«70% жалоб населения касается деятельности банковского сектора» – портал Вашифинансы.рф
Олег Прусаков: «70% жалоб населения касается деятельности банковского сектора»
16 Ноября 2017
Интервью начальника управления защиты прав потребителей Роспотребнадзора Олега Прусакова в рамках межрегиональной конференции «Повышение финансовой грамотности в Российской Федерации от реализации Проекта Минфина России к запуску Государственной Стратегии».
Олег Владимирович, Роспотребнадзор является партнером Минфина России по реализации Проекта. Что делает Ваше ведомство для повышения финансовой грамотности граждан?
Основные направления нашей работы в Проекте связаны с нашими полномочиями, с компетенцией, которую мы реализуем в области защиты прав потребителей, в том числе в области защиты прав потребителей финансовых услуг. И поскольку этой темой мы занимаемся достаточно давно и полностью в нее погружены, соответственно, все те направления Стратегии, которые затрагивают правовое просвещение потребителей и тему защиты прав потребителей – это те направления, по которым мы активно работаем. Используем наработанный опыт в рамках Проекта финансовой грамотности, который реализует Минфин России совместно со Всемирным банком. И те практические аспекты, которые характеризуют нашу работу, связанные, в том числе, с правоприменительной практикой. Это всё те составные части работы, которые, мы надеемся, будем активно развивать и дальше.
Как показывают исследования, наши граждане плохо осведомлены о том, куда они могут обращаться за защитой своих прав. Насколько это подтверждает вашу статистику?
Да, действительно, такая проблема существует. И отчасти она связана с тем обстоятельством, что финансово-кредитные организации зачастую нередко себя позиционируют в правоотношении с участием потребителей таким образом, что на эти правоотношения нормы законодательства о защите прав потребителей якобы вообще не распространяются. Такая практика, к сожалению, все еще до сих пор существует. Это вводит потребителей в заблуждение, и они не знают, куда обращаться в этой ситуации.
Несмотря на это вся информация, которая важна потребителям, есть в открытом доступе. И все граждане, которые заинтересованы в отстаивании своих прав, на основе этой информации обращаются к нам, в Роспотребнадзор. Для этих целей совсем недавно мы открыли бесплатную круглосуточную телефонную горячую линию для всех жителей Российской Федерации, которая специализируется на оказании консультации в области защиты прав потребителей финансовых услуг. И мы надеемся, что этот новый канал коммуникации будет очень востребован и пойдет на пользу потребителя.
С какими проблемами и жалобами чаще всего обращаются граждане? И с каким результатом они решаются?
Порядка 70% всех жалоб, которые поступают в наш территориальный орган, так или иначе, касаются деятельности банковского сектора. Несмотря на то, что по различным оценкам именно к банкам у потребителей наибольшая степень доверия.
Каким образом Роспотребнадзор будет участвовать в реализации Стратегии развития финансовой грамотности?
Мы достаточно давно и плотно погружены в эту тему. Вся работа, которая делалась и будет делаться, уже ориентирована на решение задач, которые сформулированы в Стратегии. Это развитие наших возможностей в плане информирования и консультирования потребителей. Мы задействовали новые формы этой работы. Мы будем развивать новый информационный ресурс с точки зрения создания в нем новых опций для потребителей. И весь спектр нашей деятельности с точки зрения ориентации повышения уровня финансовой грамотности будет заключаться в использовании всех возможностей нашей структуры, нашей сети, наших информационных возможностей. По максимальному доведению до потребителей в доступной для них форме по всему спектру финансовых услуг тех информационных материалов, которые будут востребованы, и которые помогут им на должном уровне отстаивать собственные интересы.
Назад
График работы учреждений здравоохранения ГБУЗ ЛО «Рощинская МБ»
Стационар
188855, Ленинградская область, Выборгский район, п. Первомайское, ул. Ленина, д 54, А — круглосуточно.
Поликлиника
188820, Ленинградская область, Выборгский район, п. Рощино, ул. Советская, д. 37.
Филиал поликлиники пос. Первомайское
188855, Ленинградская область, Выборгский район, п. Первомайское, ул. Ленина, д. 54 «А».
Телефон регистратуры — 8 (81378) 68–534
с понедельника по пятницу: с 8 час.00 мин. — 15 час.00 мин.
Терапевт
Орлова Ангелина Александровна
Понедельника, среда, пятница: с 8 час.00 мин. — 11 час.00 мин.,
Суббота с 9 час.00 мин. — 12 час.00 мин
воскресенье — выходной
Терапевт
Жбанова О.М.
с понедельника по пятницу: с 8 час.00 мин. — 15 час. 00 мин.,
Суббота с 9 час.00 мин. — 12 час.00 мин
воскресенье — выходной
Педиатр
Шайтанова Марина Александровна
с понедельника по пятницу: с 10 час.00 мин. — 13 час. 00 мин.,
суббота: с 10 час.00 мин. — 12 час.00 мин.
воскресенье — выходной
Гинеколог
Гилязов Рашид Рахимович
Вторник, пятница: с 8 час.00 мин. — 11час.30 мин.,
суббота, воскресенье — выходной.
Хирург
Заведующий Хирургическим Отделением
Прусаков Олег Васильевич (Врач Высшей категории)
Понедельник, четверг: с 8 час.00 мин. — 11час.30 мин.,
суббота, воскресенье — выходной.
Клинико-биохимическая лаборатория
Заведующий Клинико-диагностической лаборатории
Ушанова Лариса Владимировна (Врач Первой категории)
с понедельника по пятницу: с 8 час.30 мин.- 10 час.30 мин.,
суббота: с 8 час.30 мин. — 10 час. 00 мин.
прием анализа: с 8 час.00 мин. — 15 час.00 мин.,
воскресенье — выходной.
Флюорографический кабинет
Заведующий Рентгенологическим кабинетом
Жбанов Андрей Юрьевич (Врач второй категории)
С понедельника по пятницу: с 8 час. 00 мин. — 9 час. 00 мин.,
с 15 час. 00 мин. — 17 час. 00 мин.
суббота, воскресенье — выходной.
Рентгенологический кабинет
Заведующий Рентгенологическим кабинетом
Жбанов Андрей Юрьевич (Врач второй категории)
круглосуточно
Кабинет УЗИ
Карташова Светлана Викторовна (Врач Первой категории)
с понедельника по пятницу: с 9 час.00 мин. — 14час.00 мин.,
суббота, воскресенье — выходной.
Кабинет ФГДС
Кандидат медицинских наук
Кудин Юрий Владимирович
Врач — эндоскопист
с понедельника по пятницу: с 9час.00 мин.- 14 час.00 мин.,
суббота, воскресенье — выходной.
| Declaration, status, office | Income, rub. | Real estate, m2 | Transport, qty. | ||
|---|---|---|---|---|---|
See details | 2 309 985 rub. | 56 025 m2 | 1 items | ||
Hide details | |||||
Начальник Управления федерального государственного надзора в области защиты прав потребителей See details | 2 931 753 rub. | 55 725 m2 | 1 items | ||
Hide details | |||||
The head of the Department of consumer protection See details | 1 881 622 rub. | 55 778 m2 | 1 items | ||
Hide details | |||||
The head of the Department of consumer protection See details | 1 933 346 rub. | 55 778 m2 | 1 items | ||
Hide details | |||||
Начальник Управления защиты прав потребителей See details | 1 933 346 rub. | 55 778 m2 | 1 items | ||
Hide details | |||||
Начальник Управления защиты прав потребителей See details | 1 974 565 rub. | 55 778 m2 | 1 items | ||
Hide details | |||||
Начальник Управления защиты прав потребителей See details | 2 089 386 rub. | 58 929 m2 | 1 items | ||
Hide details | |||||
Начальник Управления защиты прав потребителей See details | 1 355 502 rub. | 58 929 m2 | 1 items | ||
Hide details | |||||
Начальник Управления защиты прав потребителей See details | 989 440 rub. | 58 867 m2 | 1 items | ||
Hide details | |||||
Начальник Управления защиты прав потребителей See details | 995 720 rub. | 58 867 m2 | 1 items | ||
Hide details | |||||
Круглый стол, посвященный правам дольщиков с участием Т.Д. Полиди
«Террористы» в новостройках
Права дольщиков и санкции застройщикам обсудили в Совете Федерации. Федеральные чиновники разошлись во мнениях о «потребительском терроризме» дольщиков.
Проблема злоупотребления правом стала темой «круглого стола», который вёл председатель Комитета по федеративному устройству Олег Мельниченко. Термин «потребительский терроризм» старались не употреблять. Мероприятие было посвящено «соблюдению баланса интересов потребителей и застройщиков при оценке качества построенных жилых домов». Сам Олег Мельниченко уверен, что большинство споров между застройщиками и дольщиками из-за качества квартир можно решить в досудебном порядке: «Закон даёт достаточно широкие основания для защиты прав потребителей при обнаружении недостатков. Однако большинство покупателей не обладают должными знаниями в области строительства. К ним на помощь приходят эксперты, зачастую формально представляющие собственников жилья, которые направляют в суд иски по поводу и реальных, и мнимых недостатков. Подобные действия часто направлены не на их устранение и защиту прав граждан, а на личное обогащение. Во многих случаях недочёты не носят масштабный характер и могут быть устранены без суда».
Г-н Мельниченко предлагает выработать правовой подход, обеспечивающий реальное соблюдение и защиту прав потребителя, но не допускающий злоупотребления правом с целью получения необоснованной выгоды. Результаты «круглого стола» и должны лечь в основу корректировок законодательства. Недавно Госдума отклонила один из законопроектов, который предлагал установить обязательный досудебный порядок решения таких споров и снижал размер неустойки для застройщика. Но в Госдуме есть и второй, очень похожий законопроект.
Стадия отрицания
Начальник управления защиты прав потребителей Роспотребнадзора Олег Прусаков в принципе не признаёт проблемы. Он уверен, что за 20 лет трудности дольщиков никуда не делись. Некоторые застройщики всё так же не сдают дома вовремя, сознательно указывая нереалистичные сроки, чтобы привлечь клиентов. Передают квартиры меньшей площади, чем обещали, либо требуют дополнительных платежей. Включают в долевые договоры пункты, ущемляющие права потребителей, или не доводят до граждан обязательную и важную информацию. «Не согласен, что процветают злоупотребления со стороны дольщиков. По данным Верховного суда, с 2016 года число дел в судах общей юрисдикции, касающихся строительства жилья, снизилось на 20%. Пиковые значения были в 2017 году, когда рассмотрели 36 216 дел. Да, в 95% случаев дела завершаются в пользу потребителей, но мы не связываем это с «потребительским терроризмом», поскольку застройщики объективно нарушают права граждан, что подтверждают суды», – уверен Олег Прусаков.
Старший прокурор по надзору за исполнением законодательства Генпрокуратуры Алексей Зарецкий заверил, что органы прокуратуры будут на стороне потребителя: «Возможно, нужно урегулировать досудебный порядок. Кроме того, необходимо решить вопрос о лицензировании экспертных организаций, которые дают «заказные» заключения для судов. Такая проблема прослеживается и из поступающих к нам жалоб. Не согласен, что надо снизить размер компенсаций и штрафов. В ряде случаев застройщику будет выгоднее выплатить компенсации, а не построить изначально качественный объект».
В ходе дискуссии прозвучали и довольно странные предложения. Так, председатель Комиссии по ЖКХ, строительству и дорогам Общественной платы РФ Светлана Разворотнева уверена, что многие претензии граждан можно снять, усилив роль приобретателя в процессе приёмки домов: «Надо предоставить право дольщикам осматривать дом перед принятием решения о его вводе в эксплуатацию. Пригласить всех дольщиков на эту комиссию и оповестить о выявленных нарушениях». Как будет выглядеть приёмка дома на 1000 квартир, когда за экспертами будет ходить 1000 дольщиков, можно себе представить…
Исполнительный директор, директор направления «Рынок недвижимости» Фонда «Институт экономики города» Татьяна Полиди также не считает, что санкции для застройщиков надо смягчить: «Согласна, что точечные поправки в 214-ФЗ возможны. Но указывать, какие дефекты существенные, а какие нет – тема спорная. Автомобиль может быть полностью исправным и безопасным, но при этом поцарапанным, и никакой покупатель его не примет».
Не в судьях дело?
Руководитель аппарата Национального объединения застройщиков жилья Кирилл Холопик пояснил, что на самом деле схема выглядит несколько иначе, чем её представляют себе чиновники. Сначала дольщик принимает квартиру и подписывает акт. А уже потом юридические фирмы агитируют его заработать за счёт застройщика. Юристы подают от имени гражданина или группы граждан иск с требованием компенсаций, прилагая экспертные заключения, и только тогда застройщик узнаёт о каких-то недоделках. Девелопер пытается проверить наличие недостатков и готов их исправить, но его просто не пускают в квартиру. Естественно, строители отказываются выплачивать компенсации. Они просят провести судебную экспертизу, но им отказывают, поскольку у суда «нет оснований не доверять экспертному заключению, предоставленному дольщиком». В итоге суд удовлетворяет требования дольщика. Он получает компенсацию, неустойку и штраф, которыми делится с юристами.
«Не сомневаемся в качестве российского правосудия. Но вот качество экспертов, на основании выводов которых суды принимают решения, вызывает сомнения. Многие из них работают с юристами в связке. С автострахованием в своё время было то же самое, но в итоге удалось соблюсти баланс интересов. Мы внесли соответствующий законопроект в Госдуму, уже получили по нему замечания и исправили их. Он позволяет в первую очередь самим застройщикам исправить замечания, привязывает расчёты неустоек к ключевой ставке и исключает двойную ответственность. Сейчас есть случаи, когда неустойка взимается дважды, по двум статьям одного закона», – говорит сенатор от Республики Башкортостан Ирек Ялалов.
Заместитель главы Минстроя Дмитрий Волков видит корень зла в том, что при оценке недоделок применяются негодные инструменты: «Для защиты прав потребителей используются документы технического регулирования, созданные для строительного проектирования и ведения строительных работ. Это и проводит к нарушению баланса интересов застройщиков и граждан. Необходимо определить перечень замечаний, которые критически влияют на качество квартиры. Если сузить круг возможных споров, это в значительной степени выбьет почву из-под ног недобросовестных посредников». Он уверен, что допускать на рынок экспертов должно государство с помощью лицензирования и аттестации.
С этим согласен директор Департамента нормативного и методического обеспечения НОСТРОЙ Александр Мешалов. Но с оговоркой: допуск экспертов может обеспечить система саморегулирования. «Мы поддерживаем необходимость дополнительных требований к таким экспертам. Сейчас нет требований ни к самим специалистам, ни к методике обследования. Зачастую даже проектную документацию не смотрят. Но фиксируют отклонения, например, стен от вертикали на 1–2 мм. Вполне возможно, что это просто погрешность используемых инструментов. Мы поддерживаем и необходимость обязательного досудебного решения споров. Сейчас досудебный порядок возможен только если в законе есть такая прямая норма».
«Отдельное лицензирование и реестры не нужны – уже есть деятельность по обследованию строительных конструкций. Такие организации должны быть членами СРО, иметь специалистов с определённым образованием и стажем работы и соответствовать уйме других требований. А для дольщиков экспертизы делают люди, которые должны иметь профильное образование и некий опыт, и все они пишут, что дефекты критические. Надо серьёзно переработать и применять давно заброшенный, но существующий классификатор дефектовых повреждений. В нём чётко указано, какой дефект критический, какой значительный, а какой малозначительный. Тем не менее низкое качество строительных конструкций в многоквартирных домах – это серьёзная проблема. Фактов «потребительского терроризма» я не отрицаю, но справедливых требований со стороны граждан больше», – полагает президент Ассоциации обследователей зданий и сооружений Алексей Улыбин.
Статья целиком на сайте «Недвижимость и строительство Петербурга» от 30 ноября
Фото «Недвижимость и строительство Петербурга»
Олег Прусаков — Бригадир в компании Дачный Сезон
Отслужил срочную службу в строительных войсках, вернувшись, продолжил совершенствоваться в этой области как на практике, работая на стройках. Так и в теории, поступив в строительный колледж. С успехом окончил обучение и по рекомендации приишел работать в одну из столичных компаний. Благодаря наработанному опыту и богатой теоретической базе был приглашен на работу в компанию «Дачный сезон» в 2015 году.
Постоянно осваивает новые специальности и активно помогает развивать профессиональные навыки всем членам коллектива.
Увлечения: ландшафтный дизайн, путешествия.
разделительЕкатерина Макарова
Рук. клиентского отдела Заказать звонокА. Филиппова
Руководитель ПТО Заказать звонокТатьяна Муравьева
Архитектор Заказать звонокИван Курганов
Специалист по снабжению Заказать звонокНиколай Герасимов
Менеджер проекта Заказать звонокТимур Дасаев
Амбассадор компании Заказать звонокВасянкин Сергей
Руководитель строительства Заказать звонокМерсик Амарян
Начальник отдела логистики Заказать звонок разделительМногие сотрудники работают в компании «Дачный Сезон» уже более 7 лет. В нашей команде принято выполнять свою работу качественно и в срок. Специалисты отдела продаж помогут вам выбрать проект дома вашей мечты, расскажут, из каких материалов его можно построить и сколько это будет стоить. Архитекторы усовершенствуют типовой проект в соответствии с вашими пожеланиями или разработают для вас индивидуальный.
разделительВладимир Черкунов
Зам. дир-ра по строительству Заказать звонокАлексей Музыкин
Бригадир Заказать звонокАлексей Смирнов
Бригадир Заказать звонокВадим Синицын
Бригадир Заказать звонокЕвгений Королев
Бригадир Заказать звонокАлексей Васянкин
Бригадир Заказать звонокДмитрий Марушов
Бригадир Заказать звонокВладислав Голубцов
Бригадир Заказать звонокСергей Дажинов
Бригадир Заказать звонокСергей Козиков
Бригадир Заказать звонокСергей Коростелев
Бригадир Заказать звонокОлег Прусаков
Бригадир Заказать звонокВиктор Вдовин
Бригадир Заказать звонокАлексей Демин
Бригадир Заказать звонокСергей Вишняков
Бригадир Заказать звонокЭдуард Ярошенко
Бригадир Заказать звонокПавел Таразанов
Бригадир Заказать звонокИван Самсонов
Бригадир Заказать звонокДжанибек Аметов
Бригадир Заказать звонокБ.Турамрасов
Бригадир Заказать звонокЕвгений Лютин
Бригадир Заказать звонокНиколай Вивняков
Бригадир Заказать звонок разделительКомпания «Дачный Сезон» работает на рынке загородного строительства более 10 лет. С 2002 года нами накоплен огромный опыт в проектировании и строительстве загородных домов и коттеджей.
Основное направление нашей компании – это проектирование и строительство в Подмосковье и близлежащих областях каркасных домов под ключ, домов из блоков, кирпича и бруса.
Наша цель – спроектировать и построить для Вас надежный и долговечный дом, эксплуатация которого принесет радость его Семье!
Инженеры и архитекторы компании «Дачный Сезон» находят индивидуальный подход к каждому Клиенту, а наши строители воплощают задуманное с надлежащим качеством работ.
Нам доверяют с 2002 года! Оставьте заявку и мы проконсультируем Вас
Круглый стол «Защита прав потребителей в эпоху цифровой экономики»
Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав…
Временный поверенный в делах посольства ЮАР в РФ Мадива Мудимели во…
Заместитель руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты…
Экран с символикой председательства Российской Федерации в…
Заместитель руководителя Федеральной службы по надзору в сфере защиты…
Начальник управления федерального государственного надзора в области…
Второй секретарь посольства КНР в РФ Ян Юкунь во время круглого стола…
Первый секретарь посольства КНР в РФ Сунь Мин (слева) и второй…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Представитель посольства Бразилии в России Карлос Серапяо во время…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Начальник управления федерального государственного надзора в области…
Первый секретарь посольства КНР в РФ Сунь Мин во время круглого стола…
Представитель посольства Бразилии в России Карлос Серапяо во время…
Координатор проекта министерства финансов РФ и Всемирного банка по…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Монитор с символикой председательства Российской Федерации в…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Координатор проекта министерства финансов РФ и Всемирного банка по…
Эксперт Лаборатории финансовой грамотности экономического факультета…
Председатель Общественной потребительской инициативы Олег Павлов во…
Председатель Общественной потребительской инициативы Олег Павлов…
Председатель Общественной потребительской инициативы Олег Павлов…
Доцент кафедры прикладной институциональной экономики экономического…
Начальник управления федерального государственного надзора в области…
Участники круглого стола «Защита прав потребителей в эпоху цифровой…
Турфирмам напомнили о приближающихся детских каникулах и свином гриппе
Ответственность за жизнь и здоровье потребителей лежит на исполнителях, соответственно, в туризме она возлагается на туроператоров, сообщил начальник управления по защите прав потребителей Роспотребнадзора Олег Прусаков в рамках выставки «Отдых» в «Крокус-Экспо».
Семинар был организован Ассоциацией туроператоров России (АТОР) при участии руководителей Роспотребнадзора.
«Операторы обязаны информировать потребителей о неблагополучной ситуации со свиным гриппом в стране, если потребитель собирается в эту страну поехать», — сказал О.Прусаков.
По словам начальника отдела организации надзора за инфекционными и паразитарными болезнями Роспотребнадзора Натальи Фроловой, весь объем информации должен быть предоставлен потребителю на стадии, предшествующей заключению договора, и обеспечить ему возможность правильного выбора услуг. Полного информирования потребителей требует и закон о туризме.
«Операторы и агентства должны отсылать клиентов на сайт Роспотребнадзора, где есть раздел, посвященный свиному гриппу, а также предлагать им воспользоваться горячей линией (номер также указан на сайте Роспотребнадзора), — заметила она. – Это особенно важно сейчас, по мере приближения школьных каникул, когда детей традиционно вывозят за рубеж».
На сегодня, как сказала Н.Фролова, согласно данным Всемирной организации здравоохранения, число лабораторно подтвержденных заболеваний составляет более 300 тыс., случаев с летальным исходом — около 4 тыс.. В список неблагополучных стран входит 161 страна, где случаи гриппа были подтверждены лабораторно.
Правда, на фоне ежегодных цифр по заболеваемости гриппом эта статистика выглядит скромно: ежегодно в мире всеми «обычными» формами гриппа болеет 500 млн. человек, около 2 млн. умирает.
Она также сообщила хорошую новость: в ноябре-декабре будет готов первый тип вакцины — живая ослабленная. Всего же будет приготовлено четыре типа вакцины.
У руководителей турагентств позиция Роспотребнадзора вызывает много вопросов. С одной стороны, казалось бы, все понятно: потребители, располагающие полной информацией, сами решат, ехать или нет.
Но, как пояснил на семинаре О.Прусаков, по общим правовым нормам, ответственность за жизнь и здоровье потребителей лежит на исполнителях, в данном случае, операторах.
«Правда, только в случае, если нанесение вреда здоровью и жизни связано с турпродуктом, что надо доказать, — сказал он. — А по закону о туризме, оператор несет ответственность за качество турпродукта, который в первую очередь должен быть безопасным».
Неопределенность ситуации, как считают в турфирмах, усугубляется еще и «рекомендациями» Роспотребнадзора воздержаться от поездок. «Тогда бы уж запретили, и все было бы понятно», — так высказывались на семинаре некоторые операторы.
Между тем, у Роспотребнадзора нет полномочий запрещать выезд в ту или иную страну. Что касается запрета, объявленного в ряде регионов на выезд детских групп, в том числе в Свердловской области, то эта мера, как дали понять представители Роспотребнадзора, скорее всего, связана исключительно с желанием местных чиновников проявить служебное рвение.
ИсточникООО «СФТ СЕРВИС» (ИНН: 7801343740)
Общая информация:
Полное юридическое наименование: ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ «СОВРЕМЕННЫЕ ФАНЕРНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ СЕРВИС»
Руководитель: Прусаков Олег Владимирович
Дата записи в реестре: 17.01.2018
Уставный капитал: 2010 тыс. Руб.
Количество сотрудников: 11
Количество учредителей: 1
Контактная информация:
Адрес: РОССИЯ, МАГАДАН, УЛ.ПРОЛЕТАРСКАЯ, Д 59, КОРП 1, КВ 18
Почтовый индекс: 685031
Юридический адрес: , РОССИЯ, 197374, г. Санкт-Петербург, ГОРОД, УЛИЦА ОПТИКОВА, ДОМ 4, КОРПУС 508, ЛИТЕР А, 11-ПОМЕЩЕНИЕ, №5
Эл. Почта:
Сайт (www):
Телефон (а): 3-47-19, 5-80-44, +7 (921) 964-22-97
Реквизиты организации (данные из реестра):
ИНН: 7801343740
КПП (код причины постановки на учет): 780101001,781401001
ОКПО: 23398361
ОГРН: 1187847006060
ОКФС (Национальная классификация собственности): 16 — Частная собственность
ОКОГУ (Национальная классификация государственной власти и управления): 4210014 — Организации, созданные юридическими или гражданскими или юридическими лицами и гражданами вместе
ОКОПФ (Национальная классификация юридических форм): 12300 — Общество с ограниченной ответственностью
ОКТМО: 40322000000
Виды деятельности:
Основной (NACE): 51.1 — Оптовая и розничная торговля, ремонт автотранспортных средств, мотоциклов, бытовых товаров и предметов личного пользования, Оптовая торговля и комиссионная торговля, кроме автомобилей и мотоциклов, Оптовая торговля через агентов (за вознаграждение или на договорной основе)
Дополнительный:
| 33.20 | Производство приборов и приборов для измерения, мониторинга, тестирования, навигации, управления и других целей |
Учредители компании:
Итоги 2020 года:| Финансовая отчетность (бухгалтерские показатели): | |||
| Код | Показатель | Значение | Единица |
| F1.1100 | Итого по Разделу I — Внеоборотные активы | 424 | тыс. Руб. |
| F1.1100 | Итого по Разделу I — Внеоборотные активы | 1246 | тыс. Руб. |
| F1.1200 | Итого по Разделу II — Оборотные активы | 85849 | тыс. Руб. |
| F1.1200 | Итого по Разделу II — Оборотные активы | 50354 | тыс. Руб. |
| F1.1600 | БАЛАНС (актив) | 86274 | тыс. Руб. |
| F1.1600 | БАЛАНС (актив) | 51600 | тыс. Руб. |
| F1.1300 | Итого по Разделу III — Собственный капитал | 34857 | тыс. Руб. |
| F1.1300 | Итого по Разделу III — Собственный капитал | 9293 | тыс. Руб. |
| F1.1400 | Итого по Разделу IV — Долгосрочные обязательства | 0 | тыс. Руб. |
| F1.1400 | Итого по Разделу IV — Долгосрочные обязательства | 0 | тыс. Руб. |
| F1.1500 | Итого по Разделу V — Краткосрочные обязательства | 51416 | тыс. Руб. |
| F1.1500 | Итого по Разделу V — Краткосрочные обязательства | 42307 | тыс. Руб. |
| F1.1700 | БАЛАНС (пассивный) | 86274 | тыс. Руб. |
| F1.1700 | БАЛАНС (пассивный) | 51600 | тыс. Руб. |
| F2.2100 | Валовая прибыль (убыток) | 71611 | тыс. Руб. |
| F2.2100 | Валовая прибыль (убыток) | 34855 | тыс. Руб. |
| F2.2200 | Прибыль (убыток) от продаж | 37569 | тыс. Руб. |
| F2.2200 | Прибыль (убыток) от продаж | 10160 | тыс. Руб. |
| F2.2300 | Прибыль (убыток) до налогообложения | 33382 | тыс. Руб. |
| F2.2300 | Прибыль (убыток) до налогообложения | 7468 | тыс. Руб. |
| F2.2400 | Чистая прибыль (убыток) | 25564 | тыс. Руб. |
| F2.2400 | Чистая прибыль (убыток) | 5411 | тыс. Руб. |
| F2.2500 | Общий финансовый результат периода | 25564 | тыс. Руб. |
| F2.2500 | Общий финансовый результат периода | 5411 | тыс. Руб. |
Краткая справка:
Компания ООО «СФТ СЕРВИС» зарегистрирована 17 января 2018 года по адресу 197374, Санкт-ПетербургГОРОД, УЛИЦА ОПТИКОВА, ДОМ 4, КОРПУС 508 ЛИТЕР А, ПОМЕЩЕНИЕ 11-Н №546. Компании был присвоен ОГРН 1187847006060 и выдан ИНН 7801343740. Основным видом деятельности является оптовая торговля через агентов (за вознаграждение или на договорной основе). Компанию возглавляет Прусаков Олег Владимирович.За 2020 год прибыль компании составила 5411 тыс. Руб.Рекомбинантные белки распознавания пептидогликанов человека обнаруживают антихламидийную активность
Abstract
Белки распознавания пептидогликанов (PGLYRP) представляют собой компоненты врожденного иммунитета, которые распознают пептидогликан и липополисахариды бактерий и проявляют антибактериальную активность. Недавно было показано, что облигатный внутриклеточный паразит Chlamydia trachomatis имеет пептидогликан. Однако антихламидийная активность PGLYRP еще не продемонстрирована.Целью нашего исследования было проверить, проявляют ли PGLYRP антибактериальную активность против C. trachomatis . Таким образом, мы клонировали области, содержащие человеческие гены Pglyrp1 , Pglyrp2 , Pglyrp3 и Pglyrp4 для последующей экспрессии в линиях клеток человека. Мы получили стабильные клеточные линии HeLa, которые секретируют рекомбинантные человеческие PGLYRP в культуральную среду. Мы также создали очищенные рекомбинантные PGLYRP1, -2 и -4 и подтвердили их активность против грамположительных ( Bacillus subtilis ) и грамотрицательных ( Escherichia coli ) бактерий.Кроме того, мы исследовали активность рекомбинантных PGLYRP против C. trachomatis и определили их МИК. Мы также наблюдали снижение инфекционной способности элементарных тел хламидий в следующем поколении после однократного воздействия PGLYRP. Наконец, мы продемонстрировали, что PGLYRP прикрепляются к элементарным тельцам C. trachomatis и активируют экспрессию хламидийной двухкомпонентной системы ответа на стресс. Таким образом, PGLYRP подавляют развитие хламидийной инфекции.
ВВЕДЕНИЕ
Белки распознавания пептидогликанов (PGLYRP) являются членами системы врожденного иммунитета. Первоначально было показано, что они связывают бактериальный пептидогликан и активируют путь пропенолоксидазы у насекомых (1). Позже PGLYRP были обнаружены также у млекопитающих и других таксономических групп (2, 3). У млекопитающих есть четыре PGLYRP, от PGLYRP1 до -4, которые были идентифицированы как бактерицидные белки (4, 5). Было показано, что PGLYRP распознают не только бактериальный пептидогликан, но и липополисахариды на внешней мембране грамотрицательных бактерий (6).В 2010 году был предложен новый механизм уничтожения бактерий с участием PGLYRP. PGLYRP связываются с пептидогликаном клеточной стенки бактерий или липополисахаридами внешней мембраны и гиперактивируют реакцию защиты от стресса у бактерий, которая приводит к самоубийству бактерий (7). Было показано, что PGLYRP связывают пептидогликан и липополисахариды в Bacillus subtilis и Escherichia coli , соответственно, и активируют бактериальные двухкомпонентные системы (TCS) CssS-CssR в B. subtilis и CpxA-CpxR в .coli , что приводит к гибели бактерий (7). В этих TCS CssS и CpxA включают домен гистидинкиназы (HK), а CssR и CpxR действуют как регуляторы ответа. В ранних исследованиях Лу и соавт. (8) продемонстрировали бактерицидную активность PGLYRP против различных грамположительных и грамотрицательных бактерий in vitro и в vivo . PGLYRP проявляют как распознающую, так и эффекторную активность против различных бактерий (3, 5, 7, –9). Однако их активность против внутриклеточных патогенных паразитов, таких как хламидии, еще не продемонстрирована.
Хламидии чередуются между двумя формами: инфекционным, метаболически неактивным элементарным тельцем (EB) и неинфекционным, метаболически активным ретикулярным тельцом (RB) (10). Обе формы RB и EB содержат липополисахариды (11). Более того, Liechti et al. (12) сообщили, что C. trachomatis содержит пептидогликан. Он был обнаружен при переходе от формы EB к форме RB (12). Эти патогенные бактерии могут считаться потенциальными мишенями для PGLYRP. Более того, PGLYRP были обнаружены в тканях, которые, как было показано, подвергаются атаке C.trachomatis (13, 14). В 2003 году Ку и Стивенс (15) охарактеризовали пару генов в C. trachomatis , которые кодируют белки с аминокислотными последовательностями, сходными с таковыми из бактериального TCS. Пара включает компонент с доменом HK (CtcB) и белок-регулятор ответа (CtcC). Эти белки были обнаружены в EB C. trachomatis . Таким образом, целью данного исследования было проверить, проявляют ли PGLYRP антибактериальную активность против внутриклеточной патогенной бактерии C.trachomatis . Таким образом, мы создали очищенные человеческие рекомбинантные PGLYRP, протестировали их активность против грамположительных и грамотрицательных бактерий, определили их MIC для C. trachomatis и исследовали экспрессию генов, кодирующих TCS, после обработки хламидийных EB с помощью PGLYRP.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Штаммы бактерий и клеточные линии.
Клетки HeLa (ATCC CCL-2) выращивали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM; Life Technologies) с 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сывороткой (FBS), 2 мМ глутамина, 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл. мл стрептомицина при 37 ° C в присутствии 5% CO 2 .Клетки Expi293F (Life Technologies) культивировали согласно рекомендациям производителя. E. coli Top10 (Invitrogen), Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 и Bacillus subtilis 168 HT были любезно предоставлены А. Прозоровым (Институт общей генетики им. Вавилова РАН) и выращены в Лурия-Бертани ( LB) бульон при 37 ° C. EB C. trachomatis D / UW-3 / Cx (ATCC VR-885) выделяли ультрацентрифугированием в градиенте урографина, как описано ранее (16).Для роста C. trachomatis в клетках HeLa использовали DMEM с 0,5% глюкозы, 10% FBS и 25 мкг / мл гентамицина. Перед инокуляцией C. trachomatis клетки HeLa высевали в 24-луночные планшеты (Corning) в количестве приблизительно 10 5 на лунку и культивировали в течение 24 часов для достижения слияния монослоя. Затем монослой клеток инфицировали инокулятом C. trachomatis при множественности инфицирования (MOI) от 0,9 до 1. Клетки центрифугировали в течение 1 ч при 900 × g .
Для продукции белка клетки HeLa-PGLYRP инкубировали в течение ночи, трижды промывали DMEM и затем культивировали в DMEM без FBS и содержащей 10 мкг / мл гентамицина. Клетки культивировали еще 72 часа при 37 ° C в присутствии 5% CO 2 .
ПЦР.
ПЦР выполняли в термоциклере DNA Engine Tetrad 2 (Bio-Rad) в реакционном объеме 25 мкл с 2–3 мМ MgCl 2 , 0,2 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата (dNTP), 67 мМ Tris-HCl ( pH 8.3), 16,7 мМ (NH 4 ) 2 SO 4 , 0,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Thermo Scientific), от 1 до 10 нг ДНК и 5 пмоль каждого праймера. Условия термоциклирования (° C / с) составляли 95/120 для 1 цикла и 95/10, от 55 до 62/10 и от 72/20 до 120 для 25 циклов с конечным удлинением 72/120.
Обратная транскрипция.
Тотальную РНК выделяли с помощью TRIzol (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. Из-за тканевой специфичности PGLYRP (14) белые кровяные тельца были использованы для получения мРНК Pglyrp1 .Клеточную линию HepG2 использовали для получения мРНК Pglyrp2 , а биопсийный материал пищевода человека использовали для получения мРНК Pglyrp3 и Pglyrp4 . Загрязнение ДНК удаляли расщеплением ДНКазой ДНКазой I (Thermo Scientific). кДНК затем синтезировали обратной транскрипцией с использованием обратной транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (Promega) в соответствии с протоколом производителя и праймером polyT (см. таблицу S1 в дополнительном материале).
Клонирование
кодирующих областей Pglyrp . кДНКамплифицировали со специфическими олигонуклеотидами (последовательности см. В таблице S1 в дополнительном материале). Для получения экспрессионных векторов гены PGLYRP клонировали в векторы pEGFP-N1 (Clontech) и pcDNA3.4 TOPO (Life Technologies). Таким образом, мы сконструировали плазмиды pcDNA-IGG-PGLYRP, кодирующие Pglyrp , слитые с легкой цепью кроличьего IgG, сайтом протеазного расщепления вируса травления табака (TEV) и C-концевой меткой 6His. Плазмидную ДНК выделяли и проверяли секвенированием с помощью набора BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit (v.3.1) на анализаторе генов ABI PRISM 3730xl (Applied Biosystems) с олигонуклеотидами pN1-pN2 для всех векторов pEGFP-N1-PGLYRP и Cmv_F-pcDNA_R для всех векторов pcDNA3.4-PGLYRP. Схемы клонирования см. На рис. S1 – S3 в дополнительном материале.
Трансфекция клеток HeLa и Expi293F.
Клетки Expi293F культивировали и трансфицировали векторами pcDNA-IGG-PGLYRP в соответствии с инструкциями производителя. Клетки HeLa трансфицировали векторами pEGFP-N1-PGLYRP и реагентом для трансфекции TransPass COS / 293 (NEB) в соответствии с инструкциями производителя, и стабильно трансфицированные клоны отбирали с помощью 500 мкг / мл G418 (Life Technologies).
Генерация PGLYRP1, -2 и -4 из слитого белка легкой цепи IgG-PGLYRP.
Клетки Expi293F, трансфицированные плазмидами pcDNA-IGG-PGLYRP, культивировали в 100-мл колбах с конечным объемом 30 мл культуральной среды Expi293. Через 120 ч после трансфекции культуру клеток центрифугировали при 130 × g в течение 10 мин. Культуральную среду разбавляли 8-кратным хроматографическим буфером (конечные концентрации 500 мМ NaCl, 20 мМ NaH 2 PO 4 и 10 мМ имидазола [pH 7.4]), а затем центрифугировали (12000 × г в течение 15 мин). Конечный раствор наносили на колонку, содержащую 1 мл Ni Sepharose High Performance (GE Healthcare), уравновешенную хроматографическим буфером. Колонку промывали 200 мл промывочного буфера (500 мМ NaCl, 20 мМ NaH 2 PO 4 , 40 мМ имидазол, pH 7,4), а затем связанную фракцию элюировали элюирующим буфером (500 мМ NaCl, 20 мМ). мМ NaH 2 PO 4 , 500 мМ имидазол, pH 7,4). Расход составлял 1.5 мл / мин. Белки очищали с помощью системы быстрой жидкостной хроматографии белков AKTA (GE Healthcare). Раствор слитого белка подвергали диализу против фосфатно-солевого буфера (PBS, pH 7,4) при 4 ° C в течение ночи. Концентрацию белка измеряли с помощью анализа белка Брэдфорда. Затем добавляли 1% (мас. / Мас.) Протеазы TEV (Sigma) и 0,5% (об. / Об.) 2-меркаптоэтанола, и смесь затем инкубировали при комнатной температуре в течение ночи. После инкубации раствор центрифугировали при 12000 × g в течение 15 мин.Супернатант разбавляли хроматографическим буфером до конечного объема 50 мл и наносили на колонку с Ni-сефарозой для очистки, как описано ранее. Присутствие PGLYRP в собранных фракциях определяли с помощью Laemmli SDS-PAGE.
В качестве контролей для последующих экспериментов с очищенными PGLYRP мы использовали холостые контрольные образцы и буфер для элюции. Для приготовления холостого контрольного образца мы наносили культуральную среду из клеток Expi293F, трансфицированных вектором pcDNA_IGG, на колонку с Ni-сефарозой.Затем мы диализовали элюат против PBS, pH 7,4, при 4 ° C в течение ночи. Мы добавили к раствору протеазу TEV и 2-меркаптоэтанол в тех же концентрациях, что и для протеолиза PGLYRP. Раствор инкубировали в течение ночи, разбавляли в 10 раз и затем наносили на колонку с Ni-сефарозой. Элюат служил холостым контрольным образцом.
Матричная лазерная десорбционная ионизация — времяпролетный масс-спектрометрический анализ (MALDI-TOF).
Полосы белка после одномерного SDS-PAGE подвергали гидролизу трипсином в геле.Кусочки геля (от 2 до 3 мм 3 ) нарезали и дважды промывали 100 мл 0,1 М бикарбоната аммония и 40% ацетонитрила в течение 30 мин при 37 ° C, обезвоживали 100 мл ацетонитрила и сушили на воздухе. Затем кусочки геля обрабатывали 4 мл раствора модифицированного трипсина (Promega) с концентрацией 12,5 мг / мл в 40 мМ бикарбонате аммония и 10% ацетонитриле в течение 16 часов при 37 ° C. Пептиды экстрагировали 8 мл водного раствора 0,5% трифторуксусной кислоты в течение 20 мин. Аликвоты образцов (2 мл) смешивали на стальной мишени с 0.3 мл раствора 2,5-дигидроксибензойной кислоты (Bruker Daltonics) (75 мг / мл в 30% ацетонитриле и 0,5% трифторуксусной кислоте). Масс-спектры записаны на масс-спектрометре Ultraflex II MALDI-TOF-TOF (Bruker Daltonics), оборудованном неодимовым лазером. Молекулярные ионы измерялись в режиме отражателя; точность измерения пика массы составляла 0,005%. Спектры фрагментных ионов были получены с помощью лазерно-индуцированной диссоциации, ускоренной за счет низкоэнергетической диссоциации, вызванной столкновениями, с гелием в качестве газа столкновения.Точность измерения пика массы фрагментного иона составляла 5 Да. Фрагменты тандемной масс-спектрометрии (МС / МС) идентифицировали с помощью программного обеспечения BioTools (Bruker Daltonics) и ионного поиска Mascot MS / MS. Идентификацию белка проводили путем поиска по пептидным отпечаткам пальцев с помощью программного обеспечения Mascot (Matrix Science Inc.). Допускалось одно пропущенное расщепление, цис-пропионамид и окисление Met. Уровень белка> 49 считался значимым ( P <0,05).
Определение MIC для
E.coli и B. subtilis .МИК были определены как самые низкие концентрации PGLYRP, которые подавляют видимый рост бактерий. Метод разбавления в бульоне использовали в соответствии со ссылкой 17. Вкратце, 150 мкл среды LB, содержащей E. coli или B. subtilis при 5 × 10 5 КОЕ / мл, добавляли в лунки 96-луночного планшета. пластина. Готовили серийные 2-кратные разведения PGLYRP в забуференном солевом растворе Хэнкса (HBSS) (Thermo Scientific) и добавляли в лунки до конечного объема 200 мкл.Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 18 ч. Образцы роста в чашках были проанализированы, и МИК были определены, как описано ранее (17).
Определение МИК для
C. trachomatis .Измерения MIC для C. trachomatis проводили следующим образом. Клетки HeLa высевали в лунки 24-луночного планшета с покровными стеклами и культивировали до достижения 90% слияния. Мы приготовили серийные 2-кратные разведения PGLYRP. Белки разводили в HBSS до конечного объема 199 мкл.Один микролитр инокулята C. trachomatis (10 5 EB / мкл) добавляли к каждому образцу PGLYRP, который затем инкубировали при встряхивании при 37 ° C в течение 2 часов. Культуральную среду отсасывали из лунок, засеянных клетками HeLa, и к клеткам добавляли 200 мкл образцов PGLYRP с хламидийными EB или контрольными образцами. Планшеты центрифугировали (900 × г, , 1 час) и добавляли свежую DMEM до конечного объема 1 мл. Мы добавили HBSS и пустой контрольный образец в HBSS в контрольные лунки.Чашки культивировали при 37 ° C в присутствии 5% CO 2 в течение дополнительных 47 часов. После инкубации лунки фиксировали 4% параформальдегидом в течение 20 минут и повышали проницаемость 1% Triton X-100 в течение 30 минут. Клетки окрашивали методом прямой иммунофлуоресценции куриными антихламидийными липоолигосахаридными антителами, меченными флуоресцеинизотиоцианатом (FITC; Galart Diagnosticum) в течение 1 часа. Раствор антител также содержал бромид этидия. Окрашенные покровные стекла помещали на предметные стекла с монтажной средой.Изображения 10 случайно выбранных полей для каждого покровного стекла были получены с помощью конфокального микроскопа Nikon Eclipse E800 (Nikon, Япония) с возбуждением на 488 нм (канал FITC) и 594 нм (канал бромистого этидия), объективом 10 × Plan Fluor и Объектив Plan Fluor 40 ×. Количество меченых клеток в обоих каналах определяли количественно с помощью программного обеспечения ImageJ (версия 1.48; RSB [http://imagej.nih.gov/]). Скорость инфицирования определяли как отношение количества клеток с включениями, меченными антителами (канал FITC), к общему количеству клеток (канал бромистого этидия).МИК определялись как самые низкие концентрации PGLYRP, при которых скорость инфицирования снижалась до> 90% от таковой в контрольных лунках (18).
Производство инфекционного потомства.
Чтобы проверить действие PGLYRP на продукцию инфекционного потомства, мы высевали клетки HeLa в два 24-луночных планшета и культивировали их до достижения 90% слияния. В каждый планшет мы добавляли аликвоту PGLYRP (100 нг / мл), а также пустой контрольный образец равного объема в контрольные лунки.Клетки в обоих планшетах инфицировали C. trachomatis при MOI 1, как описано выше, и культивировали при 37 ° C в течение дополнительных 71 часа. Затем один из планшетов фиксировали и использовали для подсчета единиц, образующих включение (IFU). Титры (в IFUs на миллилитр) рассчитывали, как описано ранее (16). В другом планшете культуральную среду удаляли из лунок. Клетки ресуспендировали в 200 мкл HBSS с помощью пипетки, переносили в микроцентрифужные пробирки и лизировали замораживанием / оттаиванием.Чтобы подготовить посевной материал с эквивалентными MOI для следующего раунда заражения, мы разводили лизаты в соответствии с титрами, рассчитанными с использованием первой чашки. Разбавленные лизаты использовали для заражения свежих клеток HeLa. Затем клетки фиксировали через 48 ч после инокуляции. Подсчитывали IFU и рассчитывали титры, как описано выше.
Приставка PGLYRP к
C. trachomatis .Чтобы доказать, что PGLYRP прикрепляются к C. trachomatis , растворы, содержащие очищенные PGLYRP (50 нг в 100 мкл HBSS), смешивали с 30 мкл C.trachomatis (10 5 клеток / мкл). Мы использовали очищенные PGLYRP в HBSS и EB в HBSS в качестве контрольных образцов. Образцы центрифугировали при 20 000 × g при 4 ° C в течение 30 мин. Супернатант собирали в свежую пробирку. Осадок промывали HBSS, центрифугировали при 20000 × g в течение 10 мин при 4 ° C и разбавляли в 100 мкл HBSS. Равные аликвоты осадка и супернатанта анализировали вестерн-блоттингом с мышиным моноклональным антителом против 6His для обнаружения прикрепления C.trachomatis и PGLYRPs.
Вестерн-блоттинг.
PGLYRP, разведенных в буфере для образцов Лэммли, нагревали до 95 ° C в течение 10 мин. Зонды разделяли с помощью 12% SDS-PAGE. После разделения белки переносили (полусухой перенос, 1 мА / см 2 в течение 1 ч) на поливинилидендифторидную мембрану (GE Healthcare) в буфере для переноса трис-глицина (48 мМ Трис, 39 мМ глицин, 0,04% SDS, 20% метанол). Мембрану блокировали 3% обезжиренным сухим молоком в PBS и обрабатывали мышиным моноклональным антителом против 6His в разведении 1: 10 000 (Invitrogen) при 4 ° C в течение ночи.Мембрану трижды промывали 0,1% Tween 20 в PBS, инкубировали с овечьим антителом против IgG мыши, связанным с пероксидазой хрена, в разведении 1:25 000 (GE Healthcare) в течение 1 ч, а затем трижды промывали. Мембрану обрабатывали реагентами для определения Вестерн-блоттинга ECL Plus (GE Healthcare) в соответствии с инструкциями производителя. Сигналы детектировали с помощью системы ChemiDoc XRS + (Bio-Rad).
Анализ активации экспрессии гена TCS хламидий.
клеток HeLa высевали в лунки 24-луночного планшета и культивировали до достижения 90% слияния.PGLYRP (100 нг / мл) разводили в HBSS до конечного объема 199 мкл. Один микролитр инокулята C. trachomatis (10 5 EB / мкл) добавляли к каждому образцу PGLYRP. Мы добавили HBSS и пустые контрольные образцы в HBSS в контрольные лунки. Культуральную среду отсасывали из лунок, засеянных клетками HeLa, и к клеткам добавляли 200 мкл образцов PGLYRP с хламидийными EB или контрольными образцами. Клетки инфицировали EB C. trachomatis при MOI 1. Клетки центрифугировали (900 × g , 1 час).Тотальную РНК выделяли в различные моменты времени после инокуляции от 0 до 72 часов. кДНК получали со специфическими праймерами (CtcC_R, CtcB_R, EuoR и OmcB_R). ПЦР в реальном времени выполняли с праймерами CtcB_F-CtcB_R, CtcC_F-CtcC_R, EuoF-EuoR и OmcB_F-OmcB-R (см. Таблицу S1 в дополнительном материале). ПЦР в реальном времени выполняли с помощью системы обнаружения CFX96 Touch Real-Time PCR (Bio-Rad) с 0,1 × SYBR green I (Invitrogen), 1 × Taq буфером с (NH 4 ) 2 SO 4 (Thermo Scientific), 0.2 мМ каждого dNTP, 0,5 ед. ДНК-полимеразы Taq (Thermo Scientific), 10 нг кДНК и 5 пМ каждого праймера. Данные были нормализованы к референсным генам раннего белка открытой рамки считывания ( euo ) и большого цистеин-богатого периплазматического белка ( omcB ) и вычислением среднего геометрического трех повторов, как описано в ссылке 19. Изменения складывались. определяется как отношение уровней экспрессии генов в разные моменты времени к уровням в 0-часовой момент времени.
Статистика.
Анализ данных выполнялся с помощью параметрического статистического анализа (тест Стьюдента t и тест множественного сравнения [двусторонний дисперсионный анализ]) с помощью программного обеспечения Statistica (версия 8.0; StatSoft Inc.). Данные представлены как средние значения ± стандартное отклонение. Различия между средними считались значимыми при значении P <0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Временная трансфекция и идентификация белков.
Для получения рекомбинантных человеческих PGLYRP мы создали стабильные клеточные линии HeLa, которые секретируют PGLYRP в культуральную среду.Эти линии были получены путем трансфекции клеток HeLa векторами pEGFP-N1-PGLYRP (см. Фиг. S1 в дополнительном материале). Трансфицированные клетки отбирали с помощью G418, и экспрессию генов PGLYRP подтверждали с помощью ПЦР с обратной транскрипцией. Мы обнаружили рекомбинантные белки в супернатанте культуры с помощью вестерн-блоттинга (). Однако мы не смогли получить очищенные белки из-за низкого уровня накопления. Затем мы временно трансфицировали клетки Expi293 векторами pcDNA-PGLYRP (см.рис.S2 в дополнительном материале). Продукцию PGLYRP в культуральной среде подтверждали вестерн-блоттингом (не показано). В этом случае мы также не смогли получить очищенные белки из-за низкого выхода. Таким образом, мы сконструировали новые векторы pcDNA-IGG-PGLYRP (см. Рис. S3 в дополнительном материале), кодирующие легкую цепь кроличьего IgG, слитую с PGLYRP, с промежутками между сайтом расщепления протеазой TEV. Временная трансфекция клеток Expi293 векторами pcDNA-IGG-PGLYRP вызвала усиленную секрецию рекомбинантных белков в культуральную среду, что впоследствии позволило нам очистить рекомбинантные человеческие PGLYRP1, -2 и -4 с помощью хроматографии.Уровень накопленного рекомбинантного PGLYRP3 оказался недостаточным для последующей очистки.
Вестерн-блот-анализ рекомбинантных человеческих PGLYRP из клеток HeLa, трансфицированных векторами pEGFP-N1-PGLYRP. Дорожки: а, PGLYRP1; b, PGLYRP2; c, PGLYRP3; d, PGLYRP4; M, маркеры молекулярной массы (соответствующие значения [в килодальтонах] показаны слева).
Слитые белки подвергались протеолизу протеазой TEV (20) в присутствии 0,5% 2-меркаптоэтанола. Оптимальное соотношение субстрат: протеаза составляло 100: 1 (вес / вес).В этом случае почти полное расщепление происходило после инкубации в течение ночи. Из-за высокой концентрации 2-меркаптоэтанола образцы разбавляли в 10 раз, чтобы избежать восстановления Ni 2+ во время последующей хроматографической очистки. Очищенные белки анализировали с помощью SDS-PAGE () и идентифицировали с помощью анализа MALDI-TOF (см. Фиг. S4 в дополнительном материале). Конечный выход чистого PGLYRP1, -2 и -4 составлял приблизительно 50 мг / л исходной культуры клеток.
Окрашенный кумасси G-250 анализ Laemmli SDS-PAGE рекомбинантных PGLYRP, выделенных из супернатантов культуральной среды клеток Expi293F, трансфицированных векторами pcDNA-IGG-PGLYRP.Дорожки: от а до с, очищенный PGLYRP1, -2 и -4 соответственно; m, маркеры молекулярной массы (соответствующие значения [в килодальтонах] показаны справа).
Определение МИК.
Чтобы проверить антибактериальную активность сгенерированных рекомбинантных белков, мы измерили их МИК для E. coli и B. subtilis (). Полученные результаты позволили подтвердить наличие антибактериальной активности PGLYRP. Кроме того, мы определили MIC PGLYRP для C.trachomatis ().
ТАБЛИЦА 1
МИК PGLYRP1, PGLYRP2 и PGLYRP4, определенные для E. coli , B. subtilis и C. trachomatis
| Белок | для белка | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| E. coli | B. subtilis | C. trachomatis | ||||
| PGLYRP1 | 12,5 | PGLYRP1 | 12,5 | 25 | 400 | |
| PGLYRP4 | 12.5 | 12,5 | 200 | |||
Прикрепление PGLYRP к
C. trachomatis .Мы проверили, прикрепляются ли PGLYRP к C. trachomatis . С этой целью мы проанализировали четыре образца с помощью вестерн-блоттинга с мышиным анти-6His антителом (). Первый образец был очищен PGLYRP1 в HBSS (, дорожка а), второй образец представлял собой супернатант центрифугированной смеси PGLYRP1 с хламидийными EB в HBSS (, дорожка b), третий образец представлял собой осадок центрифугированной смеси PGLYRP1 с хламидийным EB в HBSS (, дорожка c), а четвертый образец представлял собой осадок центрифугированных хламидийных EB в HBSS (, дорожка d).Мы обнаружили, что PGLYRP1 обнаруживался преимущественно в осадке после центрифугирования смеси PGLYRP с хламидийными EB (полосы a и c, полосы PGLYRP). Мы также наблюдали неспецифическое окрашивание хламидийных белков (полосы c и d, полосы U.B.). Аналогичные результаты были получены с PGLYRP2 и -4. Обнаружение PGLYRP в осадке после центрифугирования смеси PGLYRP с хламидийными EB подтвердило прикрепление PGLYRP к хламидийным EB.
Вестерн-блоттинг связывания рекомбинантного PGLYRP1 с C.trachomatis . Дорожки: а, очищенный PGLYRP1 в HBSS; б — супернатант центрифугированной смеси PGLYRP1 с хламидийными EB в HBSS; c — осадок центрифугированной смеси PGLYRP1 с хламидийными EB в HBSS; г — осадок центрифугированных хламидийных EB в HBSS. Верхние неспецифические полосы (U.B.) соответствуют неспецифическому окрашиванию хламидийных белков. Дорожка M, маркеры молекулярной массы (соответствующие значения [в килодальтонах] показаны справа).
Производство инфекционного потомства.
Чтобы проверить, подавляют ли PGLYRP образование инфекционного потомства, мы добавили PGLYRP к клеткам HeLa и инфицировали их C.trachomatis EBs. В первом раунде заражения мы обнаружили снижение титров хламидий во всех лунках, в которые были добавлены PGLYRP перед инокуляцией EB C. trachomatis (). Из-за разницы в титрах между образцами посевной материал, полученный после первого раунда заражения, разбавляли для достижения эквивалентных значений MOI. Разбавленные инокуляты использовали для второго раунда инфицирования свежих клеток HeLa. Через 48 часов после инокуляции мы обнаружили повышенные титры в контрольных лунках по сравнению с исходными титрами ().Это наблюдение показывает рост хламидий в контрольных лунках. В лунках, в которые добавляли PGLYRP перед инокуляцией EB C. trachomatis , мы обнаружили титры ниже исходных (). Таким образом, наши результаты демонстрируют, что PGLYRP подавляют рост хламидий и снижают продукцию инфекционного потомства.
Изменения в родительских титрах и потомстве C. trachomatis после обработки очищенными выделенными PGLYRP, добавленными к клеткам HeLa. Родительские титры рассчитывали через 72 часа после заражения (А).Чтобы нормализовать данные родительских титров, образцы разбавляли для достижения эквивалентных значений MOI (горизонтальная линия) для анализа продукции инфекционного потомства (B). В качестве контроля использовали холостой контрольный образец.
Анализ активации экспрессии гена TCS хламидий.
Чтобы проверить, активируют ли PGLYRP хламидийный TCS, мы проанализировали динамику экспрессии ctcB и ctcC после инфицирования клеток HeLa EB, обработанных PGLYRP. Мы использовали пустой контрольный образец в HBSS в качестве контроля.Мы выделили тотальную РНК из инфицированных клеток HeLa через 0, 1, 24, 48, 60 и 72 ч после инокуляции. Анализ ПЦР в реальном времени показал повышенные уровни генов ctcB и ctcC через 1 и 72 часа после инокуляции в случаях, когда EB лечились PGLYRP (). Кроме того, мы увеличили временное разрешение, используя для анализа 0-, 15-, 30-, 60-, 90-, 120-, 180- и 300-минутные временные точки после прививки. Максимальные уровни генов ctcB и ctcC наблюдались через 2 ч после инокуляции ().В контрольных образцах мы не обнаружили существенных различий в указанные моменты времени (и). Таким образом, обработка хламидийных EB PGLYRP активирует экспрессию генов, участвующих в двухкомпонентной системе стресс-ответа.
Анализ активации экспрессии гена двухкомпонентной системы стресс-ответа хламидий после обработки очищенными рекомбинантными PGLYRP через 1, 24, 48, 60 и 72 часа после инокуляции. Количественные данные ПЦР были нормализованы, и кратное изменение уровня мРНК было определено как 2 -ΔΔ CT .Данные выражены как кратное изменение мРНК ± стандартная ошибка. Пустой контрольный образец использовали в качестве контроля. Отличия от нетрансфицированного контроля считали значимыми, если значение P было <0,05 (*).
Анализ активации экспрессии гена, связанного с системой двухкомпонентного стрессового ответа хламидий, после обработки PGLYRP через 15, 30, 60, 90, 120, 180 и 300 минут после инокуляции. Количественные данные ПЦР были нормализованы, и кратность изменения уровня мРНК была определена как 2.1 −ΔΔ CT . Пустой контрольный образец использовали в качестве контроля. Данные выражены как кратные изменения уровней мРНК ± стандартные ошибки.
ОБСУЖДЕНИЕ
В настоящем исследовании мы получили растворимые рекомбинантные белки распознавания пептидогликана человека в линии клеток человека Expi293F с выходами 50 мг / л культуральной среды. Поскольку стабильные клеточные линии и временная трансфекция генными конструкциями, кодирующими PGLYRP, дали недостаточный выход для очистки белков, мы затем слили PGLYRP с легкими цепями IgG.Эти слитые белки чередовались с сайтом протеазы TEV для дальнейшего расщепления и очистки. Рекомбинантные слитые белки были обнаружены в культуральной среде клеток Expi293F, трансфицированных pcDNA3.4-IGG-PGLYRP. Затем их очищали от культуральной среды и отделяли от легкой цепи IgG протеолизом (). Таким образом, мы разработали протокол для генерации чистых PGLYRP в клетках Expi293F.
Ранее было показано, что рекомбинантные человеческие PGLYRP, продуцируемые в клетках Drosophila S2 и COS-7 обезьяны, обладают бактерицидной активностью против различных бактерий (8).Мы протестировали антибактериальную активность PGLYRP, экспрессируемых в гомологичной системе экспрессии. Эти белки продемонстрировали активность против грамположительных B. subtilis и грамотрицательных E. coli , а значения МИК, определенные в нашем исследовании (), доказывают активность PGLYRP против бактерий. Кроме того, мы определили MIC PGLYRP для C. trachomatis . В этом случае было обнаружено, что МПК примерно в 20 раз выше, чем для E. coli и B. subtilis .Эти большие значения могут быть связаны с особым образом жизни хламидий. На сегодняшний день известно несколько антимикробных белков и пептидов, обладающих антихламидийной активностью. Несколько исследований показали антихламидийные эффекты иммунных эффекторов хозяина, таких как дефенсины (21, –23), кателицидиновый пептид LL-37 (22, 24) и протегрин (23). МИК чистых PGLYRP, полученные в нашем исследовании, могут подтвердить активность PGLYRP против C. trachomatis .
Неизвестно, как PGLYRP убивают C.trachomatis . Поскольку было показано, что PGLYRP связывают липополисахариды различных бактерий (4, 7, 25), они могут связывать хламидийные липополисахариды, которые, как известно, присутствуют как в RB, так и в EB (11). Главный вопрос заключался в том, прикрепляются ли PGLYRP к C. trachomatis . Используя преципитацию и анализ вестерн-блоттинга, мы убедительно продемонстрировали, что PGLYRP напрямую взаимодействуют с EB C. trachomatis ().
Мы не знаем точного эффекта PGLYRP на C.trachomatis . Мы обнаружили, что однократный контакт между C. trachomatis и PGLYRP не только снижает инфекционную способность исходных EB, но также влияет на продукцию инфекционного потомства (). Было показано, что мембрана БЭ непроницаема для большинства молекул (крупных белков) (26, 27). Таким образом, маловероятно, что PGLYRP проникают через EB. Кроме того, маловероятно, что PGLYRP действуют изнутри. Вероятно, PGLYRP действуют вне эукариотических клеток, вероятно влияя как на дифференцировку формы EB в форму RB, так и на последующую дифференцировку формы RB обратно в форму EB.
Ранее было показано, что бактериальный стресс-защитный ответ на PGLYRP осуществляется двухкомпонентной системой стресс-ответа (7). TCS обнаруживают транслоцированные внецитоплазматические неправильно свернутые или агрегированные белки (28, 29). Было показано, что связывание PGLYRP с пептидогликаном или липополисахаридами вызывает активацию двухкомпонентной системы ответа на стресс (30). Некоторые бактериальные TCS обладают механизмом аутоактивации (29), который включает активацию экспрессии гена TCS после активации белков TCS.Этим можно объяснить гиперактивацию стрессовой реакции. C. trachomatis также имеет двухкомпонентную систему ответа на стресс (CtcB-CtcC) (15). Мы показали, что контакт PGLYRP с EB C. trachomatis активирует экспрессию генов, кодирующих белки двухкомпонентной системы стресс-ответа. Это может объяснить подавление хламидийной инфекции. Первоначально мы обнаружили два пика, соответствующих высоким уровням мРНК ctcC и ctcB (1 час и 72 часа).1-часовой пик соответствует активации экспрессии гена TCS после контакта между PGLYRP и EB. Мы также обнаружили небольшое увеличение уровня мРНК через 60 часов, что может быть связано с инициированием высвобождения EB из клеток HeLa. Затем мы обнаружили второй 72-часовой пик, соответствующий максимальному высвобождению ЭБ. Этот пик можно объяснить взаимодействием высвобожденных EB с PGLYRP в культуральной среде во время второго раунда инфекции (31). Кроме того, мы увеличили временное разрешение и обнаружили, что максимальные уровни мРНК ctcC и ctcB были достигнуты через 2 часа после контакта между EB и PGLYRP (и).
Таким образом, наши результаты демонстрируют антихламидийную активность рекомбинантных человеческих PGLYRP, которая связана с активацией генов, участвующих в хламидийной двухкомпонентной системе ответа на стресс.
Аукцион СОВЕТСКОГО ФИЛЬМА НИКОЛАЯ ПРУСАКОВА 1926 г. • Все предметы должны быть оплачены до их выпуска
• При отправке по стране и за границу, хотя мы не осуществляем доставку напрямую, мы
мы можем порекомендовать местных грузоотправителей и забрать ваши товары на нашем сайте
офис с вашего разрешения.См. Список рекомендованных грузоотправителей ниже. Клиенты
могут сами выбирать грузоотправителей, и эти рекомендации предназначены только для
удобство. Мы не несем ответственности за рекомендации грузоотправителей.
• Покупатель несет ответственность за страхование своих товаров в пути. После того, как предметов было
забраны или переданы грузоотправителю, они больше не покрываются нашей страховкой.
• Оплата за отгрузку и организацию отгрузки должны производиться с грузоотправителем
. напрямую.
• После того, как вы договорились с грузоотправителем, отправьте нам электронное письмо или факс, разрешив нам номер
. передать вашу собственность этому человеку или компании.
Рекомендуемые грузоотправители:
Для товаров, отправленных из Нью-Йорка
(1) Магазин UPS (Waldo) Тел. +1 (917) 217-7680, электронная почта: [email protected]
(2) Лекс Пак и Корабль (Боб или Ирма), тел. +1 (212) 288-4425, электронная почта: [email protected]
(3) ООО «Файн Арт Шипперс» (Олег) Тел.+1 (917) 658-5075, электронная почта: [email protected] (также может помочь с доставкой в Россию / СНГ, включая ящики)
(4) Global Transit Group (Ростислав), тел. +1 (718) 449-1971, электронная почта: [email protected] (также может помочь с доставкой в Россию / СНГ, включая ящики)
Для более крупных предметов, художественных шаттлов и всего, что требует деревянных ящиков или специального транспорта для предметов искусства
(1) Thomas Sullivan Transportation Management Inc .: +1 (718) 822-4169, электронная почта: sullivantrans @ aol.com
(2) Cadogan Tate Fine Art: +1 (718) 706-7999, электронная почта: [email protected]
(3) James Bourlet, Inc: +1 (718) 392-9770, электронная почта: [email protected]
(4) Ателье 4: +1 (718) 433-3500, электронная почта: [email protected]
(5) ООО «Макс Арт Интернэшнл», (Дариус) Тел. +1 (917) 502-8731, электронная почта: [email protected] (также может помочь с доставкой в Россию / СНГ, включая ящики)
Для местных перевозок на фургонах и грузовиках в Нью-Йорке, Новой Англии, Средней Атлантике и Флориде Shuttles
(1) Доставка на перекрестке (Артур): +1 (917) 807-3758, электронная почта: arthurcrossroads @ hotmail.com
(2) ArtWay Fine Art Services (Ленни): +1 (718) 213-6886 электронная почта: [email protected]
Клиенты могут сами выбирать грузоотправителей. Мы не несем ответственности за действия сторонних грузоотправителей, и эти рекомендации предоставлены только для удобства.
Для получения вещей лично
Позвоните нам по телефону +1 (212) 717-7500, чтобы договориться о встрече и забрать свои вещи лично. Если
кто-то другой, чье имя не указано в счете, будет забирать от вашего имени, напишите по электронной почте
или отправьте нам по факсу разрешение на передачу вашей собственности этому лицу.Оплата за все товары должна быть
были получены и очищены, прежде чем товар может быть выпущен.
Payday Loan Network имеет ставку 732%
Ульяновские бизнесмены творчески развили идею нобелевского лауреата Мухаммада Юнуса и ежедневно выдают микрозаймы под 2% годовых.
Эффективная годовая ставка составляет 732 процента, согласно плакатам возле киосков «Активденги» в магазинах. Компания предоставляет потребительские ссуды от 1 000 до 5 000 рублей (от 34 до 168 долларов США) под процентную ставку 2 процента в день на срок от 5 до 15 дней, требуя только паспорт и еще один документ, удостоверяющий личность.
Утверждение ссуды дается в течение 15 минут, а повторные клиенты утверждаются в течение пяти минут. Около 70 процентов кредитов одобрены, сказал представитель «Активденги» Михаил Теплов.
Компания работает в 70 торговых точках и девяти городах, включая Новосибирск, Нижний Новгород, Волгоград и Ульяновск, а также в поселках. «Активденги» работает с общенациональными сетями, такими как «Пятерочка» и «Магнит», а также с более мелкими региональными сетями.
Спрос подтолкнул компанию к микрозаймовому бизнесу — в разгар кризиса людям нужно было иметь возможность занимать до следующей зарплаты, сказал Теплов.По его словам, идея была взята из работы Юнуса, который предоставлял микрофинансирование предпринимателям. «Мы решили начать с частных лиц».
«Мы выдаем ссуды в местах с высокой проходимостью. Если кто-то проходит в магазине и ему нужно от 1000 до 2000 рублей, то он может занять у нас только небольшую коллекцию документов», — сказал совладелец Алексей Меркулов.
«Мы стремимся построить сеть по всей стране», — сказал совладелец и исполнительный директор Максим Исаев.
У компании около 500 000 клиентов, сообщил Теплов, а средний размер кредита составляет от 3 000 до 4 000 рублей.По словам Исаева, портфель «Активденги» превышает 6 миллионов долларов, из которых просроченные кредиты составляют 3 процента (от 1 до 15 процентов в зависимости от региона).
По словам Теплова, клиентамиAktivdengi являются в основном женщины — 60 процентов — в возрасте от 23 до 29 лет с доходами на 30 процентов ниже, чем в среднем по их региону.
Эффективная годовая ставкаAktivdengi во много раз выше, чем у аналогичных продуктов. Экспресс-ссуды на покупку бытовой техники составляют от 40 до 60 процентов, а ссуды наличными имеют максимальную ставку 125 процентов.
Федеральная служба по защите прав потребителей и Федеральная антимонопольная служба, недавно предложившая ввести налог на ростовщические процентные ставки, не обнаружили нарушений в процентных ставках «Активденги».
«Если правовой статус этой небанковской организации позволяет им предоставлять ссуды гражданам и если она должным образом информирует клиентов об эффективной годовой ставке, то не может быть никаких претензий к размеру процентной ставки. Сами граждане соглашаются с этим. «, — сказал Олег Прусаков, начальник управления службы защиты прав потребителей.
Антимонопольная служба также не регулирует размер процентных ставок, особенно для компаний, не занимающих доминирующего положения на рынке, — сказал заместитель руководителя службы Андрей Кашеваров. По его словам, если компания информирует своих клиентов о процентной ставке и не нарушает права конкурентов, нет оснований для вмешательства со стороны антимонопольной службы.
Компания информирует потребителей о размере эффективной годовой ставки, поэтому проблем с регуляторами не было, сказал Теплов.«Мы прошли проверку Федеральной службы защиты прав потребителей в нескольких регионах».
Ритейлеры не испытывают особых чувств к «Активденги». Представитель X5 Retail Group сообщил «Ведомостям», что «Активденги» не работает с самой группой, а только с ее региональными франшизами, в бизнес которых X5 не участвует. Представитель Магнита, не работающий с франшизами, сказал: «Мы — структура, которая арендует пространство, и неважно, кто его снимает «.
Сотрудничество с «Активденги» вряд ли увеличит продажи, — сказал Николай Жиляков, руководитель отдела маркетинга торговой сети Gulliver.«Люди планируют свои расходы на питание, поэтому не берут ссуды на пельмени».
«Консультативный комитет будет продвигать согласованную политику в области защиты прав потребителей в ЕАЭС»
Первое заседание Консультативного Комитет по защите прав потребителей в Евразийском экономическом союзе (ЕАЭС) проходила в Евразийской экономической комиссии (ЕЭК). Член Коллегии ЕЭК — Министр по техническому регулированию Валерий Корешков определил основные направления развития общих подходов в проведении согласованной политики стран Союза в зоне.В их число входят электронная коммерция, международные авиаперевозки. транспортные, финансовые и туристические услуги.
« Консультативный комитет создан для выполнения задач, возложенных на Комиссия по обеспечению взаимодействия стран ЕАЭС в сфере защита прав потребителей. Он предназначен для продвижения согласованной политики в Союз, который направлен на формирование равных условий для защиты интересов граждан против недобросовестной деятельности бизнеса », — сказано в сообщении . Валерий Корешков.
Согласованная политика в ЕАЭС в этой сфере проводится путем сближения законов государств Союза, принятие мер по предупреждению деятельности недобросовестных хозяйствующих субъектов и реализация некачественного товара потребителям, создание условий для бесплатного выбор товаров, обеспечение оперативной и достоверной информации о товарах и их производители.
Заместитель руководителя Роспотребнадзора Ирина Брагина, руководитель Федеральной службы по защите прав потребителей Олег Прусаков, председатель Комитета по защите прав потребителей Министерство национальной экономики Казахстана Азимхан Азимханулы, и представители нескольких структурных подразделений ЕЭК поделились своими опыт работы в сфере защиты прав потребителей.
Консультативный комитет достиг ряда соглашения. Участники планировали разработать план первоочередных действий. в области защиты прав потребителей на 2017 год. Принято решение о создании рабочая группа при Консультативном комитете по подготовке проекта рекомендации для государств Союза в этой области. Во время подготовки соответствующие рекомендации Комиссии, руководящие принципы по правам потребителей Защита, принятая резолюцией Генеральной Ассамблеи ООН в декабре 2015 года, будет принимать во внимание.
«Час с Чеховым» (1929)
Из своих ранних немых произведений великий русский кинорежиссер г-н Яков Протазанов сделал литературные адаптации не менее великих русских писателей, как в случае с «Чины и люди» (Ряды и люди) ( 1929), в котором для немого экрана собраны три рассказа Чехова: «Анна на шее», «Смерть мелкого чиновника» и «Хамелеон».«Анна на шее» рассказывает историю молодой и красивой Анны (Мария Стрелкова), которая только что вышла замуж за старого, но богатого государственного служащего.Анна думает, что ее брак спасет ее отца и двух братьев от жалкой жизни в нищете. Анна быстро разочаровывается, когда ее богатый муж оказывается скупым и суровым мужчиной. Печальная жизнь Анны меняется, когда она ходит на шикарный бал, и каждый мужчина там, включая мэра, очарован ею. Муж Анны надеется получить от этого преимущества в бизнесе, но Анна думает о мести.
Вторая серия «Смерть мелкого чиновника» — это история герра Червякова (герра Ивана Москвина), который вместе с женой ходит на балет; Во время представления государственный служащий чихает на высокопоставленного чиновника и предлагает извинения за извинениями на протяжении всего спектакля и в конце представления.Генерал не обращает внимания на инцидент, но его преследует этот второстепенный чиновник, который не оставляет дела в покое и раз за разом продолжает извиняться, писать письма с просьбой о прощении или посещать чиновника дома.
В третьем эпизоде фильма «Хамелеон» маленькая собачка кусает за палец прохожего. Разъяренный мужчина хватает его и просит двух полицейских предъявить обвинение хозяину собаки. Оба агента приступают к составлению отчета, но изменение отношения происходит сразу же, когда к ним приходит мужчина и говорит, что эта собака принадлежит мэру.
В 1929 году создание фильма, состоящего из разных эпизодов, было захватывающей идеей, и успешный конечный результат (очень фантастический для такого рода фильмов) в основном зависел от структуры фильма. Хотя на самом деле нет необходимости связывать разные истории друг с другом, этот немецкий граф считает, что с художественной точки зрения очень целесообразно иметь тему, пусть даже незначительную, связывающую эпизоды в фильме.
Как «матрешка» (те русские куклы уменьшающихся размеров, помещенные одна в другую), в «Чины и люди» герр Протазанов мало-помалу углубляется в сложные взаимоотношения между высшими и низшими рангами или вечными и тонкая борьба между разными социальными классами.Он глубоко и с трезвостью и умением изучает причиняющие беспокойство и основные человеческие инстинкты и поведение, такие как лицемерие, боязнь или прощение (на этот раз нет необходимости быть строгим и явно резким в такой критике). Это солидное произведение с дополнительными и просвещенными смыслами, которое останется в умах зрителей еще долго после того, как немое шоу закончится.
А теперь, если позволите, я должен временно уйти, потому что этот немецкий граф должен сплотить ряды со своими собратьями-аристократами.
Herr Graf Ferdinand Von Galitzien http://ferdinandvongalitzien.blogspot.com/
Онлайн видеоконференция: Pandemiya sharoitida isteʼmolchilar huquqini himoya qilish sohasida tavsiyalar berildi
2020-YIL 18-iyunda MDHga a’zo mamlakatlarning iste’molchilar huquqini HIMOYA qilish bo’yicha maslahat kengashi ва Yevroosiyo iqtisodiy ittifoqiga (YEOII) a’zo mamlakatlar iste’molchilar huquqini HIMOYA qilish masalalari bo’yicha qo’mitasi maslahat kengashining qo’shma Majlisi videokonferensiya formatida bo’lib o’tdi.Majlisda Oʻzbekiston isteʼmolchilar huquqlarini himoya qilish jamiyatlari federatsiyasi raisi Jahongir Sarimsoqov MDHga aʼzo mamlakatlarning isteʼmolchilar huquqini himoya qilish boʻyicha maslahare kengashi raisi. Попование таклифига биноан иштирок этди. Бу хакда Федерация аксборот бо’лими хабар берди.
Majlisda коронавирус инфекцияси tarqalishi sharoitida isteʼmolchilar huquqini himoya qilish, YEOIIga aʼzo mamlakatlar uchun isteʼmolchilar huquqini himoya qilish sohasida tavsiyalar masyyorlash singho.
Rospotrebnadzorning Iste’molchilar huquqlarini HIMOYA qilish sohasidagi федеральный Давлат nazorati boshqarmasi boshlig’i Олег Прусаки O’z ma’ruzasida Узбекистон iste’molchilar huquqlarini HIMOYA qilish jamiyatlari federatsiyasi jamoasiga Биринчи Yevropa в Osiyo iste’molchilar forumini ташкил et, o’tkazgani учун samimiy minnatdorlik bildirdi Хамд унь yakunida qilingan Yakuniy Кабул deklaratsiyaga yuqori бахо Бердь.
Muhokama qilinayotgan masalalar bo’yicha MDHga a’zo mamlakatlarning iste’molchilar huquqini HIMOYA qilish bo’yicha maslahat kengashi ва YEOIIga a’zo mamlakatlarning iste’molchilar huquqini HIMOYA qilish masalalari bo’yicha qo’mitasi maslahat kengashi a’zolarining ma’ruzalari tinglandi Хамда muhokama qilingan masalalar bo’yicha bayonnoma qarorlari qilindi Кабул.
Qayd etish joizki, Узбекистон iste’molchilar huquqlarini HIMOYA qilish jamiyatlari federatsiyasi Узбекистон Respublikasiga koronavirusning kirib kelishi ва tarqalishi oldini olish bo’yicha республика Maxsus komissiyasi COVID-19 tarqalishi oldini olish yo’lida профилактика tadbirlarini Amalga oshirish учун yalpi karantin e’lon qilgan dastlabki kunlardan boshlab iste’molchilar ва aholi ehtiyojmand qatlamlari huquqini химоя qilish ishiga oʻz hissasini qoʻshib kelmoqda.
Айни максадда ички истэʼмол бозорида озик-овкат ва кундалик эхтиёй моллари нархлари асосиз равишда ошиб кетиши олдини олишда ваколатли давлат органларига ко`маклашиш учун джойлардилари нашкорашиш учун джойлардилари «Джамурорашиш учун джойлардилари» джамурорашиш учун джойлардилари ».Unga federatsiyaning 600 нафар таджрибали mutaxassisi jalb qilindi. Бозор ва савдо shoxobchalaridagi наркс-navoga oid kunlik maʼlumotlar umumlashtirilgan holda maxsus komissiyaga taqdim etilmoqda.
Шунингдек, федерациянинг «Мехр улашамиз» аксияси дойрасида ахолига 300 мин дона тиббийот никоб, 7000 дона антисептик восита, иджтимоий химояга мухтой 674 оилага эса озик-овкат махсуиблотлари йет.
Федерация тизими ходимлари ташаббуси билан уларнинг бир кунлик иш хаки «Мехр-шафкат ва саломатлик джамоат фонди» га отказилди.
Бу каби хайрия ишлари давом этмокда. Куни кеча федерациянинг худудий тузилмалари Махалла ва оилани куллаб-кувватлаш вазирлиги билан бирга джойлардаги хайрияларни мувофиклаштириш марказларига 200 коп ун йетказиб берди.
Oʻzbekiston isteʼmolchilar huquqlarini himoya qilish jamiyatlari federatsiyasi MDH mamlakatlaridagi isteʼmolchilar huquqini himoya qilish bilan shugʻullanadigan jamoat birlashmalari orasida Xalqolanadigan.
.