Лабораторная диагностика бруцеллеза: причины появления, симптомы заболевания, диагностика и способы лечения

Разное

Содержание

причины появления, симптомы заболевания, диагностика и способы лечения

ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Бруцеллез: причины появления, симптомы, диагностика и способы лечения.

Определение

Бруцеллез — инфекционное заболевание, которое вызывают бактерии рода Brucella.

Эти бактерии обладают высокой устойчивостью в окружающей среде и способны длительно сохранять жизнеспособность.

На территории России заболевание встречается в южных регионах, где развито фермерское животноводство. Профессии, связанные с повышенным риском заражения бруцеллезом, – пастухи, доярки, ветеринарные и зоотехнические работники, сотрудники бактериологических лабораторий, рабочие мясокомбинатов, боен и фабрик, занятых переработкой шерсти животных.

Причины появления бруцеллеза

Бруцелла передается людям от больных животных, преимущественно коз и овец.

Передача бруцелл происходит через продукты питания (термически необработанное молоко и молочные продукты, мясо), непосредственно при контакте с больными животными, а также при вдыхании бруцелл, содержащихся в пыли в местах обитания больных животных и во время разделки их туш.

Бруцелла может проникать через плаценту, приводя к внутриутробному заражению плода, а также выделяться с грудным молоком.

Иными способами передача бруцелл от человека человеку невозможна.

После попадания в организм человека бруцелла интенсивно размножается в лимфоидной ткани.

Бруцеллы могут длительно и незаметно для человека сохраняться в организме, обуславливая хроническое течение инфекции.

Классификация заболевания

Бруцеллез может развиваться в результате инфицирования различными видами бруцелл, например Вruсеllа melitensis, Вruсеllа abortus, Имеются определенные особенности течения бруцеллеза, вызванного различными видами возбудителя, однако эти отличия касаются преимущественно эпидемиологических аспектов.

В зависимости от длительности течения заболевания бруцеллез бывает острым, подострым и хроническим. Отдельно выделяют резидуальные (остаточные) изменения, сохраняющиеся после излечения от инфекции и освобождения организма от возбудителя.

Симптомы бруцеллеза

Первые симптомы болезни появляются, как правило, спустя 1–6 недель после заражения.

Чаще бруцеллез начинается подостро — возникают неспецифические симптомы, такие как слабость, недомогание, головная, суставная и мышечная боли.

Повышение температуры в подостром периоде незначительное с последующим подъемом до более высоких значений. Лихорадка часто имеет волнообразное течение. В редких случаях наблюдается увеличение лимфатических узлов, обнаруживаются болезненные подкожные узелки.

Для бруцеллеза характерны аллергические проявления на коже (диффузное покраснение, высыпания и т.д.).

Со стороны сердечно-сосудистой системы отмечается снижение артериального давления, учащение пульса, возможно развитие воспалительных процессов в сердце. Также может возникнуть поражение дыхательной системы (бронхиты, пневмонии и т.д.).

Для хронического бруцеллеза характерно поражение опорно-двигательного аппарата, выражающееся суставными и мышечными болями, ограничением подвижности суставов.

Поражения нервной системы проявляются жжением и покалыванием по ходу нервных волокон.

Диагностика бруцеллеза

Диагностика бруцеллеза складывается из тщательного сбора анамнеза и объективного исследования больного.

К лабораторным методам, используемым при диагностике бруцеллеза, относится клинический анализ крови с определением лейкоцитарной формулы, в котором можно обнаружить признаки воспалительного процесса в организме. Однако данный метод не обеспечивает идентификации возбудителя. С этой целью применяются бактериологический, серологический и молекулярно-генетический методы.

Для бактериологического анализа, цель которого – выявление непосредственного возбудителя, проводят забор крови, мочи, мокроты и других биологических материалов в зависимости от пораженных органов. Производят посев на питательные среды с дальнейшим микроскопическим и иным исследованием полученных культур. Данный метод является золотым стандартом диагностики бруцеллеза. Однако такое исследование, как правило, занимает несколько дней.

Серологический метод основан на выявлении специфических антител классов IgM , IgА и IgG к бруцеллам. Эти белки появляются в организме в ответ на инфицирование бруцеллами и отражают наличие иммунного ответа.


Высокой специфичностью и чувствительностью обладает метод ПЦР, цель которого – обнаружение генетического материала (ДНК) бруцеллы. Данный метод способен выявлять микроорганизм, содержащийся в самых минимальных количествах в исследуемых средах.

Используемые ранее аллергические пробы для выявления бруцеллеза сейчас имеют весьма ограниченное применение.

С целью выявления поражения различных органов и систем может потребоваться биохимический анализ крови с показателями функции печени (общий белок, альбумины, аланинаминотрансфераза (АлАТ), аспартатаминотрансфераза (АсАТ), билирубин и его фракции), почек (мочевина, креатинин с подсчетом скорости клубочковой фильтрации).

Инструментальные исследования включают электрокардиографию, эхокардиографию, рентгенографию органов грудной клетки, суставов и позвоночника, ультразвуковое исследование органов брюшной полости и др.


К каким врачам обращаться

Первичная диагностика бруцеллеза требует исключения ряда заболеваний неинфекционного происхождения. Поэтому первым врачом, к которому обращаются при появлении симптомов, характерных для бруцеллеза, является терапевт или педиатр. На основании жалоб, истории заболевания, выяснения деталей эпидемиологического риска заражения у конкретного больного, данных клинического и лабораторного исследований устанавливается диагноз. Далее пациента консультирует врач-инфекционист и другие специалисты (в зависимости от наличия поражений тех или иных органов): кардиолог, хирург, репродуктолог и т.д.

Лечение бруцеллеза

Лечение бруцеллеза основано, в первую очередь, на освобождении организма от возбудителя. С этой целью используются антибактериальные препараты, активные в отношении бруцелл.

Своевременная диагностика и назначение соответствующей противомикробной терапии предотвращают хронизацию процесса и развитие инвалидизирующих осложнений (например, серьезных нарушений в работе опорно-двигательного аппарата).

Кроме того, проводится терапия, направленная на купирование тех или иных синдромов. В перечень применяемых препаратов входят иммунокорректоры, противовоспалительные средства, витамины, нейропротекторы и др.

Комплексная терапия проводится только под наблюдением врачей и включает контроль состояния пациента при помощи лабораторно-инструментальных методов.

Осложнения

Осложнения бруцеллеза могут касаться самых различных органов. Так, со стороны сердца могут развиваться блокады проведения импульса, аритмии, поражения клапанов, сердечная недостаточность.

Хроническое течение бруцеллеза нередко приводит к формированию контрактур (стойкому ограничению подвижности суставов за счет изменения его структур), дистрофии мышц. Это значительно ограничивает движения в крупных суставах (например, крестцово-подвздошном сочленении — сакроилеиту), реже поражаются мелкие суставы.

Одним из тяжелых осложнений является бесплодие. Оно может развиться в результате поражения бруцеллезом половых органов у лиц как мужского, так и женского пола.

Среди острых осложнений бруцеллеза стоит отметить менингит – воспаление мозговых оболочек, энцефалит – воспаление мозгового вещества. Данные состояния представляют угрозу жизни пациента. Хронический нейробруцеллез может привести к развитию параличей, стойким изменениям психики и другим тяжелым последствиям.

Профилактика бруцеллеза

Профилактика бруцеллеза подразделяется на специфическую и неспецифическую.

К специфической профилактике относится вакцинация, которая осуществляется по эпидемиологическим показаниям лицам, чья профессиональная деятельность связана с высоким риском заражения.

Кроме того, представители этих профессий подлежат регулярному лабораторному обследованию в рамках диспансеризации.

Неспецифическая профилактика включает использование средств защиты и соблюдение правил техники безопасности при работе со скотом, тщательную термическую обработку продуктов животного происхождения, вынужденный забой скота при наличии признаков заражения бруцеллезом или подозрении на возможное заражение.

Источники

  1. Бруцеллез у взрослых. Клинические рекомендации. 2014.
  2. Инфекционные болезни у детей, учебник // В.Ф. Учайкин, О.В. Шамшева. – М. ГОЭТАР-Медиа. 2018. 800 с.
ВАЖНО!

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.


Информация проверена экспертом

Лишова Екатерина Александровна

Высшее медицинское образование, опыт работы — 19 лет

Актуальные вопросы эпидемиологии и лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного L-формой возбудителя Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Актуальные вопросы эпидемиологии и лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного L-формой возбудителя*

Л.М. Михайлов1, А.И. Калиновский1, С.В. Балахонов1, Н.Л. Баранникова1,

Н.М. Андреевская1, В.А. Михайлова1, М.Ю. Шестопалов1, О.Г. Татарникова1,

В.И. Кузнецов1, В.А. Борисов2, В.Г. Ощепков3, Л.Н. Гордиенко3, Е.В. Куликова3

1 ФГУЗ «Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока» Роспотребнадзора ([email protected])

2 Иркутская областная клиническая инфекционная больница ([email protected])

3 ГНУ «Всероссийский НИИ бруцеллеза и туберкулеза животных Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук», г. Омск ([email protected], [email protected])

Резюме

Предложены усовершенствованные методы лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного возбудителем в L-форме, с использованием специальных питательных сред, диагностических сывороток к бруцеллам в L-форме, L-корпускулярных и растворимых антигенов атипичных бру-целл, а также ПЦР.

Приведены результаты лабораторных исследований, свидетельствующие о возможности получения дополнительной информации при постановке диагноза в неманифестных очагах бруцеллеза, обусловленных возбудителем инфекции в L-форме, для более объективной оценки уровня инфици-рованности декретированных групп населения и активного выявления больных бруцеллезом людей при диспансеризации, а также сельскохозяйственных животных — основного источника инфекции.

Ключевые слова: бруцеллез, L-форма, лабораторная диагностика

Actual Issues of Epidemiology and Laboratory Diagnosis of Brucellosis Caused by L-forms of the Parasite

L.M. Mikhailov1, A.I. Kalinovski1, S.V. Balahonov1, N.L. Barannikova1, N.M. Andreevskaya1, V.A. Mikhailova1, M.Yu. Shestopalov1,

O.G. Tatarnikova1, V.I. Kuznecov1, V.A. Borisov2, V.G. Oschepkov3,

L.N. Gordienko3, E.V. Kulikova3

1 Irkutsk Antiplague Research Institute of Siberia and Far East ([email protected])

2 Regional Clinical Hospital of Infectious Diseases of Irkutsk ([email protected])

3 State Scientific Institution All-Russian Scientific Research Institute of Brucellosis and Tuberculosis Animals, Siberian Branch of Russian Academy of Agricultural Sciences ([email protected], [email protected])

Abstraet

Proposed improved methods of laboratory diagnosis of brucellosis caused by the agent in the L-form with the use of special culture media, diagnostic sera to Brucella in the L-form, L-corpuscular and soluble antigens of atypical Brucella, PCR. Results of laboratory studies, indicating the possibility of obtaining additional information when making a diagnosis in nonclinical foci of brucellosis caused by infectious agents in the L-form for a more objective assessment of the level of infection risk groups and active identification of patients with brucellosis in people with clinical examinations, as well as livestock -the main source of infection.

Key words: brucellosis, L-form, laboratory diagnosis

Введение

Современные представления о L-трансформации многих видов бактерий как одной из фаз развития микробной популяции [6, 7, 17, 19] правомерны и для возбудителя бруцеллеза [8], что может иметь важное значение в патогенезе этой инфекции и формировании скрытых очагов бруцеллеза в связи с невозможностью лабораторной диагностики стандартными методами. Комитет экспертов

ФАО (Продовольственная и сельскохозяйственная организация ООН)/ВОЗ по бруцеллезу на одном из последних заседаний отметил значительную опасность этой инфекции для населения многих стран и обратил особое внимание на возможность пер-систенции бруцелл с образованием диссоциированных атипичных R- и L-форм возбудителя [24]. Бруцеллы в L-форме могут быть одной из причин рецидивирующего хронического течения заболева-

* Докладывалось на Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные проблемы природной очаговости болезней» (к 70-летию теории академика Е.Н. Павловского о природной очаговости болезней), ноябрь 2009 г., Омск.

Эпидемиология и Вакцинопрофилактика № 2 (51)/2010

Эпидемиология и Вакцинопрофилактика № 2 (51)/2010

ния, создавая труднопрогнозируемые эпидемиологические ситуации вследствие формирования неманифестных очагов бруцеллеза с длительной персистенцией возбудителя в L-форме у сельскохозяйственных животных [22]. Атипичный бруцеллез, обусловленный L-формой бруцелл, сложно диагностировать общепринятыми лабораторными методами, особенно бактериологическим — основным применяемым и при эпидемиологической диагностике.

Расширение возможностей лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного возбудителем в L-форме, позволит получать дополнительную информацию при постановке диагноза у больных и выявлять возможность существования неманифестных очагов бруцеллеза. Изучение эпизоотолого-эпидемиологических проявлений этого зооноза с более объективной оценкой уровня инфицирован-ности людей и животных, определение границ очага инфекции, проведение диспансеризации декретированных групп населения, лечебных, противоэпидемических и профилактических мероприятий остаются актуальными до настоящего времени.

Цель работы — совершенствование методов лабораторной диагностики атипичного бруцеллеза у больных людей и животных для выявления скрытых очагов инфекции, обусловленных возбудителем в L-форме.

Материалы и методы

В экспериментальной работе использованы штаммы бруцелл коровьего вида в S- и L-формах из коллекции музея живых культур Иркутского научно-исследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока Роспотребнадзора (НИПЧИ), корпускулярные и растворимые антигены, приготовленные из этих штаммов, а также корпускулярные антигены из бруцелл в L-форме и штаммы бруцелл, выделенные от северных оленей во Всероссийском НИИ бруцеллеза и туберкулеза животных Сибирского отделения Российской академии сельскохозяйственных наук (ВНИИБТЖ). Эксперименты проводились на подопытных животных из питомника НИПЧИ.

С диагностической целью исследованы сыворотки крови больных людей из Иркутской областной клинической инфекционной больницы и собранные с отдельных территорий Иркутской области, Республики Бурятия и Монголии с различной эпидемиологической ситуацией по бруцеллезу. При определении сроков первоначального появления антител к бруцеллам в L-форме анализированы истории болезни пациентов Иркутской областной клинической инфекционной больницы. ПЦР выполняли, как описано нами ранее, а также в соответствии с тест-системой для выявления ДНК Brucella sрр. методом полимеразной цепной реакции ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб» согласно инструкции изготовителя [15]. Для приготовления питательных сред использовали печень крупного рогатого скота (КРС)

и рыбный гидролизат из байкальской сороги с добавками. Ингибитором роста бруцелл в S-форме служили бициллин-3 и налидиксовая кислота. Серологические реакции: Хедльсона (РХ), Райта (РА), Кумбса (РК), пассивной гемагглютинации (РПГА), кольцепреципитации (РКП) и иммунофлюоресценции (РИФ) — проводили в соответствии с Методическими указаниями [18].

Все манипуляции с патогенными микроорганизмами осуществляли с соблюдением мер безопасности [5]. Интенсивность роста бруцелл на питательных средах оценивали в крестах: сплошной рост — четыре креста, более 30 КОЕ — три, от 10 до 30 КОЕ — два, до 10 КОЕ — один крест.

Для экспериментальных целей при изучении свойств L-форм бруцелл ранее использовались разные питательные среды и культуры тканей [1 — 4, 13, 20, 23, 25, 26]. В настоящее время для выделения бруцелл в L-форме рекомендуются питательные среды на основе печеночного настоя или смеси мясной воды и пептона Мартена [18]. Эти среды не являются коммерческими, их приготовление требует выполнения сложных технологических операций в достаточно оборудованных производственных условиях. Кроме того, по нашим данным, на этих средах в отдельных случаях регистрируется рост колоний в типичной S-форме возбудителя, что свидетельствует о недостаточном ингибировании бруцелл в S-форме, значительно снижая эффективность бактериологического метода диагностики атипичного бруцеллеза и выявления скрытых очагов инфекции.

Разработанные в НИПЧИ питательные среды для выделения и накопления бруцелл в L-форме [10] могут производиться в нативном и, что очень важно, в сухом виде, значительно расширяя возможности их использования. Нами приготовлено и испытано более десяти вариантов сред на основе печеночного настоя и триптического гидролизата рыбы (среда М). Из них две плотные и одна полужидкая отобраны для дальнейшей работы, которые содержат агар-агар, стимуляторы роста, осмотические стабилизаторы, источники энергии, витамины, ингибиторы роста бруцелл в S-форме. При испытании этих сред рост бруцелл в L-форме составил 30 — 33% КОЕ с полным подавлением роста бруцелл в S-форме, что свидетельствует об их высокой чувствительности и элективности.

Апробация сконструированных питательных сред проведена при экспериментальном бруцеллезе у 60 морских свинок, зараженных бруцелла-ми S-, L- и смесью S-, L-форм при использовании трех доз заражения: 1 х 109, 2 х 1010 и 4 х 1010 м.к. Хлороформированных животных вскрывали на 1-е, 2-е, 7-е, 14-е и 30-е сутки. Бруцеллы в L-форме изолированы в первые две недели после заражения, рост на испытуемых средах появился на 5 — 13-е сутки инкубации посевов при 37 °С. При заражении S- или совокупно S- и L-формами бруцеллы в S-форме выделены через 30 суток при дозе зара-

жения 1 х 109 м.к. только на контрольном коммерческом эритрит-агаре.

Результаты и обсуждение

Интенсивность и скорость роста бруцелл на разработанных сухих питательных средах для их выделения в L-форме проводили в ВНИИБТЖ с использованием 24 экспериментальных L-трансформантов и 89 штаммов в S- и L-формах, изолированных от северных оленей — основного источника инфекции в очагах бруцеллеза на Крайнем Севере. Все экспериментальные L-трансформанты выросли че-

рез 24 часа на обеих плотных питательных средах с разной интенсивностью, более выраженной на среде М. На печеночной среде более интенсивный рост L-трансформантов наблюдался через 72 часа инкубации (рис. 1).

Культуры бруцелл от северных оленей в L-форме интенсивнее росли также на среде М (рис. 2).

С использованием разработанных сред получено бактериологическое подтверждение хронического рецидивирующего бруцеллеза у двух больных людей с выделением гемокультур бруцелл в L-форме, идентифицированных в ПЦР. Изоляты

Рисунок 1.

Ростовые свойства сконструированных питательных сред для выделения бруцелл в L-форме с использованием 24 экспериментальных L-трансформантов бруцелл

Рисунок 2.

Ростовые свойства сконструированных питательных сред для выделения бруцелл в L-форме с использованием 89 штаммов, выделенных от северных оленей

Эпидемиология и Вакцинопрофилактика № 2 (51)/2010

Эпидемиология и Вакцинопрофилактика № 2 (51)/2010

по культурально-морфологическим, тинкториаль-ным свойствам, результатам фазово-контрастного микроскопирования и серологического исследования с экспериментальными бруцеллезными L-сыворотками, а также по отсутствию реверсии в S-форму отнесены к бруцеллам в стабильной L-форме. Индекс инфицированности находился в пределах 2 — 18, что свидетельствует об ослабленной вирулентности бруцелл и, вероятно, определяет их длительную персистенцию (в комплексе с другими факторами) в организме больных, являющуюся одной из причин хронического течения бруцеллеза.

На предлагаемых нами питательных средах рост бруцелл в L-форме обычно появлялся на 3 — 14-е сутки при 37 °С, возможно замедление роста до 18 — 20 суток, что влияло на учет результатов.

Вероятность выделения бруцелл в L-форме значительно увеличивается в периоды обострения болезни. Кровь засевали на плотные и полужидкие питательные среды для выделения и накопления бруцелл в L-форме и заражали биопробных животных. Результативность выделения гемокультур бруцелл в L-форме невысока. Нами показано, что наиболее эффективными сроками для выделения L-форм бруцелл от биопробных животных являются 7 — 14-е сутки после заражения. На плотных питательных средах бруцеллы в L-форме формируют мелкие колонии — диаметром 0,5 — 2 мм и крупные — до 5 мм — круглые, янтарно-желтого цвета в проходящем свете и серо-голубоватого — в падающем, возможно формирование более темного центра («яичница»). Первые генерации возбудителя могут давать скудный рост в виде нежного налета беловато-сероватого в падающем и янтарно-желтого цвета — в проходящем свете. Колонии часто врастают в агаровую пластинку, имеют крошковатую или тянущуюся консистенцию, плохо снимаются петлей. Добавление в сухую основу питательной среды на основе печеночного настоя кристаллического фиолетового придает колониям синеватый цвет. На полужидкой питательной среде бруцеллы в L-форме формируют в толще среды колонии в виде беловатых крупинок, со временем увеличивающиеся в размере.

Световая и фазово-контрастная микроскопия нативных препаратов бруцелл в L-форме характеризуется их выраженным полиморфизмом. Сфе-ропласты могут окрашиваться по Козловскому в красный, темно-бордовый, по Граму — в фиолетовый, сиреневый или красный цвет. Исследователи выделяют от 7 до 15 различных фенотипов L-форм бруцелл [14, 21]. По нашим данным, их морфология разнообразна: на начальных этапах L-трансформации наблюдается слипание клеток с образованием конгломератов, появление увеличенных изогнутых палочек, клеток раздутых и неправильной формы, а также сферических, в которых более плотные участки выглядят в виде полу-

колец или колец с просветлением в центре. Клетки часто располагаются цепочками. На поздних этапах в поле зрения много клеток увеличенных, палочковидных и овоидных, в виде темных полуколец или запятых, колец и овалов, нитевидных форм. Спор и капсул не образуется, что отмечено нами ранее [9].

Из 114 культур бруцелл, выделенных от северных оленей, в РА с поливалентной бруцеллезной S-сывороткой прореагировало 27% культур, с сыворотками против разных штаммов бруцелл в L-форме положительные реакции зарегистрированы в 17 — 91,2% случаев.

Культуры бруцелл в L-форме в пластинчатой и объемной РА со специфической L-сывороткой формируют мелкозернистый, крупнозернистый или тяжистый агглютинат, с S-антисывороткой — результат отрицательный, в отдельных случаях — слабоположительный. Особенностью агглютината L-форм в отличие от S-форм бруцелл является то, что он легко разбивается при встряхивании. L-культуры, выделенные от людей, агглютинируются только L-бруцеллезной антисывороткой. С родоспецифическими праймерами в ПЦР бруцеллы в L-форме формировали специфический амплификон, выявляемый при гель-электрофорезе.

Результаты ПЦР-тестирования экспериментальных L-трансформантов штаммов от северных оленей, а также изолированных от больных людей были неоднозначны, что определяет необходимость более глубокого изучения свойств бруцелл в L-форме, длительно персистирующих в организме животных и человека. Использование РИФ возможно для индикации бруцелл в L-форме, при этом специфическое свечение с L-антисывороткой оценивается в три-четыре креста с отсутствием или слабым свечением с S-антисывороткой. Получен положительный опыт конструирования бруцеллезного эритроцитар-ного антигенного диагностикума, выявляющего гемагглютинины к L-формам бруцелл в гиперим-мунных сыворотках до разведения 1:12 800, в сыворотках крови больных людей до 1:1600, в РКП с использованием водорастворимого препарата из бруцелл в L-форме обнаруживали пре-ципитирующие антитела в 4,7% случаев.

С целью получения ревертантов в S-форме проведены пассажи бруцелл в L-форме на плотных питательных средах без трансформирующих агентов и через организм морских свинок. При этом пассирование бруцелл в стабильной L-форме не дало положительных результатов, но зарегистрирована реверсия L-форм на начальных стадиях трансформации, отмеченная ранее [11].

Сравнительное изучение результативности отдельных серологических реакций (рис. 3) показало, что из 108 больных людей с установленным диагнозом «бруцеллез» положительный результат с S-антигеном отмечен в 100% случаев, из них в РХ -у 92 (85,2%) больных, в РА — у 21 (19,4%), в РПГА -у 72 (66,7%), в РК — у 74 (68,5%). С L-антигеном

Рисунок 3.

Результаты серологических реакций на бруцеллез у больных людей с использованием S- и L-диагностикумов

100

00

_0

К

О

0

1

00

80

60

«о 40 .Ú

со

£ 20

< О. X О. РПГА Р Кумбса 2 X Р Р Кумбса

Результативность тестов Результативность

тестов с L-диагностикумом

0

выявлено 47 (43,5%) инфицированных: в РХ — 4 (3,7%), в РА — 10 (9,3%), в РК — 45 (41,7%).

В 40 сыворотках людей с подозрением на бруцеллез позитивных результатов с S-антигеном не обнаружено, в то же время с L-антигеном выявлено четверо больных с положительными реакциями на бруцеллез, вызванный атипичным возбудителем. Это подтверждает целесообразность его применения для диагностики бруцеллеза, обусловленного L-формами возбудителя.

Оценка уровня инфицированности декретированной группы населения на территории с неясной эпизоотолого-эпидемиологической обстановкой по бруцеллезу свидетельствует о том, что из 205 обследованных у 37 (18,1%) человек зарегистрированы положительные результаты с S-диагностикумом.

При этом количество положительно реагирующих по отдельным тестам составило: в РХ — 18 (8,8%), в РА — 3 (1,5%), в РПГА — 14 (6,6%) и РК — 24 (11,7%). С L-антигеном позитивные результаты получены только в РХ дополнительно в 5 (2,4%) случаях. При исследовании 60 проб сывороток крови с территории, официально свободной от бруцеллеза, положительные реакции отмечены у 7 человек только в РХ, из них с S-антигеном — у 4 (6,6%), с L-антигеном — у 3 (5%).

У 12 больных установлен период первоначального появления L-антител в крови после официально установленного диагноза «бруцеллез», из них у 2 (16,7%) этот период длился до 10 лет, у 8 (66,6%) — 11 — 20 лет, а у 2 (16,7%) — от 21 года до 30 лет (рис. 4).

Рисунок 4.

Временные периоды первичного появления L-антител в крови больных бруцеллезом людей от момента постановки диагноза

Эпидемиология и Вакцинопрофилактика № 2 (51)/2010

Эпидемиология и Вакцинопрофилактика № 2 (51)/2010

Сконструированные питательные среды для выделения и накопления бруцелл в L-форме обладают рядом преимуществ перед рекомендованными к применению ранее [18], которые заключаются в более высоких технологичности при производстве, чувствительности и элективности, возможности выпуска в сухом виде, с более длительным сроком хранения, чем нативные среды, удобством при работе, особенно в полевых условиях.

С использованием разработанных сред выделены возбудители бруцеллеза в L-форме после длительной персистенции у больных с хронической формой бруцеллеза, что отмечено нами ранее [12]. Установлено, что при выделении бру-целл в L-форме биологическим методом посевы органов биопробных животных целесообразно проводить на 7 — 14-е сутки после заражения, что согласуется с результатами других исследователей [16].

Приведенные данные о культурально-морфологических признаках, полученные при микроскопии, с выраженным полиморфизмом бруцелл, трансформированных в L-форму, согласуются с данными других авторов [14, 21].

С помощью диагностических сывороток против бруцелл в L-форме показана возможность ускоренной идентификации культур, выделенных от животных.

Результаты ПЦР-тестирования свидетельствуют о целесообразности использования этого метода для ускоренной идентификации штаммов, изолированных от больных людей, от животных и при исследовательской работе с экспериментальными L-трансформантами, что позволет рекомендовать его в комплексе стандартных идентификационных методов.

Необходимо более глубокое изучение свойств бруцелл в L-форме из-за неоднозначных результатов в ПЦР штаммов в L-форме, изолированных от разных носителей.

Сравнительная результативность комплекса серологических реакций: РХ, РА, РПГА, РК

с S- и L-корпускулярными антигенами — показала их неоднозначность при определении специфических антител против бруцелл в S- и L-формах в крови больных и при мониторинге на территориях с различной эпидемиологической обстановкой по бруцеллезу.

Впервые у 12 больных хроническим бруцеллезом установлен период первоначального появления антител к бруцеллам в L-форме, который от момента установления диагноза составил до 10 и свыше 20 лет — по 16,7%, от 11 до 20 лет — 66,6%, это свидетельствует о том, что в большинстве случаев трансформация возбудителя инфекции из типичной в L-форму происходит после 10 лет заболевания, обусловливая целесообразность использования в этот период дополнительно в комплексе лабораторных методов диагностикумов на основе L-антигенов бруцелл.

Выводы

У больных хроническим бруцеллезом людей может происходить трансформация типичных S-бруцелл в L-форму с длительной персистенцией их в организме больного.

Рекомендованные нами специальные питательные среды позволяют более эффективно выделять культуры бруцелл в L-форме от больных людей и животных.

Лабораторная диагностика бруцеллеза с помощью комплекса серологических реакций с использованием бруцеллезных L-диагностикумов дает дополнительную информацию об инфицированности декретированных групп населения на территориях с различной эпизоотолого-эпидемиологической ситуацией по бруцеллезу.

ПЦР и диагностические сыворотки против бру-целл в L-форме при ускоренной идентификации L-культур необходимы для определения окончательного диагноза, своевременного выявления неманифестных очагов бруцеллеза и проведения противоэпизоотических и противоэпидемических мероприятий. Ш

Литература

8.

1. Базиков И.А. Получение и характеристика L-форм бруцелл и их ревер-

тантов: Автореф. дис. … канд. мед. наук. — Саратов, 1990. — 16 с. 9.

2. Базиков И.А. Морфологическая характеристика L-форм рода Бруцел-

ла, полученных при их стабилизации // Особо опасные инфекции на Кавказе: Тез. докл. к 6-й Краевой науч. конф., посвящ. 70-летию Вели- 10.

кой Октябрьской социалистической революции. — Ставрополь, 1987.

С. 215, 216.

3. Базиков И.А., Таран И.Ф. Получение и сравнительная характеристика

L-форм бруцелл и их ревертантов / Актуальные вопросы профилак- 11

тики бруцеллеза и организация медицинской помощи больным: Тез. докл. Всесоюзн. конф. — М., 1989. С. 61 — 63. 12.

4. Барабанова Е.Б. Изучение метода лазерной спектроскопии в целях использования индикации L-форм бруцелл: Автореф. дис. … канд. вет.

наук. — Омск, 1996. — 17 с. 13.

5. Безопасность работы с микроорганизмами I — II групп патогенности (опасности): Санитарные правила. СП 1.3.1285-03. — М.,

2003. — 85 с. 14.

6. Бухарин О.В., Гинцбург А.Л., Романова Н.М. и др. Механизмы выживания бактерий. — М.: Медицина, 2005. — 367 с.

7. Елисеева И.В., Бабич Е.М., Волянский Ю.Л. и др. О роли латентных 15.

трудно культивируемых и некультивируемых персистентных бактерий

в патологии человека // Анали Мечниковського 1нституту (Харьков). 2006. № 1. С. 12 — 45.

Зыкин Л.Ф., Васильев Д.А. L-формы возбудителей зооантропоно-зов. — Ульяновск, 2000. — 68 с.

Калиновский А.И., Михайлов Л.М., Андреевская Н.М. и др. Получение и характеристика бруцелл в L-форме // Бюл. Восточно-Сибирского НЦ СО РАМН. 2004. Т 2. № 1. С. 84 — 88.

Кузнецов В.И., Татарникова О.Г., Маевский М.П. и др. Приготовление питательных основ для микробиологических целей из речной рыбы / Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока, Крайнего Севера. — Новосибирск, 2006. — 292 с.

Методы индикации и идентификации L-форм бруцелл: Методические рекомендации. — Омск, 2005. — 19 с.

Михайлов Л.М, Калиновский А.И., Балахонов С.В. Персистенция L-форм бруцелл у человека с хронической формой бруцеллеза // Микробиология. 2009. № 5 (1). С. 114, 115.

Ощепков В.Г., Копейкин И.Г., Степанов Е.М. и др. L-трансформация

B. ovis на искусственных питательных средах и в организме овец // Сб. науч. тр. ОМСХИ. — Омск, 1986. С. 21 — 28.

Ощепков В.Г., Гордиенко Л.Н., Шварева А.Ю. и др. Морфо- и сероварианты L-форм В. abortus начального этапа трансформации и их биологические свойства // Сб. науч. трудов ВНИИБТЖ. — Омск, 2000. С. 257 — 270. Балахонов С.В., Шестопалов М.Ю., Калиновский А.И. Оптимизация детекции бруцелл с помощью полимеразной цепной реакции // Мо-лекуляр. генетика, микробиол., вирусол. 1996. № 4. С. 33 — 35.

16. Островская Н.Н., Толмачева Т.А. Вирулентность для морских свинок L-форм бруцелл вида Abortus // Микробиология. 1974. № 6.

С. 146, 147.

17. Прозоровский С.В., Кац Л.Н., Каган Г.Я. L-формы бактерий. — М.: Медицина. 1981. — 239 с.

18. Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза: Методические указания МУ 3.1.7.1189-03. — М., 2003. — 38 с.

19. Тимаков В.Д., Каган Г.Я. L-формы бактерий и семейство Mycoplasmataceae в патологии. — М.: Медицина, 1973. — 392 с.

20. Толмачева Т.А., Кац Л.Н. Биологические свойства и ультраструктура бруцелл в процессе L-трансформации и реверсии // Микробиология. 1977. № 1. С. 90 — 93.

21. Триленко П.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. — Л.: Колос, 1976. — 279 с.

22. Banai M., Adams L.G., Frey M. et al. The myth of Brucella L-forms and possible involvement of Brucella penicillin binding proteins (PBPs) in pathogenicity // Vet. Microbiol. 2002. V. 90. № 1 — 4. P. 263 — 279.

23. Egwu I.N., Eveland W.C. Cytological change related to Brucella canis variants uptake in vitro // Med. Microbial. Immunol. 1979. V. 167. № 2. P. 107 — 115.

24. Joint FAO/WHO expert committee on Brucellosis sixth report World Health Organisation Technical Report Ceries. — Geneva, 1986. — 133 p.

25. Hatten B.A., Sulkin E.S. Intracellular production of Brucella L-forms. Recovex of L-forms tissue culture cells infected with Brucella // J. Bacteriol. 1966. V. 91. № 1. P. 285 — 296.

26. Nelson E.L., Pickett M.J. The covery of Brucella and their relation to Brucella phage // J. Infect. Disiase. 1951. V. 8. № 3. P 226 — 232.

Метод ПЦР в лабораторной диагностике бруцеллеза*

Ю.К. Кулаков, М.М. Желудков ([email protected]),

Т.А. Толмачева, Л.Е. Цирельсон

НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, Москва

Резюме

Цель работы заключалась в совершенствовании системы идентификации и дифференциации представителей рода Brucella и лабораторной диагностики бруцеллезной инфекции с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

ПЦР использовали для проведения родовой и видовой идентификации 131 штамма патогенных видов бруцелл разного географического происхождения, идентифицированных традиционными фенотипическими методами. Из шести синтезированных пар праймеров на специфические родовые и видовые последовательности мишеней генов белков (BruAb1_1825, BRA0378, BMEI1661, BruAb2_0168, BruAb1_0266 и

BMEII0827) только одна мишень BruAb2_0168 оказалась строго специфичной к виду B. abortus. Применение в ПЦР праймеров на остальные генные мишени позволяло идентифицировать вид у всех изолятов по наличию специфических продуктов амплификации.

Изучение диагностической эффективности ПЦР в клинических образцах 196 сывороток крови больных с подозрением на бруцеллез подтвердило возможность использования этого метода в качестве дополнительного в лабораторной диагностике бруцеллеза людей.

Ключевые слова: бруцелла, бруцеллез, полимеразная цепная реакция, диагностика

PCR in Laboratory Diagnosis of Brucellosis

Yu.K. Kulakov, M.M. Zheludkhov ([email protected]),

T.A. Tolmacheva, L.E. Cirelson

N.F. Gamaleya Research Institute of Epidemiology and Microbiology, Academy of Medical Sciences, Moscow Abstract

The investigation was aimed at improving tools for identification and differentiation of the genus Brucella and laboratory diagnosis of brucellosis infection using PCR.

PCR was used for the genera, species identification of 131 strains of pathogenic species of Brucella of different geographical origin, identified by traditional phenotypic methods. From the six pairs of primers synthesized on the specific sequence of target genes (BruAb1_1825, BRA0378, BMEI1661, BruAb2_0168, BruAb1_0266 and BMEII0827) only one target BruAb2_0168 was strictly specific to the species B. abortus. Application of PCR-primers for the rest of the target genes allows the species identification of all isolates by the presence of specific amplification products.

Survey on the diagnostic efficiency of PCR with clinical samples of blood sera of 196 patients with suspected brucellosis confirmed the possibility of using it as a supplementary method in the laboratory diagnosis of human brucellosis.

Key words: Brucella, brucellosis, polymerase chain reaction, diagnosis

Введение

Бруцеллез — инфекционное, особо опасное зоонозное заболевание, вызываемое бактериями рода Brucella, которое передается от животных к человеку, характеризуется тяжелым и часто хроническим течением [1, 8]. Бруцеллез представляет актуальную проблему для здравоохранения во всем мире. По данным ВОЗ, в мире ежегодно регистрируется более 500 тыс. впервые выявленных случаев этого заболевания у людей [12], для России данный показатель составляет около 500 случаев. Что

касается хронической формы бруцеллеза, то она не имеет официального учета [2].

Противоэпидемические мероприятия включают определение возбудителя инфекции и источника его распространения. Одним из наиболее информативных показателей является выделение возбудителя заболевания. При выделении культуры микроорганизмов в первую очередь необходимо их идентифицировать и дифференцировать с применением традиционных методов (длительных, трудоемких, дорогостоящих и небезопасных), основан-

* Докладывалось на Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные проблемы природной очаговости болезней-(к 70-летию теории академика Е.Н. Павловского о природной очаговости болезней), ноябрь 2009 г., Омск.

Эпидемиология и Вакцинопрофилактика № 2 (51)/2010

anti‑Brucella spp.

Выявление специфических антител к возбудителям бруцеллеза (Brucella spp.) для диагностики заболевания и оценки эффективности проводимого лечения.

Синонимы русские

Бруцелла, бруцеллез (мальтийская, средиземноморская, ундулирующая лихорадка, септицемия Брюса), серологическая диагностика.

Синонимы английские

Brucella spp., Human brucellosis, serological diagnostics.

Метод исследования

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Бруцеллез – это инфекционное зоонозное заболевание, характеризующееся лимфаденопатией, длительной лихорадкой, поражением опорно-двигательной, сердечно-сосудистой, нервной и других систем, а также высокой частотой хронизации. Возбудители заболевания — микроорганизмы Brucella spp. Они представляют собой грамотрицательные бактерии шаровидной или овоидной формы, обладают высокой способностью к инвазии и внутриклеточному паразитированию. Патогенны для человека следующие виды бруцелл: B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. canis, B. ceti. При этом на долю B. melitensis приходится подавляющее большинство случаев заражения. Источник инфекции — крупный и мелкий рогатый скот, свиньи. Возбудитель инфекции может попадать в организм человека при употреблении мяса, сырых молочных продуктов (молоко, сыр) – алиментарный путь передачи. Также возможно заражение при непосредственном контакте с инфицированными тканями животных, их выделениями у ветеринаров, работников мясной промышленности, животноводства, сотрудников микробиологических лабораторий. Описаны случаи передачи микроорганизма от человека к человеку, в том числе случаи заражения младенцев при употреблении грудного молока больной матери. 

Инкубационный период при бруцеллезе — 7-30 дней. Заболевание имеет разнообразные клинические проявления с поражением множества органов и систем. Различают острую, подострую и хроническую форму бруцеллеза. Встречается латентная форма заболевания с отсутствием выраженной клинической симптоматики или стертым течением инфекции.

Острая и подострая формы бруцеллеза характеризуются слабостью, головной болью, длительной лихорадкой с температурой 39-40 °С и выше, сопровождающейся ознобами и проливными потами. Отмечается лимфаденопатия, увеличение и болезненность при пальпации печени и селезенки, поражение нервной системы (раздражительность, явления менингизма, менингит), поражение сердечно-сосудистой системы, опорно-двигательной системы в виде артралгий. Хроническая форма заболевания распространена и характеризуется слабыми признаками интоксикации, рецидивирующим течением с периодами обострений. Отмечается поражение опорно-двигательного аппарата в виде артритов, периоститов, перихондритов крупных суставов с формированием ограничения их подвижности, анкилозов. Также наблюдаются миозиты, фиброзиты, целлюлиты. Поражается центральная и периферическая нервные системы в виде радикулитов, невралгий, невритов, неврозов. В патологический процесс могут вовлекаться сердечно-сосудистая система с развитием васкулитов, миокардита, эндокардита, урогенитальный тракт, органы эндокринной системы. Встречается также локализованная форма бруцеллеза. Она отмечается в 20-40 % случаев инфекции и характеризуется изолированным поражением какого-либо органа, например органов мочеполовой, нервной системы, сердца, а также поражением сустава. Как правило, локализованный бруцеллез – это последствие не распознанной ранее острой формы заболевания.

Диагностика бруцеллеза основана на эпидемиологических, клинических данных и результатах изменений лабораторных показателей. Следует отметить, что диагностика бруцеллеза затруднена из-за того, что заболевание может протекать в бессимптомной, хронической и локализованной форме.

Серологическая лабораторная диагностика бруцеллеза заключается в выявлении специфических антител против антигенов возбудителя Brucella spp. Данный метод обладает высокими показателями диагностической чувствительности и быстротой получения результата. На 6-7-й день от начала заболевания начинают синтезироваться специфические антитела класса IgM. На 2-й неделе заболевания преобладает синтез антител класса IgG, достигая максимального уровня, а затем в течение длительного времени сохраняясь в циркулирующей крови. Титры обоих классов антител непрерывно нарастают, достигая максимальных значений в течение четырех недель от начала инфицирования. Диагностически значимым является нарастание титра специфических антител не менее чем в 4 раза в парных сыворотках, взятых в первые дни болезни и через 2 недели от ее начала в свежем образце крови. Определение антител к Brucella spp. также рекомендуется для оценки эффективности проводимой терапии. При положительных эффектах лечения отмечается снижения уровня антител, в то время как сохранение высоких титров свидетельствует о неэффективности терапии.

Для чего используется исследование?

  • Для лабораторной серологической диагностики бруцеллеза.
  • Для диагностики острой, подострой, хронической форм бруцеллеза.
  • Для оценки эффективности проводимой терапии.

Когда назначается исследование?

  • При клинических проявлениях острой и подострой форм бруцеллеза: слабость, головная боль, длительная лихорадка с температурой 39-40 °С и выше с ознобами, лимфаденопатии, гепатоспленомегалия, артралгии, артриты, поражения сердечно-сосудистой, нервной систем.
  • При клинических проявлениях хронической формы бруцеллеза: интоксикация, артриты, артралгии, миалгии, миозиты, фиброзиты, целлюлиты, радикулиты, невралгии, васкулиты, миокардиты, эндокардиты.
  • При симптомах изолированных поражений органов урогенитального тракта, нервной системы, сердечно-сосудистой системы, опорно-двигательной системы, особенно в группе лиц с возможным профессиональным инфицированием (ветеринары, работники мясной промышленности, животноводства, сотрудники микробиологических лабораторий), в эндемичных по бруцеллезу районах.

Что означают результаты?

Референсные значения

Диагностический титр: 1:100.

Результат: отрицательный.

Причины положительного результата:

  • бруцеллез;
  • острая, подострая, хроническая форма бруцеллеза;
  • бруцеллез, протекающий в виде локализованных форм;
  • ложноположительные результаты.

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие бруцеллеза;
  • отсутствие или снижение иммунного ответа;
  • ранние сроки инфицирования;
  • проведение исследования на поздних сроках от момента возможного инфицирования, когда в крови отсутствуют антитела.

Что может влиять на результат?

  • Клинический период и форма заболевания.
  • Особенности иммунного ответа у новорождённых детей, пожилых людей и лиц с патологией иммунной системы.
 Скачать пример результата

Важные замечания

  • При серологическом исследовании чаще всего выявляют антитела к общему для многих микроорганизмов липополигосахариду, компоненту клеточной стенки бактерий. Могут отмечаться ложноположительные результаты при наличии инфекции Yersinia enterocolitica O:9, Salmonella urbana группа N, Vibrio cholerae, Francisella tularensis, Escherichia coli O:157, Stenotrophomonas maltophilia и некоторых других микроорганизмов.
  • Может быть рекомендовано определение генетического материала возбудителя методом полимеразной цепной реакции.

Также рекомендуется

[02-029] Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

[02-041] Клинический анализ крови с микроскопией лейкоцитарной формулы

[06-050] С-реактивный белок, количественно (высокочувствительный метод)

Кто назначает исследование?

Инфекционист, терапевт, хирург, врач общей практики, невролог, ревматолог, уролог, кардиолог.

Литература

  • Al Dahouk S, Sprague LD, Neubauer H. New developments in the diagnostic procedures for zoonotic brucellosis in humans / Rev Sci Tech. 2013 Apr;32(1):177-88.
  • Kassiri H, Amani H, Lotfi M.Epidemiological, laboratory, diagnostic and public health aspects of human brucellosis in western Iran / Asian Pac J Trop Biomed. 2013 Aug;3(8):589-94; discussion 593-4.
  • Шувалова Е.П. Инфекционные болезни / М.: Медицина. – 2005. – 696 с.
  • Fauci, Braunwald, Kasper, Hauser, Longo, Jameson, Loscalzo Harrison’s principles of internal medicine, 17th edition, 2009.

НОВЫЙ ПОДХОД К АЛЛЕРГОДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА | Пономаренко

1. Безопасность работы с микроорганизмами I–II групп патогенности (опасности). Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.1285-03 / Бюллетень нормативных и методических документов Госсанэпиднадзора. — Вып. 3 (13). — М., 2003. — С. 67–144.

2. Богачева Н.В., Дармов И.В., Елагин Г.Д., Крючков А.В., Тихвинская О.В. Современные лабораторные методы оценки эффективности проведения иммунизации против опасных и особо опасных инфекций // Клиническая лабораторная диагностика. — 2011. — № 6. — С. 39–42.

3. Вершилова П.А., Чернышова М.И., Князева Э.Н. Патогенез и иммунология бруцеллеза. — М., 1974. — 271 с.

4. Галактионов В.Г. Иммунология. — М., 2004. — 528 с.

5. Инструкция по применению аллергена бруцеллезного жидкого (бруцеллина), раствор для внутрикожного введения: № 01-11/198-06: утверждена Главным государственным санитарный врачом РФ Г.Г. Онищенко 22.11.06. — М., 2006.

6. Куличенко А.Н., Ракитина Е.Л., Пономаренко Д.Г., Логвиненко О.В., Рязанова А.Г. Использование теста активации базофилов с антраксином для лабораторной (in vitro) диагностики сибирской язвы // Проблемы особо опасных инфекций. — Вып. 3 (113). — С. 86–88.

7. Новиков П.Д., Новикова Н.Д. Диагностика аллергии в реакции выброса миелопероксидазы под влиянием аллергена // Иммунопатология, аллергология, инфектология. — 2002. — № 1. — С. 63–68.

8. Иммунопатология и аллергология. Алгоритмы диагностики и лечения / под ред. Р.М. Хаитова. — М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. — 112 с.

9. Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей: МУ 3.1.7.1189-03: утв. Главным государственным санитарный врачом РФ 30.01.2003).

10. Ройт A., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология: [пер. с англ.]. — М.: Мир, 2000. — 592 с.

11. Урбах В.Ю. Биометрические методы. — М.: Наука, 1964. — 410 с.

12. Almajid F.M. Lymphocyte activation test for diagnosis of seronegative brucellosis in humans // Indian J. Pathol. Microbiol. — 2011. — Vol. 54(4). — P. 775 –781.

13. Bercovich Z. The use of skin delayed-type hyper-sensitivity as an adjunct test to diagnose brucellosis in cattle: a review // Vet Q. — 2000. — Vol. 22(3). — P. 123–130.

14. Boura P., Skendros P., Kountouras J., Zacharioudaki E., Tsapas T. Effect of bacterial extracts on the immunologic profile in chronic relapsing brucellosis patients // Int. J. Immunopathol. Pharmacol. — 1999. — Vol. 12(2). — P. 103–111.

15. De Weck A.L., Sanz M.L., Gamboa P.M., Jermann J.M., Kowalski M., Medrala W., Sainte-Laudy J., Schneider M.S., Weber J.M., Wolanczyk-Medrala A. Nonsteroidal anti-inflammatory drug hypersensitivity syndrome: a multicenter study. II. Basophil activation by nonsteroidal anti-inflammatory drugs and its impact on pathogenesis // J. Investig. Allergol. Clin. Immunol. — 2010. — Vol. 20(1). — P. 39–57.

Лабораторная диагностика бруцеллеза животных

В веткабинете «Айболит» можно заказать лабораторную диагностику бруцеллеза животных. Бруцеллез представляет собой инфекционную болезнь, которой могут заразиться не только животные, но и человек. Нередко этой болезни подвержены собаки. Заболевание у собак протекает с такими симптомами, как повышенная температура и патология репродуктивных органов. Данная болезнь не так уж хорошо изучена, и нередко врачи диагностируют вместо нее другие инфекции. Однако лабораторная диагностика бруцеллеза у животных может помочь установить причину заболевания наиболее точно.

Возбудитель болезни

Болезнь возникает из-за попадания в организм животного таких бактерий, как бруцеллы вида канис. Они малоустойчивы к воздействиям внешней среды. Нагревание до 60 градусов способно убить их в течение 30-40 минут, а до 80-градусов – за 5 минут. От кипячения они умирают моментально. Также губительно действуют на них прямые солнечные лучи. Но в условиях низкой температуры и в органических материалах они могут сохраняться от 3 до 4 месяцев.

Восприимчивость животных

Лабораторная диагностика бруцеллеза животных показывает, что из домашних питомцев наиболее подвержены такому заболеванию именно собаки – вне зависимости от возраста, пола или породы. Проникновение в организм животного происходит через органы дыхания, через кожу, половые пути или через пищу. Однако наиболее часто собаки заражаются через желудочно-кишечный тракт из-за поедания инфицированных продуктов, таких как мясо или молоко. После того, как микроорганизмы попали в тело, кровеносная система разносит их во все паренхиматозные органы, такие как селезёнка, костный мозг и печень. Однако больше всего поражается половая система, из-за чего быстро развиваются воспалительные явления, протекающие хронически и с обострениями.

Симптомы и лечение

Клиническая картина у такого заболевания обычно не ярко выражена, и окончательный диагноз ставится только после лабораторной диагностики бруцеллеза у животного.  Наиболее яркий признак болезни – это бесплодие у кобелей и патологическая картина во время щенности у сук (щенки абортируется на 30-50-й день беременности или рождаются мёртвыми). После этого у сук долгое время продолжаются воспалительные процессы, протекающие в матке. Выделения из матки и плодные воды могут стать источником заражения для владельцев собак.

Лечение заболевания не разработано, на данный момент болезнь фактически неизлечима. Можно только ослабить симптоматику при помощи антибиотиков тетрациклинового ряда и иммуностимуляторов. Иногда хороший лечебный эффект может дать регулярный прием отвара печеной мяты.

Эффективной профилактики заболевания также не разработано на данный момент.

диагностика бруцеллеза в медицинской лаборатории «Оптимум» в Сочи (Адлер)

Серологическое исследование: Реакция Райта


Реакция Райта — это один из самых популярных методов диагностирования бруцеллеза во всех странах мира. Он имеет массу преимуществ: техника выполнения очень проста, чувствительность к возбудителю — высокая и кроме того показывает наличие титров в самом начале заболевания. После седьмого дня болезни реакция достигает самого высокого значения; показатели сохраняются в течение нескольких лет.

Реакция Райта используется как для диагностирования острого периода заболевания, так и для выяснения того, болел ли пациент бруцеллезом ранее.

Сроки выполнения до 7-8 дней
   
Синонимы (rus) Иммунные антитела к антигену  бруцеллеза, анализ крови на бруцеллез
   
Cинонимы (eng) agglutination Wright, Brucella
   
Методы анализа
Реакция агглютинации Райта
   
Подготовка к проведению анализа Сдача крови натощак в утренние часы.
Следует отказаться от спиртных напитков и курения перед анализом.
Рекомендуется ограничить физические нагрузки за неделю перед тестом.
   
Биоматериал и способы его взятия
Для исследования необходима венозная кровь
Бруцеллез — инфекционная зоонозная болезнь с долговременным рецитирующим течением, может протекать в острой и хронической форме. Возбудителями являются бактерии рода Brucella.

В период первичного заболевания пациент жалуется на высокую температуру тела; при врачебном осмотре отмечается увеличение лимфатических сосудов, а также увеличение крупных суставов. Кроме того, больной может ощущать сильную потливость даже при незначительных физических нагрузках.

Основными носителями Brucell являются крупный рогатый скот (Brucella melitensis), овцы и козы (Brucella abortus), свиньи (Brucella suis). Возбудитель от больных животных выделяется с испражнениями, мочой и молоком. Путь заражения человека — контактно-бытовой или через молочные продукты. Как правило заболевание носит профессиональный характер (часто болеют ветеринарные работники, доярки и скотоводы). Лабораторная диагностика бруцеллеза проводится с помощью реакции агглютинации Райта. Метод исследования впервые был открыт в 1897 году английским бактериологом и инфекционистом А. Райтом.

Специалист назначает пациенту анализ Райта в том случае, когда имеются признаки бруцеллеза:
  • суставная боль в коленях и локтях, а также визуальное увеличение их размеров;
  • болезненные судороги нижних конечностей;
  • высокая температура тела без явных признаков простуды;
  • повышенная усталость, быстрая утомляемость;
  • чрезмерное выделение пота;
  • нервозность, нарушение сна, повышенная раздражительность.

Вышеперечисленные признаки не всегда свидетельствуют о наличии бруцеллеза, однако для исключения инфекции все же рекомендуется сдать анализ.

Таблица 1. Расшифровка полученных данных анализа

Референсные значения могут отличаться в лабораториях в связи с применением разных марок оборудования для проведения исследования.

Очень важно вовремя распознать и диагностировать заболевание, чтобы скорее приняться за лечение.

Помните: Выявление инфекции на ранней стадии увеличивает шансы скорейшего выздоровления!

Инструкция 10-19-65- 2005 «лабораторная диагностика бруцеллеза у людей»

ПОСТАНОВЛЕНИЕ № 185

Об утверждении Инструкции

4.2. 10-19-65- 2005 «Лабораторная диагностика бруцеллеза у людей»
В целях исполнения Закона Республики Беларусь «О санитарно-эпидемическом благополучии населения» в редакции от 23 мая 2000 года (Национальный реестр правовых актов Республики Беларусь, 2000 г., № 52, 2/172) постановляю:

1. Утвердить прилагаемую Инструкцию 4.2. 10-19-65- 2005 «Лабораторная диагностика бруцеллеза у людей» и ввести ее в действие на территории Республики Беларусь с 3 января 2006 г.

2. С момента введения в действие Инструкции 4.2. -19-65- 2005 «Лабораторная диагностика бруцеллеза у людей» не применять на территории Республики Беларусь «Методические указания по профилактике и лабораторной диагностике бруцеллеза людей» № 28-1/6, утвержденные Начальником Главного управления карантинных инфекций Министерства здравоохранения СССР 21 января 1980 г.

3. Главным государственным санитарным врачам областей и г.Минска довести данное постановление до сведения всех заинтересованных и установить контроль за его выполнением.

М.И. Римжа

УТВЕРЖДЕНО

Постановление

Главного государственного

санитарного врача

Республики Беларусь

21 ноября 2005 № 185

Инструкция 4.2. 10-19-65- 2005

«ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА У ЛЮДЕЙ»

РАЗДЕЛ I

ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ

ГЛАВА 1

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

1. Настоящая Инструкция разработана для организации государственного санитарного надзора в части, касающейся проведения лабораторной диагностики бруцеллеза у людей.

2. Настоящая Инструкция предназначена для специалистов бактериологических лабораторий органов и учреждений государственного санитарного надзора, других организаций здравоохранения в части, отнесенной к их компетенции.
ГЛАВА 2

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ О ВОЗБУДИТЕЛЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ

3. Бруцеллез — острое инфекционно-аллергическое, зоонозное заболевание с высокой потенциальной возможностью перехода в хроническую форму. Возбудитель бруцеллеза относится ко второй группе патогенности. Человек в любом возрасте высоко восприимчив к бруцеллезу. Заболевание длительное, трудно поддающееся лечению, поражает практически все органы и системы организма и, как правило, сопровождается хронизацией инфекционного процесса с нередко последующей инвалидностью больного.

4. Возбудителем бруцеллеза являются микроорганизмы, относящиеся к роду Brucella. По международной классификации род Brucella состоит из шести самостоятельных видов, которые подразделяются на ряд биоваров. Так, B.melitensis состоит из трех биоваров, носителями которых являются козы и овцы. B.abortus представлен семью биоварами, основной хозяин возбудителя – крупный рогатый скот. B.suis состоит из пяти биоваров, основной хозяин – свиньи, однако носителем 2-го биовара являются также зайцы, 4-го биовара – олени, а 5-го — мышевидные грызуны. B.neotomae была обнаружена у пустынных кустарниковых крыс. B.ovis выделяется от овец, а B.canis – от собак.

Бруцеллы относятся к патогенным микроорганизмам. Разные виды бруцелл и даже разные штаммы одного и того же вида отличаются неодинаковой вирулентностью. Наиболее патогенны для человека бруцеллы вида B.melitensis, которые нередко вызывают эпидемические вспышки заболевания B.abortus и B.suis вызывают, как правило, спорадические, клинически выраженные случаи заболевания. Что касается B.ovis, B.neotomae и B.canis, то известны случаи заболевания людей, заразившихся от собак бруцеллами вида В.canis, однако эпидемиологическая значимость этих видов бруцелл до конца не изучена.

Бруцеллы всех шести видов практически не отличимы друг от друга по морфологическим признакам. Бруцеллы – микроорганизмы шаровидные, овоидной или палочковидной формы. Размеры бруцелл в среднем равны 0,3-0,6 мкм для кокковых форм и 0,6-2,5 мкм для палочковидных. Спор не образуют, жгутиков не имеют, не подвижны. Красятся анилиновыми красками. При определенных условиях (воздействие специфическим бактериофагом, выращивание на средах с добавлением 10% иммунной сыворотки и тому подобное) образуют капсулу, грамотрицательны, характеризуются замедленным ростом на питательных средах, некоторые штаммы требуют для роста добавления 5-10% CO2, особенно при первоначальном выделении. Оптимальная температура для роста бруцелл 370С, оптимальная рН – 6,8-7,2. Бруцеллы подвержены изменчивости и могут переходить из S –формы в R – и L- формы.

Бруцеллы обладают высокой инвазивностью и могут проникать через неповрежденные слизистые покровы, относятся к внутриклеточным паразитам, но могут также находиться вне клетки.

Бруцеллы мало устойчивы к высокой температуре. В жидкой среде при +600С они погибают через 30 мин., при +80 – 850С – через 5 мин., при кипячении моментально. Обладают большой устойчивость к воздействиям низких температур, длительно сохраняются в пищевых продукта, в том числе хранящихся в холодильниках и морозильных камерах. Под воздействием прямых солнечных лучей бруцеллы гибнут через 4-5 часов, в почве сохраняют жизнеспособность до 100 дней, в воде – до 114 дней.

5. Возбудитель бруцеллеза патогенен для человека и многих видов животных. Основным источником инфекции для людей являются овцы, козы, крупный рогатый скот и свиньи. Отдельные животные остаются носителями бруцелл и выделяют их в течение 5 лет и более. Пути распространения бруцеллеза многообразны, так как бруцеллы выделяются больными животными через все выделительные системы. Распространять возбудителя инфекции могут и животные, не имеющие клинических проявлений бруцеллеза, но положительно реагирующие на бруцеллез. Передача возбудителя бруцеллеза и заражение людей происходит контактным, алиментарным и реже – аэрогенным путем, возможны сочетанные пути передачи.
РАЗДЕЛ II

ОРГАНИЗАЦИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ ОРГАНИЗАЦИИ ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

6. Диагностические исследования на бруцеллез в регламентированном объеме проводятся лабораториями диагностики особо опасных инфекций Республиканского центра гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья (далее – РЦГЭ и ОЗ), областных центров гигиены, эпидемиологии и общественного здоровья (далее – ОЦГЭ и ОЗ), бактериологическими лабораториями инфекционных больниц и инфекционных отделений.

7. Организация и выполнение диагностических исследований на бруцеллез в лабораториях должны осуществляться в соответствии с требованиями, регламентирующими:

безопасность работы с микроорганизмами I- II групп патогенности, вся работа по выделению и дифференциации бруцелл из любого исследуемого материала должна проводиться в условиях, предупреждающих возможность инфицирования персонала и обсеменения возбудителем объектов внешней среды;

порядок учета, хранения, передачи и транспортировки микроорганизмов I-IV групп патогенности согласно Руководству «Порядок учета, хранения, передачи и транспортировки микроорганизмов I-IV групп патогенности» № 11-7-13-2002, утвержденному Главным государственным санитарным врачом Республики Беларусь 30 декабря 2002 г.

Забор материала от больных с подозрением на бруцеллез производится медицинскими работниками инфекционного стационара, где госпитализирован больной.
ГЛАВА 4

МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ И ЕГО РАСТВОРИМЫХ АНТИГЕНОВ

8. Для лабораторной диагностики бруцеллеза у людей применяются три группы методов:

выявление возбудителя заболевания и его растворимых антигенов;

определение специфических антител;

выявление сенсибилизации организма к бруцеллезным антигенам.

9. Характерной особенностью рода Brucella является медленный рост на питательных средах, особенно в первых генерациях. При посевах крови, костного мозга и мочи культуры бруцелл обнаруживаются через 5-10 дней, а иногда через 20-30 дней после засева. При этом первые генерации культур В.abortus и B.ovis способны расти только при наличии в атмосфере повышенного содержания углекислоты (5-10%). Биовары В.abortus 5, 6 и 7 могут расти в обычных аэробных условиях.

Для выделения культур бруцелл рекомендуются следующие среды:

сывороточно-декстрозный агар, агар из картофельного настоя + сыворотка и кровяной агар (5% овечьей крови в среде), Albimi — агар, среда «Д»;

печеночные и мясопептонные агары и бульоны (рН сред — 6,8-7,2). Рецепты питательных сред указаны в приложении 1 к настоящей Инструкции.

Реагенты и среды, используемые для диагностики, должны быть стандартизованы и лицензированы с указанием сроков годности.

10. Исследование крови и другого биологического материала.

Посевы крови рекомендуется делать во время лихорадочного состояния больного, так как, в этот период наблюдается наибольший процент выделения культур. Однако не исключена возможность получения гемокультуры и при нормальной температуре. Кровь для посева следует брать до лечения антибиотиками. Посевы крови рекомендуется проводить во флаконы (желательно прямоугольные) емкостью 100-200 мл, в которые наливают по 30-50 мл агара. После стерилизации их укладывают так, чтобы агар застыл на одной из сторон флакона. Затем в каждый флакон стерильно добавляют по 25-30 мл предварительно простерилизованного бульона и выдерживают в термостате при 370С в течение 2-3 суток (агар с бульоном может быть использован не позднее 5-7 дней). Посев крови, пунктатов костного мозга и лимфоузлов производят на питательную среду сразу же после застывания агара и добавления бульона (метод предложен лабораторией бруцеллеза Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи Российской академии медицинских наук ).

Кровь в количестве не менее 10 мл стерильно берут шприцем из локтевой вены и засевают по 5 мл в два флакона. Один из флаконов инкубируют при повышенном содержании углекислоты (5-10%), а другой — в обычных условиях. Начиная с четвертого дня после посева, флаконы просматривают и при отсутствии роста культуры поверхность агара орошают бульоном. При положительном результате на поверхности агара появляются колонии бруцелл. Если в течение месяца бруцеллы не обнаруживаются, то в этом случае делают контрольный высев из бульона на твердую питательную среду. При бактериологическом обследовании больных, прошедших курс лечения антибиотиками, через 1 месяц и спустя 4-6 месяцев после окончания курса антибиотикотерапии, а также больных хронической формой бруцеллеза в период обострения (особенно при субфебрилитете) перед началом лечения рекомендуется проводить посевы крови, пунктатов костного мозга и лимфатических узлов на специальную питательную среду для выделения L-культур бруцелл (состав питательной среды указан в приложении 1 к настоящей Инструкции).

Способ посева бактериологического материала для выделения L-культур идентичен с методом выделения бактериальных гемокультур. Посевы выдерживаются в термостате не менее 35-40 дней.

11. Бруцеллы можно выделить также из костного мозга, мочи, спинномозговой жидкости, экссудата из бурситов, грудного молока, желчи, мокроты, трупного материала и так далее. Посевы проводят на твердые и жидкие питательные среды. В случаях исследования загрязненного материала для задержки роста посторонней микрофлоры к среде следует добавлять генцианвиолет из расчета 1:200000. С этой целью также добавляют различные антибиотики, в частности полимиксин — 3 мкг/мл и амфоглюкамин — 3 мкг/мл.

12. Биологический метод. Для выделения бруцелл из материалов, загрязненных посторонней микрофлорой и при малой концентрации бруцелл в исследуемом материале, используются морские свинки (весом 300-350 г) или белые мыши (весом 17-18 г). Исследуемый материал вводят подкожно в паховую область в дозах не более 0,5 мл для мышей и 1 мл для морских свинок.

Вскрытие белых мышей производится через 20-25 дней, а морских свинок — через 30-35 дней после введения исследуемого материала. Перед вскрытием у свинок следует взять кровь из сердца для исследования сыворотки в реакции агглютинации. Для посевов у морских свинок берут целиком лимфатические узлы (регионарные к месту введения исследуемого материала): паховые, подчелюстные, шейные, парааортальные, кусочки селезенки, печени, костный мозг, кровь, мочу; у белых мышей лимфатические узлы: паховые, акселярные, парааортальные, подчелюстные, кусочки селезенки и печени. Лимфатические узлы, кусочки печени и селезенки помещают в стерильную чашку. Костный мозг для засева берут пипеткой из рассеченной бедренной кости. Посевы крови из сердца, а также мочи и костного мозга производят стерильной пипеткой непосредственно на питательные среды (агар и бульон). Лимфатические узлы животных перед посевом рекомендуется надсекать ножницами. После этого каждый лимфатический узел и кусочки органов (по возможности больше) берут «уколом» стерильной деревянной палочки (палочка должна быть длиной 25-30 см, диаметром 4-5 мм, хорошо отструганная, с несколько заостренным концом) и вносят первоначально в пробирку с агаром, где той же палочкой материал раздавливают и тщательно втирают в поверхность питательной среды. Затем остатки посевного материала переносят в пробирку с бульоном. После использования палочки погружают на 1 час в дезраствор (5% раствор фенола), затем автоклавируют, после чего тщательно промывают и стерилизуют для последующего употребления. Посевы выдерживают при 370С в термостате 20-25 дней. Просмотр посевов на пробирках с агаром и бульоном производят каждые 3-4 дня, из помутневших бульонов делают высевы на пробирки со скошенным агаром.

Результат исследования оценивается положительно при выделении хотя бы одной колонии бруцелл из организма животного или при наличии положительной реакции Райта у животных в титре не менее 1:20.

ГЛАВА 5

МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ БРУЦЕЛЛ

13. Для определения принадлежности выделенных культур к роду Brucella можно использовать методы:

изучение морфологии колоний;

микроскопия окрашенных препаратов по Граму или Козловскому;

люминесцентная микроскопия;

проба со специфической сывороткой в реакции агглютинации на стекле.

14. Морфология колоний. Колонии бруцелл на агаре бесцветны, выпуклы (холмиком), с гладкой поверхностью, гомогенны, иногда с нежной зернистостью в центре колонии. С возрастом нежные и прозрачные колонии постепенно мутнеют.

Величина колоний может быть различной. Наряду с крупными, достигающими в диаметре 3-4 мм и больше, могут быть очень мелкие -точечные колонии 0,1-0,05 мм. Различные факторы (рН питательной среды, влажность, наличие бактериофага в культуре и др.), влияющие на биологию культуры, могут привести также к изменению внешнего вида колоний (встречаются зернистые, стекловидные колонии, растущие в толще агара, эрозированные, сухие, слизистые, радиально исчерченные и другие).

Для изучения структуры колоний целесообразно использовать стереоскопическую лупу МБС-1 или обычный микроскоп с объективом наименьшего увеличения.

15. Микроскопия окрашенных препаратов. При окраске по Граму бруцеллы грамотрицательны (окрашиваются в красный цвет). Окрашивание препаратов по способу Козловского: препараты, фиксированные на пламени горелки или спиртовки, окрашивают 0,5% водным раствором сафранина при подогревании до появления пузырьков, промывают дистиллированной водой и докрашивают 0,5%-ным водным раствором малахитовой или бриллиантовой зелени в течение 40-50 секунд. Бруцеллы сохраняют красную окраску сафранина, а остальные бактерии окрашиваются в зеленый цвет.

16. Проба со специфической сывороткой. Для предварительной, быстрой идентификации ставят реакцию агглютинации на стекле. На предметное стекло наносят каплю специфической сыворотки, разведенной 1:25 0,5% карболизированным физиологическим раствором, в которой эмульгируется одна петля исследуемой культуры. В положительных случаях быстро (в течение 1 минуты) наступает агглютинация с образованием хорошо выраженных хлопьев, в отрицательных — суспензия остается гомогенной. Для контроля исследуемую культуру эмульгируют в капле нормальной сыворотки или физиологическом растворе.

17. При люминесцентной микроскопии в положительных случаях наблюдается специфическое свечение клеток возбудителя на 3-4 креста по периферии микробной клетки, центральная часть при этом остается неокрашенной. Реакция иммунофлюоресценции, прямой метод указан в пунктах 41 – 43 главы 10 настоящей Иструкции.

Бруцеллез — Диагностика и лечение

Диагноз

Врачи обычно подтверждают диагноз бруцеллеза, исследуя кровь или костный мозг на бактерии бруцеллы или анализируя кровь на антитела к этим бактериям. Чтобы помочь обнаружить осложнения бруцеллеза, ваш врач может назначить дополнительные тесты, в том числе:

  • Рентгеновские снимки. Рентген может выявить изменения в ваших костях и суставах.
  • Компьютерная томография (КТ) или магнитно-резонансная томография (МРТ). Эти визуализационные тесты помогают выявить воспаление или абсцессы в головном мозге или других тканях.
  • Посев спинномозговой жидкости. Это позволяет проверить небольшой образец жидкости, окружающей головной и спинной мозг, на наличие таких инфекций, как менингит и энцефалит.
  • Эхокардиография. В этом тесте используются звуковые волны для создания изображений вашего сердца для выявления признаков инфекции или повреждения сердца.

Дополнительная информация

Показать дополнительную связанную информацию

Лечение

Лечение бруцеллеза направлено на облегчение симптомов, предотвращение рецидива заболевания и избежание осложнений.Вам нужно будет принимать антибиотики не менее шести недель, и ваши симптомы могут не исчезнуть полностью в течение нескольких месяцев. Заболевание также может вернуться и перейти в хроническую форму.

Подготовка к приему

Если вы подозреваете, что у вас бруцеллез, вы, скорее всего, начнете с посещения семейного врача или терапевта. Вас могут направить к инфекционисту.

Диагноз бруцеллеза зависит от понимания того, подвергались ли вы воздействию бактерий, вызывающих болезнь, как и когда. Вы можете помочь своему врачу, подготовив как можно больше информации.

Что вы можете сделать

Перед встречей вы можете написать список ответов на следующие вопросы:

  • Когда у вас впервые появились симптомы?
  • Вы ели сырые (непастеризованные) молочные продукты, например, молоко или козий сыр?
  • Ваша работа связана с животными или с тканями животных?
  • Были ли вы в прошлом году в других странах, кроме США?
  • Вы работаете в лаборатории, где присутствуют инфекционные организмы?
  • Вы недавно ходили на охоту?

Чего ожидать от врача

Во время медицинского осмотра ваш врач может:

  • Попросить пошевелить суставами, чтобы проверить на боль и скованность
  • Проверьте свои рефлексы и силу мышц
  • Надавите на живот, чтобы определить, увеличены ли органы или нежные

Сентябрь25, 2021

Показать ссылки
  1. Бруцеллез. Центры по контролю и профилактике заболеваний. https://www.cdc.gov/brucellosis/index.html. Проверено 19 июля 2019 г.
  2. Джеймсон Дж. Л. и др., Ред. Бруцеллез. В: Принципы внутренней медицины Харрисона. 20-е изд. Нью-Йорк, штат Нью-Йорк: компании McGraw-Hill; 2018. https://accessmedicine.mhmedical.com. Проверено 19 июля 2019 г.
  3. AskMayoExpert. Лейкопения (взрослая). Рочестер, Миннесота: Фонд Мейо медицинского образования и исследований; 2018.
  4. AskMayoExpert. Периодическая лихорадка (у ребенка). Рочестер, Миннесота: Фонд Мейо медицинского образования и исследований; 2018.
  5. AskMayoExpert. Приливы и потливость в неменопаузе (взрослые). Рочестер, Миннесота: Фонд Мейо медицинского образования и исследований; 2018.
  6. Ян X. Бруцеллез. В: Текущая терапия Конна 2019. Elsevier; 2019. https://www.clinicalkey.com. Проверено 19 июля 2019 г.
  7. Ryan, ET, et al., Eds. Бруцеллез. В: Тропическая медицина Хантера и новые инфекционные болезни.10-е изд. https://www.clinicalkey.com. Доступ 31 июля 2019 г.
  8. Безопасная минимальная температура приготовления. Министерство здравоохранения и социальных служб США. https://www.foodsafety.gov/food-safety-charts/safe-minimum-cooking-temperature. Доступ 30 июля 2021 г.

Связанные

Связанные процедуры

Показать другие связанные процедуры

Продукты и услуги

Показать больше продуктов и услуг Mayo Clinic

Рассмотрение подходов, лабораторные исследования, радиография

Автор

Николас Джон Беннетт, MBBCh, PhD, FAAP, MA (Cantab) Доцент педиатрии, содиректор отдела управления противомикробными препаратами, медицинский директор, Отделение детских инфекционных заболеваний и иммунологии Детского медицинского центра Коннектикута

Николас Джон Беннетт, MBBCh, PhD, FAAP, MA (Cantab) является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американская академия педиатрии

Раскрытие информации: получил исследовательский грант от: Cubist
Полученный доход в размере не менее чем 250 долларов от: Horizon Pharmaceuticals, Shire
Юридические консультации по вопросам Medico: Разн.

Соавтор (ы)

Мишель В. Лисгарис, доктор медицины Доцент медицины, Медицинский факультет Университета Кейс Вестерн Резерв

Мишель В. Лисгарис, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей, Американской медицинской ассоциации, Общества инфекционных болезней Америки , Общество эпидемиологии здравоохранения Америки

Раскрытие информации: нечего раскрывать.

Роберт Салата, доктор медицины, FACP, FIDSA STERIS Кафедра передового опыта в медицине, профессор и председатель медицинского факультета Медицинского факультета Университета Кейс Вестерн Резерв; Главный врач, главный врач по инфекционным заболеваниям, Университетские больницы, Медицинский центр Кливленда,

Роберт А. Салата, доктор медицины, FACP, FIDSA является членом следующих медицинских обществ: Американской ассоциации иммунологов, Американской федерации медицинских исследований, Американской медицинской Ассоциация, Центральное общество клинических и трансляционных исследований, Американское общество инфекционных заболеваний, Медицинская ассоциация штата Огайо, Общество эпидемиологии здравоохранения Америки

Раскрытие информации: нечего раскрывать.

Главный редактор

Майкл Стюарт Бронз, доктор медицины Дэвид Росс Бойд Профессор и председатель медицинского факультета, кафедра внутренней медицины, кафедра медицины, Научный центр здравоохранения Университета Оклахомы; Магистр Американского колледжа врачей; Научный сотрудник Американского общества инфекционных болезней; Член Королевского колледжа врачей, Лондон

Майкл Стюарт Бронз, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американский колледж врачей, Американская медицинская ассоциация, Ассоциация профессоров медицины, Общество инфекционных болезней Америки, Государственная медицинская ассоциация Оклахомы, Южное общество клинических исследований

Раскрытие информации: Ничего не раскрывать.

Дополнительные участники

Вафа Аль-Насир, MBBS Консультант по инфекционным заболеваниям, Управление здравоохранения Национальной гвардии, Саудовская Аравия

Вафа Аль-Насир, MBBS является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей, Американского общества инфекционистов

Раскрытие информации : Нечего раскрывать.

Благодарности

Валид Абухаммур, доктор медицины, FAAP Профессор педиатрии Медицинского колледжа Мичиганского государственного университета; Директор педиатрического инфекционного отделения педиатрического отделения Hurley Medical Center

Валид Абухаммур, доктор медицины, FAAP является членом следующих медицинских обществ: Американской медицинской ассоциации, Американского общества инфекционистов и Общества педиатрических инфекционных болезней

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Джеффри Д. Бэнд, доктор медицины Профессор медицины Оклендского университета Медицинская школа Уильяма Бомонта; Директор отдела инфекционных болезней и международной медицины, корпоративный эпидемиолог, больница Уильяма Бомонта; Клинический профессор медицины, Медицинский факультет Государственного университета Уэйна

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Николас Джон Беннет, MB, BCh, PhD Научный сотрудник педиатрических инфекционных болезней, педиатрический факультет, Медицинский университет штата Нью-Йорк, штат Нью-Йорк,

Николас Джон Беннет, MB, BCh, PhD является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha и Американской академии педиатрии

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Ицхак Брук, доктор медицины, магистр наук Профессор кафедры педиатрии Медицинской школы Джорджтаунского университета

Ицхак Брук, доктор медицины, магистр наук является членом следующих медицинских обществ: Американской ассоциации содействия развитию науки, Американского колледжа врачей — Американского общества внутренней медицины, Американской федерации клинических исследований, Американской медицинской ассоциации, Американского общества микробиологии, Общество инфекционных заболеваний вооруженных сил, Ассоциация военных хирургов США, Американское общество инфекционных заболеваний, Международное принимающее общество с ослабленным иммунитетом, Международное общество инфекционных заболеваний, Медицинское общество округа Колумбия, Нью-Йоркская академия наук, Общество детских инфекционных болезней, Общество по развитию ушей, носа и горла у детей, Общество экспериментальной биологии и медицины, Общество педиатрических исследований, Южная медицинская ассоциация и Общество хирургических инфекций

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Роберт Дж. Дарлинг, доктор медицины, FACEP Адъюнкт-клинический доцент военной и неотложной медицины, Медицинский университет военной службы, Медицинская школа Эдварда Хеберта; Заместитель директора Центра медицины катастроф и гуманитарной помощи

Роберт Дж. Дарлинг, доктор медицины, FACEP является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей скорой помощи, Американской медицинской ассоциации, Американской ассоциации телемедицины и Ассоциации военных хирургов США

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Джозеф Домачовски, доктор медицины Профессор педиатрии, микробиологии и иммунологии, кафедра педиатрии, отделение инфекционных болезней, Медицинский университет штата Нью-Йорк, штат Нью-Йорк,

Джозеф Домачовске, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Alpha Omega Alpha, Американская академия педиатрии, Американское общество микробиологии, Американское общество инфекционных болезней, Общество педиатрических инфекционных болезней и Phi Beta Kappa

.

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Рональд А. Гринфилд, доктор медицины Профессор кафедры внутренней медицины Медицинского колледжа Университета Оклахомы

Рональд Гринфилд, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей, Американской федерации медицинских исследований, Американского общества микробиологии, Центрального общества клинических исследований, Американского общества инфекционных болезней, Американского общества медицинской микологии, Фи Бета Каппа, Южное общество клинических исследований и Юго-западная ассоциация клинической микробиологии

Раскрытие информации: Pfizer Honoraria Выступление и обучение; Gilead Honoraria Выступление и обучение; Орто Макнил Гонорария Выступление и преподавание; Abbott Honoraria Выступление и преподавание; Астеллас Хонорария Выступление и обучение; Кубистская Гонорария Выступление и преподавание; Лесная фармацевтика Выступление и обучение

Джеральд Э. Мэлони-младший, DO, FAAEM Старший преподаватель, Отделение неотложной медицины, Медицинский факультет Университета Кейс Вестерн Резерв; Директор медицинской токсикологии отделения неотложной медицинской помощи; Заместитель медицинского директора, MetroLifeFlight, Медицинский центр MetroHealth, Кливленд, Огайо

Джеральд Э. Мэлони-младший, доктор медицинских наук, FAAEM является членом следующих медицинских обществ: Американской академии клинической токсикологии, Американской академии неотложной медицины, Американского колледжа врачей неотложной помощи, Американского колледжа медицинской токсикологии, Американского колледжа врачей неотложной помощи остеопатии, Американского Остеопатическая ассоциация и Общество академической неотложной медицины

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Джерри Л. Мазерхед, доктор медицины Консультант по вопросам медицинской готовности, Группа медицинской готовности и реагирования, Мемориальный институт Баттелла; Советник Технического консультативного комитета, Группа стратегического здравоохранения по управлению чрезвычайными ситуациями, Управление здравоохранения ветеранов; Адъюнкт-профессор кафедры военной и неотложной медицины Университета медицинских наук военнослужащих

Джерри Л. Мазерхед, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей скорой помощи и Национальной ассоциации врачей скорой помощи

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Khaled Nashar, MD Инструктор по клинической внутренней медицине, отделение госпиталистической медицины, отделение общей внутренней медицины, медицинский факультет, Медицинский центр Университета Питтсбурга

Халед Нашар, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американского колледжа врачей, Американской медицинской ассоциации и Американского общества гипертонии

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Роберт Стэнли Раст-младший, доктор медицины, магистр медицины Томас Уоррелл-младший, профессор эпилептологии и неврологии, содиректор клиники детской неврологии и эпилепсии FE Dreifuss, директор детской неврологии медицинского факультета Университета Вирджинии; Избранный председатель секции детской неврологии Американской академии неврологии

Роберт Стэнли Раст младший, доктор медицины, магистр медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американского общества эпилепсии, Американского общества головной боли, Американской неврологической ассоциации, Общества детской неврологии, Международной ассоциации детской неврологии и Общества педиатрических исследований

.

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Марк Р. Шлейсс, доктор медицины Кафедра педиатрии Американского легиона, профессор педиатрии, директор отделения инфекционных болезней и иммунологии, кафедра педиатрии, Медицинская школа Университета Миннесоты

Марк Р. Шлейс, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американского педиатрического общества, Американского общества инфекционных болезней, Общества педиатрических инфекционных болезней и Общества педиатрических исследований

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Аашит К Шах, доктор медицины Профессор неврологии, директор комплексной программы по эпилепсии, директор программы стипендии по клинической нейрофизиологии, Детройтский медицинский центр, Медицинский факультет Государственного университета Уэйна

Аашит К. Шах, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американского общества клинической нейрофизиологии, Американского общества эпилепсии и Американской неврологической ассоциации

.

Раскрытие информации: UCB pharma Оплата за консультацию Выступление и обучение

Russell W. Steele, MD Руководитель отделения детских инфекционных болезней Детского оздоровительного центра Ochsner; Клинический профессор кафедры педиатрии медицинского факультета Тулейнского университета

Рассел Стил, доктор медицины, является членом следующих медицинских обществ: Американской академии педиатрии, Американской ассоциации иммунологов, Американского педиатрического общества, Американского общества микробиологов, Американского общества инфекционных болезней, Медицинского общества штата Луизиана, Общества педиатрических инфекционных болезней, Общество педиатрических исследований и Южная медицинская ассоциация

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Франсиско Талавера, фармацевт, доктор философии Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

Раскрытие информации: Medscape Salary Employment

Флориан П. Томас, доктор медицины, магистр медицины, доктор медицинских наук, доктор медицинских наук Директор Регионального центра передового опыта по РС, Медицинский центр по делам ветеранов Сент-Луиса; Директор Центра рассеянного склероза Национального общества рассеянного склероза; Директор Центра передового опыта Ассоциации невропатологов, профессор кафедры неврологии и психиатрии, доцент Института молекулярной вирусологии Медицинского факультета Университета Сент-Луиса

Флориан П. Томас, MD, MA, PhD, Drmed является членом следующих медицинских обществ: Американской академии неврологии, Американской неврологической ассоциации, Американского общества параплегии, Консорциума центров рассеянного склероза, Национального общества рассеянного склероза и Sigma Xi

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Мэри Л. Виндл, PharmD Адъюнкт-профессор, Фармацевтический колледж Медицинского центра Университета Небраски; Главный редактор Medscape Drug Reference

Раскрытие: Ничего не нужно раскрывать.

Лабораторная диагностика бруцеллеза — ScienceDirect

https://doi.org/10.1016/j.pid.2016.03.006Получить права и содержание

Резюме

Бруцеллез — широко распространенное зоонозное заболевание, представляющее серьезную проблему для общественного здравоохранения, особенно в развивающихся странах.Диагностика бруцеллеза представляет собой более сложную задачу, поскольку требует высокого индекса подозрительности, клинических и лабораторных доказательств диагноза. Увеличение числа поездок по миру в эндемичные районы для работы и развлечений за последние несколько лет привело к увеличению диагностических проблем в неэндемичных странах.

Лабораторная диагностика бруцеллеза необходима для диагностики и эффективного лечения, так как в отличие от многих других инфекций в ней используются два или более лекарств в течение длительного периода времени. Среди различных доступных тестов культивирование организма из костного мозга, крови и других тканей является золотым стандартом диагностики бруцеллеза.Однако это инвазивно, требует много времени и временами менее чувствительно. Эти недостатки побудили использовать альтернативные методы для быстрой и точной диагностики бруцеллеза и помощи в раннем вмешательстве или терапии.

Альтернативные методы преимущественно включают серологические тесты, такие как иммуноферментный анализ, тестирование агглютинации сыворотки и молекулярные тесты с различными преимуществами и недостатками, подходящими для различных клинических ситуаций. Эти тесты помогают не только в диагностике, но и в отслеживании активности заболевания / реакции на терапию.В этой статье рассматриваются различные методы культивирования, серологические тесты и новейшие методы диагностики, доступные для лабораторной диагностики бруцеллеза, а также их преимущества и недостатки.

Ключевые слова

Бруцеллез

Серологические тесты

Культура крови

Бруцеллезные маркеры

Центрифугирование лизиса

ELISA

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

Посмотреть полный текст индийской академии педиатрии

.Опубликовано Elsevier B.V.Все права защищены.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Лабораторные диагностические процедуры при бруцеллезе человека: обзор существующих подходов | Джундишапурский журнал микробиологии

  • 1.

    Паппас Г., Пападимитриу П., Акритидис Н., Христу Л., Цианос Е.В. Новая глобальная карта бруцеллеза человека. Ланцет Инфекция Дис . 2006; 6 (2): 91-9. DOI: 10.1016 / S1473-3099 (06) 70382-6. [PubMed: 16439329].

  • 2.

    Лусеро NE, Айяла С.М., Эскобар Г.И., Джейкоб Н.Р. Brucella, выделенная у людей и животных в Латинской Америке с 1968 по 2006 год. Epidemiol Infect . 2008; 136 (4): 496-503. DOI: 10.1017 / S0950268807008795. [PubMed: 17559694]. [PubMed Central: PMC2870831].

  • 3.

    Вольфрам Дж. Х., Бутаев М.К., Дуйшеев А., Габбасова А.Р., Хасанов О.С., Кулаков Ю.К. и др. Глава эпидемиологии. Вакцина . 2010; 28 Дополнение 5 : F77-84.DOI: 10.1016 / j.vaccine.2010.04.050. [PubMed: 20850689].

  • 4.

    Алави С.М., Алави Л. Лечение бруцеллеза: систематический обзор исследований за последние двадцать лет. Каспиан Дж. Интерн Мед. . 2013; 4 (2): 636-41. [PubMed: 24009951]. [PubMed Central: PMC3755828].

  • 5.

    Демиртурк Н., Демирдал Т., Эрбен Н., Демир С., Аски З., Килит Т.П. и др. Бруцеллез: ретроспективная оценка 99 случаев и обзор лечения бруцеллеза. Тропическая Доктрина . 2008; 38 (1): 59-62. DOI: 10.1258 / TD.2006.006266. [PubMed: 18302876].

  • 6.

    Бузган Т., Карахочагил М.К., Ирмак Х., Баран А.И., Карсен Х., Эвирген О. и др. Клинические проявления и осложнения в 1028 случаях бруцеллеза: ретроспективная оценка и обзор литературы. Int J Заразить Dis . 2010; 14 (6): e469-78. DOI: 10.1016 / j.ijid.2009.06.031. [PubMed: 19

    2].

  • 7.

    Ariza J, Pellicer T, Pallares R, Foz A, Gudiol F. Специфический профиль антител при бруцеллезе человека. Клиническая инфекция . 1992; 14 (1): 131-40. DOI: 10.1093 / Clinids / 14.1.131. [PubMed: 1571417].

  • 8.

    Франк К.А., Кречек Р.С., Хаслер Б.Н., Аренас-Гамбоа А.М. Бруцеллез остается заболеванием, которым в развивающихся странах не уделяют должного внимания: призыв к междисциплинарным действиям. BMC Общественное здравоохранение . 2018; 18 (1): 125. DOI: 10.1186 / s12889-017-5016-у. [PubMed: 29325516]. [PubMed Central: PMC5765637].

  • 9.

    Гупте С., Каур Т. Диагностический подход к бруцеллезу. Дж. Троп Дис . 2016; 4 (1). DOI: 10.4172 / 2329-891X.1000e109.

  • 10.

    Аль Дахук С., Томазо Х., Ноклер К., Нойбауэр Х., Франгулидис Д. Лабораторная диагностика бруцеллеза — обзор литературы. Часть I. Методы прямого обнаружения и идентификации Brucella spp. Клиническая лаборатория . 2003; 49 (9-10): 487-505. [PubMed: 14572205].

  • 11.

    Хадуш А., Пал М. Бруцеллез — инфекционный рецидивирующий бактериальный зооноз мирового значения. Int J Livestock Res . 2013; 3 (1): 28. DOI: 10.5455 / ijlr.20130305064802.

  • 12.

    Кристофер С., Умапати Б.Л., Равикумар К.Л. Бруцеллез: Обзор последних тенденций в патогенности и лабораторной диагностике. Дж. Врачи лаборатории . 2010; 2 (2): 55-60. DOI: 10.4103 / 0974-2727.72149. [PubMed: 21346896]. [PubMed Central: PMC3040083].

  • 13.

    Сингх К. Лабораторные инфекции. Клиническая инфекция . 2009; 49 (1): 142-7. DOI: 10,1086 / 599104. [PubMed: 19480580].

  • 14.

    Erdem H, Kilic S, Sener B, Acikel C, Alp E, Karahocagil M и др. Диагностика хронического бруцеллярного менингита и менингоэнцефалита: результаты исследования Стамбул-2. Клиническая микробиологическая инфекция . 2013; 19 (2): E80-6. DOI: 10.1111 / 1469-0691.12092. [PubMed: 23210984].

  • 15.

    Ягупский П. Обнаружение бруцелл в культурах крови. Дж. Клин Микробиол . 1999; 37 (11): 3437-42. [PubMed: 10523530]. [PubMed Central: PMC85661].

  • 16.

    Руис Дж., Лоренте И., Перес Дж., Симарро Э., Мартинес-Кампос Л. Диагностика бруцеллеза с помощью посевов крови. Дж. Клин Микробиол .1997; 35 (9): 2417-8. [PubMed: 9276429]. [PubMed Central: PMC229981].

  • 17.

    Эспиноза Б.Дж., Чакалтана Дж., Малдер М., Франко М.П., ​​Блейз Д.Л., Гилман Р.Х. и др. Сравнение методов культивирования на разных стадиях бруцеллеза. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2009; 80 (4): 625-7. DOI: 10.4269 / ajtmh.2009.80.625. [PubMed: 19346389].

  • 18,

    Мангалги С., Саджан А. Сравнение трех методов посева крови в диагностике бруцеллеза человека. Дж. Врачи лаборатории . 2014; 6 (1): 14-7. DOI: 10.4103 / 0974-2727.129084. [PubMed: 24696554]. [PubMed Central: PMC3969635].

  • 19.

    Акпинар О. Историческая перспектива бруцеллеза: микробиологический и эпидемиологический обзор. Инфез Мед . 2016; 24 (1): 77-86. [PubMed: 27031903].

  • 20.

    Аль Дахук С., Шольц Х.С., Томазо Х., Бан П., Голлнер С., Каргес В. и др. Дифференциальное фенотипирование видов Brucella с использованием недавно разработанной полуавтоматической метаболической системы. BMC Microbiol . 2010; 10 : 269. DOI: 10.1186 / 1471-2180-10-269. [PubMed: 20969797]. [PubMed Central: PMC2984481].

  • 21.

    Ciocchini AE, Rey Serantes DA, Melli LJ, Iwashkiw JA, Deodato B, Wallach J, et al. Разработка и валидация нового диагностического теста на бруцеллез человека с использованием гликоинженерного антигена, связанного с магнитными шариками. PLoS Негл Троп Дис . 2013; 7 (2). e2048. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0002048.[PubMed: 23459192]. [PubMed Central: PMC3573069].

  • 22.

    Smits HL, Abdoel TH, Solera J, Clavijo E, Diaz R. Иммунохроматографические анализы латерального потока иммуноглобулинов M и G, специфичные для бруцелл, для быстрой серодиагностики бруцеллеза человека. Клин Диаг Лаборатория Иммунол . 2003; 10 (6): 1141-6. DOI: 10.1128 / CDLI.10.6.1141-1146.2003. [PubMed: 14607880]. [PubMed Central: PMC262433].

  • 23.

    Фадил М.А., Хоффмастер А.Р., Ши Дж., Пиментел Г., Стоддард Р.А.Сравнение четырех коммерческих наборов ИФА для определения IgM и IgG для диагностики бруцеллеза. J Med Microbiol . 2011; 60 (Pt 12): 1767-73. DOI: 10.1099 / jmm.0.033381-0. [PubMed: 21835974].

  • 24.

    Солис Гарсиа Дель Посо Дж., Лоренте Ортуно С., Наварро Э., Солера Дж. Обнаружение антител против бруцелл IgM в отсутствие IgG: проблема для клинической интерпретации серологии бруцелл. PLoS Негл Троп Дис . 2014; 8 (12).e3390. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0003390. [PubMed: 25474572]. [PubMed Central: PMC4256177].

  • 25.

    Казанова А., Ариза Дж., Рубио М., Масуэт С., Диас Р. BrucellaCapt в сравнении с классическими тестами в серологической диагностике и лечении бруцеллеза человека. Клин Вакцина Иммунол . 2009; 16 (6): 844-51. DOI: 10.1128 / CVI.00348-08. [PubMed: 19369480]. [PubMed Central: PMC26].

  • 26.

    Сюй Дж, Цю Ю, Цуй М, Кэ Ю, Чжэнь Кью, Юань Х и др.Устойчивые и дифференциальные ответы антител на белки вирулентности Brucella melitensis во время острых и хронических инфекций при бруцеллезе человека. Eur J Clin Microbiol Infect Dis . 2013; 32 (3): 437-47. DOI: 10.1007 / s10096-012-1767-7. [PubMed: 23224716].

  • 27.

    Lucero NE, Escobar GI, Ayala SM, Silva Paulo P, Nielsen K. Анализ поляризации флуоресценции для диагностики бруцеллеза человека. J Med Microbiol . 2003; 52 (Pt 10): 883-7.DOI: 10.1099 / jmm.0.05217-0. [PubMed: 12972582].

  • 28.

    Нильсен К., Галл Д. Анализ поляризации флуоресценции для диагностики бруцеллеза: обзор. J Иммуноанализ Immunochem . 2001; 22 (3): 183-201. DOI: 10.1081 / IAS-100104705. [PubMed: 11506271].

  • 29.

    Гупте С., Каур Т. Диагностика бруцеллеза человека. Дж. Троп Дис . 2016; 4 (1). DOI: 10.4172 / 2329-891x.1000185.

  • 30.

    Lin F, Xu Y, Chang Y, Liu C, Jia X, Ling B. Молекулярная характеристика сниженной чувствительности к биоцидам в клинических изолятах Acinetobacter baumannii. Передний микробиол . 2017; 8 : 1836. DOI: 10.3389 / fmicb.2017.01836. [PubMed: 220]. [PubMed Central: PMC5622949].

  • 31.

    Колменеро Дж. Д., Мората П., Руис-Меса Дж. Д., Баутиста Д., Бермудес П., Браво М. Дж. И др. Мультиплексная полимеразная цепная реакция в реальном времени: практический подход к быстрой диагностике туберкулезного и бруцеллярного остеомиелита позвоночника. Позвоночник (Фила Па, 1976) . 2010; 35 (24): E1392-6. DOI: 10.1097 / BRS.0b013e3181e8eeaf. [PubMed: 21030888].

  • 32.

    Queipo-Ortuno MI, Colmenero JD, Bermudez P, Bravo MJ, Morata P. Быстрая дифференциальная диагностика между внелегочным туберкулезом и очаговыми осложнениями бруцеллеза с использованием мультиплексной ПЦР в реальном времени. PLoS One . 2009; 4 (2). e4526. DOI: 10.1371 / journal.pone.0004526. [PubMed: 19225565]. [PubMed Central: PMC2639699].

  • 33.

    Аль Дахук С., Ноклер К. Влияние лабораторной диагностики на терапию бруцеллеза. Expert Rev Anti Infect Ther . 2011; 9 (7): 833-45. DOI: 10.1586 / eri.11.55. [PubMed: 21810055].

  • 34.

    Наварро Э., Эскрибано Дж., Фернандес Дж., Солера Дж. Сравнение трех различных методов ПЦР для обнаружения Brucella spp в образцах крови человека. FEMS Иммунол Мед Микробиол . 2002; 34 (2): 147-51.DOI: 10.1111 / j.1574-695X.2002.tb00616.x. [PubMed: 12381466].

  • 35.

    Аламиан С., Эсмаэлизад М., Захрей Т., Этемади А., Мохаммади М., Афшар Д. и др. Новый анализ ПЦР для обнаружения Brucella abortus и Brucella melitensis. Уважение общественного здравоохранения Осон . 2017; 8 (1): 65-70. DOI: 10.24171 / j.phrp.2017.8.1.09. [PubMed: 28443226]. [PubMed Central: PMC5402848].

  • 36.

    Этемади А., Мохаммди М., Эсмаэлизад М., Аламиан С., Вахеди Ф., Агаейпур К. и др.Генетическая характеристика гена wboA из преобладающих биоваров изолятов Brucella в Иране. Электронный врач . 2015; 7 (6): 1381-6. DOI: 10,14661 / 1381. [PubMed: 26516446]. [PubMed Central: PMC4623799].

  • 37.

    Ю. В. Л., Нильсен К. Обзор обнаружения Brucella spp. полимеразной цепной реакцией. Хорватская медицина J . 2010; 51 (4): 306-13. DOI: 10.3325 / cmj.2010.51.306. [PubMed: 20718083]. [PubMed Central: PMC2931435].

  • 38.

    Баддур М.М., Алхалифа Д.Х. Оценка трех методов полимеразной цепной реакции для обнаружения ДНК Brucella в периферической крови человека. Банка Микробиол . 2008; 54 (5): 352-7. DOI: 10.1139 / w08-017. [PubMed: 18449219].

  • 39.

    Mitka S, Anetakis C, Souliou E, Diza E, Kansouzidou A. Оценка различных ПЦР-тестов для раннего выявления острого и рецидивирующего бруцеллеза у людей по сравнению с традиционными методами. Дж. Клин Микробиол . 2007; 45 (4): 1211-8. DOI: 10.1128 / JCM.00010-06. [PubMed: 17267626]. [PubMed Central: PMC1865811].

  • 40.

    Ван И, Ван З, Чжан И, Бай Л., Чжао И, Лю Ц. и др. Анализы на основе полимеразной цепной реакции для диагностики бруцеллеза человека. Антимикроб Энн Клин Микробиол . 2014; 13 : 31. DOI: 10.1186 / s12941-014-0031-7. [PubMed: 25082566]. [PubMed Central: PMC4236518].

  • 41.

    Имаока К., Кимура М., Судзуки М., Камияма Т., Ямада А. Одновременное обнаружение рода Brucella с помощью комбинаторной ПЦР. Jpn J Заразить Дис . 2007; 60 (2-3): 137-9. [PubMed: 17515651].

  • 42.

    Mayer-Scholl A, Draeger A, Gollner C, Scholz HC, Nockler K. Развитие мультиплексной ПЦР для дифференциации всех описанных в настоящее время видов Brucella. Дж. Микробиологические методы . 2010; 80 (1): 112-4. DOI: 10.1016 / j.mimet.2009.10.015. [PubMed: 19887090].

  • 43.

    Кумар С., Тутеха У., Сарика К., Сингх Д., Кумар А., Кумар О. Быстрый мультиплексный ПЦР-анализ для одновременного обнаружения рода Brucella, B. abortus, B. melitensis и B. suis. Дж. Микробиол Биотехнология . 2011; 21 (1): 89-92. DOI: 10.4014 / jmb.1007.07051. [PubMed: 21301197].

  • 44.

    Камал И.Х., Аль-Гашгари Б., Мосельхи С.С., Кумосани Т.А., Абульнаджа К.О.Двухэтапный ПЦР-анализ для выявления бруцеллеза человека в эндемичных районах. BMC Infect Dis . 2013; 13 : 145. DOI: 10.1186 / 1471-2334-13-145. [PubMed: 23517532]. [PubMed Central: PMC3614503].

  • 45.

    Garofolo G, Ancora M, Di Giannatale E. Панель локусов MLVA-16 на Brucella spp. с помощью мультиплексной ПЦР и многоцветного капиллярного электрофореза. Дж. Микробиологические методы . 2013; 92 (2): 103-7. DOI: 10.1016 / j.mimet.2012.11.007. [PubMed: 23174277].

  • 46.

    Mirnejad R, Mohamadi M, Piranfar V, Mortazavi SM, Kachuei R. Дуплексная ПЦР для быстрого и одновременного обнаружения Brucella spp. в образцах крови человека. Азиатский Пак Дж. Троп Мед . 2013; 6 (6): 453-6. DOI: 10.1016 / S1995-7645 (13) 60073-5. [PubMed: 23711705].

  • 47.

    Аль-Наккас А., Мустафа А.С., Райт С.Г. Масштабная оценка вложенной ПЦР в одной пробирке для лабораторной диагностики бруцеллеза человека в Кувейте. J Med Microbiol . 2005; 54 (Pt 8): 727-30. DOI: 10.1099 / jmm.0.45772-0. [PubMed: 16014425].

  • 48.

    Хасанджани Рушан М.Р., Мараши С.М., Моулана З. Анализы на основе полимеразной цепной реакции для диагностики активных и рецидивирующих случаев бруцеллеза человека. Ам Дж. Троп Мед Хиг . 2016; 95 (6): 1272-6. DOI: 10.4269 / ajtmh.16-0344. [PubMed: 27928078]. [PubMed Central: PMC5154438].

  • 49.

    Цирак М.Ю., Хизель К.[Значение методов полимеразной цепной реакции, нацеленных на два разных участка генов, для диагностики бруцеллеза]. Микробийол Буль . 2002; 36 (3-4): 271-6. Турецкий. [PubMed: 12838660].

  • 50.

    Lin GZ, Zheng FY, Zhou JZ, Gong XW, Wang GH, Cao XA и др. Петлевой изотермический анализ амплификации, нацеленный на ген omp25, для быстрого обнаружения Brucella spp. Зонды Mol Cell . 2011; 25 (2-3): 126-9. DOI: 10.1016 / j.mcp.2011.01.001. [PubMed: 21232598].

  • 51.

    Fekete A, Bantle JA, Halling SM, Stich RW. Полиморфизм длин амплификационных фрагментов в штаммах Brucella с использованием полимеразной цепной реакции с произвольными праймерами. Дж Бактериол . 1992; 174 (23): 7778-83. DOI: 10.1128 / jb.174.23.7778-7783.1992. [PubMed: 1360006]. [PubMed Central: PMC207493].

  • 52.

    Аль Дахук С., Томазо Х., Пренгер-Бернингхофф Э., Сплеттстойссер В.Д., Шольц Х.С., Нойбауэр Х.Идентификация видов и биотипов бруцелл с использованием полиморфизма длины рестрикционного фрагмента полимеразной цепной реакции (ПЦР-ПДРФ). Crit Rev Microbiol . 2005; 31 (4): 191-6. DOI: 10.1080 / 10408410500304041. [PubMed: 16417200].

  • 53.

    Vrioni G, Gartzonika C, Kostoula A, Boboyianni C, Papadopoulou C, Levidiotou S. Применение иммуноферментного анализа полимеразной цепной реакции в образцах цельной периферической крови и сыворотки для диагностики острого бруцеллеза человека. Eur J Clin Microbiol Infect Dis . 2004; 23 (3): 194-9. DOI: 10.1007 / s10096-003-1082-4. [PubMed: 14986157].

  • 54.

    Гарибян Л., Авашия Н. Полимеразная цепная реакция. Дж. Инвест Дерматол . 2013; 133 (3): 1-4. DOI: 10.1038 / jid.2013.1. [PubMed: 23399825]. [PubMed Central: PMC4102308].

  • 55.

    Каттар М.М., Заллуа П.А., Арай Г.Ф., Самаха-Кфури Дж., Шбакло Х., Кандж С.С. и др. Разработка и оценка анализов полимеразной цепной реакции в режиме реального времени на цельной крови и тканях, залитых парафином, для быстрой диагностики бруцеллеза человека. Диагностика микробиологических инфекций . 2007; 59 (1): 23-32. DOI: 10.1016 / j.diagmicrobio.2007.04.002. [PubMed: 17532591].

  • 56.

    Debeaumont C, Falconnet PA, Maurin M. ПЦР в реальном времени для обнаружения Brucella spp. ДНК в образцах сыворотки крови человека. Eur J Clin Microbiol Infect Dis . 2005; 24 (12): 842-5. DOI: 10.1007 / s10096-005-0064-0. [PubMed: 16341519].

  • 57.

    Queipo-Ortuno MI, Colmenero JD, Bravo MJ, Garcia-Ordonez MA, Morata P.Полезность количественного анализа ПЦР в реальном времени с использованием образцов сыворотки для различения неактивного, серологически положительного и активного бруцеллеза человека. Клиническая микробиологическая инфекция . 2008; 14 (12): 1128-34. DOI: 10.1111 / j.1469-0691.2008.02095.x. [PubMed: 166].

  • 58.

    Zhang B, Wear DJ, Stojadinovic A, Izadjoo M. Последовательные ПЦР-анализы в реальном времени, применяемые для идентификации геномных подписей в фиксированных формалином тканях, залитых парафином: отчет о случае остеомиелита, вызванного бруцеллами. Мил Мед . 2013; 178 (1): 88-94. DOI: 10.7205 / MILMED-D-12-00274. [PubMed: 23356125].

  • 59.

    Colmenero JD, Clavijo E, Morata P, Bravo MJ, Queipo-Ortuno MI. Количественная полимеразная цепная реакция в режиме реального времени улучшает стандартную микробиологическую диагностику при вспышке бруцеллеза из-за употребления непастеризованного козьего сыра. Диагностика микробиологических инфекций . 2011; 71 (3): 294-6. DOI: 10.1016 / j.diagmicrobio.2011.06.016. [PubMed: 21855249].

  • 60.

    Боунааджа Л., Альбер Д., Шене Б., Эно С., Зигмунт М.С., Поляк С. и др. ПЦР в реальном времени для идентификации Brucella spp .: сравнительное исследование IS711, bcsp31 и отдельных генов-мишеней. Ветеринарная микробиология . 2009; 137 (1-2): 156-64. DOI: 10.1016 / j.vetmic.2008.12.023. [PubMed: 1
    66].

  • 61.

    Санхуан-Хименес Р., Колменеро Дж. Д., Бермудес П., Алонсо А., Мората П. Анализ плавления ДНК Amplicon для одновременного обнаружения Brucella spp и комплекса Mycobacterium tuberculosis.Возможное использование в быстрой дифференциальной диагностике внелегочного туберкулеза и очаговых осложнений бруцеллеза. PLoS One . 2013; 8 (3). e58353. DOI: 10.1371 / journal.pone.0058353. [PubMed: 23520501]. [PubMed Central: PMC3592798].

  • 62.

    Gopaul KK, Sells J, Bricker BJ, Crasta OR, Whatmore AM. Быстрая и надежная дифференциация штаммов живых вакцин Brucella на основе однонуклеотидного полиморфизма от полевых штаммов. Дж. Клин Микробиол .2010; 48 (4): 1461-4. DOI: 10.1128 / JCM.02193-09. [PubMed: 20181906]. [PubMed Central: PMC2849582].

  • 63.

    Фостер Дж. Т., Окинака Р. Т., Свенссон Р., Шоу К., Де Б. К., Робисон Р. А. и др. Анализ однонуклеотидных полиморфизмов, определяющих основные клады Brucella, с помощью ПЦР в реальном времени. Дж. Клин Микробиол . 2008; 46 (1): 296-301. DOI: 10.1128 / JCM.01496-07. [PubMed: 18032628]. [PubMed Central: PMC2224295].

  • 64.

    Майо Э., Бегеман Л., Бисселинк И., ван Тулден П., Вирсма Л., Хиемстра С. и др.Идентификация и типирование Brucella spp. у морских свиней (Phocoena phocoena) на голландском побережье. Ветеринарная микробиология . 2014; 173 (1-2): 118-24. DOI: 10.1016 / j.vetmic.2014.07.010. [PubMed: 25115787].

  • 65.

    Seng P, Drancourt M, Gouriet F, La Scola B, Fournier PE, Rolain JM и др. Текущая революция в бактериологии: рутинная идентификация бактерий с помощью матричной лазерной десорбционной ионизации времяпролетной масс-спектрометрии. Клиническая инфекция . 2009; 49 (4): 543-51. DOI: 10,1086 / 600885. [PubMed: 19583519].

  • 66.

    Феррейра Л., Вега Кастано С., Санчес-Хуанес Ф., Гонсалес-Кабреро С., Менеготто Ф., Ордуна-Доминго А. и др. Идентификация бруцелл с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF. Быстрая и надежная идентификация по чашкам с агаром и посевам крови. PLoS One . 2010; 5 (12). e14235. DOI: 10.1371 / journal.pone.0014235. [PubMed: 21151913].[PubMed Central: PMC2997794].

  • 67.

    Мезуреур Дж., Ранальди С., Моннин В., Жирар В., Аренд С., Велкер М. и др. Простой и безопасный протокол для подготовки образцов бруцелл для матричного лазерного десорбционного ионизационно-пролетного масс-спектрометрического анализа. Дж. Клин Микробиол . 2016; 54 (2): 449-52. DOI: 10.1128 / JCM.02730-15. [PubMed: 26582837]. [PubMed Central: PMC4733191].

  • 68.

    Wareth G, Eravci M, Weise C, Roesler U, Melzer F, Sprague LD, et al.Комплексная идентификация иммунодоминантных белков Brucella abortus и Brucella melitensis с использованием антител в сыворотке от естественно инфицированных хозяев. Int J Mol Sci . 2016; 17 (5). DOI: 10.3390 / ijms17050659. [PubMed: 27144565]. [PubMed Central: PMC4881485].

  • 69.

    Kim JY, Sung SR, Lee K, Lee HK, Kang SI, Lee JJ и др. Иммунопротеомика Brucella abortus RB51 как кандидатных антигенов в серологической диагностике бруцеллеза. Вет Иммунол Иммунопатол . 2014; 160 (3-4): 218-24. DOI: 10.1016 / j.vetimm.2014.05.009. [PubMed: 24

    8].

  • 70.

    Pajuaba AC, Silva DA, Almeida KC, Cunha-Junior JP, Pirovani CP, Camillo LR, et al. Иммунопротеомика Brucella abortus выявляет дифференциальные профили антител между вакцинированным S19 и естественно инфицированным скотом. Протеомика . 2012; 12 (6): 820-31. DOI: 10.1002 / pmic.201100185. [PubMed: 22539433].

  • Лабораторные данные по бруцеллезу — wikidoc

    Главный редактор: C. Майкл Гибсон, M.S., M.D. [1]; Заместитель главного редактора: Равитея Гуддети, M.B.B.S. [2] Даница ЛукачВишал Деварконда, M.B.B.S [3]

    Обзор

    Диагноз бруцеллеза может быть подтвержден либо положительной бактериальной культурой, либо положительным титром антител против b rucella при серологическом тестировании.

    Результаты лабораторных исследований

    Лабораторные данные о бруцеллезе включают следующее: [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] [11] [12] [13]

    Лабораторные данные по бруцеллезу
    Кровь Общий анализ крови Общий анализ крови может выявить:
    СОЭ Нормальный или повышенный
    CRP Нормальный или повышенный
    Функциональный тест печени Функциональный тест печени может выявить:
    Культура
    • Выделение и идентификация Brucella может подтвердить диагноз бруцеллеза.
    • Brucella чаще всего выделяют из посевов крови (посевы крови положительны между 7-м и 21-м днем)
    • Однако он также может быть изолирован от:
    Серологические тесты Серологические тесты
    • Существует два типа серологических тестов на основе:
    • Для постановки диагноза с помощью серологии необходимы два образца сыворотки:
      • Первый образец сыворотки крови следует взять при остром заболевании (≤7 дней после появления симптомов)
      • Второй образец сыворотки следует взять через 2-4 недели, чтобы проверить повышение уровня антител (четырехкратное или большее повышение уровня антител может быть связано с положительным результатом на бруцеллез).
      • Если представление парных сывороток невозможно, вероятный диагноз может быть поставлен с помощью одного образца сыворотки.
    • Тест микроагглютинации Brucella (BMAT)
    • Бенгальская роза
      • Роза бенгальская имеет положительную прогностическую ценность примерно на 99% для пациентов с острым и хроническим бруцеллезом.
      • Бенгальская роза измеряет антитела IgM и IgG.
    • 2-меркаптоэтанол (2-ME)
    • Античеловеческий глобулин (Кумбс)
      • Используется у пациентов с хроническим бруцеллезом с отрицательной сероагглютинацией, поскольку они имеют неагглютинирующие антитела IgG.
    • Непрямой иммуноферментный анализ (ELISA)
    • Тест-полоски
      • Новое и многообещающее, основанное на связывании антител IgM Brucella , простое, точное и быстрое.
    • Тест Brucellacapt
      • Одностадийный иммунозахват для выявления общих антител против Brucella — это все более широко используемый дополнительный тест, когда позволяют ресурсы.
    Молекулярные тесты PCR
    • ПЦР — это быстрый и точный диагностический инструмент для подтверждения диагноза бруцеллез
    • Было разработано множество разновидностей ПЦР (например, вложенная ПЦР, ПЦР в реальном времени и ПЦР-ELISA), и было обнаружено, что они обладают превосходной специфичностью и чувствительностью при обнаружении как первичной инфекции, так и рецидива после лечения.
    • К сожалению, они еще не стандартизированы для рутинного использования, и некоторые центры сообщают о стойких положительных результатах ПЦР после клинически успешного лечения, что подогревает споры о существовании длительного хронического бруцеллеза. [14] [15] [16] [17]
    Биопсия ткани

    Биопсия печени и лимфатических узлов может выявить неказеозные гранулемы. [2] [4]

    Анализ ЦСЖ
    Анализ

    CSF может выявить лимфоцитоз и низкий уровень глюкозы. [2] [4]

    Анализ синовиальной жидкости

    Анализ синовиальной жидкости может выявить преобладание лимфоцитов с количеством гранулоцитов, которое обычно не превышает 15 000 клеток / мкл, и низким уровнем глюкозы. [2] [4]

    Галерея

    Список литературы

    1. 1.0 1.1 Бруцеллез. CDC. http://www.cdc.gov/brucellosis/clinician/bacterial-isolation.html. Доступ 4 февраля 2016 г.
    2. 2,0 2,1 2,2 2,3 Бруцеллез «Деннис Каспер, Энтони Фаучи, Стивен Хаузер, Дэн Лонго, Дж. Ларри Джеймсон, Джозеф Лоскальцо» Принципы внутренней медицины Харрисона, 19e Доступ 9 декабря 2017 г.
    3. ↑ Колменеро Дж. Д., Регера Дж. М., Мартос Ф., Санчес-Де-Мора Д., Дельгадо М., Кос М.; и другие.(1996). «Осложнения, связанные с инфекцией Brucella melitensis: исследование 530 случаев». Медицина (Балтимор) . 75 (4): 195–211. PMID 8699960
    4. 4,0 4,1 4,2 4,3 Mantur BG, Amarnath SK, Shinde RS (2007). «Обзор клинико-лабораторных особенностей бруцеллеза человека». Индийский журнал J Med Microbiol . 25 (3): 188–202. PMID 17

      4
    5. ↑ Паппас Г., Акритидис Н., Босилковски М., Цианос Э. (2005).«Бруцеллез». N Engl J Med . 352 (22): 2325–36. PMID 15930423.
    6. Дин А.С., Крамп Л., Гретер Х., Хаттендорф Дж., Шеллинг Э., Зинстаг Дж. (2012). «Клинические проявления бруцеллеза человека: систематический обзор и метаанализ». PLoS Negl Trop Dis . 6 (12): e1929. DOI: 10.1371 / journal.pntd.0001929. PMC 3516581. PMID 23236528.
    7. ↑ Young EJ (1995). «Бруцеллез: современная эпидемиология, диагностика и лечение.». Curr Clin Top Infect Dis . 15 : 115–28. PMID 7546364
    8. ↑ Айген Б., Доганай М., Сумеркан Б. и др. Клинические проявления, осложнения и лечение бруцеллеза: ретроспективная оценка 480 пациентов. Med Malad Infect 2002; 32: 485.
    9. Замани А., Коораки С., Мохазаб Р.А., Замани Н., Матлооб Р., Хаятбахш М.Р .; и другие. (2011). «Эпидемиологические и клинические особенности бруцеллезного артрита у 24 детей». Энн Сауди Мед . 31 (3): 270–3.DOI: 10.4103 / 0256-4947.81543. PMC 3119967. PMID 21623056.
    10. ↑ Муса А.М., Бахар Р.Х., Арадж Г.Ф., Коши Т.С., Мухтасеб С.А., аль-Мудаллал Д.С. и другие. (1990). «Неврологические осложнения бруцеллезного спондилита». Acta Neurol Scand . 81 (1): 16–23. PMID 2330811
    11. ↑ Паппас Г., Босилковски М., Акритидис Н., Мастора М., Кртева Л., Цианос Э. (2003). «Бруцеллез и дыхательная система». Clin Infect Dis . 37 (7): e95–9. PMID 13130417.DOI: 10.1086 / 378125
    12. ↑ Херрик Дж. А., Ледерман Р. Дж., Салливан Б. и др. Бруцеллезный артериит: клинические проявления, лечение и прогноз. Lancet Infect Dis 2014; 14: 520.
    13. Ариза Дж., Босилковски М., Кашио А., Колменеро Дж. Д., Корбел М. Дж., Фалагас МЭ; и другие. (2007). «Перспективы лечения бруцеллеза в 21 веке: рекомендации Янины». ПЛоС Мед . 4 (12): e317. DOI: 10.1371 / journal.pmed.0040317. PMC 2222927. PMID 18162038.
    14. 14,0 14,1 Паппас Г., Акритидис Н., Босилковски М., Цианос Э. (2005). «Бруцеллез». N Engl J Med . 352 (22): 2325–36. DOI: 10.1056 / NEJMra050570. PMID 15930423.
    15. ↑ Бруцеллез. CDC. http://www.cdc.gov/brucellosis/transmission/index.html. Доступ 1 февраля 2016 г.
    16. ↑ Бруцеллез. Википедия. https://en.wikipedia.org/wiki/Brucellosis. Доступ 29 января 2016 г.
    17. ↑ Бруцеллез.Википедия. https://es.wikipedia.org/wiki/Brucelosis. Доступ 2 февраля 2016 г.
    18. 18.00 18.01 18.02 18.03 18.04 18.05 18.06 18.07 18.08 18.09 18.10 910 Публичная библиотека изображений

    Шаблон: WH Шаблон: WS

    Варианты диагностики бруцеллеза собак

    Сентябрь 2019

    Возможности диагностики бруцеллеза собак

    Автор: Dr.Саша Томасон

    Бруцеллез — заразное зоонозное заболевание, вызываемое небольшими грамотрицательными аэробными коккобациллами из рода Brucella . Клинические признаки могут варьироваться от вида к виду и от животного к животному, но репродуктивная недостаточность является наиболее частым клиническим признаком у всех животных. Исходя из уровней липополисахарида (ЛПС), организм может иметь грубую морфологию ( Brucella canis ) или гладкую морфологию ( B.abortus, B. suis и B. melitensis ). При выборе теста на бруцеллез важны различия между грубым и гладким тестом, поскольку большинство тестов могут обнаружить только один тип.

    Организмы Brucella имеют тенденцию иметь предпочтение в качестве хозяина, но большинство из них могут инфицировать другие виды хозяев. Brucella canis является наиболее распространенным возбудителем бруцеллеза собак, но собаки также могут заразиться Brucella abortus (крупный рогатый скот) и Brucella suis (свиньи) после проглатывания зараженной плаценты и абортированных плодов домашнего скота.Также сообщалось, что аттенуированные вакцинные штаммы B. abortus и B. melitensis (овцы, козы) могут инфицировать собак.

    В KSVDL мы предлагаем четыре различных варианта тестов для диагностики бруцеллеза собак:

    • Brucella BAPA (забуференный подкисленный пластинчатый антиген). Этот серологический тест обнаруживает гладкую Brucella spp . такие как B. abortus, B. suis и B. melitensis . Он не обнаружит B. canis .Это хороший скрининговый тест для собак, которые смешиваются с сельскохозяйственными животными. Отрицательный результат обычно очень надежен. Положительный результат требует подтверждающего тестирования.
    • Пробирочный тест на агглютинацию Brucella canis. Этот серологический тест выявляет антитела только к B. canis . Он обладает высокой чувствительностью, что делает его отличным средством для скрининга Brucella canis . Отрицательный результат теста обычно очень надежен. Возможны ложноположительные результаты, поэтому для всех положительных результатов потребуется второй подтверждающий тест.
    • Brucella PCR. Наш ПЦР-тест представляет собой двухцелевую ПЦР в реальном времени. Выявят все Brucella spp . Второй будет обнаруживать только B. canis , поэтому он может отличить B. canis от других Brucella spp. Он может определять 2 КОЕ / мл, что делает его высокочувствительным и специфическим тестом. Этот уровень обнаружения примерно в 5 раз более чувствителен, чем посев крови. Этот тест может использоваться как скрининговый, так и подтверждающий тест.
    • Культура крови на Brucella canis.Хотя это традиционный золотой стандарт диагностики заболевания, его лучше всего использовать только в качестве подтверждающего теста. Ложноотрицательные результаты возможны из-за обычно низкого уровня бактерий в каждом образце, периодического выделения и медленного роста организма, и это лишь некоторые из них.

    Бруцеллез бывает сложно диагностировать, и не существует стандартного протокола, который бы помогал направлять диагностический процесс у собак. Хорошее практическое правило — использовать более одного типа тестов, чтобы повысить шансы обнаружения Brucella .Для определения титров может потребоваться от двух недель до нескольких месяцев, поэтому выполнение нескольких тестов в течение этого периода также поможет. Титры антител и бактериемия обычно наиболее высоки во время проэструса, течки, беременности и сразу после аборта у инфицированных самок собак. Тестирование в эти периоды времени увеличит шансы выявить у собаки бруцеллез.

    Бруцеллез — это заболевание, подлежащее регистрации в большинстве штатов, включая Канзас. Государственные ветеринарные чиновники могут помочь вам составить рекомендации по подтверждающим тестам в случае положительного результата с помощью любого из методов тестирования.

    Для получения дополнительной информации о борьбе с бруцеллезом в питомниках ознакомьтесь с рекомендациями по профилактике и борьбе с бруцеллезом в питомниках собак.

    Д-р Томасон — доцент кафедры клиентского обслуживания и поддержки KSVDL.

    ДАЛЕЕ: Понимание in vivo и гистологических хирургических границ при опухолях кожи собак
    Вернуться к индексу

    Департамент здравоохранения | Описание лабораторного случая бруцеллеза (LCD)

    Разрешение: PHLN

    Дата согласования: 25 октября 2006 г.



    1 PHLN КРАТКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛАБОРАТОРИИ

    1.1 Состояние:

    бруцеллез
    1.1.1 Окончательные критерии
    a Изоляция видов Brucella из стерильного участка;
    ИЛИ
    b Сероконверсия или значительное повышение уровня антител Brucella в сыворотках крови в острой стадии и в период выздоровления.
    1.1.2 Критерии предположения
    Один высокий титр специфического антитела Brucella .

    2 ВВЕДЕНИЕ

    Бруцеллез был впервые описан Брюсом в 1887 году, когда был открыт вид бактерий, впоследствии названный Brucella melitensis. Тип лихорадочного заболевания, характеризующийся регулярными ремиссиями или перерывами, был признан в Средиземноморском регионе на протяжении веков. К нему было применено много названий, часто относящихся к местам, в которых он был особенно распространен. Наиболее известны мальтийская лихорадка, Средиземноморская лихорадка, Гибралтарская лихорадка или Рок-лихорадка и волнообразная лихорадка.

    Причина болезни была неясна, пока Брюс не сообщил о многочисленных мелких кокковых организмах в окрашенных срезах селезенки смертельно инфицированного солдата.Он назвал организм Micrococcus melitensis. В конце концов была установлена ​​связь между M. melitensis и организмом, описанным Бангом (1897) как причиной заразного аборта у крупного рогатого скота. Название рода Brucella было предложено в знак признания открытия Брюса.

    Впоследствии возникла все более сложная структура штаммов, в которой определенные представители рода Brucella были связаны с конкретным первичным животным-хозяином.Потенциальный диапазон взаимодействий с людьми увеличивался с каждым новым видом, потому что каждый вид Brucella имеет отличительные эпидемиологические особенности.

    Род Brucella в настоящее время делится на 6 видов: B. abortus, B. melitensis, B. suis, B. canis, B. ovis и B. neotomae. Три из них были обнаружены в Австралии: B. abortus у крупного рогатого скота, B. suis у свиней и B. ovis у овец.

    Бруцеллез — это зоноз, и, за некоторыми исключениями, инфекции у людей возникают в результате прямого или косвенного контакта с источниками животного происхождения. Зарегистрированы редкие случаи передачи вируса от человека к человеку либо при обстоятельствах, связанных с половым контактом, либо при передаче тканей, включая кровь и костный мозг. Другим более частым источником инфекции является лабораторный бруцеллез, вызванный воздействием B. melitensis, B. abortus, B. suis, и B. canis в результате аэрозолей, образующихся во время манипуляции с культурами.Несколько исследований показали, что в прошлом бруцеллез в лаборатории передавался чаще, чем любое другое бактериальное заболевание (Топли и Уилсон).

    Большинство случаев заражения, вызываемого бактериями B. abortus, B. melitensis, B. suis и B. canis , возникают в результате профессионального или домашнего контакта с инфицированными животными или с окружающей средой, загрязненной их выделениями. Особому риску подвергаются фермеры и их семьи, рабочие скотобойни, мясники и ветеринары.Зараженные животные, которые недавно сделали аборт или родили, представляют наибольшую опасность: заражение может произойти при проглатывании или вдыхании, либо при загрязнении конъюнктивы или кожи выделениями. Основным источником заражения населения в целом являются молочные продукты, приготовленные из зараженного молока (Топли и Уилсон).

    В Австралии после уничтожения B. abortus у крупного рогатого скота наибольшая частота инфицирования наблюдается у людей, которые убивают и обрабатывают туши диких свиней (особенно в Квинсленде и Северном Новом Южном Уэльсе), среди которых B.suis является эндемическим заболеванием. В противном случае большинство случаев заболевания людей бруцеллезом завезено из эндемичных стран (Средиземноморский регион, страны Ближнего Востока и Латинской Америки) или происходит у сотрудников лабораторий, работающих с культурами от инфицированных пациентов.
    К началу страницы

    Сам род очень гомогенен, все члены демонстрируют> 90% гомологии в исследованиях пар ДНК-ДНК, таким образом классифицируя Brucella как моноспецифический род (Verger и Grayon). Однако предложенная классификация, в которой все типы будут рассматриваться как биовары B.melitensis не был принят на том основании, что это может сильно сбить с толку.

    Совсем недавно полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (RFLP) был использован для различения видов в пределах рода Brucella и поддержал предпочтение хозяина в качестве основы для классификации бруцелл.

    ПЦР выбранных последовательностей с последующим рестрикционным анализом предоставила дополнительные доказательства полиморфизма ряда генов, включая гены omp 2, dna k, htr и ery.

    Была сохранена старая номенклатура (таблица 1), при этом в качестве номенклатуры видов использовались прежние названия видов. В них распознаются семь биоваров B. abortus , три — B. melitensis и пять — B. suis.

    Таблица 1. Распознаваемые виды и биотипы с диапазоном хозяев и видами, эндемичными для Австралии

    и зайцы
    Виды

    Биотипы

    Хозяин Присутствуют в Австралии
    B.abortus

    1–9

    Крупный рогатый скот, собаки, лошади, овцы и человек
    B. suis

    1–5

    Свиньи, крупный рогатый скот, собаки Да, только биотип 1
    B. melitensis

    1–3

    Овцы, козы, крупный рогатый скот и человек Нет
    B. ovis Овцы
    Б.canis Собаки и человек
    B. neotomae Пустынная древесная крыса
    Начало страницы
    малочисленность отличительных физических признаков и возникновение субклинических и атипичных инфекций делают клинический диагноз бруцеллеза у людей особенно трудным.

    3.1 Культура для

    Brucella Выделение Brucella sp.это самый надежный способ поставить диагноз. Скорее всего, он будет успешным в острой фазе инфекции.
    3.1.1 Среда
    Для оптимального выделения Brucella sp. 3-5 мл крови следует засеять в 20-100 мл бульона сывороточной декстрозы, триптонно-соевого бульона или триптиказо-соевого бульона или, что чаще, коммерческого автоматизированного бульона для культивирования крови, и инкубировать при 37 ° C на воздухе, обогащенном 5– 10% CO 2 . Селективные среды не требуются для культивирования образцов крови человека, взятых с соблюдением правил асептики, но их следует использовать, если необходимо исследовать образцы экскрементов или загрязненных тканей.Жидкую среду можно сделать селективной путем добавления смеси антибиотиков, содержащей: амфотерицин B 1 мг L -1, бацитрацин 25 мг L -1 , циклогексимид 100 мг L -1 , d-циклосерин 100 мг L -1 , налидиксовая кислота 5 мг L -1 , полимиксин B 6 мг L -1 и ванкомицин 20 мг L -1 .

    Когда жидкие среды используются для обогащения или первичной изоляции, субкультуры следует делать каждые 3-5 дней на подходящей твердой среде, такой как агар с лошадиной кровью или агар с сывороткой с декстрозой, которые затем инкубируют при 37 ° C в воздухе, обогащенном 5-10 % CO 2 .Необходимости частого пересева можно избежать, используя 2-фазную систему, в которой и твердая, и жидкая фаза содержатся в одной бутылке. Даже с этой системой пересевы на свежую твердую среду должны производиться сразу же после роста, чтобы свести к минимуму диссоциацию гладких культур на вариант негладкой колонии (Топли и Уилсон, Корнер и Альтон). с использованием автоматизированной коммерческой системы культивирования крови. Эти системы очень чувствительны и обычно сигнализируют в течение 5 дней без необходимости слепых субкультур.(Ягупский, 1999, 2004)

    3.1.2 Подходящие образцы
    Можно культивировать образцы любой жидкости организма или ткани, взятые хирургическим путем или при вскрытии. Кровь — это наиболее часто исследуемый материал, но костный мозг с большей вероятностью даст положительные результаты. Посев крови лучше всего проводить на образцах, взятых во время приступа лихорадки, желательно при повышении температуры. Скорость изоляции повышается, если в течение 24 часов берутся несколько проб (Топли и Уилсон).
    3.1.3 Чувствительность теста
    Вышеописанная процедура позволяет достичь уровня изоляции до 85% от пациентов с острой инфекцией B. melitensis .
    3.1.4 Специфичность теста
    Математические данные отсутствуют

    Диагноз бруцеллеза подтверждается выделением небольших грамотрицательных коккобацилл из крови или других тканей, подходящим анамнезом и подтвержденным специальными биохимическими тестами. Биотипирование в справочной лаборатории может предоставить дополнительную информацию об этиологии изолята.Выделение Brucella sp подлежит уведомлению во всех штатах Австралии.

    3.1.5 Прогностические значения
    Отрицательный посев не исключает диагноз бруцеллеза.
    3.1.6 Подходящие критерии приемлемости
    Рост не происходит после инкубации чашек с кровяным агаром или сывороточным агаром с декстрозой (SDA) в течение 24 часов при 37 ° C в 5–10% CO 2.

    После инкубации кровяного агара в течение 48 часов при 37 C в 5–10% CO 2 колонии размером 1 мм, негемолитические и с металлическим блеском.После 48 часов инкубации с SDA виды Brucella немного больше, чем на кровяном агаре, и имеют кремовый цвет.

    Некоторые Brucella sp. будет расти без увеличения концентрации CO 2 , в то время как другим видам для роста требуется 5–10% CO 2 . Brucella sp. не будет расти анаэробно.
    Начало страницы

    3.1.7 Подходящие внутренние средства контроля
    Правильно задокументированная, актуальная программа контроля качества для каждого типа и партии используемой среды
    3.1.8 Подходящие критерии валидации теста
    Изоляция Brucella sp. подтверждается биохимическими и фенотипическими показателями. Диагноз подтверждается историей болезни и серологией.
    3.1.9 Подходящая внешняя программа контроля качества
    Подходящей внешней программы контроля качества не существует.
    3.1.10 Особые соображения
    При работе с бруцеллами необходимо проявлять особую осторожность, поскольку люди очень восприимчивы к бруцеллезу, а лабораторные инфекции не редкость. С культурами этих организмов и содержащими их материалами, включая клинические образцы, следует обращаться с надлежащими мерами предосторожности только лицами, прошедшими соответствующую подготовку и имеющими опыт работы с микробиологическими методами.

    Поскольку виды Brucella spp очень распространены в лаборатории, все изоляты из стерильных участков должны храниться в шкафу безопасности до тех пор, пока их личность не станет известна, а образцы для посева крови всегда следует отбирать в шкафах безопасности.

    Если есть подозрение на культуру Brucella spp, с ними следует обращаться в учреждении PC3 или направить в лабораторию с соответствующими удобствами. Все манипуляции с живыми культурами Brucella следует проводить в вытяжных защитных шкафах, конструкция которых позволяет физически изолировать оператора от любых источников заражения.

    Суспензии культур не следует центрифугировать в обычных центрифугах, если они не оснащены аэрозольными роторами и сборками пробирок. Тюбики или бутылки следует наполнять и опорожнять только в защитном шкафу. Следует избегать использования стеклянных пробирок или бутылок.

    Следует обратить внимание на использование методов, сводящих к минимуму образование аэрозолей. Таким образом, пипетки следует наполнять и опорожнять с помощью резиновых груш или пипеток с батарейным питанием, соблюдая осторожность, чтобы избежать их загрязнения и предотвратить вспенивание или пузыри во время процедуры.

    Персоналу лаборатории, работавшему с Brucella spp на открытом столе, следует обратиться за медицинской помощью, чтобы рассмотреть возможность проведения антибиотикопрофилактики доксициклином (Fiori et ​​al ).

    3.2 Идентификация

    Brucella sp. Идентификация видов Brucella проходит в два этапа.

    A: A: Диагностические лаборатории — предполагаемая идентификация вида Brucella обычно проводится в обычной клинической лаборатории.Лаборатории должны подтвердить, что предполагаемый изолят не является Haemophilus. Бруцелла является организмом уровня РС3, и из-за потенциального риска для лабораторного персонала любой подозрительный изолят следует отправлять в Национальную справочную лабораторию бруцеллы Австралийской лаборатории здоровья животных для подтверждения и биотипирования.

    B: Справочная лаборатория — все предполагаемые изоляты должны быть подтверждены как Brucella spp и биотипированы.
    Начало страницы

    Стандартные биохимические тесты

    3.2.1 Подходящий образец
    Чистая культура на твердой среде (кровяной агар или сывороточный декстрозный агар).
    3.2.2 Окрашивание Окрашивание
    по Граму — Виды Brucella представляют собой небольшие грамотрицательные палочки, которые часто выглядят коккобациллярными.

    Modified Ziehl-Neelsen — Некоторые виды Brucella являются частично кислотоустойчивыми в том смысле, что они не обесцвечиваются 0,5% уксусной кислотой в модифицированном красителе Циля-Нильсена. В этом красителе сохраняется карбол-фуксин, и бруцеллы выглядят как окрашенные в красный цвет коккобациллы.

    3.2.3 Детали теста
    Для рутинной идентификации несколько биохимических тестов, вместе с морфологией колоний и свойствами окрашивания, предположительно идентифицируют изолят как Brucella sp. Таким образом, бруцеллы неподвижны, положительны по каталазе, положительны по оксидазе, гидролизуют мочевину, восстанавливают нитраты и являются индол-отрицательными. Используя известные положительные антисыворотки (например, «Murex» Brucella abortus и Brucella melitensis , специфические антисыворотки), можно использовать экспресс-тест скользящей агглютинации для предположительной идентификации Brucella sp.
    3.2.4 Чувствительность теста
    Математические данные отсутствуют.
    3.2.5 Специфичность теста
    Выделение бруцеллоподобного организма должно быть подтверждено как специфическими биохимическими, так и серологическими тестами. После этого полное биотипирование необходимо провести в справочной лаборатории.
    3.2.6 Прогностические значения
    Отрицательный посев не исключает диагноз бруцеллеза.
    3.2.7 Подходящие критерии теста
    На кровяном агаре Brucella sp — негемолитические колонии, рост которых занимает не менее 48 часов.Они не растут анаэробно. Организмы, которые морфологически и биохимически соответствуют виду Brucella .
    3.2.8 Подходящие внутренние контроли
    Каждую партию биохимического субстрата тестируют с подходящим положительным и отрицательным контрольными организмами. Результаты всех испытаний записываются, и результаты сохраняются.
    3.2.9 Подходящие критерии валидации
    Правильные биохимические и фенотипические реакции, проявляемые эталонными штаммами Brucella sp.
    3.2.10 Подходящая программа внешнего контроля качества
    Программа проб ветеринарной микробиологической проверки Службы качества IFM.

    IFM Quality Services, PO Box 351, Moorebank, NSW 1875, Australia.

    3.2.11 Наборы / автоматизированные системы для биохимической идентификации
    Не подходит.
    3.2.12 Молекулярная идентификация
    Было описано несколько мишеней ПЦР для анализов по идентификации Brucella spp, включая dnaK, 16S рРНК, межгенную спейсерную область 16S-23S, omp2, и bcsp31 (ген иммуногенетической мембранный белок, специфичный для рода Brucella ).(Проберт и др., 2004). Дальнейший анализ продуктов амплификации некоторых из них может быть использован для дифференциации номовидов. Например, полиморфизмы в гене dnaK были использованы для дифференциации B. melitensis от других видов Brucella . Полностью ген dnak амплифицируют, и продукт расщепляют Eco RV. B. melitensis имеет один сайт Eco RV, тогда как все остальные виды Brucella имеют два сайта Eco RV (Cloeckaert).Секвенирование 16S не позволяет дифференцировать номовиды. Недавно была разработана мультиплексная ПЦР в реальном времени на основе bcsp3,1 для идентификации культур предполагаемых видов Brucella (Probert, 2004).
    Начало страницы

    3.3 Биотипирование

    Биотипирование предполагаемых изолятов Brucella spp осуществляется путем определения чувствительности организмов к выбранным анилиновым красителям (тионину, основному фуксину, тиониновому синему и сафранину O) и пенициллину. Способность организма расти в присутствии эритрита, продукция H 2 S, потребность в CO 2 для роста, способность гидролизовать мочевину, агглютинация с антисывороткой, продуцируемой против антигенов A и M Brucella, и чувствительность к лизису с использованием Фаги Тбилиси и Вейбриджа.
    3.3.1 Подходящие и неподходящие образцы
    Изоляты, которые биохимически и морфологически соответствуют Brucella spp.
    Изоляты должны быть гладкими культурами.
    3.3.2 Подробности испытаний
    Тионин, основной фуксин, тиониновый синий и сафранин О красители в соответствующих разведениях, эритритол и пенициллин готовят и добавляют к отдельным аликвотам агара с декстрозой, к которому добавлена ​​эмбриональная телячья сыворотка. Тарелки заливают не более чем за 24 часа до использования.
    48–72-часовая культура исследуемого организма проверяется на гладкость с помощью кристаллического фиолетового.

    Если культура гладкая, то тяжелый посевной материал распределяют на испытательные планшеты, а также на 2 наклонных поверхности, которые инкубируют в аэробных условиях и на воздухе, обогащенном 5% CO. 2 и для определения того, требуется ли изоляту CO 2 для роста. Бумажная полоска, пропитанная ацетатом свинца, добавляется к внутренней крышке трубки CO 2 , чтобы определить, образуется ли H 2 S. Тестируемый организм добавляется в бульон с мочевиной, чтобы определить, гидролизует ли организм мочевину. Создают газонную культуру изолята и добавляют фаги Тбилиси и Вейбриджа в разведении, которое вызывает конфлюэнтный лизис (разведение в стандартном тесте) в чувствительных штаммах Brucella spp.Все культуры инкубируют при 37 ° C.

    Бульон мочевины исследуют на наличие гидролиза каждые 15 минут в течение 2 часов.
    Склон, содержащий полоску из ацетата свинца, исследуется ежедневно на предмет образования H 2 S. Все остальные чашки исследуют через 3 дня и регистрируют чувствительность к красителям и пенициллину. Способность организмов расти в присутствии эритрита определяется его чувствительностью к 2 фагам и его потребностью в CO 2 для роста.

    3.3.3 Чувствительность теста
    Зависит от изолята. Грубые штаммы нечувствительны к фагам Тбилиси и Вейбриджа.
    3.3.4 Специфичность теста
    Тест специфичен для видов Brucella .
    3.3.5 Прогнозные значения
    Отсутствуют.
    3.3.6 Подходящие критерии приемки теста
    Все элементы управления работают должным образом.
    3.3.7 Подходящие внутренние контроли
    Эталонные штаммы ВОЗ Brucella suis биотипа 1, Brucella abortus биотипа 2 и Brucella melitensis биотипа 1 устанавливаются с каждым неизвестным.
    3.3.8 Подходящие критерии валидации оригинального теста
    Биотип Brucella, подтвержденный биохимическими и фенотипическими параметрами.
    3.3.9 Подходящие программы внешнего контроля качества
    Нет в наличии.
    3.3.10 Особые соображения
    Культуры Brucella, выращиваемые in vitro, могут претерпевать изменения в морфологии колоний, которые сопровождаются изменениями антигенной структуры, чувствительности к фагам и вирулентности. Этот процесс называется диссоциацией и особенно вероятен при выращивании гладких штаммов в статической жидкой культуре.Произведенные варианты могут варьироваться от сильно аберрантных слизистых или грубых форм до других, которые являются переходными между крайними стадиями; промежуточные или гладко-промежуточные формы (Corbel et ​​al ).

    Тестирование культур либо кристаллическим фиолетовым, либо акрифлавином перед тестированием на чувствительность к фагам или агглютинацию с помощью моноспецифической антисыворотки необходимо для выявления вариантов, которые могут быть нечувствительными в этих тестах.

    Фаги Тбилиси и Вейбриджа не влияют на какие-либо негладкие виды Brucella.Любую реакцию с антисывороткой A или M следует игнорировать.
    Начало страницы

    3.4 Обнаружение нуклеиновых кислот ПЦР-анализ

    для прямого обнаружения бруцелл в образцах человека имеет значительное преимущество в безопасности по сравнению с методами культивирования. За рубежом описано несколько мишеней для ПЦР-тестов, включая bcsp31 (ген иммуногенетического мембранного белка, специфичного для рода Brucella ). Queipo-Ortuno et al, 2005 описали анализ ПЦР в реальном времени для обнаружения Brucella spp в сыворотке у пациентов из эндемичного района Испании (сыворотка оказалась менее ингибирующей, чем цельная кровь).Они сообщили о чувствительности анализа 94,6% и специфичности 94,6%. Соответствующая чувствительность посева крови составила 65%. Тесты ПЦР пока недоступны в продаже и не используются в Австралии.

    3.5 Серологические тесты

    В Австралии рутинно используются несколько тестов: тест на агглютинацию сыворотки (SAT), тест на бенгальский розовый, тест на дитиотреитол (DTT), тест на античеловеческий глобулин Кумбса (AHG), CFT и EIA. Антиген, используемый во всех тестах, должен происходить из гладких клеток бруцеллы, а не из грубых клеток, которые, как известно, увеличивают частоту перекрестных реакций с другими организмами.Наиболее важная перекрестная реакция происходит с Yersinia enterocolitica O: 9, который имеет общие антигенные детерминанты О-цепи ЛПС с Brucella. Эта перекрестная реакция влияет на все серологические тесты на бруцеллу, которые в настоящее время используются в Австралии для диагностики заболеваний человека. Только тесты с использованием суспензий антигенов, не содержащих ЛПС, специфичны для бруцеллы. Это было успешно достигнуто с использованием n -лауроилсаркозина (Erdenebaatar et al, 2003). Противоиммуноэлектрофорез использовался для измерения антител против растворимых антигенов, но в настоящее время недоступен в Австралии.

    Поскольку все номовиды перекрестно реагируют друг с другом и вакцинных штаммов B. abortus , серология не позволяет идентифицировать инфекционные виды Brucella . Антиген, используемый в серологических тестах, чаще всего представляет собой целые клетки B. abortus .

    3.5.1 Тест на агглютинацию сыворотки (пробирка) (SAT)
    SAT считается золотым стандартом серологического теста и, поскольку его легко выполнять, широко используется. Используемый антиген представляет собой солевую суспензию промытых гладких целых клеток Brucella abortus, , обычно получаемых коммерчески.Коммерческие препараты антигенов могут различаться по качеству, и каждую партию следует стандартизировать по панели сывороток с известным титром.
    3.5.1.1 Чувствительность теста
    Высокая — примерно 95% по сравнению с культурой. SAT не обнаруживает неагглютинирующие антитела; поэтому возможны ложноотрицательные результаты.
    3.5.1.2 Специфичность теста
    Перекрестные реакции происходят с антителами к Yersinia enterocolitica O: 9 и Afipia clevelandensis (Drancourt et al (1997)
    3.5.1.3 Прогностические значения
    Высокий для положительного титра, особенно при остром заболевании. Поскольку SAT обнаруживает преимущественно IgM (но также и IgG и IgA), он часто бывает положительным на ранних стадиях заболевания, и сероконверсия или повышение титра могут не наблюдаться. Лаборатории часто не хотят определять титр, соответствующий инфекции. В Австралии, где низкая заболеваемость людей, диагностический титр обычно выше 1:80. Иногда в литературе сообщалось о прозоне.
    3.5.1.4 Подходящие критерии приемлемости
    Для подтверждения положительного результата необходимо провести полное эпидемиологическое расследование.
    3.5.1.5 Подходящие внутренние контроли
    Стандартные положительные и отрицательные контроли и положительная сыворотка с известным титром.
    3.5.1.6 Подходящая внешняя программа контроля качества
    NATA / RCPA QAP для серологических исследований.
    Начало страницы
    3.5.2 Тест на бенгальскую розу
    RB — это экспресс-тест на агглютинацию в чашках, который изначально был разработан для скрининга крупного рогатого скота на B. abortus и полезен для диагностики в районах, где нет лабораторных помещений. Сейчас его часто используют для диагностики болезней человека.В тесте используется суспензия гладких клеток B. abortus , окрашенная красителем бенгальской розы для обнаружения агглютининов Brucella, и она обладает перекрестной реактивностью с другими организмами, идентичной SAT.
    Характеристики теста Rose Bengal очень похожи на SAT, но он более чувствителен и очень полезен в качестве скринингового теста.
    3.5.3 Тест с 2-меркаптоэтанолом (2-ME)
    Этот тест был разработан для измерения IgG у пациентов с хроническим бруцеллезом и высоким титром SAT, у которых диагноз не был ясен.Вкратце, SAT проводят в присутствии 0,005 M 2-ME, который расщепляет дисульфидные связи в IgM, устраняя их способность агглютинировать антигены Brucella. Сравниваются титры до и после лечения 2-МЕ. Сейчас этот тест предлагают лишь несколько лабораторий в Австралии.
    3.5.4 Тест Кумбса (AHG)
    Тест Кумбса обнаруживает наличие неагглютинирующих антител, которые не могут быть обнаружены другими серологическими тестами. Он используется для подтверждения диагноза у пациентов с убедительным анамнезом бруцеллеза, но у которых тесты SAT и RB отрицательны.Вкратце сыворотка реагирует с антигенами бруцелл и добавляется антиглобулин человека для агглютинирования любых образованных комплексов антиген-антитело. Чувствительность теста Кумбса значительно выше, чем у SAT, но его сложно выполнять.
    3.5.5 Тест фиксации комплемента (CFT)
    CFT становится положительным после SAT и RB. Это может быть полезно для диагностики пациентов, которые обращаются на позднюю стадию заболевания, когда титры других тестов снизились. Используемый антиген обычно представляет собой цельные гладкие клетки, и его перекрестная реактивность с другими организмами аналогична SAT и RB.Сейчас очень немногие австралийские лаборатории предлагают этот тест.
    3.5.6 ИФА (ИФА)
    В последние годы было разработано несколько коммерческих ИФА на Brucella. ELISA, произведенный в Австралии, в настоящее время используется несколькими крупными частными и государственными лабораториями для скрининга сывороток на наличие антител IgG и IgM к Brucella. Положительные сыворотки или сыворотки пациентов с многообещающим анамнезом, но с отрицательным ИФА, затем проверяются по крайней мере одним из других анализов. Антиген получают промыванием целых клеток Brucella, и перекрестные реакции такие же, как в тестах, описанных выше.Рабочие характеристики анализа доступны на веб-сайте компании (www.panbio.com.au) и аналогичны другим анализам EIA, описанным в литературе (Araj et al, 1986, Diaz and Moriyon 1989).
    3.5.6.1 Чувствительность теста
    Высокая.

    Чувствительность IgM ELISA приближается к 100% в сыворотке острой пробы. IgM может не обнаруживаться в сыворотке выздоравливающих, но редко может оставаться положительным в течение 19 месяцев.

    IgG ELISA может быть отрицательным в сыворотках, собранных на очень ранней стадии заболевания, но приближается к 100% в сыворотках выздоравливающих.

    3.5.6.2 Специфичность теста
    Высокая, но будет перекрестная реакция с антителами к Yersinia enterocolitica LPS
    3.5.6.3 Прогностические значения
    Отрицательная прогностическая ценность высокая, но положительная прогностическая ценность меньше. IgG ELISA может обнаруживать антитела после контакта без заболевания у рабочих, таких как ветеринары, с высоким риском воздействия, и оставаться положительным у пациентов, которые выздоровели от болезни.
    Начало страницы

    4 ССЫЛКИ

    1. Corbel, M.Дж. И Макмиллан, А. П. Бруцеллез, в микробиологии Топли и Вильсона и микробных инфекциях, том 3, Бактериальные инфекции (9-е изд.), Лондон: Арнольд, 1998. pp. 818 — 84.
    2. Корнер, Л. А. и Альтон, Г. Г. Бруцеллез крупного рогатого скота в австралийских стандартных методах диагностики болезней животных, Постоянный комитет по сельскому хозяйству и управлению ресурсами. Мельбурн: CSIRO, 1993.
    . 3. Фиори, П. Л. Инфекция Brucella abortus , полученная в микробиологических лабораториях. 2000. J Clin Microbiol 38: 2005-2006
    4.Ягупский П. Обнаружение бруцелл в культурах крови. 1999 г., журнал J Clin Microbiol 37: 3437-3442
    5. Ягупский П. Использование среды BACTEC MYCO / FLYTIC для обнаружения бактериемии Brucella melitensis . 1999. J Clin Microbiol 42: 2207-2208
    6. Вергер, Дж. М. и Грейон, М. Современная классификация рода Brucella, в Brucella melitensis (Verger and Plommet), Dordrecht: Martinus Nijhoff, 1985.
    7. Cloeckaert, A., Verger, J-M., Grayon, M. и Grepinet, O.(1996) Полиморфизм в локусе dnaK у видов Brucella и идентификация вида Brucella melitensis — специфический маркер. J. Med. Microbiol. 45, 200-205.
    8. Probert, SW, Schrader, KN, Khoung, NY, Bystrom, SL, Graves, MH, (2004) Анализ ПЦР в реальном времени для обнаружения Brucella spp., B. abortus, и B. melitensis. J Clin Microbiol 42: 1290-1293.
    9. Корбел, М. Дж., Гилл, К. П. У., Томас, Э. Л.Хендри, Д. Мак Л.Ф.Д, 1983 Методы идентификации бруцелл. MAFF Publications, Алнвик, Великобритания
    10. Арадж, Г.Ф., Лулу, А.Р., Мустафа, М.Ю., Хатиб, М.И. (1986) Оценка ELISA в диагностике острого и хронического бруцеллеза у людей. J Hyg. Camb. 97: 457-469.
    11. Диаз Р., Морион И. Лабораторные методы диагностики бруцеллеза человека. В бруцеллезе: клинические и лабораторные аспекты. Young EJ и Corbel MJ (Ed) CRC Press 1989.
    12. Дранкур М., Бруки П.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.