Лабораторная диагностика малярии: Лабораторная диагностика малярии в Санкт-Петербурге, цена

Разное

Содержание

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКИ МАЛЯРИИ.

Малярия — группа трансмиссивных инфекционных заболеваний, передаваемых человеку при укусах комаров рода Anopheles.

Предварительный диагноз малярии устанавливают на основании клинико- эпидемиологических данных, подтверждается он обнаружением плазмодиев малярии в крови. В эндемических очагах наблюдается тенденция к гипердиагностике малярии, что, однако, гораздо менее опасно, чем гиподиагностика вне эндемических очагов при завозе малярии.

Определенную помощь в диагностике могут оказать результаты общего анализа крови. В  результате массового распада эритроцитов у больного малярией возникает гемолитическая анемия, гипербилирубинемия, в связи с чем кожа и слизистые оболочки больного приобретают желтушную окраску. Однако в первые дни болезни она может отсутствовать, даже в первую неделю обычно не выражена, так как потеря какой-то части эритроцитов вследствие гемолиза компенсируется выбросом крови из депо организма.

В результате активизации эритропоэза повышается число ретикулоцитов, возникает полихроматофилия.

Со стороны белой крови для малярии характерны лейкопения, нейтропения, эозинопения, относительный лимфоцитоз. В затянувшихся случаях  моноцитоз. Высокий лейкоцитоз при малярии встречается очень редко, в основном при  злокачественном течении тропической малярии. Поэтому при наличии лейкоцитоза вообще правильнее думать о другой болезни, а не о малярии, кроме пернициозных её форм.

Характерные для малярии высокие показатели СОЭ так же, как и анемия, выявляются при значительной длительности болезни. В ранние сроки СОЭ может оставаться в пределах нормы, что не должно дезориентировать врача.

В практической работе при исследовании крови на наличие малярийных плазмодиев пользуются, в основном, методом толстой капли. Преимущество этого метода заключается в том, что для приготовления толстой капли используется в 30—50 раз больше крови, чем для тонкого мазка, и поэтому концентрация паразитов в одном поле зрения толстой капли в десятки раз больше, чем в мазке. Следовательно, обнаружить паразитов в толстой капле значительно легче, чем в мазке, что особенно важно при скудной паразитемии. Толстые капли окрашивают без предварительной фиксации, поэтому эритроциты при промывании водой выщелачиваются и паразиты деформируются, в связи, с чем установить вид паразита иногда трудно. В таких случаях требуется дополнительное исследование мазка, который фиксируют перед окраской. В нем хорошо видны детали морфологии паразита и изменения пораженных эритроцитов. Для паразитологического подтверждения диагноза малярии необходимо обнаружение бесполых стадий развития паразита, т.е. трофозоитов и шизонтов.

Паразиты обнаруживаются в крови, как на высоте приступов болезни, так и в промежутках между ними.

Серологическая диагностика малярии. Малярийные антитела появляются в крови после 2-3-го приступа, достигают максимального уровня на 4-6 неделе, затем при отсутствии реинфекции титр их постепенно снижается, сохраняясь на низком уровне в течение 6 мес. и более. Выявляют их с помощью реакции непрямой флюоресценции, РНГА, реакции энзиммеченных антител. Для постановки РНИФ необходимы специфические антигены, в качестве которых используются толстые капли инфицированной крови, содержащей паразитов малярии человека или обезьян, которые по антигенной структуре близки паразитам человека, и сыворотки против IgG человека, меченные изотиоцианатом флюоресцеина. Нижний порог специфической для малярии реакции равен, по данным разных авторов, 1:20, 1:80, 1:160.

Результаты РНГА считаются положительными в разведении 1:40 и выше. При сравнительном изучении установлено, что РНГА уступает РНИФ в чувствительности и специфичности в ранние сроки — первые 2 недели болезни.

 В последние годы для диагностики паразитарных болезней, в том числе малярии, используют новый перспективный серологический тест — РЭМА. Основу метода составляет использование антигенов или антител меченных ферментами. Для диагностики малярии в РЭМА используется растворимый антиген из эритроцитарных паразитов. РЭМА отличается высокой чувствительностью и точностью учета результатов с помощью инструментальных методов — на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре. Большинство серологических методов диагностики малярии (пассивная гемагглютинация, преципитация в геле, связывание комплемента и др.) не получили широкого распространения вследствие сложной методики их постановки, необходимости специальной подготовки персонала, наличия особого лабораторного оснащения и стандартизированных антигенов, а также из-за недостаточной специфичности результатов. Даже наилучший из этих методов — метод непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ), играет в лабораторной диагностике малярии лишь второстепенную роль.

Во всех случаях диагностики малярии основной является паразитологическая диагностика путем приготовления и изучения препаратов толстой капли и тонкого мазка.

                                                               Заведующий КДЛ детской поликлиники

                                                               И.И. Булах

Малярия

Малярия – это инфекционное заболевание, которое вызывает повторяющиеся приступы озноба и лихорадки. Возбудителем малярии является плазмодий – паразит, передающийся с укусами комаров – носителей инфекции. Каждый год от малярии умирает примерно один миллион людей по всему миру, но наиболее распространена она в странах с тропическим и субтропическим климатом.

Вакцины для предотвращения малярии не существует, однако при приеме профилактических средств риск заболеть снижается.

Успешность лечения зависит от вида плазмодия, состояния больного и других факторов.

Синонимы русские

Болотная лихорадка, перемежающаяся лихорадка, пароксизмальная малярия.

Синонимы английские

Malaria, Jungle fever, Marsh fever.

Симптомы

Для малярии характерно периодическое повторение приступов (каждые 48-72 часа, в зависимости от вида возбудителя). Приступ длится примерно 1-2 часа и сопровождается следующими симптомами:

  • озноб  – от умеренного до тяжелого,
  • высокая температура тела (до 39-41 °С),
  • кашель,
  • обильное потоотделение (появляется в конце приступа и сопровождается снижением температуры до нормальной или ниже нормы).

Кроме того, могут появляться другие симптомы:

  • головная боль,
  • тошнота, рвота, понос,
  • усталость, быстрая утомляемость,
  • потеря аппетита,
  • боль в мышцах,
  • желтуха.

Как правило, малярия проявляется в течение нескольких недель после укуса зараженного комара. Однако некоторые паразиты могут находиться в организме несколько месяцев или лет, не вызывая никаких симптомов.

Общая информация о заболевании

Малярия – это инфекционное заболевание, которое вызывает повторяющиеся приступы озноба и лихорадки. Возбудителем являются четыре вида паразитов, передающихся с укусами комаров – носителей инфекции. Реже малярия распространяется через переливание крови или от матери к плоду. Чаще всего она встречается в странах с тропическим и субтропическим климатом.

Жизненный цикл малярийного паразита начинается, когда самка комара вида анофелес, питаясь кровью больного малярией, проглатывает паразитов. В процессе полового развития в организме комара из них развиваются спорозоиты (одна из жизненных форм паразита), располагающиеся в слюнных железах насекомого.

При укусе комар вводит слюну со спорозоитами в организм человека, где они размножаются бесполым путем в клетках печени. После периода созревания, длящегося от нескольких суток до нескольких месяцев, паразиты высвобождаются из клеток печени и проникают в эритроциты (красные кровяные тельца), что является началом активной фазы болезни. В эритроцитах происходит дальнейшее бесполое размножение паразитов; при разрыве оболочки эритроцита (каждые 48-72 часа) плазмодии оказываются в плазме крови, что обуславливает возникновение лихорадки и озноба. Затем они проникают в непораженные эритроциты и цикл повторяется. Промежуточные формы плазмодий способны сохраняться в организме (в печени) до нескольких лет, вызывая повторное развитие заболевания даже после курса лечения.

Малярия может привести к смерти, чаще всего от нее умирают дети в возрасте до 5 лет. Обычно летальный исход связан с осложнениями заболевания:

  • церебральная малярия – зараженные эритроциты могут закупоривать мелкие кровеносные сосуды мозга, вызывая его отек или повреждение;
  • дыхательная недостаточность из-за накопления в легких жидкости;
  • повреждение органов – печеночная или почечная недостаточность, повреждение селезенки;
  • тяжелая анемия как следствие уменьшения количества нормально функционирующих эритроцитов;
  • низкий уровень сахара в крови (может быть спровоцирован как малярией, так и ее лечением).

Кто в группе риска?

Чаще всего малярией болеют люди, живущие в странах с тропическим и субтропическим климатом (африканские государства к югу от пустыни Сахары, индийский субконтинент, Соломоновы острова, Папуа-Новая Гвинея и Гаити), или гости этих стран.

Более тяжелому течению малярии подвержены:

  • дети до 5 лет,
  • туристы из регионов, где не распространено данное заболевание, посетившие субтропические или тропические страны,
  • беременные и их еще не рождённые дети,
  • бедные слои населения, не имеющие доступа к квалифицированной медицинской помощи.

Диагностика

Заподозрить заболевание позволяют периодические приступы лихорадки, особенно если пациент находился в очагах малярии за последние два года. Для подтверждения диагноза необходимо обнаружить паразита в мазках крови.

Лабораторные методы исследования

  • Микроскопия мазка крови. Этот анализ до сих пор остается ведущим методом диагностики малярии. Он достаточно простой и недорогой, однако относительно трудоемкий. Кровь для приготовления мазка необходимо брать у пациента во время приступа лихорадки – это повышает вероятность обнаружения малярийных плазмодиев. После изготовления мазка и его окраски по специальной технологии можно обнаружить самих возбудителей заболевания или характерные изменения эритроцитов. В частности, при малярии в эритроцитах определяются пятна, обусловленные включениями плазмодиев. По результатам исследования мазка крови судят о наличии инфекции, а также определяют вид паразита и стадию заболевания.
  • Определение антител к возбудителю малярии – молекул, вырабатываемых иммунной системой в ответ на попадание в организм малярийного плазмодия. Отрицательный результат анализа позволяет исключить диагноз «малярия».
  • Определение белков возбудителя. Современный анализ, с помощью которого можно выявить в крови молекулы, входящие в состав малярийного плазмодия. Это быстрый, недорогой метод диагностики, обладающий высокой достоверностью в отношении малярийной инфекции.
  • Определение генетического материала малярийного плазмодия методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Позволяет определить даже незначительное число возбудителей заболевания в крови. В силу высокой стоимости исследование широко не распространено.
  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ).
    • Гемоглобин и эритроциты. Так как при приступах малярии происходит разрушение эритроцитов (гемолиз), их уровень в крови, а также уровень содержащегося в них гемоглобина может быть снижен, свидетельствуя о развитии анемии.
    • Тромбоциты. Снижение уровня тромбоцитов является характерным признаком малярии и наблюдается примерно у 70  % больных.
    • Лимфоциты. При малярии в крови могут определяться измененные (атипичные)лимфоциты (белые кровяные тельца).
    • Ретикулоциты – это созревающие эритроциты. Так как при приступах малярии зрелые эритроциты разрушаются, выработка ретикулоцитов возрастает.
  • Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) – фермент, который содержится во многих органах и тканях человека, в том числе в эритроцитах. Повышение ЛДГ является характерным признаком малярии.
  • Аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ). Повышение уровня печеночных ферментов АЛТ и АСТ будет указывать на повреждение печени, вызванное малярией.
  • Общий билирубин. Билирубин – конечный продукт распада гемоглобина. При усиленном разрушении эритроцитов его уровень повышается.

Другие методы исследования

  • Компьютерная томография головного мозга. При признаках поражения центральной нервной системы может потребоваться выполнение компьютерной томографии головного мозга, которая позволяет выявить отек головного мозга и кровотечение в его оболочке.

Лечение

Лечение малярии предполагает прием специальных противомалярийных препаратов, а также устранение осложнений заболевания.

Отмечается устойчивость некоторых видов малярии к лекарствам. Вакцины, позволяющей полностью избавить пациента от этого заболевания, не существует, хотя ее поиски активно ведутся.

Профилактика

  • Применение противомалярийных препаратов при путешествиях в регионы с высоким уровнем заболеваемости малярией.
  • Предотвращение заражения через укус. Избежать укусов комаров можно с помощью:
    • обработки стен дома специальными спреями,
    • использования москитной сетки, пропитанной препаратами против комаров,
    • ношения одежды, закрывающей тело, опрыскивания одежды противомоскитными спреями.

Рекомендуемые анализы

  • Общий анализ крови
  • Лактатдегидрогеназа
  • Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
  • Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
  • Общий билирубин

Страница не найдена |

Страница не найдена |

404. Страница не найдена

Архив за месяц

ПнВтСрЧтПтСбВс

11121314151617

18192021222324

25262728293031

       

       

       

     12

       

     12

       

      1

3031     

     12

       

15161718192021

       

25262728293031

       

    123

45678910

       

     12

17181920212223

31      

2728293031  

       

      1

       

   1234

567891011

       

     12

       

891011121314

       

11121314151617

       

28293031   

       

   1234

       

     12

       

  12345

6789101112

       

567891011

12131415161718

19202122232425

       

3456789

17181920212223

24252627282930

       

  12345

13141516171819

20212223242526

2728293031  

       

15161718192021

22232425262728

2930     

       

Архивы

Метки

Настройки
для слабовидящих

Малярия. Профилактика и лечение. / Блог / Клиника ЭКСПЕРТ

В настоящее время весьма популярным направлением отдыха стал Занзибар (на языке суахили Funguvisiwa ya Zanzibar, в английском варианте Zanzibar Archipelago), представляющий собой архипелаг из 75 островов в Индийском океане, растянувшийся вдоль восточного берега Африки напротив современной Танзании. Часть архипелага входит в автономию Занзибар. Потрясающие пейзажи, дикая природа, экзотика. Однако, за безоблачностью отдыха может скрываться опасность для здоровья, о которой мы бы хотели информировать наших пациентов. Это малярия. Малярия итал. mala aria — «плохой воздух», ранее известная как «болотная лихорадка», представляет собой инфекционно-паразитарное заболевание, для которого характерно поражение «красных клеток крови» — эритроцитов простейшими внутриклеточными паразитами рода Plasmodiu (плазмодии). Малярия находится на пятом месте по числу смертельных случаев за год среди инфекционных заболеваний. До 2010 года ежегодно до миллиона человек умирало от малярии, например, 781 000 в 2009 и 655 000 в 2010. По состоянию на 2008—2009 годы на одну смерть от малярии приходилось 2200 $ на лечение и исследования в мире. Для сравнения, на одну смерть от ВИЧ/СПИД приходилось 6800 $.

Эпидемиология и профилактика.

Малярия достаточно древнее заболевание, но и на данный момент оно распространено во всем мире, особенно в странах Африки. Для некоторых групп населения риск заражения малярией, а также развитие более тяжелой формы болезни выше. Это младенцы, дети до пяти лет, а также беременные женщины. Кроме того, люди с ВИЧ/СПИДом, мигранты, у которых нет иммунитета, путешественники и мобильные группы населения находятся в зоне риска. Россия, Украина и другие страны постсоветского пространства являются свободными от малярии странами, т. е. регистрируются единичные случаи завозной малярии. Однако с развитием туризма возможно заражение малярией во время путешествия в страны, эндемичные (свойственные данной местности) по малярии. 85—90 % случаев заражения приходится на районы Африки южнее Сахары, также эндемичными являются некоторые страны Азии, Южной Америки, Океании. Перед поездкой рекомендовано проконсультироваться в посольстве страны, в которую планируется путешествие, относительно эпидемической ситуации и эффективных для этого региона мер профилактики малярии. Беременным, детям в возрасте до 4-х лет и людям, живущим с ВИЧ, в страны, неблагополучные по малярии желательно не выезжать. Методы, которые используются для предотвращения распространения болезни в областях, эндемичных для малярии, включают прием профилактических лекарственных средств и использование средств для предотвращения укусов комаров. Перед поездкой необходимо уточнить региональную устойчивость малярии к препаратам. Медикаментозная профилактика не обеспечивает 100% защиты, но значительно снижает риск заболевания. Ее необходимо начать принимать за 1-2 недели до поездки и продолжать 4 – 6 недель после прибытия домой.

Вакцина.

Создание универсальной прививки от малярии затруднено из-за того, что плазмодии (малярийные паразиты) обладают большим генетическим разнообразием. В одном и том же ареале обитания могут одновременно находиться сотни видов возбудителей малярии, отличных друг от друга. В одной-единственной прививке невозможно совместить антигены всех этих видов. Прививка от малярии существует, однако на сегодняшний день она не универсальна. Ее плановое использование не одобрено в европейских странах мира. Эффективность существующей вакцины против малярийного плазмодия низка (31−56 %). Тестируется новая высокоэффективная вакцина (90 % и более из ослабленных радиацией плазмодиев.

Клинические проявления.

Малярия сопровождается лихорадкой, ознобами, спленомегалией (увеличением размеров селезёнки), гепатомегалией (увеличением размеров печени), анемией (снижением гемоглобина). Характеризуется хроническим рецидивирующим течением. Первые симптомы — лихорадка, головная боль и озноб — могут быть слабовыраженными, что затрудняет выявление малярии. Если не начать лечение в течение первых 24 часов, малярия P. falciparum может развиться в тяжелую болезнь, часто заканчивающуюся летальным исходом. Различают 4 вида малярии: Трехдневная малярия, Малярия овале, Четырехдневная малярия, Тропическая малярии. Инфицирование (заражение) малярией происходит в то время, когда инфицированный комар рода Anopheles всасывает кровь человека. Плазмодии со слюной комара в виде спорозоитов попадают в кровь. Инкубационный (бессимптомный) период длится от момента инфицирования до первых клинических проявлений. Этот период соответствует тканевой шизогонии или спячке спорозоитов и в зависимости от вида возбудителя длится от 10 дней до нескольких месяцев!!! Предвестники болезни появляются в течении 3 – 4 суток — ухудшение общего состояния в виде появления гриппоподобных симптомов: слабость, недомогание, головные боли, боли в суставах, ощущение озноба и др. Острый период, который характеризуется появлением повторяющейся приступообразной лихорадки. Продолжительность приступа от 5 до 12 часов, иногда до суток. Период приступов лихорадки связан с эритроцитарной шизогонией плазмодия. После приступа лихорадки наступает межприступный период, температура тела нормализуется, а самочувствие больного улучшается. Выздоровление наступает тогда, когда проходит стадия поздних рецидивов. Таким образом, общая продолжительность болезни определяется видом инвазии (заражения). Общая продолжительность для трехдневной и четырехдневной малярии составляет от двух до четырех лет, для малярии овале – от полутора лет до трех, для тропической – до года. Иногда между периодами ранних и поздних рецидивов может возникать латентная стадия (полное отсутствие симптомов). Она может длиться от двух до десяти месяцев и, в основном, характерна для трехдневной малярии и малярии овале.

Диагностика малярии основывается на следующих критериях:

  • Клинические – характерные клинические проявления (симптомы), наличие лихорадки.
  • Эпидемические – пребывание больного в регионах эндемичных по малярии в период последних трех лет. Не забудьте информировать врачей об этом!
  • Анамнестические (история жизни больного): перенесенная ранее малярия, факты переливания крови.
  • Лабораторные исследования остаются основными критериями в постановке диагноза «малярия». Лечить малярию необходимо только после лабораторного подтверждения диагноза.

Основные лабораторные методы:

  • Микроскопия крови
  • Анализ крови с микроскопией (изучением под микроскопом) необходимо сдать для обнаружения самих малярийных паразитов.

При микроскопии толстой кровяной капли обнаруживаются большие относительно бледные эритроциты, в которых находятся плазмодии малярии в различных стадиях развития. Их количество в периферической крови зависит от тяжести заболевания. Микроскопия тонкого мазка крови позволяет более детально изучить измененные эритроциты и паразитов в частности. Такой анализ назначается для определения вида паразита и его стадии развития.

Иммунологический анализ крови

Для обнаружения малярийных антигенов (особых белков) необходимо сдать кровь на иммунологический анализ. Существует несколько экспресс-тестов на различные виды плазмодий, которые позволяют диагностировать болезнь прямо у кровати больного. Выполнение иммунологических тестов занимает 10 – 15 минут. Этот анализ широко используется для эпидемиологических исследований в странах с высоким риском заражения малярией.

Серологический анализ крови

При малярии необходимо сдать серологический анализ крови, чтобы обнаружить антитела к плазмодиям в крови пациента. Результаты этого анализа могут указывать не только на присутствие паразита в организме, но и на перенесенное заболевание. Положительным результатом считают рост концентрации антител в крови более чем 1 к 20.

Полимеразная цепная реакция на основе капли крови

ПЦР при малярии необходимо сдавать, только если предыдущие анализы не подтвердили заболевание. ПЦР выполняется на основе капли периферической крови заболевшего человека. Данный вид анализа является высокоспецифичным. Он дает положительный результат и обнаруживает возбудителя в более чем 95 процентах случаев болезни.

Лечение.

Без паразитологического доказательства заболевания можно провести лечение:

  • во-первых, при наличии клинических симптомов в очагах эндемических по малярии,
  • во-вторых, при недоступности лабораторных методов исследования.

Лечение проводят в условиях инфекционного стационара.

Цель лечения малярии: прервать жизнедеятельность паразита в крови больного, предотвратить появление осложнений заболевания, не допустить смерть больного,

профилактировать хроническое течение и рецидивы малярии. В зависимости от вида малярии, наличия или отсутствия осложнений заболевания, стадии цикла развития малярийного плазмодия, наличия устойчивости (резистентности) к противомалярийным препаратам, разрабатываются индивидуальные схемы этиотропной терапии из представленных противомалярийных препаратов. Самым распространённым медикаментом для лечения малярии сегодня, как и раньше, является хинин. На некоторое время он был заменен хлорохином, но ныне снова приобрел популярность. Причиной этому стало появление в Азии и затем распространение по Африке и другим частям света Plasmodium falciparum с мутацией устойчивости к хлорохину. Также существует несколько других веществ, которые используются как для лечения, так и для профилактики малярии ( доксициклин, сульфадоксин/пириметамин, атовакуон/прогуанин). Их использование преимущественно зависит от устойчивости к ним паразитов в области, где используется тот или другой препарат. В настоящее время наиболее эффективны комбинированные лекарственные средства с артемезинином.

Мы ни в коем случае не отговариваем вас от поездки в Африканский рай, мы хотим, чтобы вы были во всеоружии с минимальными рисками для здоровья и чтобы ваш отдых, действительно был незабываемым только с точки зрения положительных эмоций

Микроскопическое исследование «толстой капли» мазка крови на малярийные плазмодии (Plasmodium)

Малярия (лихорадка, болотная лихорадка) — острая или хроническая эндемическая трансмиссивная болезнь, характеризующаяся приступами лихорадки, увеличением печени и селезенки, гемолитической анемией, рецидивирующим течением. Заболевание у людей вызывают 4 вида малярийных плазмодиев: 1. Plasmodium vivax — возбудитель трехдневной формы малярии; 2. Plasmodium ovale — вызывает трехдневный овале-малярии; 3. Plasmodium malariae — возбудитель четырехдневной формы малярии; 4. Plasmodium falciparum — вызывает тропическую малярию. Заболевание через укусы передают самки комаров рода Anopheles. Кроме того, определенное эпидемиологическое значение имеет трансфузионная малярия, которая возникает после переливания крови от донора паразитоносителей или при манипуляции инструментами, загрязненными зараженной кровью. В процессе своей жизнедеятельности плазмодии проходят сложный цикл развития со сменой хозяина. Он состоит из двух фаз: половой (спорогонии), которая проходит в теле самки комара, и бесполой (шизогонии), что происходит в организме человека. Сначала плазмодии проникают в клетки печени (тканевая шизогония), позже — в эритроциты (эритроцитарная шизогония). Успешная лабораторная диагностика малярии возможна именно в период эритроцитарной шизогонии.

Микроскопическое исследование толстой капли и мазков крови

Микроскопическое исследование толстой капли и мазков крови является наиболее распространенным и важным методом диагностики заболевания. Кровь от больных надо брать до начала лечения и несколько раз повторять во время лечения. Плазмодиев в крови больше на высоте лихорадки, особенно после 2-3-го приступа, хотя их можно обнаружить и в период апирексии. Для исследования крови от каждого больного после прокола мякоти пальца готовят 4-8 препаратов (мазки и толстые капли), которые окрашивают по методу Романовского-Гимза. Ядра паразитов окрашиваются в красный, а цитоплазма — в сине-голубой цвет. При наличии возбудителей в эритроцитах обнаруживают различные стадии их развития: 1) кольцевидные трофозоиты возникают после их проникновения в эритроциты; узкий ободок цитоплазмы окружает вакуоль, которая выжимает ядро к периферии и паразит по форме напоминает кольцо (кольцо) 2) амебовидную трофозоиты (взрослые формы) 3) зрелые трофозоиты (шизонты), которые делятся на 6-24 еротроцитарних мерозоитов. При разрушении эритроцитов они попадают в плазму крови. Часть мерозоитов в эритроцитах превращается в незрелые мужские и женские половые клетки — микро-и макрогаметоциты. Для определения вида малярийных плазмодиев необходимо уметь дифференцировать их морфологические особенности. Сначала просматривают толстые капли. Если у них плазмодиев не проявляют, тонкие мазки крови вообще не исследуют. И только при наличии паразитов в толстой капле, особенности их строения изучают в мазках.

Лабораторная диагностика

Диагностика малярии основывается на эпидемиологических, географических, клинических и лабораторных данных. В эндемичных странах с умеренным климатом больные выявляются в определенное время года, в неэндемичных — в любое время года в зависимости от ее завоза. Чтобы уменьшить риск ошибочного диагноза, лечащие врачи должны любому лихорадящему больному задать два вопроса: выезжали ли Вы в эндемичные по малярии страны, и не проводилось ли Вам недавно переливание крови?

Лабораторная диагностика малярии осуществляется двумя методами: паразитологическим и иммунологическим. Ведущий паразитологический метод — микроскопия окрашенных по Романовскому–Гимзе препаратов крови, толстой капли и тонкого мазка. Метод толстой капли достаточно чувствителен и специфичен. Скрининговым является исследование толстой капли, так как объем крови в 30–40 раз больше, чем в тонком мазке. В тонком мазке сохраняются морфологические особенности, присущие данному виду паразита, что имеет большое значение для диагноза. Подтверждением клинического диагноза малярии служит обнаружение в препарате крови любых стадий паразитов, развивающихся в эритроцитах: трофозоитов (молодых и взрослых), шизонтов (незрелых и зрелых), а также гаметоцитов (мужских и женских). Внеэритроцитарные стадии (мерозоиты) существуют в плазме крови короткое время и обнаруживаются в препаратах редко. Каждый препарат крови просматривается до обнаружения в нем паразитов (не менее 100 полей зрения). В случае положительного результата указывается вид возбудителя, все стадии паразита и уровень паразитемии. Может применяться метод флуоресцентной микроскопии центрифугата крови.

Иммунологический (серологический) метод диагностики основан на обнаружении в сыворотке пациента антипаразитарных антител или выявлении в кровяном русле растворимых паразитарных антигенов. В обоих случаях оценивают исход реакции антиген–антитело, ориентируясь на маркер, свидетельствующий о связывании антигена с антителом. В практике большое применение нашли методы обнаружения антител. Чаще других используется непрямая реакция иммунофлюоресценции (НРИФ). Показатель наличия антител — яркая флюоресценция паразитов, находящихся в эритроцитах. Иммуноферментная тест-система, основанная на использовании растворимых антигенов малярийных паразитов, также широко используется.

В настоящее время разработана диагностика малярии с применением полимеразной цепной реакции, которая обнаруживает возбудителей даже при низком уровне паразитемии и позволяет выявить их внутривидовые различия. Метод высоко чувствителен, однако, дорогостоящий и сложный в исполнении.

Проявления эпидемического процесса

По масштабам распространения малярия является одной из наиболее массовых паразитарных болезней в мире. Распространенность малярии отличается неоднородностью, которая зависит от разнообразия природных предпосылок, усиливающихся социальными условиями деятельности людей. По риску заражения и вероятности завоза малярии выделяют следующие регионы мира, для которых характерными являются различия по видовому составу плазмодиев:

  1. Страны Африки, расположенные южнее Сахары. На этой территории доминирующим возбудителем является P. falciparum, вторую позицию занимает P. malariaе, P. ovale встречается эпизодически, P. vivax — крайне редко. Риск заражения малярией для людей, приезжающих в эти страны, очень велик круглый год.

  2. Страны Северной Африки, Ближнего и Среднего Востока. Распространение малярии в этом регионе очень неравномерное. В структуре возбудителей доминирует P. vivax. В отдельных странах (Эфиопия, Сомали, Судан) риск заражения малярией оценивается как высокий.

  3. Страны Юго-Восточной Азии и Океании. В западной части региона и центральных районах Китая преимущественно встречается P. vivax, на остальных территориях — P. falciparum, реже — P. malariaе, P. ovale встречается крайне редко. Высокий риск заражения малярией характерен для предгорных территорий Индокитая и Восточной Индии.

  4. Страны Латинской Америки. На большинстве территорий доминирует P. vivax, а P. falciparum встречается эпизодически. Во многих районах малярия ликвидирована. Риск заражения для приезжих людей относительно невелик и сохраняется при поездках в сельские районы.

ВБеларуси в 40–50-е годы заболеваемость малярией была очень высокой. В настоящее время ежегодно выявляется около 10 случаев завозной малярии. В 2007 г. — 10 случаев, в 2008 г. — 9, в 2009 г. — 10. Видовой состав возбудителей малярии в 2009 г. был следующим:P. vivax — 4, P. falciparum — 7, P. ovale — 2, P. malariaе — 2. В пяти случаях это была микст-инфекция и зарегистрирован 1 случай рецидива в г. Минске. Завозы малярии на территорию Беларуси в 2009 г. осуществлялись из следующих стран: Пакистан, Гана, Гвинея, Кот Дивуар, Нигерия, Судан. Малярия выявлена у 6 граждан Беларуси, посещавших указанные станы и у 3 иностранных граждан. На рис. 3 представлена заболеваемость малярией в Беларуси начиная с 1958 г.

Рис 3. Заболеваемость малярией в Беларуси

Передача возбудителя малярии может осуществляться только на маляриогенных территориях. Условиями, определяющими маляриогенность территории, являются:

  1. наличие температур воздуха, допускающих завершение процесса спорогонии в переносчике;

  2. наличие комаров рода Anopheles, восприимчивых к заражению возбудителем малярии человека;

  3. способность и возможность самок комаров доживать до эпидемически опасного возраста;

  4. численность комаров и наличие контакта с человеком;

  5. наличие населения, восприимчивого к заражению возбудителем малярии человека.

По всем перечисленным условиям территория Республики Беларусь является маляриогенной для трехдневной малярии (возбудитель P. vivax). На территории Республики Беларусь малярия ликвидирована в 1953 году, однако возможен завоз малярии из эндемичных стран.

Сезон года, в течение которого выявляется наибольшее количество больных малярией, называют малярийным сезоном. В условиях умеренного климата малярийный сезон подразделяется:

  1. на сезон эффективной заражаемости комаров;

  2. сезон передачи возбудителей малярии;

  3. сезон возникновения заболеваний.

Сезон эффективной заражаемости — это период года, когда комары имеют возможность заразиться плазмодиями, и в их организме произойдет завершение спорогонии, т. е. из гаметоцитов разовьются спорозоиты. Сезон эффективной заражаемости начинается с момента устойчивого установления среднесуточной температуры воздуха выше +16 ºС (при трехдневной малярии), заканчивается — за 2–4 недели до снижения среднесуточных температур ниже +16 ºС. В последние дни лета комары также могут заражаться, но из-за недостатка тепла спорозоиты не успевают развиваться. Следовательно, такое заражение неэффективно. В Беларуси сезон эффективной заражаемости начинается в мае и продолжается до августа.

Сезон передачи — это период года, в течение которого происходит передача малярии человеку через укусы комаров. Сезон передачи начинается после завершения в организме комара спорогонии в условиях конкретных температур текущего года, завершается — с массовым уходом комаров на зимовку. В Беларуси сезон передачи начинается в июне и продолжается до сентября.

Сезон возникновения заболеваний малярией для Беларуси нехарактерен, так как местные случаи заражения этой инвазией наблюдаются крайне редко. Завозные случаи малярии наблюдаются в различные периоды года и зависят от сезона передачи возбудителей в странах, в которых произошло заражение.

Диагностика малярии, лабораторная диагностика малярии – Medaboutme.ru

Диагностика малярии осуществляется в тех случаях, когда есть подозрение на трансмиссионное инфекционное заболевание, что передается путем укуса человека вредным насекомым. Основные симптомы заболевания – это анемия, лихорадка, озноб. Малярия носит характер хронического рецидивирующего заболевания.

Один известный военный врач из Франции еще в 80 году позапрошлого века обнаружил в крови своего пациента живой одноклеточный организм. Именно так был выявлен случай, когда простейшие стали причиной возникновения болезни (малярии).

Лабораторная диагностика малярии может проводиться двумя методами – паразитологическим и иммунологическим.

Паразитологический метод

Паразитологический способ диагностики осуществляется при помощи гемоскопического теста. В случае, когда при проведении исследования были обнаружены какие-либо эритроцитарные стадии плазмодиев, констатируется диагноз «малярия».

Эффективность и надежность такого метода зависит от опытности лаборанта и правильного выполнения обследования на каждом отдельном этапе. Вероятность обнаружения соответствующих микроорганизмов вырастает в несколько раз, если брать во внимание густую каплю крови.

Чем большей является концентрация вредоносных микроорганизмов в крови, тем соответственно легче их обнаружить. Диагностика малярии проводится с учетом минимального порога обнаружения, который составляет пять паразитов в одной мкл крови.

В случае, когда были обнаружены некие косвенные симптомы малярийной инфекции, толстую каплю исследуют более тщательно. Для получения результата необходимо проводить забор крови по несколько раз в сутки.

Для того чтобы диагностика была эффективной, важно вести постоянный контроль, указывать название паразита, количество, временные рамки проведения исследований.

Иммунологические методы

Лабораторная диагностика малярии иммунологическими способами предусматривает возможность обнаружить растворимые паразитарные антигены и антитела в сыворотке крови.

Зачастую в медицине прибегают к использованию непрямой реакции иммунофлуоресцении. Антигеном, как правило, служит капля крови, в которой содержится большой процент шизонтов.

В нынешнее время предоставляется возможным осуществить диагностику болезни и путем полимеразной цепной реакции. Но данный метод, к сожалению, достаточно сложный и дорогостоящий.

CDC — Малярия — Диагностические инструменты

Тест непрямых флуоресцентных антител

Обнаружение антител к малярии выполняется с помощью теста непрямых флуоресцентных антител (IFA). Процедуру IFA можно использовать, чтобы определить, был ли пациент инфицирован Plasmodium . Из-за времени, необходимого для выработки антител, а также из-за наличия антител серологическое тестирование нецелесообразно для рутинной диагностики острой малярии. Однако обнаружение антител может быть полезно для:

  • Скрининг доноров крови, вовлеченных в случаи малярии, вызванной переливанием крови, когда паразитемия донора может быть ниже обнаруживаемого уровня исследования мазка крови
  • Тестирование пациента, обычно из эндемичного района, у которого были повторные или хронические инфекции малярии, на состояние, известное как синдром тропической спленомегалии
  • Тестирование пациента, который недавно лечился от малярии, но диагноз ставится под сомнение.

Видоспецифическое тестирование доступно для трех из четырех видов человека: P. falciparum , P. vivax и P. malariae. Антигены P. ovale не всегда легко доступны, поэтому тесты на антитела не проводятся рутинно. Перекрестные реакции часто происходят между видами Plasmodium и видами Babesia . Стадия крови Plasmodium видов шизонтов (меронтов) используются в качестве антигена. Сыворотка пациента подвергается воздействию организмов; гомологичное антитело, если оно присутствует, присоединяется к антигену, образуя комплекс антиген-антитело (Ag-Ab).Затем добавляется меченное флуоресцеином антитело против человека, которое присоединяется к специфическим антителам пациента к малярии. Когда предметное стекло исследуют с помощью флуоресцентного микроскопа, если паразиты флуоресцируют яблочно-зеленым цветом, это означает, что реакция положительная.

Иммуноферментный анализ

также использовался в качестве инструмента для скрининга доноров крови, но имеет ограниченную чувствительность из-за использования только антигена Plasmodium falciparum вместо антигенов всех четырех видов человека.

Тест непрямых флуоресцентных антител (IFA).Флуоресценция указывает на то, что исследуемая сыворотка пациента содержит антитела, которые реагируют с препаратом антигена (здесь паразитов Plasmodium falciparum ).

Малярия — Лабораторные тесты онлайн

Источники, использованные в текущем обзоре

Центры по контролю и профилактике заболеваний (2012). Диагностика и лечение малярии в мире, эндемичном по малярии. Доступно в Интернете по адресу http://www.cdc.gov/malaria/malaria_worldwide/reduction/dx_tx.html. По состоянию на 12 сентября 2015 г.

Инициатива по вакцине против малярии (2015 г.). Ускорение разработки вакцины против малярии. Доступно в Интернете по адресу http://www.malariavaccine.org/malvac-state-of-vaccine-dev.php. По состоянию на 14 сентября 2015 г.

Максмен, Эми (2013). Малярия: гонка против сопротивления. Nature , Vol 503, 7475. Доступно в Интернете по адресу http://www.nature.com/news/malaria-a-race-against-resistance-1.14155. По состоянию на 15 сентября 2015 г.

Всемирная организация здравоохранения (2015 г.).Малярия. Доступно в Интернете по адресу http://www.who.int/malaria/media/world_malaria_report_2014/en/. По состоянию на 15 сентября 2015 г.

Источники, использованные в предыдущих обзорах

Медицинская энциклопедия MedlinePlus. Малярия. Доступно в Интернете по адресу http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/000621.htm. По состоянию на апрель 2011 г.

Национальный институт аллергии и инфекционных заболеваний. Понимание малярии. Доступно в Интернете по адресу http://www.niaid.nih.gov/topics/malaria/understandingmalaria/Pages/default.aspx. По состоянию на апрель 2011 г.

Всемирная организация здравоохранения. Малярия. Информационный бюллетень, апрель 2010 г. Доступно в Интернете по адресу http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs094/en/index.html. По состоянию на апрель 2011 г.

ВОЗ. 10 фактов о малярии. Доступно в Интернете по адресу http://www.who.int/features/factfiles/malaria/en/index.html. По состоянию на апрель 2011 г.

CDC. Эпиднадзор за малярией — США, 2006 г. MMWR . Доступно в Интернете по адресу http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/ss5705a2.htm.По состоянию на апрель 2011 г.

ВОЗ. Что такое БДТ от малярии? Доступно в Интернете по адресу http://www.wpro.who.int/sites/rdt/whatis/malaria_rdt.htm. По состоянию на апрель 2011 г.

CDC. DPDx — Диагностические процедуры: образцы крови, сбор образцов. Доступно в Интернете по адресу http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/DiagnosticProcedures.htm. По состоянию на апрель 2011 г.

(28 февраля 2011 г.) CDC. Диагностика и лечение малярии в США. Доступно в Интернете по адресу http://www.cdc.gov/malaria/diagnosis_treatment/index.html. По состоянию на апрель 2011 г.

(27 июля 2009 г.) CDC. Желтая книга, глава 2, Консультации перед поездкой, Малярия. Доступно в Интернете по адресу http://wwwnc.cdc.gov/travel/yellowbook/2010/chapter-2/malaria.aspx. По состоянию на апрель 2011 г.

(октябрь 2007 г.) ЮНИСЕФ. Диагностика малярии: Руководство по выбору наборов для экспресс-диагностики малярии — 1-е издание. PDF-файл доступен для загрузки по адресу http://www.unicef.org/supply/files/Guidance_for_malaria_rapid_tests.pdf. По состоянию на май 2011 г.

Сингх Б., Ким Сунг Л., Матусоп А., Радхакришнан А., Шамсул С.С., Кокс-Сингх Дж., Томас А., Конвей Д.Большой очаг естественных инфекций Plasmodium knowlesi у людей. Ланцет . 2004 27 марта; 363 (9414): 1017-24.

Питер Ван ден Эеде, Хонг Нгуен Ван, Шанталь Ван Овермейр, Индра Витилингам, Тханг Нго Дык, Ле Суан Хунг, Хунг Нгуен Ман, Йозеф Анне, Умберто Д’Алессандро, Аннет Эрхарт. Человеческие инфекции Plasmodium knowlesi у детей младшего возраста в центральном Вьетнаме. Журнал о малярии . 2009 8: 249.

Стефани П. Джонстон, Норман Дж.Пениазек, Манифет В. Ксаявонг, Сьюзан Б. Слеменда, Патрисия П. Уилкинс и Александр Дж. Да Силва. ПЦР как подтверждающий метод лабораторной диагностики малярии. Дж. Клин Микробиол . 2006 (март) 44 (3): 1087–1089.

Диагноз малярии: краткий обзор

Abstract

Малярия — основная причина смерти в тропических и субтропических странах, ежегодно убивая более 1 миллиона человек во всем мире; 90% смертельных случаев приходится на африканских детей. Несмотря на то, что в настоящее время существуют эффективные способы борьбы с малярией, число случаев малярии по-прежнему увеличивается из-за нескольких факторов.В этой чрезвычайной ситуации необходимы быстрые и эффективные методы диагностики для борьбы с малярией и борьбы с ней. Традиционные методы диагностики малярии остаются проблематичными; поэтому были разработаны и внедрены новые технологии для преодоления ограничений. В этом обзоре подробно описаны доступные в настоящее время методы диагностики малярии.

Ключевые слова: Plasmodium , малярия, диагностика, метод

ВВЕДЕНИЕ

Малярия, которую иногда называют «королем болезней», вызывается простейшими паразитами из рода Plasmodium .Наиболее серьезный и иногда смертельный тип малярии вызывается Plasmodium falciparum . Другие виды малярии человека, P. vivax , P. ovale , P. malariae и иногда P. knowlesi , могут вызывать острые, тяжелые заболевания, но показатели смертности низкие. Малярия является наиболее серьезным инфекционным заболеванием в тропических и субтропических регионах и продолжает оставаться серьезной глобальной проблемой здравоохранения, поскольку более 40% населения мира подвержено малярийному риску различной степени примерно в 100 странах.По оценкам, более 500 миллионов человек ежегодно страдают от малярийных инфекций, в результате чего умирает около 1-2 миллионов человек, из которых 90% — дети в странах Африки к югу от Сахары [1]. Число случаев малярии во всем мире, по-видимому, увеличивается из-за увеличения риска передачи в районах, где контроль над малярией снизился, увеличения распространенности устойчивых к лекарствам штаммов паразитов и, в относительно небольшом числе случаев, массового увеличения числа международных поездок и миграции [2] . Потребность в эффективных и практичных средствах диагностики для глобальной борьбы с малярией возрастает [3], поскольку эффективная диагностика снижает как осложнения, так и смертность от малярии.Дифференцировать клинический диагноз от других тропических инфекций на основании признаков и симптомов пациентов или заключений врачей может быть сложно. Поэтому срочно необходимы подтверждающие диагнозы с использованием лабораторных технологий. В этом обзоре обсуждаются доступные в настоящее время методы диагностики малярии во многих условиях и оценивается их применимость в условиях богатых и бедных ресурсов.

ДИАГНОСТИКА МАЛЯРИИ

Своевременная и точная диагностика имеет решающее значение для эффективного лечения малярии.Глобальное воздействие малярии стимулировало интерес к разработке эффективных диагностических стратегий не только для районов с ограниченными ресурсами, где малярия является серьезным бременем для общества, но также и в развитых странах, где часто не хватает опыта диагностики малярии [4,5]. Диагностика малярии включает выявление паразитов малярии или антигенов / продуктов в крови пациента. Хотя это может показаться простым, диагностическая эффективность зависит от многих факторов. Различные формы 5 видов малярии; различные стадии эритроцитарной шизогонии, эндемичность различных видов, взаимосвязь между уровнями передачи, перемещением населения, паразитемией, иммунитетом, а также признаками и симптомами; лекарственная устойчивость, проблемы рецидивирующей малярии, устойчивой жизнеспособной или нежизнеспособной паразитемии и секвестрации паразитов в более глубоких тканях, а также использование химиопрофилактики или даже предполагаемого лечения на основе клинического диагноза — все это может повлиять на идентификацию и интерпретацию малярийной паразитемии в диагностическом тесте.

Малярия — это потенциальная неотложная медицинская помощь, и к ней следует обращаться соответственно. Задержки с диагностикой и лечением являются основными причинами смерти во многих странах [6]. Диагностика может быть затруднена, если малярия больше не является эндемическим заболеванием для медицинских работников, не знакомых с этой болезнью. Клиницисты могут забыть включить малярию в число потенциальных диагнозов для некоторых пациентов и не назначить необходимые диагностические тесты. Технические специалисты могут быть незнакомы или не иметь опыта борьбы с малярией и не могут обнаружить паразитов при исследовании мазков крови под микроскопом.В некоторых районах передача малярии настолько интенсивна, что большая часть населения инфицирована, но остается бессимптомной, например, в Африке. У таких носителей выработался достаточный иммунитет, чтобы защитить их от малярийной болезни, но не от инфекции. В таких ситуациях обнаружение малярийных паразитов у больного человека не обязательно означает, что болезнь вызвана паразитами. Во многих странах, эндемичных по малярии, нехватка ресурсов является серьезным препятствием для надежной и своевременной диагностики. Медицинский персонал недостаточно обучен, не оборудован и получает недоплачиваемую работу.Они часто сталкиваются с чрезмерной нагрузкой на пациентов и должны разделить свое внимание между малярией и другими не менее серьезными инфекционными заболеваниями, такими как туберкулез или ВИЧ / СПИД.

КЛИНИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ МАЛЯРИИ

Клинический диагноз малярии является традиционным среди врачей. Этот метод наименее дорогостоящий и наиболее широко применяемый. Клинический диагноз основывается на признаках и симптомах пациента, а также на физических данных при осмотре. Самые ранние симптомы малярии очень неспецифичны и разнообразны и включают лихорадку, головную боль, слабость, миалгию, озноб, головокружение, боль в животе, диарею, тошноту, рвоту, анорексию и зуд [7].Клинический диагноз малярии по-прежнему является сложной задачей из-за неспецифического характера признаков и симптомов, которые в значительной степени совпадают с другими распространенными, а также потенциально опасными для жизни заболеваниями, например общие вирусные или бактериальные инфекции и другие лихорадочные заболевания. Совпадение симптомов малярии с другими тропическими болезнями снижает диагностическую специфичность, что может способствовать неизбирательному использованию противомалярийных средств и ухудшать качество помощи пациентам с немалярийными лихорадками в эндемичных районах [8-10].Комплексное ведение детских болезней (ИВБДВ) предоставило клинические алгоритмы для лечения и диагностики распространенных детских болезней минимально подготовленными поставщиками медицинских услуг в развивающихся странах, имеющими неподходящее оборудование для лабораторной диагностики. Широко используемый клинический алгоритм диагностики малярии по сравнению с полностью обученным педиатром, имеющим доступ к лабораторной поддержке, показал очень низкую специфичность (0–9%), но 100% чувствительность в африканских условиях [11, 12]. Этот недостаток специфичности показывает опасность отличить малярию от других причин лихорадки у детей только на основании клинических данных.Недавно другое исследование показало, что использование клинического алгоритма IMCI привело к 30% гипердиагностике малярии [13]. Таким образом, точность диагностики малярии может быть значительно повышена за счет объединения клинических и паразитарных данных [14].

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА МАЛЯРИИ

Быстрая и эффективная диагностика малярии не только облегчает страдания, но и снижает передачу инфекции в сообществе. Неспецифический характер клинических признаков и симптомов малярии может привести к чрезмерному лечению малярии или отсутствию лечения других заболеваний в эндемичных по малярии районах и неправильной диагностике в неэндемичных районах [15].В лабораторных условиях малярия диагностируется различными методами, например: обычная микроскопическая диагностика путем окрашивания тонких и толстых мазков периферической крови [16], другие методы концентрации, например метод количественного анализа лейкоцитов (QBC) [15], быстрые диагностические тесты, например, OptiMAL [17,18], ICT [19], Para-HIT-f [10], ParaScreen [20], SD Bioline [21], Paracheck [ 22], а также методы молекулярной диагностики, такие как полимеразная цепная реакция (ПЦР) [23,24]. Также были описаны некоторые преимущества и недостатки этих методов, связанные с чувствительностью, специфичностью, точностью, прецизионностью, затраченным временем, рентабельностью, трудоемкостью, потребностью в квалифицированных микроскопистов и проблемой неопытных технических специалистов.

Микроскопическая диагностика с использованием окрашенных тонких и толстых мазков периферической крови (PBS)

Малярия обычно диагностируется путем микроскопического исследования окрашенных мазков крови с использованием красителей Гимзы, Райта или Филда [25]. Этот метод очень мало изменился с момента открытия Лаверраном малярийного паразита и усовершенствования техники окрашивания Романовским в конце 1800-х годов. Более чем столетие спустя обнаружение под микроскопом и идентификация видов Plasmodium в окрашенных по Гимзе толстых мазках крови (для скрининга присутствующих малярийных паразитов) и тонких мазках крови (для подтверждения вида) остается золотым стандартом для лабораторной диагностики [26 ].Малярия диагностируется микроскопически путем окрашивания толстых и тонких пленок крови на предметном стекле для визуализации малярийных паразитов. Вкратце, палец пациента очищают 70% этиловым спиртом, дают ему высохнуть, затем протирают край кончика пальца острым стерильным ланцетом и две капли крови помещают на предметное стекло. Для получения густого мазка крови пятно крови перемешивают круговыми движениями углом предметного стекла, стараясь не сделать препарат слишком густым, и дают высохнуть без фиксатора.После высыхания пятно окрашивают разбавленным раствором Гимза (1:20, об. / Об.) В течение 20 мин и промывают, помещая пленку в забуференную воду на 3 мин. Предметное стекло сушат на воздухе в вертикальном положении и исследуют с помощью светового микроскопа. Поскольку они не закреплены, красные клетки лизируются при нанесении красителя на водной основе. Тонкую пленку крови готовят, сразу помещая гладкий край слайдера в каплю крови, регулируя угол между слайдом и распределителем до 45 °, а затем размазывая кровь быстрым и равномерным движением по поверхности.Затем пленке дают высохнуть на воздухе и фиксируют абсолютным метанолом. После сушки образец окрашивают разбавленным раствором Гимзы (1:20, об. / Об.) В течение 20 мин и промывают, на короткое время погружая предметное стекло в банку с забуференной водой и вынимая из нее (чрезмерная стирка обесцвечивает пленку). Затем слайду дают высохнуть на воздухе в вертикальном положении и исследуют под световым микроскопом [27]. Широкое распространение этого метода в лабораториях по всему миру можно объяснить его простотой, низкой стоимостью, его способностью определять присутствие паразитов, инфицирующие виды и оценивать плотность паразитов — все параметры, полезные для борьбы с малярией.Недавно проведенное исследование показало, что обычная микроскопическая диагностика малярии в учреждениях первичной медико-санитарной помощи в Танзании может сократить выписывание противомалярийных препаратов, а также, по-видимому, улучшить надлежащее лечение немалярийной лихорадки [16]. Однако процессы окрашивания и интерпретации трудоемки, занимают много времени и требуют значительного опыта и подготовленных медицинских работников, особенно для точного определения видов при низкой паразитемии или при смешанных малярийных инфекциях.Самый важный недостаток микроскопического исследования — его относительно низкая чувствительность, особенно при низком уровне паразитов. Хотя опытный микроскопист может обнаружить до 5 паразитов / мкл, средний микроскопист обнаруживает только 50–100 паразитов / мкл [28]. Это, вероятно, привело к недооценке показателей заражения малярией, особенно случаев с низким уровнем паразитемии и бессимптомной малярией. Способность поддерживать необходимый уровень знаний в области диагностики малярии является проблематичной, особенно в удаленных медицинских центрах в странах, где болезнь встречается редко [29].Микроскопия трудоемка и не подходит для использования с высокой пропускной способностью, а определение видов при низкой плотности паразитов по-прежнему является сложной задачей. Поэтому в отдаленных сельских районах, например В периферийных медицинских клиниках нет электричества и медицинских учреждений, микроскопия часто недоступна [30].

Метод QBC

Метод QBC был разработан для улучшения микроскопического обнаружения паразитов и упрощения диагностики малярии [31]. Этот метод включает окрашивание дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) паразитов в пробирках с микрогематокритом флуоресцентными красителями, например.грамм. акридиновый оранжевый и его последующее обнаружение с помощью эпифлуоресцентной микроскопии. Вкратце, кровь из пальца собирают в гематокритную пробирку, содержащую акридиновый апельсин и антикоагулянт. Пробирку центрифугируют при 12000 g в течение 5 мин и сразу исследуют с помощью эпифлуоресцентного микроскопа [27]. Ядра паразита светятся ярко-зеленым цветом, а цитоплазма желто-оранжевой. Метод QBC оказался быстрым и чувствительным тестом для диагностики малярии во многих лабораториях [15,32-35].Хотя он увеличивает чувствительность к P. falciparum , он снижает чувствительность к другим видам и снижает специфичность из-за окрашивания ДНК лейкоцитов [36]. Недавно было показано, что акридиновый оранжевый является предпочтительным методом диагностики (с помощью световой микроскопии и иммунохроматографических тестов) в контексте эпидемиологических исследований бессимптомных популяций в эндемичных районах, вероятно, из-за повышенной чувствительности при низкой паразитемии [37]. В настоящее время коммерчески доступны портативные флуоресцентные микроскопы, использующие технологию светоизлучающих диодов (LED), и предварительно подготовленные предметные стекла с флуоресцентным реагентом для мечения паразитов [38].Хотя метод QBC прост, надежен и удобен для пользователя, он требует специального оборудования, более дорог, чем обычная световая микроскопия, и не позволяет определять виды и количество паразитов.

Экспресс-диагностические тесты (RDT)

Поскольку Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) признала острую потребность в новых, простых, быстрых, точных и экономичных диагностических тестах для определения присутствия малярийных паразитов, чтобы преодолеть недостатки световая микроскопия, были разработаны многочисленные новые методы диагностики малярии [39].Это, в свою очередь, привело к увеличению использования ДЭТ при малярии, которые выполняются быстро и легко и не требуют электричества или специального оборудования [40]. В настоящее время доступно 86 БДТ от малярии от 28 различных производителей [41]. В отличие от традиционной микроскопической диагностики путем окрашивания тонких и толстых мазков периферической крови и метода QBC, все RDT основаны на одном принципе и обнаруживают антиген малярии в крови, протекающей вдоль мембраны, содержащей специфические противомалярийные антитела; им не требуется лабораторное оборудование.Большинство продуктов нацелены на белок, специфичный для P. falciparum , например богатый гистидином протеин II (HRP-II) или лактатдегидрогеназа (LDH). Некоторые тесты обнаруживают специфических и панспецифических антигенов P. falciparum (альдолаза или пан-малярийная pLDH) и позволяют отличить не P. falciparum инфекции от смешанных малярийных инфекций. Хотя большинство продуктов RDT подходят для диагностики малярии P. falciparum , некоторые также заявляют, что они могут эффективно и быстро диагностировать P.vivax малярия [21,42,43]. Недавно был разработан новый метод ДРТ для обнаружения P. knowlesi [44]. ДЭТ дают возможность расширить преимущества паразитарной диагностики малярии за пределы возможностей световой микроскопии с потенциально значительными преимуществами в лечении лихорадочных заболеваний в отдаленных эндемичных по малярии районах. Показатели RDT для диагностики малярии были отличными [14,19,20,22,45-47]; однако некоторые отчеты из отдаленных эндемичных по малярии районов показали большие различия в чувствительности [36,40,48].Мюррей и соавторы недавно обсудили надежность RDT в «обновленной информации о быстром диагностическом тестировании на малярию» в своей превосходной статье [49]. В целом, RDT представляют собой очень ценный инструмент быстрой диагностики малярии для медицинских работников; однако в настоящее время его необходимо использовать вместе с другими методами для подтверждения результатов, характеристики инфекции и мониторинга лечения. В эндемичных по малярии районах, где нет оборудования для световой микроскопии, которое могло бы получить пользу от ДЭТ, требуются улучшения для простоты использования, чувствительности к не-falciparum инфекции, стабильности и доступности.В настоящее время ВОЗ разрабатывает руководящие принципы для обеспечения контроля качества от партии к партии, что необходимо для доверия общества к этому новому диагностическому инструменту [41]. Поскольку простота и надежность ДЭТ были улучшены для использования в сельских эндемичных районах, диагностика ДЭТ в неэндемичных регионах становится более возможной, что может сократить время до лечения в случае завезенной малярии [30].

Серологические тесты

Диагностика малярии с использованием серологических методов обычно основана на обнаружении антител к паразитам малярии на стадии бесполой крови.Иммунофлуоресцентный тест на антитела (ИФА) был надежным серологическим тестом на малярию в последние десятилетия [50]. Хотя ИФА требует много времени и является субъективным, он очень чувствителен и специфичен [51]. Литература четко иллюстрирует надежность ИФА, поэтому его обычно считали золотым стандартом для серологического тестирования на малярию [47]. IFA полезен в эпидемиологических исследованиях, для скрининга потенциальных доноров крови и иногда для получения доказательств недавнего инфицирования у неиммунных людей.До недавнего времени это был валидированный метод обнаружения антител, специфичных для Plasmodium , в различных отделениях банка крови, который был полезен для скрининга потенциальных доноров крови, чтобы избежать малярии, передаваемой при переливании крови [52,53]. Во Франции, например, IFA используется как часть стратегии целевого скрининга в сочетании с анкетой для доноров [54]. Принцип IFA заключается в том, что после заражения любыми видами Plasmodium специфические антитела вырабатываются в течение 2 недель после первоначального заражения и сохраняются в течение 3-6 месяцев после уничтожения паразитов.IFA использует специфический антиген или неочищенный антиген, приготовленный на предметном стекле, покрытый оболочкой и хранящийся при -30 ℃ до использования, и определяет количество антител IgG и IgM в образцах сыворотки пациентов. Титры> 1:20 обычно считаются положительными, а <1:20 - неподтвержденными. Титры> 1: 200 можно классифицировать как недавние инфекции [27]. В заключение, IFA прост и чувствителен, но требует много времени. Его нельзя автоматизировать, что ограничивает количество сывороток, которые можно исследовать ежедневно. Это также требует флуоресцентной микроскопии и обученных технических специалистов; на показания может влиять уровень подготовки технического специалиста, особенно для образцов сыворотки с низким титром антител.Более того, отсутствие стандартизации реагентов IFA делает его непрактичным для рутинного использования в центрах переливания крови и для согласования межлабораторных результатов.

МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Как упоминалось выше, традиционные методы диагностики малярии остаются проблематичными. В различных лабораториях срочно необходимы новые методы лабораторной диагностики, которые демонстрируют высокую чувствительность и высокую специфичность без субъективных вариаций. Последние разработки в области молекулярно-биологических технологий, e.грамм. Методы ПЦР, петлевой изотермической амплификации (LAMP), микроматрицы, масс-спектрометрии (MS) и проточной цитометрии (FCM) позволили всесторонне охарактеризовать малярийных паразитов и порождают новые стратегии диагностики малярии.

Метод ПЦР

Методы, основанные на ПЦР, являются недавней разработкой в ​​молекулярной диагностике малярии и оказались одним из наиболее специфичных и чувствительных диагностических методов, особенно для случаев малярии с низкой паразитемией или смешанной инфекцией [55].Метод ПЦР продолжает широко использоваться для подтверждения малярийной инфекции, последующего терапевтического ответа и выявления лекарственной устойчивости [27]. Было обнаружено, что он более чувствителен, чем QBC и некоторые RDT [56,57]. Что касается золотого стандарта метода диагностики малярии, то ПЦР показала более высокую чувствительность и специфичность, чем обычное микроскопическое исследование окрашенных мазков периферической крови, и теперь кажется лучшим методом диагностики малярии [55]. ПЦР может обнаружить всего 1-5 паразитов / мкл крови (≤ 0.0001% инфицированных эритроцитов) по сравнению с примерно 50-100 паразитов / мкл крови при микроскопии или ДЭТ. Более того, ПЦР может помочь обнаружить лекарственно-устойчивых паразитов, смешанные инфекции и может быть автоматизирована для обработки большого количества образцов [58,59]. Некоторые модифицированные методы ПЦР оказались надежными, например, вложенная ПЦР, ПЦР в реальном времени и ПЦР с обратной транскрипцией, и оказались полезными методами второй линии, когда 96 Korean J Parasitol. Vol. 47, No. 2: 93-102, июнь 2009 г. Результаты традиционных методов диагностики неясны для пациентов с признаками и симптомами малярии; они также позволяют точно определять виды [58,60-62].В последнее время широкое распространение получил метод ПЦР для выявления инфекций P. knowlesi [63–65]. Хотя ПЦР, по-видимому, преодолела две основные проблемы, связанные с чувствительностью и специфичностью диагностики малярии, полезность ПЦР ограничена сложными методологиями, высокой стоимостью и необходимостью в специально обученных технических специалистах. Таким образом, ПЦР обычно не применяется в развивающихся странах из-за сложности тестирования и отсутствия ресурсов для адекватного и регулярного выполнения этих тестов [66].Контроль качества и обслуживание оборудования также важны для метода ПЦР, поэтому он может не подходить для диагностики малярии в отдаленных сельских районах или даже в обычных клинических диагностических условиях [67].

Метод LAMP

Метод LAMP заявлен как простой и недорогой молекулярный диагностический тест на малярию, который выявляет консервативный ген 18S рибосомной РНК P. falciparum [68]. Другие исследования показали высокую чувствительность и специфичность не только для P.falciparum , но также P. vivax , P. ovale и P. malariae [69,70]. Эти наблюдения показывают, что LAMP более надежен и полезен для рутинного скрининга малярийных паразитов в регионах, где трансмиссивные болезни, такие как малярия, являются эндемичными. LAMP оказался простым, чувствительным, быстрым и более дешевым, чем ПЦР. Однако реагенты требуют холодного хранения, и необходимы дальнейшие клинические испытания для подтверждения осуществимости и клинической применимости LAMP [30].

Microarrays

Публикация генома Plasmodium предлагает множество возможностей диагностики малярии [71,72]. Микроматрицы могут сыграть важную роль в будущей диагностике инфекционных заболеваний [73]. Принцип метода микроматриц аналогичен традиционной гибридизации по Саузерну. Гибридизация меченых мишеней, разделенных от нуклеиновых кислот в тестовом образце до зондов на массиве, позволяет зондировать несколько генных мишеней в одном эксперименте. В идеале этот метод должен быть уменьшен в размерах и автоматизирован для диагностики в местах оказания медицинской помощи [23].Пан-микробный олигонуклеотидный микрочип был разработан для диагностики инфекционных заболеваний и точно идентифицировал P. falciparum в клинических образцах [74]. Однако этот диагностический метод все еще находится на ранней стадии разработки [30].

Анализ FCM

Сообщается, что проточная цитометрия использовалась для диагностики малярии [75–77]. Вкратце, принцип этого метода основан на обнаружении гемозоина, который вырабатывается, когда паразиты, вызывающие внутриэритроцитарную малярию, переваривают гемоглобин хозяина и кристаллизуют высвободившийся токсичный гем в гемозоин в кислой пищевой вакуоли.Гемозоин в фагоцитах может быть обнаружен деполяризацией лазерного света, когда клетки проходят через канал проточного цитометра. Этот метод может обеспечить чувствительность 49-98% и специфичность 82-97% для диагностики малярии [78,79] и потенциально полезен для диагностики клинически неподозреваемой малярии. Недостатками являются трудоемкость, необходимость в квалифицированных специалистах, дорогостоящем диагностическом оборудовании и возможность ложноположительных результатов при других бактериальных или вирусных инфекциях. Следовательно, этот метод следует рассматривать как инструмент скрининга на малярию.

Автоматические счетчики клеток крови (ACC)

ACC — это практический инструмент для диагностики малярии [80], с тремя описанными подходами. Первый использовал прибор Cell-Dyn® 3500 для обнаружения малярийного пигмента (гемозоина) в моноцитах и ​​показал чувствительность 95% и специфичность 88% по сравнению с мазком крови золотого стандарта [81]. Во втором методе также использовался Cell-Dyn® 3500 и анализировался деполяризованный лазерный свет (DLL) для выявления инфекции малярии с общей чувствительностью 72% и специфичностью 96% [82].В третьем методе использовался АСС Beckman Coulter для обнаружения увеличения количества активированных моноцитов по объему, проводимости и разбросу (VCS) с 98% чувствительностью и 94% специфичностью [83]. Хотя это и многообещающе, ни один из трех методов обычно не доступен в клинических лабораториях; необходимы дальнейшие исследования для улучшения и проверки прибора и его программного обеспечения. Точность, которую обещают эти методы для выявления малярийных паразитов, означает, что АКК может стать ценным и рутинным лабораторным методом диагностики малярии.

Масс-спектрофотометрия

Недавно было сообщено о новом методе обнаружения малярийных паразитов in vitro с чувствительностью 10 паразитов / мкл крови. Он включает протокол очистки образцов цельной крови с последующей масс-спектрометрией с прямой ультрафиолетовой лазерной десорбцией (LDMS). Для диагностики малярии принцип LDMS состоит в том, чтобы идентифицировать конкретный биомаркер в клинических образцах. При малярии гем из гемозоина представляет собой интересный биомаркер, специфичный для паразитов. LDMS является быстрой, высокопроизводительной и автоматизированной.По сравнению с микроскопическим методом, который требует наличия опытного микроскопа и до 30-60 минут для исследования каждого мазка периферической крови, LDMS может анализировать образец менее чем за 1 минуту [84]. Однако отдаленные сельские районы без электричества неприветливы для существующих высокотехнологичных масс-спектрометров. Будущие усовершенствования оборудования и методов должны сделать этот метод более практичным.

Недавно были разработаны и внедрены другие надежные диагностические тесты для диагностики малярии, и некоторые тесты коммерчески доступны, например, иммуноферментный анализ (ELISA) / иммуноферментный анализ (EIA) [50,54,85], анализ агглютинации латекса. [86] и культивирование живых малярийных паразитов [87,88].Посмертная диагностика органов путем исследования малярийных паразитов при вскрытии тканей, например также описаны печень и селезенка [89], почки [90] и мозг [91]. Однако культивирование паразитов, молекулярные методы, методы серологии и методы патобиологической диагностики, хотя иногда и используются в исследовательских лабораториях, не подходят для рутинной клинической диагностики малярии. резюмирует методы и вопросы, которые необходимо учитывать при диагностике малярии.

Таблица 1

Краткое изложение методов и вопросов для рассмотрения при диагностике малярии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Обычное микроскопическое исследование периферических толстых и тонких мазков крови остается золотым стандартом диагностики малярии.Хотя для этого метода требуется обученный микроскоп, а его чувствительность и специфичность различаются по сравнению с последними техническими достижениями, он недорог и надежен. Быстрые и удобные RDT в настоящее время реализованы во многих удаленных настройках, но они дороги и требуют улучшенного контроля качества. Серологические тесты полезны для эпидемиологических исследований, но не подходят для диагностики острой малярии. Молекулярно-биологические методы подходят для исследовательских лабораторий; они могут использоваться для выявления развития лекарственной устойчивости, полезны для идентификации видов, а также для количественного определения плотности паразитов с низкой паразитемией.Наконец, уровень эндемичности малярии, срочность диагностики, опыт врача, эффективность медицинских работников и бюджетные ресурсы — все это факторы, влияющие на выбор метода диагностики малярии.

Диагноз малярии: краткий обзор

Abstract

Малярия — основная причина смерти в тропических и субтропических странах, ежегодно убивая более 1 миллиона человек во всем мире; 90% смертельных случаев приходится на африканских детей. Несмотря на то, что в настоящее время существуют эффективные способы борьбы с малярией, число случаев малярии по-прежнему увеличивается из-за нескольких факторов.В этой чрезвычайной ситуации необходимы быстрые и эффективные методы диагностики для борьбы с малярией и борьбы с ней. Традиционные методы диагностики малярии остаются проблематичными; поэтому были разработаны и внедрены новые технологии для преодоления ограничений. В этом обзоре подробно описаны доступные в настоящее время методы диагностики малярии.

Ключевые слова: Plasmodium , малярия, диагностика, метод

ВВЕДЕНИЕ

Малярия, которую иногда называют «королем болезней», вызывается простейшими паразитами из рода Plasmodium .Наиболее серьезный и иногда смертельный тип малярии вызывается Plasmodium falciparum . Другие виды малярии человека, P. vivax , P. ovale , P. malariae и иногда P. knowlesi , могут вызывать острые, тяжелые заболевания, но показатели смертности низкие. Малярия является наиболее серьезным инфекционным заболеванием в тропических и субтропических регионах и продолжает оставаться серьезной глобальной проблемой здравоохранения, поскольку более 40% населения мира подвержено малярийному риску различной степени примерно в 100 странах.По оценкам, более 500 миллионов человек ежегодно страдают от малярийных инфекций, в результате чего умирает около 1-2 миллионов человек, из которых 90% — дети в странах Африки к югу от Сахары [1]. Число случаев малярии во всем мире, по-видимому, увеличивается из-за увеличения риска передачи в районах, где контроль над малярией снизился, увеличения распространенности устойчивых к лекарствам штаммов паразитов и, в относительно небольшом числе случаев, массового увеличения числа международных поездок и миграции [2] . Потребность в эффективных и практичных средствах диагностики для глобальной борьбы с малярией возрастает [3], поскольку эффективная диагностика снижает как осложнения, так и смертность от малярии.Дифференцировать клинический диагноз от других тропических инфекций на основании признаков и симптомов пациентов или заключений врачей может быть сложно. Поэтому срочно необходимы подтверждающие диагнозы с использованием лабораторных технологий. В этом обзоре обсуждаются доступные в настоящее время методы диагностики малярии во многих условиях и оценивается их применимость в условиях богатых и бедных ресурсов.

ДИАГНОСТИКА МАЛЯРИИ

Своевременная и точная диагностика имеет решающее значение для эффективного лечения малярии.Глобальное воздействие малярии стимулировало интерес к разработке эффективных диагностических стратегий не только для районов с ограниченными ресурсами, где малярия является серьезным бременем для общества, но также и в развитых странах, где часто не хватает опыта диагностики малярии [4,5]. Диагностика малярии включает выявление паразитов малярии или антигенов / продуктов в крови пациента. Хотя это может показаться простым, диагностическая эффективность зависит от многих факторов. Различные формы 5 видов малярии; различные стадии эритроцитарной шизогонии, эндемичность различных видов, взаимосвязь между уровнями передачи, перемещением населения, паразитемией, иммунитетом, а также признаками и симптомами; лекарственная устойчивость, проблемы рецидивирующей малярии, устойчивой жизнеспособной или нежизнеспособной паразитемии и секвестрации паразитов в более глубоких тканях, а также использование химиопрофилактики или даже предполагаемого лечения на основе клинического диагноза — все это может повлиять на идентификацию и интерпретацию малярийной паразитемии в диагностическом тесте.

Малярия — это потенциальная неотложная медицинская помощь, и к ней следует обращаться соответственно. Задержки с диагностикой и лечением являются основными причинами смерти во многих странах [6]. Диагностика может быть затруднена, если малярия больше не является эндемическим заболеванием для медицинских работников, не знакомых с этой болезнью. Клиницисты могут забыть включить малярию в число потенциальных диагнозов для некоторых пациентов и не назначить необходимые диагностические тесты. Технические специалисты могут быть незнакомы или не иметь опыта борьбы с малярией и не могут обнаружить паразитов при исследовании мазков крови под микроскопом.В некоторых районах передача малярии настолько интенсивна, что большая часть населения инфицирована, но остается бессимптомной, например, в Африке. У таких носителей выработался достаточный иммунитет, чтобы защитить их от малярийной болезни, но не от инфекции. В таких ситуациях обнаружение малярийных паразитов у больного человека не обязательно означает, что болезнь вызвана паразитами. Во многих странах, эндемичных по малярии, нехватка ресурсов является серьезным препятствием для надежной и своевременной диагностики. Медицинский персонал недостаточно обучен, не оборудован и получает недоплачиваемую работу.Они часто сталкиваются с чрезмерной нагрузкой на пациентов и должны разделить свое внимание между малярией и другими не менее серьезными инфекционными заболеваниями, такими как туберкулез или ВИЧ / СПИД.

КЛИНИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ МАЛЯРИИ

Клинический диагноз малярии является традиционным среди врачей. Этот метод наименее дорогостоящий и наиболее широко применяемый. Клинический диагноз основывается на признаках и симптомах пациента, а также на физических данных при осмотре. Самые ранние симптомы малярии очень неспецифичны и разнообразны и включают лихорадку, головную боль, слабость, миалгию, озноб, головокружение, боль в животе, диарею, тошноту, рвоту, анорексию и зуд [7].Клинический диагноз малярии по-прежнему является сложной задачей из-за неспецифического характера признаков и симптомов, которые в значительной степени совпадают с другими распространенными, а также потенциально опасными для жизни заболеваниями, например общие вирусные или бактериальные инфекции и другие лихорадочные заболевания. Совпадение симптомов малярии с другими тропическими болезнями снижает диагностическую специфичность, что может способствовать неизбирательному использованию противомалярийных средств и ухудшать качество помощи пациентам с немалярийными лихорадками в эндемичных районах [8-10].Комплексное ведение детских болезней (ИВБДВ) предоставило клинические алгоритмы для лечения и диагностики распространенных детских болезней минимально подготовленными поставщиками медицинских услуг в развивающихся странах, имеющими неподходящее оборудование для лабораторной диагностики. Широко используемый клинический алгоритм диагностики малярии по сравнению с полностью обученным педиатром, имеющим доступ к лабораторной поддержке, показал очень низкую специфичность (0–9%), но 100% чувствительность в африканских условиях [11, 12]. Этот недостаток специфичности показывает опасность отличить малярию от других причин лихорадки у детей только на основании клинических данных.Недавно другое исследование показало, что использование клинического алгоритма IMCI привело к 30% гипердиагностике малярии [13]. Таким образом, точность диагностики малярии может быть значительно повышена за счет объединения клинических и паразитарных данных [14].

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА МАЛЯРИИ

Быстрая и эффективная диагностика малярии не только облегчает страдания, но и снижает передачу инфекции в сообществе. Неспецифический характер клинических признаков и симптомов малярии может привести к чрезмерному лечению малярии или отсутствию лечения других заболеваний в эндемичных по малярии районах и неправильной диагностике в неэндемичных районах [15].В лабораторных условиях малярия диагностируется различными методами, например: обычная микроскопическая диагностика путем окрашивания тонких и толстых мазков периферической крови [16], другие методы концентрации, например метод количественного анализа лейкоцитов (QBC) [15], быстрые диагностические тесты, например, OptiMAL [17,18], ICT [19], Para-HIT-f [10], ParaScreen [20], SD Bioline [21], Paracheck [ 22], а также методы молекулярной диагностики, такие как полимеразная цепная реакция (ПЦР) [23,24]. Также были описаны некоторые преимущества и недостатки этих методов, связанные с чувствительностью, специфичностью, точностью, прецизионностью, затраченным временем, рентабельностью, трудоемкостью, потребностью в квалифицированных микроскопистов и проблемой неопытных технических специалистов.

Микроскопическая диагностика с использованием окрашенных тонких и толстых мазков периферической крови (PBS)

Малярия обычно диагностируется путем микроскопического исследования окрашенных мазков крови с использованием красителей Гимзы, Райта или Филда [25]. Этот метод очень мало изменился с момента открытия Лаверраном малярийного паразита и усовершенствования техники окрашивания Романовским в конце 1800-х годов. Более чем столетие спустя обнаружение под микроскопом и идентификация видов Plasmodium в окрашенных по Гимзе толстых мазках крови (для скрининга присутствующих малярийных паразитов) и тонких мазках крови (для подтверждения вида) остается золотым стандартом для лабораторной диагностики [26 ].Малярия диагностируется микроскопически путем окрашивания толстых и тонких пленок крови на предметном стекле для визуализации малярийных паразитов. Вкратце, палец пациента очищают 70% этиловым спиртом, дают ему высохнуть, затем протирают край кончика пальца острым стерильным ланцетом и две капли крови помещают на предметное стекло. Для получения густого мазка крови пятно крови перемешивают круговыми движениями углом предметного стекла, стараясь не сделать препарат слишком густым, и дают высохнуть без фиксатора.После высыхания пятно окрашивают разбавленным раствором Гимза (1:20, об. / Об.) В течение 20 мин и промывают, помещая пленку в забуференную воду на 3 мин. Предметное стекло сушат на воздухе в вертикальном положении и исследуют с помощью светового микроскопа. Поскольку они не закреплены, красные клетки лизируются при нанесении красителя на водной основе. Тонкую пленку крови готовят, сразу помещая гладкий край слайдера в каплю крови, регулируя угол между слайдом и распределителем до 45 °, а затем размазывая кровь быстрым и равномерным движением по поверхности.Затем пленке дают высохнуть на воздухе и фиксируют абсолютным метанолом. После сушки образец окрашивают разбавленным раствором Гимзы (1:20, об. / Об.) В течение 20 мин и промывают, на короткое время погружая предметное стекло в банку с забуференной водой и вынимая из нее (чрезмерная стирка обесцвечивает пленку). Затем слайду дают высохнуть на воздухе в вертикальном положении и исследуют под световым микроскопом [27]. Широкое распространение этого метода в лабораториях по всему миру можно объяснить его простотой, низкой стоимостью, его способностью определять присутствие паразитов, инфицирующие виды и оценивать плотность паразитов — все параметры, полезные для борьбы с малярией.Недавно проведенное исследование показало, что обычная микроскопическая диагностика малярии в учреждениях первичной медико-санитарной помощи в Танзании может сократить выписывание противомалярийных препаратов, а также, по-видимому, улучшить надлежащее лечение немалярийной лихорадки [16]. Однако процессы окрашивания и интерпретации трудоемки, занимают много времени и требуют значительного опыта и подготовленных медицинских работников, особенно для точного определения видов при низкой паразитемии или при смешанных малярийных инфекциях.Самый важный недостаток микроскопического исследования — его относительно низкая чувствительность, особенно при низком уровне паразитов. Хотя опытный микроскопист может обнаружить до 5 паразитов / мкл, средний микроскопист обнаруживает только 50–100 паразитов / мкл [28]. Это, вероятно, привело к недооценке показателей заражения малярией, особенно случаев с низким уровнем паразитемии и бессимптомной малярией. Способность поддерживать необходимый уровень знаний в области диагностики малярии является проблематичной, особенно в удаленных медицинских центрах в странах, где болезнь встречается редко [29].Микроскопия трудоемка и не подходит для использования с высокой пропускной способностью, а определение видов при низкой плотности паразитов по-прежнему является сложной задачей. Поэтому в отдаленных сельских районах, например В периферийных медицинских клиниках нет электричества и медицинских учреждений, микроскопия часто недоступна [30].

Метод QBC

Метод QBC был разработан для улучшения микроскопического обнаружения паразитов и упрощения диагностики малярии [31]. Этот метод включает окрашивание дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) паразитов в пробирках с микрогематокритом флуоресцентными красителями, например.грамм. акридиновый оранжевый и его последующее обнаружение с помощью эпифлуоресцентной микроскопии. Вкратце, кровь из пальца собирают в гематокритную пробирку, содержащую акридиновый апельсин и антикоагулянт. Пробирку центрифугируют при 12000 g в течение 5 мин и сразу исследуют с помощью эпифлуоресцентного микроскопа [27]. Ядра паразита светятся ярко-зеленым цветом, а цитоплазма желто-оранжевой. Метод QBC оказался быстрым и чувствительным тестом для диагностики малярии во многих лабораториях [15,32-35].Хотя он увеличивает чувствительность к P. falciparum , он снижает чувствительность к другим видам и снижает специфичность из-за окрашивания ДНК лейкоцитов [36]. Недавно было показано, что акридиновый оранжевый является предпочтительным методом диагностики (с помощью световой микроскопии и иммунохроматографических тестов) в контексте эпидемиологических исследований бессимптомных популяций в эндемичных районах, вероятно, из-за повышенной чувствительности при низкой паразитемии [37]. В настоящее время коммерчески доступны портативные флуоресцентные микроскопы, использующие технологию светоизлучающих диодов (LED), и предварительно подготовленные предметные стекла с флуоресцентным реагентом для мечения паразитов [38].Хотя метод QBC прост, надежен и удобен для пользователя, он требует специального оборудования, более дорог, чем обычная световая микроскопия, и не позволяет определять виды и количество паразитов.

Экспресс-диагностические тесты (RDT)

Поскольку Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) признала острую потребность в новых, простых, быстрых, точных и экономичных диагностических тестах для определения присутствия малярийных паразитов, чтобы преодолеть недостатки световая микроскопия, были разработаны многочисленные новые методы диагностики малярии [39].Это, в свою очередь, привело к увеличению использования ДЭТ при малярии, которые выполняются быстро и легко и не требуют электричества или специального оборудования [40]. В настоящее время доступно 86 БДТ от малярии от 28 различных производителей [41]. В отличие от традиционной микроскопической диагностики путем окрашивания тонких и толстых мазков периферической крови и метода QBC, все RDT основаны на одном принципе и обнаруживают антиген малярии в крови, протекающей вдоль мембраны, содержащей специфические противомалярийные антитела; им не требуется лабораторное оборудование.Большинство продуктов нацелены на белок, специфичный для P. falciparum , например богатый гистидином протеин II (HRP-II) или лактатдегидрогеназа (LDH). Некоторые тесты обнаруживают специфических и панспецифических антигенов P. falciparum (альдолаза или пан-малярийная pLDH) и позволяют отличить не P. falciparum инфекции от смешанных малярийных инфекций. Хотя большинство продуктов RDT подходят для диагностики малярии P. falciparum , некоторые также заявляют, что они могут эффективно и быстро диагностировать P.vivax малярия [21,42,43]. Недавно был разработан новый метод ДРТ для обнаружения P. knowlesi [44]. ДЭТ дают возможность расширить преимущества паразитарной диагностики малярии за пределы возможностей световой микроскопии с потенциально значительными преимуществами в лечении лихорадочных заболеваний в отдаленных эндемичных по малярии районах. Показатели RDT для диагностики малярии были отличными [14,19,20,22,45-47]; однако некоторые отчеты из отдаленных эндемичных по малярии районов показали большие различия в чувствительности [36,40,48].Мюррей и соавторы недавно обсудили надежность RDT в «обновленной информации о быстром диагностическом тестировании на малярию» в своей превосходной статье [49]. В целом, RDT представляют собой очень ценный инструмент быстрой диагностики малярии для медицинских работников; однако в настоящее время его необходимо использовать вместе с другими методами для подтверждения результатов, характеристики инфекции и мониторинга лечения. В эндемичных по малярии районах, где нет оборудования для световой микроскопии, которое могло бы получить пользу от ДЭТ, требуются улучшения для простоты использования, чувствительности к не-falciparum инфекции, стабильности и доступности.В настоящее время ВОЗ разрабатывает руководящие принципы для обеспечения контроля качества от партии к партии, что необходимо для доверия общества к этому новому диагностическому инструменту [41]. Поскольку простота и надежность ДЭТ были улучшены для использования в сельских эндемичных районах, диагностика ДЭТ в неэндемичных регионах становится более возможной, что может сократить время до лечения в случае завезенной малярии [30].

Серологические тесты

Диагностика малярии с использованием серологических методов обычно основана на обнаружении антител к паразитам малярии на стадии бесполой крови.Иммунофлуоресцентный тест на антитела (ИФА) был надежным серологическим тестом на малярию в последние десятилетия [50]. Хотя ИФА требует много времени и является субъективным, он очень чувствителен и специфичен [51]. Литература четко иллюстрирует надежность ИФА, поэтому его обычно считали золотым стандартом для серологического тестирования на малярию [47]. IFA полезен в эпидемиологических исследованиях, для скрининга потенциальных доноров крови и иногда для получения доказательств недавнего инфицирования у неиммунных людей.До недавнего времени это был валидированный метод обнаружения антител, специфичных для Plasmodium , в различных отделениях банка крови, который был полезен для скрининга потенциальных доноров крови, чтобы избежать малярии, передаваемой при переливании крови [52,53]. Во Франции, например, IFA используется как часть стратегии целевого скрининга в сочетании с анкетой для доноров [54]. Принцип IFA заключается в том, что после заражения любыми видами Plasmodium специфические антитела вырабатываются в течение 2 недель после первоначального заражения и сохраняются в течение 3-6 месяцев после уничтожения паразитов.IFA использует специфический антиген или неочищенный антиген, приготовленный на предметном стекле, покрытый оболочкой и хранящийся при -30 ℃ до использования, и определяет количество антител IgG и IgM в образцах сыворотки пациентов. Титры> 1:20 обычно считаются положительными, а <1:20 - неподтвержденными. Титры> 1: 200 можно классифицировать как недавние инфекции [27]. В заключение, IFA прост и чувствителен, но требует много времени. Его нельзя автоматизировать, что ограничивает количество сывороток, которые можно исследовать ежедневно. Это также требует флуоресцентной микроскопии и обученных технических специалистов; на показания может влиять уровень подготовки технического специалиста, особенно для образцов сыворотки с низким титром антител.Более того, отсутствие стандартизации реагентов IFA делает его непрактичным для рутинного использования в центрах переливания крови и для согласования межлабораторных результатов.

МЕТОДЫ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Как упоминалось выше, традиционные методы диагностики малярии остаются проблематичными. В различных лабораториях срочно необходимы новые методы лабораторной диагностики, которые демонстрируют высокую чувствительность и высокую специфичность без субъективных вариаций. Последние разработки в области молекулярно-биологических технологий, e.грамм. Методы ПЦР, петлевой изотермической амплификации (LAMP), микроматрицы, масс-спектрометрии (MS) и проточной цитометрии (FCM) позволили всесторонне охарактеризовать малярийных паразитов и порождают новые стратегии диагностики малярии.

Метод ПЦР

Методы, основанные на ПЦР, являются недавней разработкой в ​​молекулярной диагностике малярии и оказались одним из наиболее специфичных и чувствительных диагностических методов, особенно для случаев малярии с низкой паразитемией или смешанной инфекцией [55].Метод ПЦР продолжает широко использоваться для подтверждения малярийной инфекции, последующего терапевтического ответа и выявления лекарственной устойчивости [27]. Было обнаружено, что он более чувствителен, чем QBC и некоторые RDT [56,57]. Что касается золотого стандарта метода диагностики малярии, то ПЦР показала более высокую чувствительность и специфичность, чем обычное микроскопическое исследование окрашенных мазков периферической крови, и теперь кажется лучшим методом диагностики малярии [55]. ПЦР может обнаружить всего 1-5 паразитов / мкл крови (≤ 0.0001% инфицированных эритроцитов) по сравнению с примерно 50-100 паразитов / мкл крови при микроскопии или ДЭТ. Более того, ПЦР может помочь обнаружить лекарственно-устойчивых паразитов, смешанные инфекции и может быть автоматизирована для обработки большого количества образцов [58,59]. Некоторые модифицированные методы ПЦР оказались надежными, например, вложенная ПЦР, ПЦР в реальном времени и ПЦР с обратной транскрипцией, и оказались полезными методами второй линии, когда 96 Korean J Parasitol. Vol. 47, No. 2: 93-102, июнь 2009 г. Результаты традиционных методов диагностики неясны для пациентов с признаками и симптомами малярии; они также позволяют точно определять виды [58,60-62].В последнее время широкое распространение получил метод ПЦР для выявления инфекций P. knowlesi [63–65]. Хотя ПЦР, по-видимому, преодолела две основные проблемы, связанные с чувствительностью и специфичностью диагностики малярии, полезность ПЦР ограничена сложными методологиями, высокой стоимостью и необходимостью в специально обученных технических специалистах. Таким образом, ПЦР обычно не применяется в развивающихся странах из-за сложности тестирования и отсутствия ресурсов для адекватного и регулярного выполнения этих тестов [66].Контроль качества и обслуживание оборудования также важны для метода ПЦР, поэтому он может не подходить для диагностики малярии в отдаленных сельских районах или даже в обычных клинических диагностических условиях [67].

Метод LAMP

Метод LAMP заявлен как простой и недорогой молекулярный диагностический тест на малярию, который выявляет консервативный ген 18S рибосомной РНК P. falciparum [68]. Другие исследования показали высокую чувствительность и специфичность не только для P.falciparum , но также P. vivax , P. ovale и P. malariae [69,70]. Эти наблюдения показывают, что LAMP более надежен и полезен для рутинного скрининга малярийных паразитов в регионах, где трансмиссивные болезни, такие как малярия, являются эндемичными. LAMP оказался простым, чувствительным, быстрым и более дешевым, чем ПЦР. Однако реагенты требуют холодного хранения, и необходимы дальнейшие клинические испытания для подтверждения осуществимости и клинической применимости LAMP [30].

Microarrays

Публикация генома Plasmodium предлагает множество возможностей диагностики малярии [71,72]. Микроматрицы могут сыграть важную роль в будущей диагностике инфекционных заболеваний [73]. Принцип метода микроматриц аналогичен традиционной гибридизации по Саузерну. Гибридизация меченых мишеней, разделенных от нуклеиновых кислот в тестовом образце до зондов на массиве, позволяет зондировать несколько генных мишеней в одном эксперименте. В идеале этот метод должен быть уменьшен в размерах и автоматизирован для диагностики в местах оказания медицинской помощи [23].Пан-микробный олигонуклеотидный микрочип был разработан для диагностики инфекционных заболеваний и точно идентифицировал P. falciparum в клинических образцах [74]. Однако этот диагностический метод все еще находится на ранней стадии разработки [30].

Анализ FCM

Сообщается, что проточная цитометрия использовалась для диагностики малярии [75–77]. Вкратце, принцип этого метода основан на обнаружении гемозоина, который вырабатывается, когда паразиты, вызывающие внутриэритроцитарную малярию, переваривают гемоглобин хозяина и кристаллизуют высвободившийся токсичный гем в гемозоин в кислой пищевой вакуоли.Гемозоин в фагоцитах может быть обнаружен деполяризацией лазерного света, когда клетки проходят через канал проточного цитометра. Этот метод может обеспечить чувствительность 49-98% и специфичность 82-97% для диагностики малярии [78,79] и потенциально полезен для диагностики клинически неподозреваемой малярии. Недостатками являются трудоемкость, необходимость в квалифицированных специалистах, дорогостоящем диагностическом оборудовании и возможность ложноположительных результатов при других бактериальных или вирусных инфекциях. Следовательно, этот метод следует рассматривать как инструмент скрининга на малярию.

Автоматические счетчики клеток крови (ACC)

ACC — это практический инструмент для диагностики малярии [80], с тремя описанными подходами. Первый использовал прибор Cell-Dyn® 3500 для обнаружения малярийного пигмента (гемозоина) в моноцитах и ​​показал чувствительность 95% и специфичность 88% по сравнению с мазком крови золотого стандарта [81]. Во втором методе также использовался Cell-Dyn® 3500 и анализировался деполяризованный лазерный свет (DLL) для выявления инфекции малярии с общей чувствительностью 72% и специфичностью 96% [82].В третьем методе использовался АСС Beckman Coulter для обнаружения увеличения количества активированных моноцитов по объему, проводимости и разбросу (VCS) с 98% чувствительностью и 94% специфичностью [83]. Хотя это и многообещающе, ни один из трех методов обычно не доступен в клинических лабораториях; необходимы дальнейшие исследования для улучшения и проверки прибора и его программного обеспечения. Точность, которую обещают эти методы для выявления малярийных паразитов, означает, что АКК может стать ценным и рутинным лабораторным методом диагностики малярии.

Масс-спектрофотометрия

Недавно было сообщено о новом методе обнаружения малярийных паразитов in vitro с чувствительностью 10 паразитов / мкл крови. Он включает протокол очистки образцов цельной крови с последующей масс-спектрометрией с прямой ультрафиолетовой лазерной десорбцией (LDMS). Для диагностики малярии принцип LDMS состоит в том, чтобы идентифицировать конкретный биомаркер в клинических образцах. При малярии гем из гемозоина представляет собой интересный биомаркер, специфичный для паразитов. LDMS является быстрой, высокопроизводительной и автоматизированной.По сравнению с микроскопическим методом, который требует наличия опытного микроскопа и до 30-60 минут для исследования каждого мазка периферической крови, LDMS может анализировать образец менее чем за 1 минуту [84]. Однако отдаленные сельские районы без электричества неприветливы для существующих высокотехнологичных масс-спектрометров. Будущие усовершенствования оборудования и методов должны сделать этот метод более практичным.

Недавно были разработаны и внедрены другие надежные диагностические тесты для диагностики малярии, и некоторые тесты коммерчески доступны, например, иммуноферментный анализ (ELISA) / иммуноферментный анализ (EIA) [50,54,85], анализ агглютинации латекса. [86] и культивирование живых малярийных паразитов [87,88].Посмертная диагностика органов путем исследования малярийных паразитов при вскрытии тканей, например также описаны печень и селезенка [89], почки [90] и мозг [91]. Однако культивирование паразитов, молекулярные методы, методы серологии и методы патобиологической диагностики, хотя иногда и используются в исследовательских лабораториях, не подходят для рутинной клинической диагностики малярии. резюмирует методы и вопросы, которые необходимо учитывать при диагностике малярии.

Таблица 1

Краткое изложение методов и вопросов для рассмотрения при диагностике малярии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Обычное микроскопическое исследование периферических толстых и тонких мазков крови остается золотым стандартом диагностики малярии.Хотя для этого метода требуется обученный микроскоп, а его чувствительность и специфичность различаются по сравнению с последними техническими достижениями, он недорог и надежен. Быстрые и удобные RDT в настоящее время реализованы во многих удаленных настройках, но они дороги и требуют улучшенного контроля качества. Серологические тесты полезны для эпидемиологических исследований, но не подходят для диагностики острой малярии. Молекулярно-биологические методы подходят для исследовательских лабораторий; они могут использоваться для выявления развития лекарственной устойчивости, полезны для идентификации видов, а также для количественного определения плотности паразитов с низкой паразитемией.Наконец, уровень эндемичности малярии, срочность диагностики, опыт врача, эффективность медицинских работников и бюджетные ресурсы — все это факторы, влияющие на выбор метода диагностики малярии.

Как врачи проверяют наличие малярии

Когда комар, заболевший малярией, кусает вас, паразит попадает в вашу кровь и разрушает эритроциты, переносящие кислород. Обычно вы чувствуете себя плохо в течение нескольких дней или недель. Но некоторые паразиты без проблем могут жить в вашем организме год.

Первые симптомы малярии часто напоминают грипп или вирус. Из-за этого вам может не сразу получить помощь. Но промедление с лечением может привести к летальному исходу. Ранние тесты дают вам наилучшие шансы на выздоровление.

Типы анализов

Густые и жидкие мазки крови. Это наиболее распространенные и точные тесты на малярию. Лаборант, врач или медсестра возьмут часть вашей крови и отправят ее в лабораторию для окрашивания, чтобы четко обозначить паразитов. Техник раскладывает его на предметном стекле и рассматривает в микроскоп.Тонкий мазок крови, также называемый мазком крови, представляет собой одну каплю крови, покрывающую большую часть предметного стекла. Густым мазком кровь капает на небольшой участок. Обычный тест выполняет по два из каждого.

Количество малярийных паразитов в вашей крови может меняться каждый день. Таким образом, ваш тест может сказать, что у вас нет малярии, даже если вы болеете. По этой причине для достижения наилучших результатов вам может потребоваться сдать кровь несколько раз в течение 2-3 дней.

Экспресс-диагностический тест. Также называется RDT или тестом на антиген, это быстрый вариант, когда забор крови и мазок недоступны.Кровь, взятая из укола на пальце, наносится на тест-полоску, которая меняет цвет, чтобы показать, есть ли у вас малярия.

Этот тест обычно не может определить, какой из четырех распространенных видов малярийных паразитов вызвал вашу инфекцию. Он также не может сказать, является ли инфекция незначительной или серьезной. Ваш врач должен контролировать все результаты с помощью мазков крови.

Молекулярный тест. Также известный как тест полимеразной цепной реакции, он может определить тип паразита, что поможет вашему врачу решить, какие лекарства прописать.Этот тест — хороший выбор, если в вашей крови мало паразитов или если результаты мазка крови нечеткие.

Тест на антитела. Врачи используют это, чтобы узнать, болели ли вы в прошлом малярией. Он ищет антитела, которые обнаруживаются в крови после инфекции.

Тест на лекарственную устойчивость. Некоторые паразиты малярии устойчивы к лекарствам. Но врачи могут проверить вашу кровь, чтобы узнать, подействуют ли определенные лекарства.

Анализ крови. Помимо других анализов, у вас также могут быть взяты кровь для анализа крови и химического анализа.Это может сказать вашему врачу, насколько серьезна ваша инфекция и вызывает ли она другие проблемы, например анемию или почечную недостаточность.

Лабораторная диагностика

Лабораторная диагностика малярии требует идентификации паразита или его антигенов / продуктов в крови пациента.

Требования к диагностическому тесту — специфичность, чувствительность, простота выполнения и разумная стоимость.

Доступные в настоящее время методы можно разделить на три категории:

  1. Микроскопия
  2. Иммунологические методы
  3. Молекулярные методы

1.Микроскопия


a) Исследование толстого и жидкого мазка крови

Исследование толстого и жидкого мазка крови является золотым стандартом диагностики малярии. Процедура состоит из следующих этапов: сбор периферической крови, окрашивание мазка красителем Гимза и исследование эритроцитов на малярийных паразитов под микроскопом.

Густой мазок . Не фиксируется в метаноле; это позволяет гемолизовать эритроциты, а лейкоциты и любые присутствующие малярийные паразиты будут единственными обнаруживаемыми элементами.Однако гемолиз может привести к искажению морфологии плазмодия, что затрудняет дифференциацию видов плазмодиев. Поэтому толстые мазки в основном используются для выявления инфекции и оценки паразитемии.

Мазок тонкий . Фиксируется в метаноле. Тонкие мазки позволяют исследователю идентифицировать виды малярии, количественно определять паразитемию и распознавать такие формы паразитов, как шизонты и гаметоциты.

На рис. 1 показано, как выглядят тонкие и толстые мазки, а на рис. 2 показано, как микроскопист распознает паразитов в красных кровяных тельцах (эритроцитах).

Рис. 1. Густой и жидкий мазок крови
(Источник: CDC)
Рис. 2. Инфицированные эритроциты под микроскопом
(Источник: CDC)
Достоинства:
  • Недорогой метод
  • Позволяет исследователю определять количество паразитов и различать виды малярии.

Недостатки:

  • Точность диагностики зависит от качества мазка крови и оборудования, способностей микроскописта, плотности паразитов и времени, затрачиваемого на считывание мазка.Все это может привести к задержкам в лечении.
  • Не подходит для крупномасштабных эпидемиологических исследований.
  • Ложноположительный. Неправильный состав мазка крови может привести к появлению артефактов, которые могут быть ошибочно расценены как паразиты малярии. Иногда тромбоциты также затрудняют диагностику.
  • Ложноотрицательный. Это связано с низкой плотностью паразитов или небольшим количеством полей, исследуемых микроскопистом.

b) Количественный тест лейкоцитов (QBC)
Этот метод включает центрифугирование и сжатие слоя красных кровяных телец, окрашенных акридиновым оранжевым, а затем исследуемых под источником ультрафиолетового света.Вся процедура проходит в стеклянной гематокритной пробирке, предварительно покрытой изнутри акридиновым оранжевым красителем и оксалатом калия; залито 55-65 мкл крови. Пробирку центрифугируют, и компоненты разделяются в соответствии с их плотностями, образуя полосы (рис. 3).

Затем флуоресцирующие паразиты наблюдаются с помощью ультрафиолетового микроскопа на границе раздела эритроцитов / белых кровяных телец, как показано ниже на Рисунке 4.

Тест QBC проще и быстрее, чем классическая микроскопия мазка периферической крови, но необходимое оборудование дорогое. а идентификация видов и точный учет невозможны.

Рис. 4. Флуоресцентные паразиты под УФ-микроскопом
(Источник: en.impact-malaria.com)

Рисунок 3. QBC, полосы, образовавшиеся после центрифугирования

(Источник: qbcdiagnostics.com)

2. Иммунологические методы

Методы на основе антител


a) Тест непрямых флуоресцентных антител (IFAT)

Антиген состоит из инфицированной крови, связанной с предметным стеклом микроскопа с 12 точками.На каждое пятно помещают каплю разведенных промытых инфицированных эритроцитов и дают им высохнуть. Затем его инкубируют с серийными разведениями исследуемой сыворотки, а затем с раствором античеловеческого иммуноглобулина, меченного флуоресцеинизотиоцианином, который содержит синий Эванса в качестве контрастного красителя. После высыхания слайдов их исследуют с помощью флуоресцентной микроскопии.
Антитело в исследуемой сыворотке реагирует с антигеном паразитов, и антииммуноглобулиновая реакция с антителом демонстрируется флуоресценцией паразитов, как показано на рисунке 5.

Недостатками метода являются необходимость наличия флуоресцентного микроскопа и высоких технических навыков.


Рис. 5. Флуоресцентная микроскопия

(Источник: en.impact-malaria.com)


б) Иммуноферментный анализ (ELISA)
В этом методе используется растворимый малярийный антиген, нанесенный на стенки микротитровального планшета (рис. 6).

Если тест положительный, антитело связывает антиген, что приводит к видимому изменению цвета.

При отрицательном результате теста и отсутствии антител цвет субстрата не меняется.

Рисунок 6. Планшет для ELISA

.

(Источник: en.impact-malaria.com)


Антигенные методы


Быстрый диагностический тест (RDT)

RDT — это устройство, которое может обнаруживать антиген малярии в небольшом количестве крови (5 мкл) с помощью иммунохроматографического анализа (изменение цвета абсорбирующей полоски нитроцеллюлозы) с моноклональными антителами, направленными против антигена паразита.В зависимости от антигена-мишени существующие быстрые тесты могут включать следующие комбинации: ·
  • HRP-2 (Histidine Rich Protein-2) — это белок, продуцируемый бесполыми стадиями и гаметоцитами P. falciparum , экспрессируемый на мембрана эритроцитов (чувствительность: обнаруживает паразитоз> 40 паразитов / мкл). Часто он сохраняется в крови пациента в течение нескольких недель после успешного лечения.
  • Альдолаза плазмодия — это фермент паразитарного гликолитического пути, экспрессируемый всеми видами малярии (панмалярийный антиген — PMA).
  • Лактатдегидрогоназа (ЛДГ) — гликолитический фермент, вырабатываемый паразитами на бесполой и половой стадиях и высвобождаемый инфицированными эритроцитами. (чувствительность: обнаруживает паразитоз> 100 паразитов / мкл)
Тест-полоски PfHRP2 имеют 2 линии, одна для контроля, а другая для антигена PfHRP2.

Тест-полоски PfHRP2 / PMA и тест-полоски pLDH (паразитарный LDH) имеют 3 линии, 1 для контроля и 2 другие для P.falciparum и не- falciparum .

Изменение цвета контрольной линии необходимо для подтверждения правильности теста. При изменении цвета только контрольной линии, а не других линий, тест считается отрицательным.

В тесте PfHRP2 изменение цвета на обеих линиях интерпретируется как положительный тест на малярию P. falciparum (рис. 7).

При использовании тестов PfHRP2 / PMA и pLDH изменение цвета на контрольной линии и линии, специфичной для посуды, указывает на инфекцию, отличную от fa1ciparum , а изменение цвета во всех 3 строках указывает на присутствие P.falciparum (моноинфекция или смешанная инфекция с другими видами), как показано на рисунке 7. Следовательно, смешанные инфекции P. falciparum видами, отличными от falciparum , нельзя отличить от чистых инфекций P. falciparum .

Рис. 7. Двух- и трехстрочные ДЭТ, положительные на P. falciparum или смешанную инфекцию

Преимущества:

  • Не требует электричества, поэтому его можно проводить в поле, удаленном от положения микроскопа
  • Простота выполнения и интерпретации с результатом, полученным за 15-30 минут
  • Возможность расследования вспышек и скрининга лиц, вернувшихся с лихорадкой из эндемичных районов
  • Тесты
  • HRP-2 имеют чувствительность> 90% для P.falciparum и тесты ЛДГ> 95%

Недостатки:

  • Низкая чувствительность при выявлении бессимптомных пациентов, особенно при слабых паразитемиях
  • Перекрестные реакции на аутоантитела (например, ревматоидный фактор в случае теста HRP2)
  • Ложные положительные результаты (гаметоцитемия, стойкая бесполая паразитемия ниже предела обнаружения под микроскопом)
  • Ложноотрицательный (генетическая делеция или мутация антигена hrp-2)

В заключение, после теста RDT всегда следует проводить микроскопическое подтверждение результата; отрицательный для исключения низкой паразитемии и положительный для утверждения видов, обнаруженных в RDT, и для количественной оценки доли инфицированных эритроцитов.

3. Молекулярные методы


Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

С помощью ПЦР-амплификации можно обнаружить все 4 вида малярийных паразитов с, как сообщается, в 10 раз большей чувствительностью, чем при микроскопии. Новые технологии, такие как лизированные сапонином эритроциты NAT (метод амплификации нуклеиновых кислот) и LAMP (петлевая изотермическая амплификация), могут обеспечить более дешевую диагностику с большей чувствительностью и специфичностью для 5 видов плазмодиев, принятых ВОЗ; хотя они могут оказаться полезными при обнаружении инфекций плазмодия у здоровых взрослых с «субмикроскопическими» уровнями паразитемии, до сих пор нет теста ПЦР, одобренного Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов для диагностики малярии или скрининга доноров крови, и должны последовать дальнейшие разработки, чтобы эти методы будут широко применяться в качестве диагностических тестов.

Преимущества:
  • Высокая чувствительность и специфичность
  • Обнаружение смешанных видов инфекций и штаммов, устойчивых к лекарствам
  • Автоматика, высокоскоростной оборот
  • Количественное определение способности к дифференциации паразитов и видов
Недостатки:
  • Слишком чувствительно для клинического использования
  • Непригоден для полевых условий
  • Дорого
  • Технически сложный

Рассмотрение подхода, мазки крови, альтернативы тестированию мазка крови

  • Пиола П., Набасумба С., Турьякира Э. и др.Эффективность и безопасность артеметер-люмефантрина по сравнению с хинином у беременных с неосложненной малярией, вызванной Plasmodium falciparum: открытое рандомизированное исследование не меньшей эффективности. Ланцет Infect Dis . 2010 ноябрь 10 (11): 762-9. [Медлайн].

  • МакГриди Р., Ли С.Дж., Виладфайнджерн Дж. И др. Побочные эффекты малярии falciparum и vivax и безопасность противомалярийного лечения на ранних сроках беременности: популяционное исследование. Ланцет Infect Dis .2012 май. 12 (5): 388-96. [Медлайн].

  • Cox-Singh J, Davis TM, Lee KS, et al. Малярия Plasmodium knowlesi у людей широко распространена и потенциально опасна для жизни. Clin Infect Dis . 2008 15 января. 46 (2): 165-71. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Marchand RP, Culleton R, Maeno Y, Quang NT, Nakazawa S. Коинфекции Plasmodium knowlesi, P. falciparum и P. vivax среди людей и комаров Anopheles dirus, Южный Вьетнам. Emerg Infect Dis . 2011 июл.17 (7): 1232-9. [Медлайн].

  • Уильям Т., Менон Дж., Раджахрам Дж. И др. Тяжелая форма малярии Plasmodium knowlesi в больнице третичного уровня, Сабах, Малайзия. Emerg Infect Dis . 2011 июл.17 (7): 1248-55. [Медлайн].

  • Эпиднадзор за малярией — США, 2010 г. Центры по контролю и профилактике заболеваний. Доступно по адресу http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/ss6102a1.htm?s_cid=ss6102a1_e. Доступ: 1 марта 2012 г.

  • Центры по контролю и профилактике заболеваний. Малярия. Доступно по адресу http://www.cdc.gov/malaria. Доступ: 15 сентября 2011 г.

  • Тейлор С.М., Паробек С.М., Фэрхерст, РМ. Гемоглобинопатии и клиническая эпидемиология малярии: систематический обзор и метаанализ. Ланцет Infect Dis . 2012 июн. 12 (6): 457-68. [Медлайн].

  • Trape JF, Tall A, Diagne N и др. Заболеваемость малярией и устойчивость к пиретроидам после введения обработанных инсектицидами надкроватных сеток и комбинированной терапии на основе артемизинина: продольное исследование. Ланцет Infect Dis . 2011 Декабрь 11 (12): 925-32. [Медлайн].

  • [Рекомендации] Бейли Дж. У., Уильямс Дж., Бэйн Б. Дж., Паркер-Уильямс Дж., Чиодини П. Целевая группа по общей гематологии. Руководство по лабораторной диагностике малярии. Лондон (Великобритания): Британский комитет стандартов в гематологии. 2007; 19. [Полный текст].

  • Бейли Дж. У., Уильямс Дж., Бэйн Б. Дж. И др. Руководство: лабораторная диагностика малярии. Целевая группа по общей гематологии Британского комитета по стандартам в гематологии. Br J Haematol . 2013 декабрь 163 (5): 573-80. [Медлайн].

  • Экспресс-тесты для диагностики малярии — Гаити, 2010. MMWR Morb Mortal Wkly Rep . 29 октября 2010 г. 59 (42): 1372-3. [Медлайн].

  • Wongsrichanalai C, Barcus MJ, Muth S, Sutamihardja A, Wernsdorfer WH. Обзор средств диагностики малярии: микроскопия и экспресс-тест (RDT). Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2007 декабрь 77 (6 доп.): 119-27. [Медлайн].

  • Центры по контролю и профилактике заболеваний.Примечание для читателей: экспресс-тест на малярию. Центры по контролю и профилактике заболеваний. Доступно по адресу http://www.cdc.gov/mmwr/preview/mmwrhtml/mm5627a4.htm. Доступ: 30 сентября 2011 г.

  • де Оливейра А.М., Скарбински Дж., Оума П.О. и др. Проведение экспресс-тестов на малярию в рамках рутинного ведения больных малярией в Кении. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2009 Март 80 (3): 470-4. [Медлайн].

  • Полли С.Д., Гонсалес И.Дж., Мохамед Д. и др.Клиническая оценка набора для петлевой амплификации для диагностики завозной малярии. J Заразить Dis . 2013 Август 208 (4): 637-44. [Медлайн]. [Полный текст].

  • d’Acremont V, Malila A, Swai N, et al. Отказ от приема противомалярийных препаратов у детей с лихорадкой, у которых есть отрицательный результат экспресс-диагностики. Clin Infect Dis . 2010 сен 1. 51 (5): 506-11. [Медлайн].

  • Mens P, Spieker N, Omar S, Heijnen M, Schallig H, Kager PA.Является ли молекулярная биология лучшей альтернативой микроскопии для диагностики малярии? Сравнение микроскопии, обнаружения антигенов и молекулярных тестов в сельской Кении и городской Танзании. Trop Med Int Health . 2007 12 февраля (2): 238-44. [Медлайн].

  • [Рекомендации] Центры по контролю и профилактике заболеваний. Обновленные рекомендации CDC по использованию артеметера-люмефантрина для лечения неосложненной малярии у беременных женщин в США. Доступно по адресу https: // www.cdc.gov/mmwr/volumes/67/wr/mm6714a4.htm?s_cid=mm6714a4_e#contribAff. Апрель 2018 г .; Дата обращения: 13 апреля 2018 г.

  • Dondorp AM, Fanello CI, Hendriksen IC, et al. Сравнение артесуната и хинина в лечении тяжелой формы малярии, вызванной falciparum, у африканских детей (AQUAMAT): открытое рандомизированное исследование. Ланцет . 2010 13 ноября. 376 (9753): 1647-57. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Sinclair D, Donegan S, Isba R, Lalloo DG. Артесунат против хинина для лечения тяжелой формы малярии. Кокрановская база данных Syst Rev . 2012, 13 июня: CD005967. [Медлайн].

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США одобрило таблетки Коартема для лечения малярии. FDA. Доступно по адресу http://www.fda.gov/NewsEvents/Newsroom/PressAnnouncements/ucm149559.htm. Доступ: 8 апреля 2009 г.

  • Тойшер Ф., Гаттон М.Л., Чен Н., Петерс Дж., Кайл Д.Э., Ченг К. Индуцированный артемизинином покой у плазмодия falciparum: продолжительность, скорость восстановления и последствия неэффективности лечения. J Заразить Dis . 2010, 1. 202 (9): 1362-8. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Tozan Y, Klein EY, Darley S, Panicker R, Laxminarayan R, Breman JG. Предпочтительный ректальный артесунат для лечения тяжелой детской малярии: анализ экономической эффективности. Ланцет . 4 декабря 2010 г. 376 (9756): 1910-5. [Медлайн].

  • Амаратунга С., Сренг С., Суон С. и др. Устойчивый к артемизинину Plasmodium falciparum в провинции Пурсат, западная Камбоджа: исследование скорости выведения паразитов. Ланцет Infect Dis . 2012 12 ноября (11): 851-8. [Медлайн].

  • Dondorp A, Nosten F, Stepniewska K, Day N, White N, Группа испытаний хинин-артесуната в Юго-Восточной Азии (SEAQUAMAT). Артесунат по сравнению с хинином для лечения тяжелой формы малярии, вызванной falciparum: рандомизированное исследование. Ланцет . 2005, 27 августа — 2 сентября. 366 (9487): 717-25. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Othoro C, Johnston D, Lee R, Soverow J, Bystryn JC, Nardin E. Повышенная иммуногенность пептидных вакцин Plasmodium falciparum с использованием местного адъюванта, содержащего мощный синтетический агонист Toll-подобного рецептора 7, имиквимод. Инфекционный иммунитет . 2009 Февраль 77 (2): 739-48. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Ричардс Дж. С., Станисич Д. И., Фаукс Ф. Дж. И др. Связь между естественно приобретенными антителами к эритроцит-связывающим антигенам Plasmodium falciparum и защитой от малярии и паразитемии высокой плотности. Clin Infect Dis . 2010 15 октября. 51 (8): e50-60. [Медлайн].

  • Олоту А., Лусингу Дж., Лич А. и др. Эффективность вакцины против малярии RTS, S / AS01E и исследовательский анализ титров антител против циркумспорозоитов и защиты у детей в возрасте 5-17 месяцев в Кении и Танзании: рандомизированное контролируемое исследование. Ланцет Infect Dis . 2011 Февраль 11 (2): 102-9. [Медлайн].

  • Хант К. Первая в мире вакцина против малярии, предназначенная для 360 000 африканских детей. CNN. Доступно по адресу https://www.cnn.com/2019/04/23/health/malaria-africa-worlds-first-vaccine-intl/index.html?fbclid=IwAR38y1BxCtPED9-zd0h6HeFun1VQXFd1_Mrxx478aHTmBRD3_Mrxx478aHTmBRD3 25 апреля 2019 г .; Дата обращения: 26 апреля 2019 г.

  • Первая вакцина против малярии, одобренная регулирующими органами ЕС. Медицинские новости Medscape.Доступно на http://www.medscape.com/viewarticle/848608. 24 июля 2015 г .;

  • Janeczko LL. Примахин защищает от рецидива малярии, вызванной P. vivax. Медицинские новости Medscape. 3 января 2013 г. Доступно по адресу http://www.medscape.com/viewarticle/777109. Доступ: 16 января 2013 г.

  • Sutanto I, Tjahjono B, Basri H, et al. Рандомизированное открытое испытание примахина против рецидива малярии vivax в Индонезии. Противомикробные агенты Chemother . 2013 Март.57 (3): 1128-35. [Медлайн].

  • Llanos-Cuentas A, Lacerda MV, Rueangweerayut R, Krudsood S, Gupta SK, Kochar SK, et al. Тафенохин плюс хлорохин для лечения и профилактики рецидивов малярии Plasmodium vivax (ДЕТЕКТИВ): многоцентровое двойное слепое рандомизированное исследование по подбору дозы фазы 2b. Ланцет . 2014 22 марта. 383 (9922): 1049-58. [Медлайн].

  • Кринтафель (тафенохин) [вкладыш в упаковке]. Парк Исследовательского Треугольника, Северная Каролина: GlaxoSmithKline.Июль 2018 г. Доступно в [Полный текст].

  • Аракода (тафенохин) [листок-вкладыш]. Вашингтон, округ Колумбия: 60 Degrees Pharms, LLC. Август 2018 г. Доступно по ссылке [Полный текст].

  • Lowes R. FDA усиливает предупреждение о рисках, связанных с мефлохином. Медицинские новости Medscape . 29 июля 2013 г. [Полный текст].

  • Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США. Сообщение FDA по безопасности лекарств: FDA одобряет изменения на этикетке противомалярийного препарата мефлохина гидрохлорида из-за риска серьезных психических и нервных побочных эффектов.FDA. Доступно на http://www.fda.gov/downloads/Drugs/DrugSafety/UCM362232.pdf. Доступ: 6 августа 2013 г.

  • Briand V, Bottero J, Noel H, et al. Прерывистое лечение для профилактики малярии во время беременности в Бенине: рандомизированное открытое исследование эквивалентности, сравнивающее сульфадоксин-пириметамин с мефлохином. J Заразить Dis . 2009 15 сентября. 200 (6): 991-1001. [Медлайн].

  • Briand V, Cottrell G, Massougbodji A, Cot M. Периодическое профилактическое лечение для предотвращения малярии во время беременности в районах с высокой степенью передачи. Малар J . 4 декабря 2007 г. 6: 160. [Медлайн]. [Полный текст].

  • Центры по контролю и профилактике заболеваний. Атланта, Джорджия: DHHS; 2009. Малярия и путешественники. Доступно по адресу http://www.cdc.gov/malaria/travelers/index.html. Доступ: 15 сентября 2011 г.

  • Партнерство по клиническим исследованиям RTS, S. Первые результаты фазы 3 испытания вакцины против малярии RTS, S / AS01 у африканских детей. N Engl J Med . 2011 / Октябрь. 365: [Полный текст].

  • Белый NJ.Вакцина от малярии (передовая). N Engl J Med . 2011 / Октябрь. 365: [Полный текст].

  • [Рекомендации] Центры по контролю и профилактике заболеваний. Диагностика и лечение малярии в США. Доступно по адресу http://www.cdc.gov/malaria/diagnosis_treatment/index.html. Доступ: 15 сентября 2011 г.

  • Poespoprodjo JR, Fobia W.

  • Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.