ПЦР на чипах или ddPCR в образцах окружающей среды. Другой подход — проточная цитометрия, основанная на дифференциации яиц по размеру. 78 Фактически, флуоресцентное окрашивание может даже позволить нам определить стадию развития или жизнеспособности яйца. Однако стоимость оборудования и потребность в обученном персонале могут затруднить применение этой техники.

Заключение

инфекций, передаваемых половым путем, оказывают существенное социально-экономическое воздействие и влекут за собой огромные физические последствия и последствия для развития инфицированного населения.Микроскопическое исследование кала — приемлемая мера для оценки уровней инфекции в эндемичных регионах с высокой интенсивностью. Чувствительность методов, основанных на микроскопии, можно значительно повысить, если надлежащим образом обучить задействованный лабораторный персонал. Однако главная проблема традиционных методов состоит в том, что они требуют много времени и требуют громоздких процедур анализа проб. В таких областях могут быть полезны менее громоздкие и более чувствительные методы FLOTAC. Однако в районах с низкой эндемичностью или на этапе элиминации актуальность методов, основанных на микроскопии, ограничена, и могут потребоваться более чувствительные молекулярные методы, такие как ПЦР.Было продемонстрировано, что кПЦР с его способностью обеспечивать оценку интенсивности инфекции является потенциальной, особенно когда рассматривается вопрос о прекращении вмешательства путем массового введения лекарств или для надзора за ППГ в малоэндемичных регионах или путешественниками, возвращающимися из эндемичных регионов. Более того, молекулярные методы важны для обнаружения новых / появляющихся видов. Однако необходимы более тщательные исследования, чтобы точно связать данные количественной ПЦР с бременем червей.

Перспектива будущего

Разработка новых диагностических методов с широким спектром применимости в различных матрицах образцов является обязательной для обнаружения STH.Хотя разработка молекулярных инструментов имеет множество преимуществ с точки зрения чувствительности, простоты выполнения, воспроизводимости и автоматизации, у них все еще есть много недостатков; наиболее важным из них является высокая стоимость, которая ограничивает применимость в регионах, где невозможно современное оборудование и адекватное обучение пользователей. Однако для решения проблем, связанных с ПЦР, предпринимаются попытки объединения образцов и рентабельных модификаций существующих молекулярных методов.

Может существовать потенциал для обнаружения антител / антигенов, но их необходимо оценивать в полевых условиях.Разработка новых методов, оцифровка / автоматизация процедур, внедрение четких протоколов, идентификация новых биомаркеров и мультиплексирование являются многообещающими для диагностики ППГ. Кроме того, необходима тщательная мультицентрическая валидация новых диагностических тестов, особенно в низкоэндемичных условиях.

Раскрытие информации

Авторы сообщают об отсутствии конфликта интересов в этой работе.

Список литературы

1. Глистные инфекции, передающиеся через почву. Доступно по адресу: https: // www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/soil-transmitted-helminth-infections. По состоянию на 16 декабря 2020 г.

2. Колелла В., Брэдбери Р., Трауб Р. Ancylostoma ceylanicum. Тенденции Паразитол . 2021; 25: S1471–4922. DOI: 10.1016 / j.pt.2021.04.013

3. Хотес П.Дж., Альварадо М., Басаньес М.Г. и др. Исследование глобального бремени болезней 2010: интерпретация и значение для забытых тропических болезней. PLoS Негл Троп Дис . 2014: 8. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0002865

4.Hay SI, Abajobir AA, Abate KH, et al. Глобальные, региональные и национальные годы жизни с поправкой на инвалидность (DALY) для 333 болезней и травм и ожидаемая продолжительность здоровой жизни (HALE) для 195 стран и территорий, 1990–2016 гг .: систематический анализ для исследования глобального бремени болезней 2016 г. Ланцет . 2017; 390: 1260–1344. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (17) 32130

5. Инфекции кишечных нематод — причина 3-го уровня | институт показателей и оценки здоровья н.д. Доступно по адресу: http: // www.healthdata.org/results/gbd_summaries/2019/intestinal-nematode-infections-level-3-cause. По состоянию на 18 января 2021 г.

6. Куонг К., Фиорентино М., Периньон М. и др. Когнитивные способности и уровень железа отрицательно связаны с анкилостомозом у камбоджийских школьников. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2016; 95: 856–863. DOI: 10.4269 / ajtmh.15-0813

7. Кларк NE, Clements ACA, Doi SA и др. Дифференциальный эффект массовой дегельминтизации и целевой дегельминтизации для борьбы с гельминтами, передаваемыми через почву, у детей: систематический обзор и метаанализ. Ланцет . 2017; 389: 287–297. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (16) 32123-7

8. Пабалан Н., Сингиан Э., Табангай Л., Джарджанази Х., Бойвин М. Дж., Эзеамама А. Э. Гельминтозная инфекция, передаваемая через почву, потеря образования и когнитивные нарушения у детей школьного возраста: систематический обзор и метаанализ. PLoS Негл Троп Дис . 2018; 12 (1): e0005523. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0005523

9. Гарнизон А, Бойвин М., Хошнуд Б. и др. Гельминтозная инфекция, передающаяся через почву, при беременности и в течение длительного периода нейрокогнитивного и поведенческого развития ребенка: перспективная когорта матери и ребенка в Бенине. PLoS Негл Троп Дис . 2021; 15 (3): e0009260. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0009260

10. Андерсон Р., Траскотт Дж., Холлингсворт Т.Д. Охват и частота массового приема лекарств, необходимых для устранения постоянной передачи гельминтов, передающихся через почву. Философия Trans R Soc B Biol Sci . 2014; 369 (1645): 20130435. DOI: 10.1098 / rstb.2013.0435

11. Монтрезор А., Мупфасони Д., Михайлов А. и др. Глобальный прогресс в борьбе с гельминтозами, передаваемыми через почву, к 2020 году и цели Всемирной организации здравоохранения на 2030 год. PLoS Негл Троп Дис . 2020; 14: e0008505. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0008505

12. Хотез П.Дж., Банди Д.А.П., Бигл К. и др. Гельминтные инфекции: гельминтозные инфекции, передающиеся через почву, и шистосомоз. В: Jamison DT, Breman JG, Measham AR, et al. редакторы. Приоритеты борьбы с болезнями в развивающихся странах . 2-е место, Нью-Йорк: Издательство Оксфордского университета; 2006.

13. Кейзер Дж., Утцингер Дж. Лечение гельминтов, передаваемых через почву, в масштабах всего сообщества является эффективным методом справедливости. Ланцет .2019; 393 (10185): 2011–2012. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (18) 32981-7

14. Amoah ID, Adegoke AA, Stenström TA. Глистные инфекции, передающиеся через почву, связанные с повторным использованием сточных вод и ила: обзор имеющихся данных. Троп Мед Инт Хил . 2018; 23: 692–703. DOI: 10.1111 / tmi.13076

15. Хурана С., Сетхи С. Лабораторная диагностика гельминтозов, передающихся через почву. Троп Паразитол . 2017; 7: 86. DOI: 10.4103 / TP.TP_29_17

16. Гарсия Л.С., Эрровуд М., Кокоскин Э. и др.Лабораторная диагностика паразитов желудочно-кишечного тракта. Clin Microbiol Ред. . 2018; 31: e00025–17. DOI: 10.1128 / CMR.00025-17

17. Всемирная организация здравоохранения. Инструменты для диагностики кишечных паразитов . второе изд. Женева: Всемирная организация здравоохранения; 2019.

18. Тарафдер М.Р., Карабин Х., Джозеф Л., Балолонг Э., Ольведа Р., МакГарви С.Т. Оценка чувствительности и специфичности метода исследования кала Като-Каца для выявления анкилостомов, инфекций Ascaris lumbricoides и Trichuris trichiura у людей при отсутствии «золотого стандарта».». Инт Дж. Паразитол . 2010. 40: 399–404. DOI: 10.1016 / j.ijpara.2009.09.003

19. Аллам А.Ф., Фараг Х.Ф., Лотфи В., Фаузи Х.Х., Эльхадад Х., Шехаб А.Ю. Сравнение методов FLOTAC, Kato-Katz и формалиновой концентрации эфира для диагностики кишечных паразитарных инфекций у школьников в сельской местности Египта. Паразитология . 2020; 148 (3): 289–294. DOI: 10.1017 / S0031182020001675

20. Кулибали Дж. Т., Уаттара М., Беккер С. Л. и др. Сравнение чувствительности и количества фекальных яиц Mini-FLOTAC с использованием фиксированных образцов стула и метода Като-Каца для диагностики Schistosoma mansoni и гельминтов, передаваемых через почву. Акта Троп . 2016; 164: 107–116. DOI: 10.1016 / j.actatropica.2016.08.024

21. Периаго М.В., Диниз Р.С., Пинто С.А. и др. Подходящий инструмент для работы: обнаружение гельминтов, передающихся через почву, в районах, эндемичных по другим гельминтам. PLoS Негл Троп Дис . 2015; 9 (8): e0003967. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0003967

22. Барда Б., Кахал П., Виллагран Э. и др. Мини-ФЛОТАК, Като-Кац и Макмастер: три метода, одна цель; основные моменты с севера Аргентины. Векторы паразитов .2014; 7 (1): 271. DOI: 10.1186 / 1756-3305-7-271

23. Эндрис М., Текесте З., Лемма В., Кассу А. Сравнение методов диагностики като-каца, влажной фиксации и формол-эфира при кишечных гельминтозах в Эфиопии. ISRN Паразитология . 2013; 180439. DOI: 10.5402 / 2013/180439

24. Левеке Б., Бенке Дж. М., Аджампур ССР и др. Сравнение чувствительности и количества яиц в фекалиях с помощью методов подсчета яиц Макмастера и толстого мазка Като-Каца для гельминтов, передаваемых через почву. PLoS Негл Троп Дис . 2011; 5: e1201. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0001201

25. Habtamu K, Degarege A, Ye-Ebiyo Y, Erko B. Сравнение методов Kato-Katz и FLOTAC для диагностики гельминтозов, передаваемых через почву. Паразитол Инт . 2011; 60: 398–402. DOI: 10.1016 / j.parint.2011.06.020

26. Кнопп С., Ринальди Л., Хамис И.С. и др. Один FLOTAC более чувствителен, чем три экземпляра Kato-Katz для диагностики малоинтенсивных гельминтозов, передаваемых через почву. Транс Р Соц Троп Мед Хиг . 2009. 103: 347–354. DOI: 10.1016 / j.trstmh.2008.11.013

27. Утцингер Дж., Ринальди Л., Лохориньон Л.К. и др. FLOTAC: новый чувствительный метод диагностики анкилостомозов у ​​людей. Транс Р Соц Троп Мед Хиг . 2008. 102: 84–90. DOI: 10.1016 / j.trstmh.2007.09.009

28. Cools P, Vlaminck J, Albonico M, et al. Диагностические характеристики одного и нескольких экземпляров Kato-Katz, Mini-FLOTAC, FECPAKG2 и qPCR для обнаружения и количественной оценки гельминтов, передаваемых через почву, в трех эндемичных странах. PLoS Негл Троп Дис . 2019: 13. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0007446

29. Адугна С., Кебеде Т., Меконнен З., Дегареге А., Лян С., Эрко Б. Диагностические характеристики не содержащего растворителей концентратора фекальных паразитов Mini Parasep ® по сравнению с Kato-Katz и McMaster для диагностики кишечных паразитарных инфекций. Транс Р Соц Троп Мед Хиг . 2017; 111: 572–578. DOI: 10.1093 / trstmh / try010

30. Николай Б., Брукер С.Дж., Пуллан Р.Л. Чувствительность диагностических тестов на гельминтозы, передаваемые через почву: метаанализ при отсутствии истинного золотого стандарта. Инт Дж. Паразитол . 2014; 44: 765–774. DOI: 10.1016 / j.ijpara.2014.05.009

31. Бег М., Зишан М., Зафар А. и др. Использование трубок концентратора фекалий с фильтром Parasep »для обнаружения кишечных паразитов в образцах стула в обычных условиях. Индийский Дж. Патол Микробиол . 2011; 54: 121. DOI: 10.4103 / 0377-4929.77358

32. Ханна В., Сагар С., Ханна Р., Чавла К. Сравнительное исследование методики осаждения формалин-этилацетат и метода Mini Parasep ® без растворителей в быстрой диагностике кишечных паразитов. Троп Паразитол . 2018; 8: 29–32. DOI: 10.4103 / tp.TP_44_17

33. Мевара А., Хурана С., Гупта С., Мунда В.С., Сингх С., Сегал Р. Диагностические характеристики не содержащего растворителей концентратора фекальных паразитов Mini Parasep ® для диагностики кишечных паразитарных инфекций. Индийский журнал J Med Microbiol . 2019; 37: 381–386. DOI: 10.4103 / ijmm.IJMM_19_44

34. Useh M, Asuquo A, Otu-Bassey I., Ubi O. Оценка эффективности концентратора фекальных паразитов Mini Parasep SF; Новый метод против прямого мазка и метод концентрации эфира формола для обнаружения кишечных паразитов в стуле. Дж. Медицинская Лаборатория Sci . 2011; 20: 458.

35. Левеке Б., Монтрезор А., Альбонико М. и др. Оценка антигельминтной эффективности мебендазола у школьников в шести странах, где гельминты, передающиеся через почву, являются эндемичными. PLoS Негл Троп Дис . 2014; 8 (10): e3204. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0003204

36. Дэвид Э.Д., Линдквист В.Д. Определение удельного веса некоторых яиц гельминтов с помощью центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Дж Паразитол . 1982; 68: 916–919.DOI: 10.1186 / 1756-3305-5-288

37. Левеке Б., Коулс П., Альбонико М. и др. Определение пороговых значений для классификации инфекций, передаваемых через почву, от умеренной до тяжелой по интенсивности гельминтозов для FECPAKG2, McMaster, Mini-FLOTAC и qPCR. PLoS Негл Троп Дис . 2020; 14 (7): e0008296. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0008296

38. Кнопп С., Глинц Д., Ринальди Л. и др. FLOTAC: перспективный метод обнаружения яиц гельминтов в человеческих фекалиях. Транс Р Соц Троп Мед Хиг . 2009. 103: 1190–1194.DOI: 10.1016 / j.trstmh.2009.05.012

39. Lim MD, Brooker SJ, Belizario VY, et al. Диагностические инструменты для программ борьбы с гельминтами, передаваемыми через почву, и программ ликвидации: путь к разработке диагностических продуктов. PLoS Негл Троп Дис . 2018; 12 (3): e0006213. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0006213

40. Techion: FECPAKG2: лучшее тестирование для лучшей производительности. Доступно по адресу: https://www.techion.com/FECPAKG2. По состоянию на 17 декабря 2020 г.

41. Аяна М., Вламинк Дж., Коулс П. и др.Модификация и оптимизация протокола FECPAKG2 для обнаружения и количественного определения яиц гельминтов, передающихся через почву, в стуле человека. PLoS Негл Троп Дис . 2018; 12 (10): e0006655. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0006655

42. Moser W., Bärenbold O, Mirams GJ, et al. Диагностическое сравнение между FECPAKG2 и методом Като-Каца для анализа яиц гельминтов, передающихся через почву, в кале. PLoS Негл Троп Дис . 2018; 12 (6): e0006562. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0006562

43.Сукас С., Ван Дорст Б., Крыж А., Лагати О., Де Мальше В., Стуйвер Л. Дж.. Разработка платформы «лаборатория на диске» с цифровыми изображениями для идентификации и подсчета яиц паразитов в кале человека и животных. Микромашины . 2019; 10: 852. DOI: 10.3390 / mi10120852

44. Рекена-Мендес А., Чиодини П., Бисоффи З, Буонфрат Д., Готуццо Е., Муньос Дж. Лабораторная диагностика и последующее наблюдение за стронгилоидозом: систематический обзор. PLoS Негл Троп Дис . 2013; 7 (1): e2002. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0002002

45. Гарсия LS. Диагностическая медицинская паразитология. Руководство по коммерческим методам клинической микробиологии. В: Аллан Л., редактор. Диагностическая медицинская паразитология . Вашингтон, округ Колумбия, США: ASM Press; 2014: 274–305. DOI: 10.1128 / 9781555817961.ch21

46. Hailegebriel T, Petros B., Endeshaw T. Оценка паразитологических методов обнаружения Strongyloides Stercoralis среди лиц в отдельных учреждениях здравоохранения в Аддис-Абебе, Эфиопия. Эфиоп Дж. Здравоохранение . 2017; 27: 515–522. DOI: 10.4314 / ejhs.v27i5.10

47. Сато Ю., Тома Х, Киюна С., Широма Ю. Тест непрямой агглютинации с частицами желатина для массового обследования на стронгилоидоз. Транс Р Соц Троп Мед Хиг . 1991; 85: 515–518. DOI: 10.1016 / 0035-9203 (91)

-Y

48. Силва Л.П., Да Коста Барселуш И.С., Пассос-Лима А.Б., Эспиндола Ф.С., Барбоса Кампос DM, Коста-Крус Дж.М. Вестерн-блоттинг с использованием антигена Strongyloides ratti для обнаружения антител IgG в качестве подтверждающего теста при стронгилоидозе человека. Mem Inst Oswaldo Cruz . 2003. 98: 687–691. DOI: 10.1590 / S0074-02762003000500017

49. Шаффель Р., Нуччи М., Карвалью Е., Брага М., Португалия Р., Пульчери В. Значение иммуноферментного теста (иммуноферментный анализ) для диагностики стронгилоидоза у пациентов с иммунодефицитом из-за гематологических злокачественных новообразований. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2001; 65: 346–350. DOI: 10.4269 / ajtmh.2001.65.346

50. Арифин Н., Ханафия К.М., Ахмад Х., Нордин Р. Серодиагностика и раннее выявление инфекции Strongyloides stercoralis . J Microbiol Immunol Infect . 2019; 52: 371–378. DOI: 10.1016 / j.jmii.2018.10.001

51. Рави В., Рамачандран С., Томпсон Р. В., Андерсен Дж. Ф., Нева Ф.А. Характеристика рекомбинантного иммунодиагностического антигена (NIE) из Strongyloides stercoralis личинок L3-стадии. Мол Биохим Паразитол . 2002; 125: 73–81. DOI: 10.1016 / S0166-6851 (02) 00214-1

52. Раманатан Р., Бурбело П.Д., Грут С., Иадарола М.Дж., Нева Ф.А., Нутман ТБ. Анализ систем иммунопреципитации люциферазой повышает чувствительность и специфичность диагностики инфекции Strongyloides stercoralis . Дж. Заражение Дис. . 2008; 198: 444–451. DOI: 10.1086 / 589718

53. Раско Л.Н., Прайс С, Шин С.Х., Макаулифф I, Прист Дж. У., Хандали С. Разработка тестов на основе рекомбинантного антигена Ss-NIE-1 для иммунодиагностики стронгилоидоза. PLoS Негл Троп Дис . 2015; 9 (4): e0003694. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0003694

54. Юнус М.Х., Арифин Н., Балачандра Д., Ануар Н.С., Нордин Р. Тест полоски бокового потока для серодиагностики стронгилоидоза. Ам Дж. Троп Мед Хиг .2019; 101: 432–435. DOI: 10.4269 / ajtmh.19-0053

55. Сайкс А.М., Маккарти Дж. С.. Диагностический тест на копроантиген на инфекцию Strongyloides. PLoS Негл Троп Дис . 2011; 5 (2): e955. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0000955

56. Лагати О., Верхейен А., Ван Хоф К. и др. Обнаружение инфекции Ascaris lumbricoides с помощью ELISA на копроантиген ABA-1. PLoS Негл Троп Дис . 2020; 14: e0008807. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0008807

57. Elsemore DA. Флинн Л.А. Изобретатель; Правопреемник Idexx Laboratories Inc.Устройство, набор и метод для улавливания и обнаружения антигена анкилостомы. 2007. Патент США US20080311557A1.

58. Лагати О., Верхейен А., Ван Астен С. и др. 2-Метил-пентаноилкарнитин (2-MPC): биомаркер в моче для инфекции патента Ascaris lumbricoides . Научный сотрудник . 2020; 10: 15780. DOI: 10.1038 / s41598-020-72804-y

59. Lagatie O, Njumbe Ediage E, Pikkemaat JA, Djuardi Y, Stuyver LJ. 2-метилбутирамид, ранее идентифицированный биомаркер в моче для Ascaris lumbricoides , не присутствует у инфицированных индонезийцев. Векторы паразитов . 2017; 10 (1): 1–3. DOI: 10.1186 / s13071-017-2600-z

60. Ayana M, Cools P, Mekonnen Z, et al. Сравнение четырех протоколов экстракции ДНК и трех протоколов сохранения для молекулярного обнаружения и количественного определения гельминтов, передающихся через почву, в кале. PLoS Негл Троп Дис . 2019; 13 (10): e0007778. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0007778

61. О’Коннелл Е.М., Натман ТБ. Обзорная статья: молекулярная диагностика гельминтов, передающихся через почву. Ам Дж. Троп Мед Хиг .2016; 95: 508–514. DOI: 10.4269 / ajtmh.16-0266

62. Грант JR, Pilotte N, Williams SA. Пример использования геномики и биоинформатики для разработки чувствительных и специфичных для видов ПЦР-диагностики гельминтов, передаваемых через почву. Передний Genet . 2019; 10: 883. DOI: 10.3389 / fgene.2019.00883

63. Хоу К.Л., Болт Б.Дж., Каин С. и др. WormBase 2016: расширение, позволяющее проводить геномные исследования гельминтов. Нуклеиновые Кислоты Res . 2016; 44: D774–80. DOI: 10.1093 / nar / gkv1217

64.Истон А.В., Оливейра Р.Г., О’Коннелл Е.М. и др. Многопараллельная количественная ПЦР обеспечивает повышенную чувствительность и диагностические возможности для желудочно-кишечных паразитов человека: выводы на основании данных о воздействии массовой дегельминтизации. Векторы паразитов . 2016; 9: 38. DOI: 10.1186 / s13071-016-1314-y

65. Pilotte N, Papaiakovou M, Grant JR, et al. Улучшенное выявление гельминтозов, передаваемых через почву, на основе ПЦР с использованием подхода секвенирования нового поколения для разработки анализа. PLoS Негл Троп Дис .2016; 10: e0004578. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0004578

66. Линн М., Полдерман Антон М., Винкелес Мельчерс Н.В. Диагностика полипаразитизма в условиях высокой распространенности в Бейре, Мозамбик: обнаружение кишечных паразитов в образцах кала с помощью микроскопии и ПЦР в реальном времени. PLoS Негл Троп Дис . 2017; 11 (1): e0005310. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0005310

67. Verweij JJ, Canales M, Polman K, et al. Молекулярная диагностика Strongyloides stercoralis в образцах фекалий с использованием ПЦР в реальном времени. Транс Р Соц Троп Мед Хиг . 2009. 103: 342–346. DOI: 10.1016 / j.trstmh.2008.12.001

68. Verweij JJ, Brienen EA, Ziem J, Yelifari L, Polderman AM, Van Lieshout L. Одновременное обнаружение и количественная оценка Ancylostoma duodenale, Necator americanus и Oesophagostomum bifurcum в образцах фекалий с использованием мультиплексной ПЦР в реальном времени Am. Дж Троп Мед Хиг . 2007. 77: 685–690. DOI: 10.4269 / ajtmh.2007.77.685

69. Папаякову М., Гассер РБ, Литтлвуд, Д.Т.Дж. Количественная диагностика гельминтозов, передаваемых через почву, на основе ПЦР: фекальные или непостоянные? Тенденции Паразитол .2019; 35 (7): 491–500. DOI: 10.1016 / j.pt.2019.04.006

70. Dunn JC, Papaiakovou M, Han KT, et al. Повышенная чувствительность кПЦР по сравнению с Като-Кац требуется для точной оценки распространенности гельминтозов, передаваемых через почву, в условиях, где проводилось несколько раундов массового введения лекарств. Векторы паразитов . 2020; 13 (1): 324.

71. Папаякову М., Райт Дж., Пилотт Н. и др. Объединение как стратегия своевременной диагностики гельминтов, передающихся через почву, в кале: ценность и воспроизводимость. Векторы паразитов . 2019; 12 (1): 443.

72. Дэн М.Х., Чжун Л.Й., Камольнетр О., Лимпанонт Ю., Львов З.Ы. Обнаружение гельминтов методом петлевой изотермической амплификации: обзор обновленных технологий и перспектив на будущее. Заражение бедностью . 2019; 8: 1–22. DOI: 10.1186 / s40249-019-0530-z

73. Рашван Н., Диавара А., Скотт М.Э., Причард Р.К. Изотермические диагностические тесты для обнаружения гельминтов, передающихся через почву, на основе метода SmartAmp2. Векторы паразитов .2017; 10: 496. DOI: 10.1186 / s13071-017-2420-1

74. Shiraho EA, Eric AL, Mwangi IN, et al. Разработка петлевой изотермической амплификации для диагностики Ascaris lumbricoide s в образцах фекалий. J Parasitol Res . 2016; 2016. DOI: 10.1155 / 2016/7376207

75. Мугамби Р.М., Агола Е.Л., Мванги И.Н., Киньюа Дж., Сирахо Е.А., Мкодзи Г.М. Разработка и оценка метода петлевой изотермической амплификации (LAMP) для обнаружения анкилостомоза ( Necator americanu s) в образцах фекалий. Векторы паразитов . 2015; 8: 574. DOI: 10.1186 / s13071-015-1183-9

76. Watts MR, James G, Sultana Y, et al. Петлевой изотермической амплификации (LAMP) анализ Strongyloides stercoralis в стуле, который использует метод визуального обнаружения с флуоресцентным красителем SYTO-82. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2014; 90: 306–311. DOI: 10.4269 / ajtmh.13-0583

77. Wakid MH. Анализ кала на скрытую кровь и паразитарные желудочно-кишечные инфекции. J Parasitol Res . 2010; 2010: 434801.DOI: 10.1155 / 2010/434801

78. Амоа И.Д., Сингх Г., Стенстром Т.А., Редди П. Обнаружение и количественная оценка гельминтов, передающихся через почву, в пробах окружающей среды: обзор текущего состояния и перспектив на будущее. Акта Троп . 2017; 169: 187–201. DOI: 10.1016 / J.ACTATROPICA.2017.02.014

79. Оге Х., Оге С. Количественное сравнение различных методов обнаружения яиц Toxocara canis в пробах песка. Ветеринарный врач-паразитол . 2000. 92: 75–79.DOI: 10.1016 / S0304-4017 (00) 00276-4

80. Рекомендации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) по безопасному использованию сточных вод, экскрементов и серой воды — Том 4. Доступно по адресу: https://www.who.int/water_sanitation_health/publications/gsuweg4/en/. По состоянию на 18 января 2021 г.

81. Агентство по охране окружающей среды США. Экологические нормы и технологии, борьба с патогенами и привлечением переносчиков в осадок сточных вод. Доступно по адресу: https://www.epa.gov/sites/production/files/2015-07/documents/epa-625-r-92-013.pdf. По состоянию на 18 января 2021 г.

82. Хименес Б., Майя С., Веласкес Г. и др. Идентификация и количественная оценка яиц патогенных гельминтов с использованием системы цифровых изображений. Эксперимент Паразитол . 2016; 166: 164–172. DOI: 10.1016 / j.exppara.2016.04.016

83. Ротрок М.Дж., Хиетт К.Л., Киппер Б.Х., Ингрэм К., Хинтон А. Количественная оценка зоонозных бактериальных патогенов в образцах воды для промышленной птицеводства с использованием капельной цифровой ПЦР. Adv Microbiol . 2013; 03: 403–411.DOI: 10.4236 / aim.2013.35055

Паразитологическая оценка качества салата на рынках Maxixe City, Мозамбик

Исследовательская статья — (2021) Том 0, Выпуск 0

Alfredo Célio 1 * , Nchowela Guido 2 , Muchanga Izaidino 3 , Nharrave Adérito 1 , Mussa Yazido 1 и Macuácua Jorge 4

4

* Для переписки: Доктор Альфредо Селио, факультет медицинских наук, Университет Ликунго, Келимане и Бейра, Мозамбик, Тел .: +258844563951, Эл. Почта:

Место покупки N образцов Положительные (%) Отрицательные (%)
Dumbanengue 17 11 (64.7) 6 (35,3)
Цухула 17 17 (100) 0 (0)
Ксиканджуанин 16 7 (43,75) 9 (56,25)
Всего 50 35 (70) 15 (30)

Merket Монопаразитизм Бипаразитизм Полипаразитизм Всего
Dumbanengue 6 (54.5) 2 (18,2) 3 (27,3) 11
Цухула 10 (58,8) 6 (35,3) 1 (5,9) 17
Ксиканджуанин 5 (71,4) 2 (28,6) 0 (0) 7
Всего 21 (60) 10 (28,6) 4 (11,4) 35