Му 3: :: ЗАО «МОНТАЖНОЕ УПРАВЛЕНИЕ №3»

Разное

Содержание

:: ЗАО «МОНТАЖНОЕ УПРАВЛЕНИЕ №3»

ЗАО «Монтажное управление №3» является одним из старейших электромонтажных предприятий Уральского региона. Официальный юридический статус оно получило в 1941 году, когда входило в состав треста «Уралэлектросетьстрой».

За время своего существования ЗАО «Монтажное управление №3» не раз меняло подчиненность. В 60-70-е годы предприятие находилось в подчинении треста «Электроцентромонтаж» и насчитывало в своих рядах 1200 специалистов. Закрытое акционерное общество «Монтажное управление № 3» обслуживало для Минэнерго СССР огромную территорию: Южный Урал, Башкирию, Казахстан.

Предметом гордости старшего поколения электромонтажников ЗАО «Монтажное управление №3» является тот факт, что их усилиями были введены в строй три челябинские ТЭЦ, Южноуральская и Троицкая ГРЭС, Курганская ТЭЦ. ЗАО «Монтажное управление №3» принимало участие в монтаже уникального блока на быстрых нейтронах БН-600 на Белоярской атомной электростанции и монтировало оборудование подстанций мощнейшей ЛЭП напряжением 1150 кВ Экибастуз-Урал.

Сегодня ЗАО «Монтажное управление №3» является дочерним предприятием ОАО «Электроуралмонтаж».

Политика в области качества

Руководствуясь Конституцией Российской Федерации, федеральными законами, указами и распоряжениями Президента Российской Федерации, постановлениями и рас-поряжениями Правительства Российской Федерации, другими нормативными докумен-тами в промышленности и энергетике, ЗАО «Монтажное управление №3» настоящим объ-являет о своей Политике в области обеспечения качества при выполнении работ и пре-доставлении услуг сторонним организациям.

Миссия: Закрытое акционерное общество «Монтажное управление №3» дочернее общество ОАО «Электроуралмонтаж» — крупное электромонтажное предприятие, способ-ное выполнить весь комплекс услуг по комплектации, строительству, электромонтажу и пуско-наладке объектов для предприятий электроэнергетики, всех отраслей промышлен-ности и потребителей социального сектора «под ключ», качественно, в сжатые сроки и без проблем для Заказчика, на основании многолетнего опыта и установившихся в тече-ние десятилетий традиций, своевременного изучения новых технологий и связанного с ними обучения кадров.

Наш девиз: «Каждый электромонтажник в ответе за себя и свое предприятие».

Главной целью ЗАО «Монтажное управление №3» в области качества — совершенст-вование выполняемых нами работ, высококачественные и конкурентоспособные услуги, удовлетворяющее требованиям и ожиданиям Заказчиков, соответствующие междуна-родным и национальным стандартам, законодательным и обязательным требованиям.

Для реализации указанной цели, руководство берет на себя обязательства следовать следующим принципам деятельности:

  • создание, развитие и укрепление отношений с Заказчиками и повышение их удовлетворенности;
  • непрерывное повышение квалификации всех сотрудников предприятия с целью повышения профессионализма, организации и улучшения качества выполнения ра-бот, а также внедрения новых технологий;
  • улучшение системы поставки и комплектация материалов и электрооборудова-ния;
  • организация эффективной системы управления производством работ; Соблюдение этих принципов деятельности производится по следующим направлениям:
  • обеспечить снижение количества претензий, рекламаций и жалоб со стороны За-казчиков;
  • обучение электромонтажников, мастеров, производителей работ и ИТР по вопро-сам: способов ведения работ, улучшения качества выполнения электромонтажных работ;
  • системы контроля по приемке электрооборудования по качеству и комплектно-сти;
  • проведение анализа своей деятельности для своевременного предотвращения не-соответствий и устранение их причин.

Руководство ЗАО «Монтажное управление №3» берет на себя ответственность за реализацию Политики в области качества и принимает обязательства по постоянному развитию и улучшению системы менеджмента качества организации и соответствии ее международному стандарту ISO 9001:2008.

 

Игрушка 3 в 1 с вишнёвыми косточками «Бычок Му-Му»

В популярной серии плюшевых разогрелок компании Мякиши пополнение! Встречайте – символ 2021 года Бычок Му-Му с вишнёвыми косточками.
Это must have для современных родителей! Игрушка разогрелка с вишнёвыми косточками позволяет развиваться малышу с первых дней и помогает мамам сразу в нескольких направлениях:
Игрушка помогает справиться с коликами новорожденных, успокоить, снять физическое и эмоциональное напряжение;
Расслабляет нервную систему перед сном и помогает быстрее уснуть;
Разогретые вишневые косточки являются прекрасной успокаивающей ароматерапией;
Игрушка помогает развивать мелкую моторику рук;
Развивает игровую деятельность, осязательные и сенсорные навыки;
Подходит для мальчиков и для девочек.

Мягкая плюшевая игрушка выполнена из качественного гипоаллергенного материала. Её всегда хочется трогать, щупать и обнимать не только малышу, но и родителям. Внутри игрушки натуральный материал: лен и вишневые косточки.
Самым важным функционалом является возможность разогреть мешочек с вишнёвыми косточками и, положив обратно в игрушку, использовать в качестве грелки при коликах у малыша.

Как нагреть? Достаньте подушечку с вишневыми косточками из игрушки и нагрейте в СВЧ печи 40 секунд при 600 Вт. Затем вложите подушечку в игрушку и убедитесь, что температура комфортная для вас и вашего ребёнка. Положите теплую игрушку малышу на животик при коликах. Проверено: помогает! Перед повторным нагревом мешочек должен полостью остыть. НЕЛЬЗЯ НАГРЕВАТЬ ВСЮ ИГРУШКУ ЦЕЛИКОМ!

Тёплый режим расслабляет, согревает, прогревает детское автокресло и детское питание в бутылочке, подготавливает малыша ко сну, снимает эмоциональное и физическое напряжение, помогает при кашле простудного характера, успокаивает раскричавшегося малыша, улучшает настроение.

Как остудить? Подушечку с вишнёвыми косточками поместите в морозильную камеру в полиэтиленовом пакете, и заморозьте до комфортной для Вас температуры (не более 60 минут). Холодный режим тонизирует, уменьшает сонливость, повышает работоспособность мозга при усталости, помогает избавиться от головной боли при повышенной температуре, уменьшает любую острую боль, уменьшает отеки, уменьшает зубную боль, снимает напряжение в мышцах.

ИГРУШКА НА РУКУ! Если извлечь из игрушки вишневые косточки, с ним можно играть, надев на руку. Придумывайте сказки и истории, ребенку это точно понравится! Плюшевые ушки, хвостик на кнопочке, льняное тельце, милая вышитая мордочка — все это будет способствовать сенсорному и эмоциональному развитию вашего малыша!

КАК СТИРАТЬ? Корпус игрушки стирать вручную при температуре 30 градусов. Подушечку с вишнёвыми косточками (внутри игрушки) стирать нельзя, только встряхивать и проветривать.

Мякиши идеально подходят для самых маленьких, поскольку у них нет острых углов. Удачно подобранный размер, цвет, звук, яркие и понятные рисунки развивают мышление, координацию движений и совершенствуют моторику нежных детских пальчиков.
Развивающие игрушки для детей от 0 лет рекомендуем использовать строго под присмотром взрослых!
Изготовлено из гипоаллергенных материалов.
При поставке цветовые решения игрушек и фурнитуры могут отличаться от представленных на сайте.

Игрушка Мякиши 3 в 1 с вишневыми косточками Бычок Му-Му

Игрушка РазоГРЕЛКА из Плюша с вишнёвыми косточками — это Must Have 3в1 для современных родителей! Позволяет развиваться малышу с первых дней и помогает мамам сразу в нескольких направлениях: — Помогает справиться с коликами новорожденных, успокоить, снять физическое и эмоциональное напряжение — Расслабляет перед сном и помогает быстрее уснуть — Разогретые вишневые косточки являются прекрасной успокаивающей ароматерапией — Игрушка помогает развивать мелкую моторику пальчиков малыша — Развивает игровую деятельность, осязательные и сенсорные навыки — Подходит для мальчиков и для девочек Плюшевая игрушка выполнена из качественного гипоаллергенного материала. Внутри игрушки подушечка с вишнёвой косточкой для разогревания в микроволновке или охлаждения в холодильнике. Вишнёвые косточки обладают уникальными свойствами сохранять тепло и холод. Игрушка успокоит животик малыша при коликах и охладит при ушибах, а также будет способствовать развитию мелкой моторики. 1. Развивает Нейтральный режим (режим комнатной температуры) развивает мелкую моторику, слуховое развитие, тактильные ощущения, работу зрительных рецепторов. Ребенку нравится перебирать в руках зернышки. 2. Согревает Как нагреть? Достаньте подушечку с вишневыми косточками из игрушки и нагрейте в СВЧ печи 40 секунд при 600 Вт. Затем вложите подушечку в игрушку и убедитесь, что температура комфортная для вас и вашего ребёнка. Положите теплую игрушку малышу на животик при коликах. Проверено: помогает! Перед повторным нагревом мешочек должен полостью остыть. НЕЛЬЗЯ НАГРЕВАТЬ ВСЮ ИГРУШКУ ЦЕЛИКОМ! Тёплый режим расслабляет, согревает, прогревает детское автокресло и детское питание в бутылочке, подготавливает малыша ко сну, снимает эмоциональное и физическое напряжение, успокаивает и улучшает настроение. 3. Охлаждает Как остудить? Подушечку с вишнёвыми косточками поместите в морозильную камеру в полиэтиленовом пакете, и заморозьте до комфортной для Вас температуры (не более 60 минут). Холодный режим помогает при ушибах, тонизирует. 4. Игрушка на руку Если извлечь из Авокадо вишневые косточки, с ним можно играть, надев на руку. Придумывайте сказки и истории, ребенку это точно понравится! Плюшевый Авокадо, милая вышитая мордочка — все это будет способствовать сенсорному и эмоциональному развитию вашего малыша!

Сжим сечен. (95-150/16-50мм2) У-870 МУ-3

  • Характеристики

  • Описание товара

  • Наличие в магазинах

  • Отзывы (0)

  • Вопрос-ответ

Производитель:

ПЭМИ

Артикул:

У-870 МУ-3

Вес:

0,002

Объем:

0,001

Фасовка:

45

г. Краснодар, ул Онежская, 60

В наличии17

г. Краснодар, ул. Кр. Партизан, 194

В наличии3

г. Краснодар, ул. Солнечная, 25

В наличии1

г. Анапа, ул. Парковая, 62б

Под заказ0

г. Краснодар, ул. Дзержинского, 98/3

В наличии17

г. Краснодар, ул. Уральская, 87

В наличии1

г. Краснодар, ул. Российская, 252

В наличии10

г. Краснодар Центральный склад

В наличии17

г. Краснодар, ул. Западный обход, 34

Под заказ0

Раздел не найден.

ДОМИНО ПЛАСТМАССОВОЕ «УМКА» БУРЕНКА ДАША МУ-МУ-МУ 3-В-1 в кор.100шт

Домино «Бурёнка Даша. Му-му-му» ТМ «Умные игры» непременно понравится юным поклонникам одноимённого мультфильма:
— 3 в 1: цифры, логика, счёт
— фишки с изображением любимых героев

Набор включает яркие фишки для игры, разделённые на 2 части. На каждой из частей есть картинка с персонажем мультсериала, а также цифра. Задача игроков – продолжать цепочку элементов, подбирая каждый, ориентируясь по картинке и цифре на ней. В процессе игры дети будут развивать логическое мышление и при этом весело проведут время. Компактный набор удобно хранить и брать собой в путешествие.

Игра в домино ТМ «Умные игры» развивает:
— логическое мышление
— воображение
— мелкую моторику
— визуальное восприятие
— усидчивость

Размер упаковки: 2 x 18 x 6 см.
Материал: пластмасса.
Рекомендовано детям от 3-х лет.

Купить ДОМИНО ПЛАСТМАССОВОЕ «УМКА» БУРЕНКА ДАША МУ-МУ-МУ 3-В-1 в кор.100шт по низкой цене

Купить изделия для детей и детские игрушки по низкой цене с доставкой в Москве и по всей России, вы можете, если зарегистрируетесь в интернет-магазине Kidland.ru – для зарегистрированных пользователей магазин предоставляет дополнительные скидки.

Заказать ДОМИНО ПЛАСТМАССОВОЕ «УМКА» БУРЕНКА ДАША МУ-МУ-МУ 3-В-1 в кор.100шт в интернет-магазине Kidland.ru

Рассмотрите фото и описание, которые имеются в каждой из предлагаемых позиций и закажите:

·        на сайте – круглосуточно и без выходных;

·        отправив заказ на e-mail: [email protected];

·        позвонив нашим операторам с 10 до 19 в рабочие дни: 8 (985) 830-33-35.

Доставка или самовывоз ДОМИНО ПЛАСТМАССОВОЕ «УМКА» БУРЕНКА ДАША МУ-МУ-МУ 3-В-1 в кор.100шт)

В Москве, Московской области, в Санкт-Петербурге и Ленинградской области вы можете заказать курьерскую доставку выбранного товара или самостоятельно забрать покупку из пунктов самовывоза – ознакомьтесь с ними на странице ссылка.

Если вы купили детские игрушки и товары из другого региона, возможности доставки для вас на странице https://kidland.ru/i_dostavka_i_oplata/ нашего сайта.

Наш магазин предлагает:
·        продажи от проверенных поставщиков;
·        наличие моделей на любой вкус;
·        возможность купить нужное изделие на заказ;
·        низкая стоимость и высокое качество предложенной продукции;
·        подробные фото и детальное описание ассортимента;
·        доставка до дома и пунктов самовывоза;
·        огромное число пунктов самовывоза по Москве и всей России;
·        специальные цены для зарегистрированных пользователей;
·        гарантия качества и возможность возврата товара.

Прием заказов на сайте осуществляется круглосуточно без выходных и праздников! Если необходима консультация специалистов, вы можете воспользоваться обратной связью или перезвонить в рабочее время.

Интернет-магазин Kidland.ru – это игрушки от проверенных производителей, недорого, с доставкой, гарантией и самого высокого качества.

Датский «Люнгбю» стал соперником «Краснодара» по 3-му отборочному раунду Лиги Европы

https://rsport.ria.ru/20170720/1123151496.html

Датский «Люнгбю» стал соперником «Краснодара» по 3-му отборочному раунду Лиги Европы

Датский «Люнгбю» стал соперником «Краснодара» по 3-му отборочному раунду Лиги Европы — РИА Новости Спорт, 05.09.2019

Датский «Люнгбю» стал соперником «Краснодара» по 3-му отборочному раунду Лиги Европы

Датский «Люнгбю» победил словацкий «Слован» из Братиславы во втором отборочном раунде Лиги Европы по футболу и вышел в третий раунд квалификации, где встретится с российским «Краснодаром».

2017-07-20T20:23

2017-07-20T20:23

2019-09-05T13:41

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdnn21.img.ria.ru/images/sharing/article/1123151496.jpg?11188539231567680072

РИА Новости Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2017

РИА Новости Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://rsport.ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости Спорт

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

спорт, лига европы уефа, слован (братислава), люнгбю, аек (ларнака), динамо (минск), краснодар, работнички

20:23 20.07.2017 (обновлено: 13:41 05.09.2019)

Датский «Люнгбю» победил словацкий «Слован» из Братиславы во втором отборочном раунде Лиги Европы по футболу и вышел в третий раунд квалификации, где встретится с российским «Краснодаром».

Му-3


На главную — Поиск — Обзор — Алфавитный указатель: 0-1-2-3-4-5-6-7-8-9
A- B- C- D- E- F- G- H- I- J- K- L- M- N- O- P- Q- R- S- T- U- V- W- X- Y- Z
Му-3
Часть Mu
Японская серия ракет-носителей Mu представляет собой гибкую ракету-носитель на твердом топливе для выхода в космос.

Статус : Снят с производства. Полезная нагрузка : 770 кг (1690 фунтов). Усилие : 1740,00 кН (3

фунтов силы). Полная масса : 62 610 кг (138 030 фунтов). Высота : 28,00 м (91,00 футов). Диаметр : 1,50 м (4,90 фута). Apogee : 185 км (114 миль).

LEO Полезная нагрузка: 770 кг (1690 фунтов) на орбиту 185 км. Полезная нагрузка: 520 кг (1140 фунтов) на GTO. Стартовая цена $: — 30 000 миллионов долларов в долларах 1994 года.

Stage Data — Mu-3

  • Stage 0. 2 x Mu-3S-0. Полная масса : 5 100 кг (11 200 фунтов). Масса пустого : 1080 кг (2380 фунтов). Тяга (вакуум) : 327,830 кН (73 699 фунтов силы). Isp : 263 сек. Время горения : 38 сек. Исп (сл) : 238 сек. Диаметр : 0,73 м (2,39 фута). Ширина пролета : 0,73 м (2,39 фута). Длина : 8,25 м (27,06 футов). Топливо : Твердое . Нет двигателей : 1. Двигатель : SB-735 . Другие обозначения : SB-735. Статус : В производстве.
  • Этап 1. 1 х Му-3С-1. Полная масса : 34 800 кг (76 700 фунтов). Масса пустого : 7640 кг (16840 фунтов). Тяга (вакуум) : 1262,419 кН (283803 фунт-силы). Isp : 263 сек. Время горения : 70 сек. Исп (сл) : 238 сек. Диаметр : 1,41 м (4,62 фута). Размах : 5,00 м (16,40 фута). Длина : 14,75 м (48,39 фута). Топливо : Твердое . Нет двигателей : 1. Двигатель : M-13 . Другие обозначения : М-13. Статус : В производстве.
  • 2 этап. 1 х Му-3С-2. Полная масса : 13 100 кг (28 800 фунтов). Масса пустого : 2800 кг (6100 фунтов). Тяга (вакуум) : 523,998 кН (117 799 фунтов силы). Isp : 285 сек. Время горения : 70 сек. Исп (сл) : 220 сек. Диаметр : 1,41 м (4,62 фута). Размах : 1,41 м (4,62 фута). Длина : 6,19 м (20,30 фута). Топливо : Твердое . Нет двигателей : 1. Двигатель : М-23-Му . Другие обозначения : М-23. Статус : В производстве.
  • 3 этап. 1 х Му-3С-3. Полная масса : 3590 кг (7910 фунтов). Масса пустого : 490 кг (1080 фунтов). Тяга (вакуум) : 132,115 кН (29701 фунт-сила). Isp : 294 сек. Время горения : 85 сек. Диаметр : 1,50 м (4,90 фута). Ширина пролета : 1,50 м (4,90 фута). Длина : 2.68 м (8,79 футов). Топливо : Твердое . Нет двигателей : 1. Двигатель : М-3Б-Му . Другие обозначения : М-3Б. Статус : В производстве.


Семейство : цельнолитые, орбитальная ракета-носитель. Страна : Япония. Космический корабль : СС, Тансей, Корса А, EXOS, Астро, Хагоромо, Хитен, Solar (японский спутник), Экспресс 1. Агентство : Nissan.

Вернуться к началу страницы
На главную — Поиск — Обзор — Алфавитный указатель: 0-1-2-3-4-5-6-7-8-9
A- B- C- D- E- F- G- H- I- J- K- L- M- N- O- P- Q- R- S- T- U- V- W- X- Y- Z
© 1997-2019 Mark Wade — Контакт
© / Условия использования

Что такое осмысленное использование, стадия 3?

Этап 3 осмысленного использования — это третий этап программы стимулирования ЭУЗ осмысленного использования. Центры услуг Medicare и Medicaid (CMS) и Управление национального координатора по ИТ в здравоохранении (ONC) опубликовали окончательное правило о 3-м этапе значимого использования 6 октября 2015 г.

Несмотря на требования, установленные на этапе 3, в ближайшее время будут внесены важные изменения в виде нового закона под названием MACRA — или Закона о повторном разрешении доступа к Medicare и CHIP (Программа медицинского страхования детей). MACRA в конечном итоге изменит программу значимого использования, чтобы продвигать вперед компенсацию на основе стоимости.

«Программа осмысленного использования в том виде, в каком она существовала, теперь будет фактически прекращена и заменена чем-то лучшим», — сказал Энди Славитт, исполняющий обязанности администратора CMS, в январе 2016 года.

При нынешнем положении дел летом 2016 г. этап 3 осмысленного использования будет необязательным для поставщиков в 2017 г. и обязательным для всех участников в 2018 г. Цели и меры для всех поставщиков, независимо от их предыдущего участия, окончательно определены для отчетного периода 2018 г. в соответствии с этим правилом. .

Наряду со стадией осмысленного использования 1 и стадией осмысленного использования 2, третий список критериев и требований требует, чтобы все больницы и соответствующие медицинские специалисты использовали сертифицированные системы электронных медицинских карт (EHR).

Требования программы значимого использования

Стадия рационального использования 3 включает все требования, которым должны соответствовать врачи, чтобы получить свои стимулы и избежать каких-либо штрафов. В этой программе врачи должны достичь восьми общих целей, в отличие от ранее существовавшего требования о том, чтобы они могли выбирать из основного меню вариантов. Цели охватывают следующие области:

  1. Защищенная медицинская информация ( PHI ): Врачи, отвечающие критериям, должны подтвердить проведение анализа рисков безопасности для оценки уязвимостей PHI, которые могут привести к утечке данных.В дополнение к тому факту, что Закон о переносимости и подотчетности медицинского страхования (HIPAA) требует практики для проведения анализа рисков и других аудитов безопасности, требования, прилагаемые к осмысленным целям использования, делают его обязательным для получения стимулов.
  2. Электронное назначение рецептов: Приемлемые врачи должны запрашивать более 80% допустимых рецептов для составления формуляра лекарств и передавать их в аптеки в электронном виде.
  3. Поддержка принятия клинических решений (CDS): Для достижения этой цели для подходящих врачей доступны два разных метода.Первая мера предусматривает реализацию пяти интервенций СРС. Вторая мера связана с активным использованием в отчетный период проверок взаимодействия лекарств и лекарств и лекарств на аллергию, которые доступны в рамках сертифицированной платформы ЭУЗ.
  4. Компьютеризированная запись заказа поставщика ( CPOE ): В соответствии с этой целью, соответствующие критериям врачи должны соответствовать трем различным критериям для заказов на лекарства, лабораторные и диагностические изображения.
  5. Электронный доступ для пациентов: Чтобы способствовать вовлечению пациентов, этап 3 значимого использования включает цель, в соответствии с которой правомочные врачи должны предоставить доступ к ЭМК более чем 80% пациентов с возможностью просмотра и загрузки записей.Кроме того, подходящие врачи должны предлагать возможность получения образовательных данных более чем 35% своих пациентов.
  6. Координация оказания помощи посредством вовлечения пациентов : Меры, включенные в эту цель, побуждают пациентов активно участвовать в оказании помощи, заставляя врачей обучать их и предлагать возможности для просмотра данных о состоянии здоровья пациентов. Меры в этой цели охватывают три различных аспекта. Первая мера требует от врачей, чтобы более 25% пациентов взаимодействовали с их EHR.Вторая мера требует, чтобы более 35% пациентов получали безопасную цифровую связь от поставщика медицинских услуг. Третья мера направлена ​​на поощрение сбора данных о состоянии здоровья пациентов с фитнес-трекеров или носимых устройств более чем у 15% пациентов. Приемлемые поставщики должны подтвердить все три критерия, но соответствовать пороговым значениям для двух из трех.
  7. Обмен медицинской информацией ( HIE ): Меры, включенные в эту цель значимого использования, способствуют взаимодействию.Первая мера требует, чтобы более 50% переходов по уходу и направлений к специалистам включали обмен записями по уходу, такими как документы о непрерывном уходе (CCD), в электронном виде. Вторая мера требует, чтобы врачи, впервые осматривающие пациента, получали медицинские документы в электронном виде из вторичного источника более 40% времени. Последняя мера требует, чтобы врачи использовали услуги электронного назначения лекарств для согласования списков лекарств из онлайн-источников с их собственными для более чем 80% новых пациентов, которых они принимают.Приемлемые поставщики должны подтвердить все три критерия, но соответствовать пороговым значениям для двух из трех.
  8. Отчетность реестра медицинских и клинических данных: С этой целью поставщики услуг должны выбрать три из пяти доступных пунктов назначения отчетов ЭУЗ, в которые они будут периодически отправлять данные. Варианты отчетности включают регистр иммунизации, синдромный эпиднадзор, случаи заболевания, регистр общественного здравоохранения и регистр клинических данных.

Stage 3 также способствует использованию API-интерфейсов для устранения разрыва между ИТ-системами здравоохранения и обеспечения расширенного доступа к данным.

Значимое использование и MACRA

MACRA — это федеральный закон, подписанный 16 апреля 2015 года, который устанавливает способы оплаты врачам за уход за получателями Medicare и включает финансирование технической помощи поставщикам медицинских услуг и разработку соответствующих мер. Закон также устанавливает требования к обмену данными.

Больше обновлений поощрительной программы EHR

Важно отметить, что в июле 2016 года CMS опубликовала схему, описывающую изменения, которые она предложила для системы перспективных платежей для амбулаторных пациентов (OPPS) на 2017 год.В этом документе CMS обратилась к Конгрессу с просьбой внести изменения в программу значимого использования, в том числе:

  • Сокращение отчетного периода EHR с полного года до 90 дней.
  • Устранение целей CDS и CPOE.
  • Снижение пороговых значений для подмножества оставшихся целей и мер на этапе 2 значимого использования на 2017 г. и на этапе 3 значимого использования на 2017–2018 гг. Для соответствующих критериям больниц и больниц критического доступа.
  • Гибкость для тех, кто не продемонстрировал значимого использования в предыдущем году, что позволяет им подтвердить измененную стадию 2 к 1 октября 2017 года.

Законодатели должны официально проголосовать за внесение этих изменений в предметное использование, чтобы они вступили в силу.

Несмотря на недавний выпуск окончательного решения этапа 3 значимого использования и предлагаемые изменения, врачи в 2017 году будут иметь доступ к недавно внедренной программе под названием Advancing Care Information (ACI) с системой поощрительных платежей Medicare (MIPS), которые являются частью MACRA. Согласно новому закону, ACI будет влиять только на кабинеты врачей Medicare, но не на больницы Medicare или программы Medicaid.Эти новые программы предназначены для обеспечения гибкости, например:

  • Уменьшено количество необходимых мероприятий.
  • Устранение CDS и CPOE.
  • Больше внимания к взаимодействию и обмену медицинской информацией.
  • Несколько вариантов получения поощрений для врачей.
  • Исключение для некоторых врачей из отчетности, когда технология EHR менее применима.

Недавно предложенные изменения правил значимого использования получили похвалу от ряда различных медицинских ассоциаций по всей стране, но еще неизвестно, как врачи будут ориентироваться в различных программах и требованиях, с которыми они сталкиваются в каждой из них.

Требования программы этапа 3 для поставщиков медицинских услуг, подтверждающих участие в программах Medicaid по содействию совместимости (PI) в своем штате

CMS переименовывает программы стимулирования EHR в программы

Promooting Interoperability (PI) , чтобы продолжить работу агентства по улучшению доступа пациентов к медицинской информации и сокращению времени и затрат, необходимых поставщикам для выполнения требований программ. CMS также находится в процессе доработки обновлений программ посредством нормотворчества.Для получения дополнительной информации посетите целевую страницу, где CMS будет публиковать обновления и дополнительные ресурсы, как только они станут доступны.

В октябре 2015 года CMS выпустила окончательное правило, изменяющее требования к участию в программах поощрения электронных медицинских карт (ЭУЗ) на период с 2015 по 2017 год, а также на 2018 год и последующие годы. На этой странице представлена ​​информация о требованиях для Этапа 3.

Поставщики услуг Medicaid, которые имеют право участвовать только в программе поощрения Medicaid EHR, не подлежат корректировке платежей Medicare.

Штаты продолжат определять форму и способ отчетности CQM для своих соответствующих государственных программ поощрения Medicaid EHR при условии утверждения CMS.

ПРИМЕЧАНИЕ. Все поставщики, которые не продемонстрировали значимого использования в предыдущем году и стремятся впервые продемонстрировать значимое использование в 2017 году, чтобы избежать корректировки платежей 2018 года, должны подтвердить соответствие измененным целям и мерам этапа 2.

Цели и мероприятия

  • Все поставщики должны подтвердить единый набор целей и мер.
  • Для квалифицированных специалистов (EP) и соответствующих больниц существует 8 целей.
  • Чтобы соответствовать требованиям этапа 3, все поставщики должны использовать технологии, сертифицированные для версии 2015 года. Провайдер, у которого есть технология, сертифицированная для сочетания Редакции 2015 г. и Издания 2014 г., потенциально может подтвердить соответствие требованиям Этапа 3, если сочетание сертифицированных технологий не будет препятствовать им в соблюдении мер Этапа 3. Однако провайдер, технология которого сертифицирована только для версии 2014 года, не может подтверждать уровень 3.
  • Обратите внимание, что отсутствуют альтернативные исключения или спецификации.
  • В политику расчета показателей внесены изменения, которые определяют, что действия, включенные в числитель, должны происходить в течение отчетного периода EHR, если этот период составляет полный календарный год или если он меньше полного календарного года, в пределах календарного года, в котором наступает отчетный период EHR. Конкретные затронутые меры указаны в разделе «Дополнительная информация» технических характеристик.

Гибкость в рамках целей и мероприятий

Этап 3 включает гибкость в рамках определенных целей, позволяющую поставщикам услуг выбирать меры, наиболее подходящие для их группы пациентов или практики. Цели Этапа 3 с гибкими вариантами измерения включают:

  • Координация обслуживания посредством вовлечения пациентов — Поставщики медицинских услуг должны подтвердить все три показателя и соответствовать пороговым значениям по крайней мере для двух показателей для достижения цели.
  • Обмен медицинской информацией — Поставщики должны подтвердить все три меры и должны соответствовать пороговым значениям по крайней мере для двух мер для достижения цели.
  • Отчетность по общественному здравоохранению — Соответствующие критериям специалисты должны сообщать по двум критериям, а соответствующие больницы должны сообщать по четырем параметрам.

Отчетный период ЭУЗ

  • В 2017 году для всех новых и вернувшихся участников отчетный период EHR составляет как минимум любые непрерывные 90 дней с 1 января по 31 декабря 2017 года.

Этап 3 Требования к ресурсам программы стимулирования ЭУЗ Medicaid

Подробная ошибка IIS 8.5 — 404.11

Ошибка HTTP 404.11 — не найдено

Модуль фильтрации запросов настроен на отклонение запроса, содержащего двойную escape-последовательность.

Наиболее вероятные причины:
  • Запрос содержал двойную escape-последовательность, а фильтрация запросов настроена на веб-сервере, чтобы отклонять двойные escape-последовательности.
Что можно попробовать:
  • Проверьте параметр configuration/system.webServer/security/[email protected] в файле applicationhost.config или web.confg.
Подробная информация об ошибке:
Модуль RequestFilteringModule
Уведомление BeginRequest
Обработчик StaticFile
Код ошибки 0x00000000
2 2
Запрошенный URL https: // app2.kitchener.ca:443/appdocs/zonebylaw/publishedcurrenttext/sections/section%2055%20-%20high%20intensity%20mixed%20use%20corridor%20zone%20(mu-3).pdf
Physical Path C : \ sites \ wwwnew \ appdocs \ zonebylaw \ publishedcurrenttext \ section \ section% 2055% 20-% 20high% 20intensity% 20mixed% 20use% 20corridor% 20zone% 20 (mu-3) .pdf
Метод входа в систему Не еще не определено
Пользователь входа в систему Еще не определено
Дополнительная информация:
Это функция безопасности.Не изменяйте эту функцию, пока не полностью осознаете масштаб изменения. Перед изменением этого значения необходимо выполнить трассировку сети, чтобы убедиться, что запрос не является вредоносным. Если сервер разрешает двойные escape-последовательности, измените параметр configuration/system.webServer/security/[email protected] Это могло быть вызвано неправильным URL-адресом, отправленным на сервер злоумышленником.

Просмотр дополнительной информации »

Обзор

KEF Mu3 | Какой Hi-Fi?

ЛУЧШИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ НА СЕГОДНЯ

KEF балуется рынком наушников с 2013 года, экспериментируя на протяжении многих лет как с накладными, так и с накладными наушниками, однако справедливо будет сказать, что гигант Hi-Fi не открыл рынок наушников.Но может ли все это измениться с появлением амбициозного Mu3?

Mu3 — это первые беспроводные наушники KEF с шумоподавлением, которые по цене занимают промежуточное положение между популярными наушниками Sony WF-1000XM3 и Bose QuietComfort.

Build

(Изображение предоставлено KEF)

Если вы не слышали о Россе Лавгроуве до того, как купите KEF, то к тому времени, когда вы распаковываете их, вы получите их. Его имя написано на упаковке, инструкции и даже внутри корпуса Mu3.

  • KEF Mu3 в Кратчфилде за 229,99 долларов

В прошлом Лавгроув участвовал в разработке нескольких продуктов KEF, в первую очередь KEF Muon — впечатляющей пары алюминиевых напольных динамиков ограниченного выпуска, которые стоят впечатляющих 140 000 фунтов стерлингов ( 198000 долларов) за пару. Он также сыграл важную роль в разработке отмеченной наградами беспроводной колонки KEF Muo, и теперь он обратился к паре настоящих беспроводных наушников.

Технические характеристики KEF Mu3

(Изображение предоставлено KEF)

Тип Настоящие беспроводные наушники-вкладыши

Bluetooth Да

Шумоподавление Да

Срок службы батареи 9 часов (+15 часов из ящика)

Масса 5.8 г (каждый)

С того момента, как вы вытащите наушники из упаковки, вы увидите причастность Лавгроува. Корпус выглядит как большая капля жидкого металла, но имеет приятную изящную форму. Он также выглядит прочным, а гладкий глянцевый пластик помогает произвести первое впечатление более высокого качества. То же самое происходит, когда вы открываете кейс. Имя Lovegrove на внутренней стороне может быть слишком большим намеком на дизайнера, но блеск маленьких серебряных наушников также привлекает ваше внимание.

Бутоны выглядят и ощущаются в соответствии с корпусом, от гладкой глянцевой поверхности до логотипа KEF, отпечатанного на поверхности каждого бутона.Они удивительно маленькие, что делает их немного скользкими, когда их кладут между пальцами, но установить их на место с помощью хорошего уплотнения не так уж сложно. Возьмите вкладыши (на выбор есть четыре разных размера), вставьте их и слегка поверните вкладыши, чтобы зафиксировать их на месте.

Комфорт

(Изображение предоставлено KEF)

При условии хорошего уплотнения уровень предлагаемой пассивной шумоизоляции является приличным. Считая их довольно удобными для короткой прогулки, мы немного менее уверены в их комфорте во время длительных сеансов прослушивания.Sony WF-1000XM3 имеют немного более громоздкий дизайн, но выглядят гораздо менее навязчивыми, как и наушники Bose QuietComfort.

При первом открытии футляра наушники автоматически запускают процесс сопряжения. После подключения к наушникам они подключаются почти сразу после подъема крышки.

На внешней поверхности каждого наушника вы найдете небольшой логотип KEF, расположенный на круглой кнопке управления. Здесь нет сенсорного управления, но физические работают отлично, а также означает, что вы не нажмете кнопку воспроизведения или не пропустите трек, когда поставите их на место.

На левом наушнике долгое нажатие снижает громкость, а короткое нажатие включает или выключает шумоподавление и включает режим окружающей среды (который позволяет вам слышать окружающее, не вынимая наушников из ушей) . На правом наушнике короткое нажатие отвечает на звонки и воспроизводит или приостанавливает музыку, а долгое нажатие увеличивает громкость. Двойное нажатие останавливает ваш телефонный звонок или пропускает дорожку вперед.

Время автономной работы составляет девять часов, при этом кейс дает дополнительно заявленные 15 часов дополнительного заряда для поддержания работы бутонов.Для сравнения: лучший в своем классе Sony WF-1000XM3 работает около шести часов. Если вас застали врасплох, быстрый пятиминутный выстрел из зарядного футляра (который использует USB-C) должен дать вам час игрового времени.

На корпусе есть небольшой светодиод, который мигает, когда батарея разряжена, но это не так очевидно на фоне глянцевого пластика, а также не дает реальной индикации того, сколько заряда осталось. Мы были застигнуты врасплох, когда нашим бутонам потребовалась зарядка, но мы обнаружили, что корпус тоже работает пусто.

В отличие от многих беспроводных наушников по этой цене, для KEF Mu3 нет приложения. Это означает, что вам не нужно настраивать эквалайзер, но это проблема, только если вас не устраивает баланс KEF. И мы не можем понять, почему бы вам этого не сделать.

Звук

(Изображение предоставлено KEF)

KEF производят чудесно сбалансированный звук, гладкий и изысканный. Они довольно легко подаются и представляют музыку зрелым и утонченным образом, что позволяет их легко слушать в течение длительного времени.Вы можете довести их до предела времени автономной работы и выйти на другую сторону, не чувствуя себя истощенным или уставшим от их звука.

Мы играем Shout от Tears For Fears и замечаем полноту и изящество перкуссии, а также хорошее пространство вокруг инструментов. В песне нет ни намека на резкость, поскольку звон колоколов прорезает богатый вокал песни и твердые, но относительно мягкие басы. Тем не менее, Sony WF-1000XM3 передает песню с большим чувством блеска, доказывая свою способность найти дополнительное снаряжение, когда дело доходит до драмы и драйва.

Переключитесь на Diviner Хайдена Торпа, и плавная, задушевная передача трека подчеркнет сильные стороны KEF. Его вокал богат и насыщен, с хорошим чувством экспрессии, а отдельные удары клавиш пианино хорошо передаются. Опять же, Sonys поднимают этот уровень динамики и экспрессии на ступеньку выше, формируя более тесную эмоциональную связь со слушателем.

Переходя к Massive Attack Angel , KEF хорошо справляются с мощной и безжалостной басовой линией.В каждом басовом импульсе есть богатство, и они звучат солидно, даже если соперники могут придать им большую текстуру.

Mu3 отлично справляется с минимизацией внешнего вмешательства. Их технология шумоподавления не дает таких ярких результатов, как наушники Bose QuietComfort, но они эффективны, и, в любом случае, не всем нравится ощущение вакуума, которое может вызывать более агрессивная технология шумоподавления.

Хотя качество связи могло быть лучше. В то время как лучшие пары настоящих беспроводных наушников придают вашему голосу более естественное звучание, KEF имеют немного грубую кромку и обеспечивают большее сжатие.

Verdict

KEF подняла голову над парапетом и выпустила пару настоящих беспроводных наушников, которые можно считать достойными соперниками Apple AirPods Pro. Тем не менее, у нас есть некоторые оговорки по поводу качества связи, и, хотя ничто в производительности не выделяется как отрицательный, Mu3 не может полностью соответствовать звуковым возможностям ведущих в своем классе конкурентов на этом уровне, таких как Bose и Sony. .

Однако, если вы поклонник бренда KEF — или Росс Лавгроув в частности — и имеете в своем распоряжении средства, стоит дать им шанс.

ОЧКИ

БОЛЬШЕ:

Прочтите наше руководство по лучшим беспроводным наушникам

Прочтите наш Sony WF-1000XM3 обзор

Pro Apple

Прочтите наш обзор наушников Bose QuietComfort

ЛУЧШИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ НА СЕГОДНЯШНЕМУ

Мобильные оперативные группы — SCP Foundation

Мобильные оперативные группы (МОГ) — это элитные подразделения, состоящие из персонала, привлеченного со всего Фонда, и мобилизованные для борьбы с конкретными угрозами или ситуациями, которые иногда превышают оперативные возможности или опыт обычного полевого персонала и, как следует из их названия, могут быть перемещены. между объектами или местоположениями по мере необходимости.Персонал мобильной оперативной группы представляет «лучших из лучших» Фонда.

Мобильные оперативные группы сильно различаются по размеру, составу и назначению. Боевая целевая группа в составе батальона, обученная для борьбы с очень агрессивными аномальными объектами, может состоять из сотен военнослужащих, а также вспомогательного персонала, транспортных средств и оборудования и может быть развернута полностью или частично для борьбы с угрозами по всему миру. Однако мобильная оперативная группа может также представлять собой небольшую специализированную оперативную группу по сбору разведывательных данных или расследований, в которой может быть менее дюжины сотрудников, если этого будет достаточно для достижения их целей.

Находясь в полевых условиях, члены оперативной группы часто изображают из себя сотрудников служб экстренного реагирования, местных или федеральных правоохранительных органов или военнослужащих, соответствующих региону, в котором они действуют. Командиры мобильных оперативных групп также могут запросить помощь местных полевых подразделений или персонала, размещенного на близлежащих объектах Фонда, для выполнения своих задач.


ОРГАНИЗАЦИЯ

Каждый блок имеет фундаментальную структуру, которая наилучшим образом соответствует их прямому назначению.В то время как боевые оперативные группы могут строго следовать военной иерархии и организации, более мелкие подразделения могут иметь неформальную или иную эзотерическую цепочку командования. Таким образом, обязанности командира мобильной оперативной группы (MTFC) для каждой конкретной оперативной группы могут сильно различаться; командир большой оперативной группы может сосредоточиться на поддержании нескольких команд и развертывании их по мере необходимости для каждой назначенной операции, тогда как командир небольшой группы может развернуться со своей командой и руководить операцией с места.

Точно так же сплоченность каждого подразделения также будет различаться. Некоторые мобильные оперативные группы состоят из персонала, который обучался и работал вместе в течение многих лет или даже десятилетий, тогда как персонал мобильной оперативной группы, сформированной в любой момент для работы с конкретным инцидентом, может знать немного больше, чем имена и поля деятельности друг друга. экспертизы.


СОЗДАНИЕ

Мобильные оперативные группы обычно назначаются по мере необходимости директором оперативных групп Фонда, часто с прямого одобрения одного или нескольких членов Совета O5.Значительное количество мобильных оперативных групп создается для борьбы с конкретными аномалиями, проявляющими черты, которым стандартные группы сдерживания или реагирования не могут эффективно противодействовать, хотя многие также были созданы для предотвращения возникающей или теоретической угрозы.


ОТКЛЮЧЕНИЕ

Мобильные оперативные группы, созданные с целью сдерживания конкретной аномалии, обычно деактивируются в конце операции восстановления или когда дальнейшее сдерживание больше не требуется.Иногда такие целевые группы остаются в рабочем состоянии, если полученные знания и опыт считаются полезными для будущих инцидентов, но в противном случае целевая группа, вероятно, будет расформирована, а ее персонал вернется на свои прежние должности. Очень редко мобильная оперативная группа также будет расформирована, если она понесет достаточные потери, чтобы вывести ее из строя. В этих случаях, если предыдущие возможности этой конкретной целевой группы будут сочтены необходимыми, для ее замены может быть назначена новая оперативная группа.


ЧТО ТАКОЕ MOBILE TASK FORCE?

Мобильная оперативная группа — это команда сотрудников, которая представляет лучших и наиболее эффективных полевых агентов и исследователей Фонда и отправляется туда, когда обычный персонал учреждения неспособен или плохо подготовлен к реагированию на инциденты или угрозы определенного типа. Возьмем медицинскую аналогию:

  • Техники и охранники Фонда аналогичны медсестрам; они могут справляться с повседневными заботами и рутинными задачами, такими как прием жизненно важных функций или прием лекарств, но у них нет опыта или полномочий для диагностики состояний или выполнения сложных процедур.
  • Команды сдерживания, тактические группы и исследователи Фонда аналогичны врачам первичной медико-санитарной помощи или семейным врачам; они могут ставить общий диагноз и оказывать более сложную помощь, но их время ценно, поэтому их вызывают только тогда, когда они необходимы.
  • Мобильная оперативная группа похожа на хирурга или другого специалиста; к ним обращаются или вызывают, когда общедоступный персонал не может справиться с ситуацией или если ситуация выходит за рамки их возможностей.Они дорогие, и их очень мало, но они лучше всего подходят для любого конкретного случая.

Однако, как и не все медицинские специалисты — хирурги, не все мобильные оперативные группы — это вооруженные солдаты, несущие пулеметы и взрывчатку; учитывая, что аномалии, с которыми имеет дело Фонд, могут принимать любые формы и размеры, нетрудно представить, что у Фонда могут быть целевые группы, состоящие из чрезвычайно умных полевых биологов или групп элитных хакеров, которые имеют очень специализированные, но небоевые роли.



НАСКОЛЬКО БОЛЬШАЯ МОБИЛЬНАЯ ЗАДАЧНАЯ СИЛА?

Мобильная оперативная группа сильно различается по размеру в зависимости от области их компетенции и операционных требований. Команда хакеров может состоять всего из полдюжины членов, но боевые единицы могут быть намного больше. Чтобы взять пример из вооруженных сил США, требуется около 50 обученных солдат, чтобы безопасно штурмовать средний дом: один отряд (не менее дюжины человек) для охраны периметра, один отряд для штурма здания и один отряд в резерве для поддержки. остальные вверх.В случае сомнений, пожалуйста, свяжитесь с экспертом в предметной области, который может помочь вам придумать правдоподобное описание целевой группы, подходящей для ваших нужд.

В качестве альтернативы помните, что мобильная оперативная группа — это элитное подразделение , и не все объекты или сущности SCP требуют упоминания такой оперативной группы; для морских котиков не имеет смысла останавливать движение или выслеживать мелкого вора, а для мобильной оперативной группы нет смысла мобилизовать инертный объект, который не представляет собой активного или автономного угроза.



КОГДА ИСПОЛЬЗУЕТСЯ MOBILE TASK FORCE?

Помните, мобильные оперативные группы — это элита, лучшее, что может предложить Фонд. Отдельные полевые агенты, группы сдерживания и группы реагирования, размещенные на объектах по всему миру, сами по себе очень компетентны, но когда они сталкиваются с чем-то, что даже ветераны не могут понять, пора вызвать экспертов из других стран. город.

Просто имейте в виду, что, поскольку они являются элитой, это означает, что их услуги являются одновременно высокими и малодоступными.Если это просто забег, тогда незачем лететь в команде с другого конца света.



СКОЛЬКО МОБИЛЬНЫХ ЗАДАЧНЫХ СИЛ ЕСТЬ?

Как упоминалось в руководстве по безопасному расположению объектов, это зависит от автора. Некоторые авторы верят в обширный и всепроникающий Фонд с более чем сотней специализированных рабочих групп, тогда как другие верят в меньший Фонд с, возможно, всего лишь дюжиной активных рабочих групп. Оба являются правильными интерпретациями; это полностью зависит от того, какой из них лучше всего соответствует вашему повествованию.



НУЖНО ИСПОЛЬЗОВАТЬ ТОЛЬКО ТОЛЬКО НА ЭТОЙ СТРАНИЦЕ?

Вовсе нет! Эта страница предназначена для того, чтобы вдохновить и дать представление о последовательном использовании сайта, и предназначена только для того, чтобы дать общее представление о том, как работают мобильные оперативные группы; Вы можете создавать свои собственные или даже творчески противоречить приведенным здесь обычаям. Помните, что даже во вселенной мобильные оперативные группы создаются и распускаются постоянно; Фонд может быть бюрократией, но они не настолько глупы, чтобы полагать, что жесткая иерархия полевого персонала может справиться со всеми аномалиями.Иногда лучшая команда для работы — это та, которую вы создаете «на лету».



ДОБАВЛЕНИЕ НОВЫХ ЗАПИСЕЙ

Страницы со списком не предназначены для того, чтобы быть исчерпывающим списком всех целевых групп, на которые есть ссылки по всему сайту. Как правило, мобильные оперативные группы из основного списка использовались как минимум в пяти статьях, написанных как минимум тремя авторами. Для рабочих групп с меньшим количеством статей их можно добавить в раздел «Дополнительные MTF» на этой странице. Пожалуйста, используйте ветку обсуждения этого руководства, чтобы предлагать новые дополнения.

Полный список МОГ, фигурирующих в существующих статьях, можно найти на этой странице. Список МОГ, находящихся в подчинении международных отделений Фонда, см. На этой странице.

Если вы хотите внести на эту страницу правку, выходящую за рамки простого обновления уже представленного здесь списка выступлений МОГ, пожалуйста, сначала свяжитесь с членом команды MAST, чтобы получить его одобрение.


Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Альфа-1 — это оперативная группа, которая подчиняется непосредственно Совету O5 и используется в ситуациях, требующих строжайшей оперативной безопасности.Оперативная группа состоит из лучших и самых преданных сотрудников Фонда. Дополнительная информация о МОГ Альфа-1 засекречена на 5-м уровне.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Альфа-4 состоит в основном из персонала, обученного действовать в качестве тайных сотрудников и специализирующихся на отслеживании, перехвате и защите аномальных объектов, отправляемых через почтовые службы и службы доставки посылок по всему миру.

Помощь в содержании предметов:

Оперативная группа Миссия: Возрожденная Омега-7. Мобильная оперативная группа, специально предназначенная для обучения и использования гуманоидных объектов SCP в полевых условиях.

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы : МОГ Бета-4 — это целевая группа, созданная с единственной целью — помогать и контролировать СО-466 (Уилсонские решения для дикой природы) в их взаимодействии с аномалиями местной фауны.

Помощь в содержании предметов:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Бета-7 специализируется на обнаружении и локализации аномалий, представляющих экстремальные биологические, химические или радиологические опасности, а также на быстром локализации и очистке территорий, затронутых такими аномалиями. Это включает планирование и развертывание действий в чрезвычайных ситуациях, связанных с обширным или пандемическим распространением возбудителей аномальных заболеваний или других заразных явлений.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Task Force Mission: Mobile Task Force Gamma-5 специализируется на предотвращении распространения информации об аномальных событиях или явлениях в тех случаях, когда первоначальные усилия по подавлению оказались неэффективными или недостаточными, или в тех случаях, когда такие знания уже достигли критического уровня общественности. экспозиция. Это включает в себя исследование и применение экспериментальных амнезиаков, а также процедуры изготовления воспоминаний.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа «Гамма-6» специализируется на расследовании и отслеживании глубоководных или океанических аномалий.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа «Гамма-13» специализируется на расследовании, отслеживании и задержании аномальных объектов, людей и сущностей, связанных с СО-1115 (Anderson Robotics).Это включает в себя идентификацию клиентов Anderson, местонахождение продуктов Anderson и проведение рейдов в офисах Anderson.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы : Мобильная оперативная группа Дельта-5 состоит из нескольких автономных ячеек глубокого прикрытия, специализирующихся на идентификации и упреждающем обнаружении аномальных объектов и сущностей, представляющих интерес для других групп интересов.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Специализируется на расследовании, локализации и последующей ликвидации аномалий в сельской местности и пригороде.

Помощь в содержании предметов:

Задача оперативной группы: Эпсилон-9 специализируется на использовании зажигательного оружия и работе в условиях высоких температур.

Помощь в содержании предметов:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа «Эпсилон-11» обеспечивает внутреннюю безопасность Фонда SCP под надзором МОГ Альфа-1. Они представляют собой специальные оперативные подразделения, развертываемые на сайтах Фонда, когда стандартные протоколы выходят из строя и неизбежны множественные взломы. Таким образом, большинство их операций засекречены.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа «Зета-9» специализируется на расследовании, разведке и локализации подземных или замкнутых областей, демонстрирующих аномальные явления, особенно с непоследовательной топографией или нестабильным пространством-временем.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Оперативная группа Миссия: Мобильная оперативная группа Эта-4 — это подразделение разумных морских птиц, затронутых SCP-3095. Эта-4 специализируется на сборе и анализе информации, дополнительных полевых исследованиях и поддержке, а в крайних случаях — на воздушных боях. Целевой группе было поручено защищать человечество после «Миграции» Сценария конца сознания класса BE.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Эта-5 — это подразделение быстрого реагирования, специализирующееся на отслеживании, захвате и сдерживании крупномасштабных агрессоров (сущностей более 30 метров в высоту). Развертывается из Зоны измерений-172 и задерживается в ней.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Эта-10 специализируется на расследовании, обнаружении и первоначальном сдерживании объектов или сущностей, проявляющих визуальные когнитивные опасности, визуальные меметические агенты или иным образом требующих косвенного или альтернативного наблюдения для безопасного обращения.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Эта-11 специализируется на расследовании, обнаружении и локализации слуховых и музыкальных аномалий, включая любые слуховые когнитивные опасности или звуковые аномальные угрозы.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа «Тета-4» специализируется на обнаружении и локализации растений или растений-подобных аномальных объектов и сущностей, особенно на полевых работах, связанных с широко распространенными заражениями таких аномалий.

Помощь в содержании предметов:

Task Force Mission: Мобильная оперативная группа Theta-90 занимается аномальной топологией, геометрией и подобными математическими проблемами.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы : Мобильная оперативная группа Йота-10 поддерживает секретных агентов в различных международных, федеральных и провинциальных правоохранительных органах и специализируется на содействии передаче аномальных доказательств и объектов под контроль Фонда, а также передаче юрисдикции над аномальными объектами. места проведения мероприятий от местных правоохранительных органов до групп сдерживания и реагирования Фонда.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Каппа-10 является временным обозначением до тех пор, пока она не будет официально распущена или на нее будут наложены санкции. Перед ним стоит строгая задача по расследованию и выявлению «кибер-аномалий» с использованием комбинации виртуальных агентов (AIC) и исследователей Фонда для отслеживания, нейтрализации и / или сдерживания таких нематериальных угроз.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа «Лямбда-4» специализируется на идентификации, отслеживании и локализации переносимых по воздуху биологических аномалий, особенно аномальных птичьих организмов.

Помощь в содержании предметов:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Лямбда-5 специализируется на перемещении по нестабильной, сюрреалистической и контролируемой реальности и содержит потенциально опасных людей и артефакты, способные манипулировать пространством и временем.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Оперативная группа Миссия: Специализируется на отслеживании, сдерживании и уничтожении аномальных паразитов.Часто используется в качестве группы быстрого реагирования при отслеживании аномальных организмов.

Помощь в содержании предметов:

Оперативная группа Миссия: Оперативная группа, которая специализируется на работе с местами, ориентированными на розничную торговлю, и аномалиями, будь то отдельные рестораны или целые торговые районы, демонстрирующие аномалии. После первоначального расследования ресторана «Амвросий» МОГ Лямбда-14 была направлена ​​на борьбу с этой группой.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Му-3 предназначена для наблюдения за правительством Ирака «Маршалл, Картер и Дарк Лтд.».Благодаря объединенным усилиям агентов под прикрытием и специалистов по секретным операциям их цель: выявить интересующие объекты, которыми владеют Маршалл, Картер и Дарк; изолирование возможностей восстановления этих объектов; и, в конечном итоге, добиться их сдерживания.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Оперативная группа Миссия: Мобильная оперативная группа Му-4 специализируется на идентификации, отслеживании, поиске и локализации электронных устройств и передач, особенно аномальных компьютеров и сетевых аномалий.Это включает расследование интернет-сайтов, подозреваемых в аномальных возможностях или участвующих в аномальных событиях.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Му-13 специализируется на отслеживании, анализе и сдерживании бестелесных или нематериальных проявлений и сущностей, особенно тех, которые считаются разумными, разумными или иным образом разумными и адаптивными.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Оперативная группа Миссия: Вооруженная мобильная оперативная группа Nu-7 — это батальонная сила, состоящая из трех частей пехотных сил специальных операций размером с роту, роты легких бронетранспортеров, взвода танков, эскадрильи вертолетов, химико-биологических-радиологических — ядерный (CBRN) взвод, взвод боевых инженеров, отделение специалистов по ядерному оружию (NWS), а также дополнительный боевой специалист и вспомогательный персонал.AMTF Nu-7 базируется в основном за пределами Вооруженной Зоны биологического содержания-14 и отвечает за реагирование на инциденты, связанные с потерей связи с основными объектами Фонда при обстоятельствах, когда предполагается нарушение на всей территории, компрометация противником или другое аналогичное катастрофическое событие. .

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Оперативная группа Миссия: Фонд обнаружил способ стать Онейрой, и теперь с этой силой они более способны сдерживать их.На протяжении десятилетий они обучают своих агентов технике, которая позволяет одному сознанию соединяться с другим. Немногочисленные умственно закаленные люди, добившиеся успеха, объединяются в целевую группу. Первым из них была мобильная оперативная группа Омикрон Ро.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Пи-1 специализируется на расследовании, локализации и последующей ликвидации аномалий в густонаселенной городской среде, особенно в мегаполисе Нью-Йорка.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Оперативная группа Миссия: Мобильная оперативная группа Ро-1 специализируется на обнаружении, локализации и транспортировке аномалий, связанных с Группой интересов Альфа-388, «Университет Алексильвы». С уменьшением угрозы, исходящей от конкретного правительства Ирака, МОГ расширила свое внимание на любые меры по сдерживанию аномальных академических начинаний.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Rho-9 отвечает за компьютерную безопасность Фонда.Когда меметические агенты-убийцы могут скрываться по всей структуре данных, это непростая задача.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Ро-19 была отправлена ​​на Венеру в надежде установить присутствие Фонда там, где может быть значительная аномальная активность.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы : Мобильная оперативная группа Сигма-3 отвечает за исследование, понимание и, в конечном итоге, на содержание обширного потустороннего места Библиотеки Странников.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа «Сигма-66» сформирована из захваченных членов из других правительств Ирака. Несмотря на отсутствие лояльности, которого Фонд ожидает от собранной команды, они находят опыт членов ценной.

Отчеты о действиях:

Оперативная группа Миссия: Бессмертные клоны-киборги, созданные из плоти мертвого бога, Тау-5 использует эзотерическое и экспериментальное оружие Фонда для расследования и сдерживания тауматургических, магических и псионических угроз.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Пси-7 специализируется на тайном расследовании, сдерживании и / или сносе аномальных зданий или построек, затронутых аномалиями, особенно жилых домов в густонаселенных районах. Это включает приобретение или передачу затронутых зданий под контроль Фонда, а также первоначальное наблюдение и документирование таких зданий до передачи местным группам содержания для долгосрочного или постоянного содержания.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы: Мобильная оперативная группа Psi-8 специализируется на расследовании, отслеживании, сдерживании и / или уничтожении лиц, подозреваемых в реанимационных аномалиях или пострадавших от них, а также на расследовании предполагаемых случаев связи с умершими. частные лица. Это включает в себя отключение устройств, предназначенных для связи с похороненными заживо людей, таких как колокольчики, трубы и телефоны, а также задержание и допрос лиц, утверждающих, что они контактировали с умершими людьми.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Оперативная группа Миссия: «Святые» МОГ Омега-0 — это информационные конструкции с воспоминаниями умерших сотрудников Фонда, которые могут проявляться через доступ к терминалам интрасети Фонда. Используя Identity Warfare Training (IWT), они защищают своих живых товарищей от информационных угроз и сущностей. Существование МОГ ω-0 неизвестно большинству или всем живым членам Фонда.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Миссия оперативной группы : Мобильная оперативная группа Омега-7 — это экспериментальная оперативная группа, специализирующаяся на обнаружении и сдерживании аномалий с использованием совместных аномальных гуманоидных существ, в частности SCP-076 и SCP-105. Мобильная оперативная группа Омега-7 расформирована и списана; эта запись должна быть удалена по распоряжению Администрации документации и защиты информации.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Оперативная группа Миссия: Оперативная группа, состоящая из сотрудников Фонда, изменяющих реальность из альтернативной вселенной. Омеге-12 поручено захватить экземпляры SCP-3480-2, охранять множество сущностей, заключенных в Зоне 13, и выслеживать могущественных скульпторов реальности вне рамок в других местах.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

Оперативная группа Миссия: — Исторически Церковь Разбитого Бога всегда гордилась своей искусственностью — что ее вера подтверждается материальными артефактами и физическими чудесами.Итак, когда пришло время дестабилизировать Церковь, Фонд выдвинул команду фальсификаторов, и Стигма-9 была им.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

МОГ, не отвечающая требованиям, необходимым для получения собственной заявки с артом, может быть добавлена ​​в этот список по запросу. Приведенный здесь список никоим образом не следует рассматривать как исчерпывающий; новые МОГ формируются и распускаются постоянно, как того требует Фонд.

МОГ Бета-777 («Копье Гекаты»)

Оперативная группа Миссия: Специализируется на анализе тауматургических ритуалов и контрмерах; включая тауматургический бой. На базе Зоны 91.

Помощь в содержании предметов:

МОГ Эпсилон-7 («Забудь обо мне»)

Оперативная группа Миссия: Тайная оперативная группа, задачей которой является срыв исследований и разработок мнестических препаратов.

Помощь в содержании предметов:

МОГ Тета-5 («Большая лодка»)

Оперативная группа Миссия: Специализируется на аномалиях, связанных с морскими транспортными средствами или угрожающих им.

Помощь в содержании предметов:

МОГ Каппа-43 («Посредники»)

Оперативная группа Миссия: Специализируется на расследовании, отслеживании и задержании аномальных объектов и средств массовой информации, связанных с СО-5889 (Vikander-Kneed Technical Media), и амнистии любых свидетелей.

Помощь в содержании предметов:

МОГ Тау-51 («Городская драка»)

Оперативная группа Миссия: Специализируется на локализации и извлечении SCP-объектов из городской среды, особенно в трех интересных местах Портленда.

Помощь в содержании предметов:

Отчеты о действиях:

МОГ Ипсилон-4 («Сахарная пилюля»)

Миссия оперативной группы: Изначально сформированная для сдерживания SCP-2559, Мобильная оперативная группа Ипсилон-4 отвечает за эпидемиологическое сдерживание, особенно на сдерживание меметических вспышек.

Помощь в содержании предметов:

МОГ Фи-2 («Умницы»)

Оперативная группа Миссия: Оперативная группа, специализирующаяся на изучении, отслеживании, отлове и охоте на доисторические аномалии, особенно динозавров.

Помощь в содержании предметов:

Улучшенное ингибирование эксцизионной репарации оснований и белок Mu Gam бактериофага дает базовые редакторы C: G-to-T: A с более высокой эффективностью и чистотой продукта

Мишени с несколькими редактируемыми C демонстрируют более высокую чистоту продукта

Ранее мы сообщали об эффективности редактирования оснований с помощью BE3 может быть ниже для некоторых (но не всех) целевых C, которые находятся непосредственно ниже G ( 6 ), что согласуется с известным предпочтением последовательности APOBEC1 (рис.2B и рис. S2, A и B) ( 21 ). Чтобы эффективно редактировать эти мишени, мы создали варианты BE3, в которых мы заменили дезаминазу APOBEC1 на CDA1 (для генерации CDA1-BE3), AID (для генерации AID-BE3) или APOBEC3G (для генерации APOBEC3G-BE3), три ОцДНК-специфичные ферменты цитидиндезаминазы с различными предпочтениями последовательностей ( 22 ). Мы трансфицировали клетки 293T эмбриональной почки человека (HEK) плазмидами, кодирующими эти варианты BE3 и sgRNA, нацеленные на локус EMX1 , FANCF , HEK2 , HEK3 , HEK4 или RNF2 .Через три дня после трансфекции геномную ДНК экстрагировали, целевые локусы амплифицировали с помощью ПЦР и оценивали на предмет редактирования основания с помощью HTS. Мы наблюдали более эффективное редактирование целевых C, которые сразу же следуют за G, с CDA1-BE3 и AID-BE3, чем с BE3 (рис. 2B, рис. S2 и таблицы с S1 по S6). В целом, CDA1-BE3 и AID-BE3 показали более низкую эффективность редактирования, чем BE3, на целевых C, которые не следуют за G (рис. S2). Напротив, APOBEC3G-BE3 демонстрирует непредсказуемые предпочтения последовательности с более низкими выходами редактирования C-to-T по сравнению с BE3.Эти данные предполагают, что CDA1-BE3 и AID-BE3 могут предлагать более высокую эффективность редактирования по сравнению с BE3 для некоторых целевых 5′-GC-3 ‘последовательностей.

Рис. 2 Влияние редактирования базы multi-C на чистоту продукта.

( A ) Архитектуры BE3, CDA1-BE3 и AID-BE3. ( B ) Типичные данные высокопроизводительного секвенирования клеток HEK293T человека, обработанных BE3-, CDA1-BE3– и AID-BE3. Последовательность протоспейсера показана вверху, PAM — синим, а целевые C — красным, с номерами в нижнем индексе, указывающими их положение в протоспейсере.Под каждой последовательностью указаны проценты от общего числа считываний секвенирования с соответствующим основанием. Относительный процент целевых C, которые чисто редактируются как T, а не как основание, отличное от T, намного выше для клеток, обработанных AID-BE3, который редактирует три C в этом локусе, чем для клеток, обработанных BE3, который редактирует только один C. ( C ) Клетки HEK293T обрабатывали BE3, CDA1-BE3 и AID-BE3, как описано в разделе «Материалы и методы». Показано распределение продукта среди отредактированных считываний секвенирования ДНК (считываний, в которых целевая C мутирована).( D ) Последовательности протоспейсеров и PAM (синие) геномных локусов изучены, при этом анализируемые целевые C в (B) показаны красным. ( E ) Частота образования инделя (см. Материалы и методы) после обработки в (A). Значения и планки ошибок отражают средние значения и стандартное отклонение трех независимых биологических повторов, выполненных в разные дни. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001; **** P <0,0001, по двустороннему тесту Стьюдента t .

При анализе этих данных мы заметили, что чистота продуктов CDA1-BE3 и AID-BE3 обычно была выше, чем у BE3 на тех участках, для которых CDA1-BE3 и AID-BE3 редактировали больше C, чем BE3 (рис. 2). Например, в локусе HEK4 BE3 эффективно редактирует только один C (C без G), но оба CDA1-BE3 и AID-BE3 редактируют три C (рис. S2). Чистота продукта BE3 в этом локусе составляет 50 ± 7% (означает ± SD для n = 3 биологических повтора), тогда как чистота продукта CDA1-BE3 и AID-BE3 составляет 97 ± 2% и 93 ± 2%, соответственно.Более того, EMX1 и FANCF , отредактированные BE3 с чистотой продукта 84 ± 3% и 91 ± 2%, соответственно, содержат несколько C, которые редактируются с сопоставимой эффективностью (рис. S3), тогда как HEK2 и RNF2 , отредактированный BE3 с гораздо более низкой чистотой продукта, 28 ± 3% и 64 ± 3%, соответственно, содержит несколько C, которые редактируются с неодинаковой эффективностью (рис. S3). CDA1-BE3 и AID-BE3, которые редактируют оба C в локусе HEK2 со сравнимой эффективностью, демонстрируют гораздо более высокую чистоту продукта в этом локусе (85 ± 5% и 81 ± 4%, соответственно) (рис.2 и рис. S2C). Таким образом, мы исключили возможность того, что в сайтах HEK2 и RNF2 множественные C сначала преобразуются в U с помощью BE3 с сопоставимой эффективностью, а затем обрабатываются с разной эффективностью системами репарации ДНК; если бы это было так, мы бы ожидали аналогичного распределения продуктов, когда эти участки обрабатывали BE3 по сравнению с CDA1-BE3 или AID-BE3, а не наблюдались различные распределения продуктов (рис. 2C и таблицы S1-S6). Вместо этого мы предположили, что изолированный G: U может легче обрабатываться UNG, чем кластеры поражений G: U.Возникает соблазн предположить, что процессивность домена цитидиндезаминазы в BE3 ( 6 , 23 ) может увеличивать время пребывания BE3 в локусах, содержащих несколько редактируемых C, тем самым блокируя доступ для UNG более эффективно, чем в локусах, содержащих один редактируемый C.

Мы стремились дополнительно исследовать взаимосвязь между чистотой продукта, количеством отредактированных C в отдельных считываниях секвенирования и активностью UNG. Чтобы выявить судьбу ДНК с редактированием оснований в отсутствие явного ингибирования UNG, мы удалили компонент UGI из BE3 для генерации BE3B.Мы трансфицировали клетки HEK293T плазмидами, кодирующими BE3 или BE3B, и sgRNA, нацеленными на локус EMX1 , FANCF , HEK2 , HEK3 , HEK4 или RNF2 . Как и ожидалось, учитывая роль UNG в диверсификации результатов базового редактирования, установленную выше, чистота продуктов для всех целевых C значительно снизилась в обработанной BE3B ДНК по сравнению с обработанной BE3 ДНК, при этом доля редактируемых продуктов, содержащих не-Ts, увеличивалась на в среднем 1.8 ± 0,4 раза (рис. S4D).

Мы проанализировали отдельные считывания секвенирования ДНК из клеток HEK293T, обработанных sgRNA, нацеленных на мульти-C сайты HEK2 , HEK3 и RNF2 и либо BE3, либо BE3B. Для каждого сайта мы обозначили первичную мишень C как наиболее эффективно модифицированный нуклеотид. По всем трем сайтам в среднем 80 ± 10% считываний секвенирования, которые содержали нежелательное изменение C на не-T первичной цели C, показали только это единственное событие редактирования базы (фиг.S4 и S5). Напротив, на тех же трех сайтах с множеством C гораздо более низкое среднее значение (32 ± 4%) считываний секвенирования, содержащих чистое изменение C-to-T первичной цели C, показало только это единственное событие редактирования чистой базы (рис. S4). и S5). Кроме того, распределение продуктов для обработанной BE3B ДНК HEK4 , сайта, который содержит только один C в окне редактирования, примерно соответствует соотношению 1: 3: 1 для A: G: T (рис. S4E). Эти наблюдения в совокупности указывают на то, что когда один цитидин в данной мишени превращается в U в отсутствие UGI, он эффективно обрабатывается посредством BER, инициированного UNG, с образованием смеси продуктов.

Эти данные согласуются с моделью, в которой кластерные несоответствия G: U обрабатываются иначе, чем изолированные несоответствия G: U, и с большей вероятностью будут производить чистые изменения C-to-T. Когда желательно только одно событие редактирования C-to-T, вышеупомянутые наблюдения предполагают, что ингибирование UNG имеет решающее значение для минимизации нежелательных побочных продуктов. Однако при выполнении целевого случайного мутагенеза с использованием слияния dCas9-дезаминазы, например, с TAM ( 16 ) и CRISPR-X ( 12 ), вышеупомянутые наблюдения предполагают, что использование BE3B на целевых сайтах с минимальным количеством редактируемых C будет максимизировать смеси продуктов.

Оптимизация архитектуры BE3 улучшает чистоту продукта

Мы стремились улучшить чистоту продукта при базовом редактировании, особенно для сайтов с одним C или с неравномерно отредактированными C. Вышеупомянутые результаты предполагают, что оптимизация BE3 для минимизации доступа UNG к промежуточному продукту G: U должна улучшить чистоту продукта. Сначала мы попытались заменить компонент UGI в BE3 на связывающий оцДНК белок, чтобы получить SSB-BE3, рассуждая о том, что SSB может блокировать урацил-содержащую часть оцДНК R-петли от доступа UNG.Мы наблюдали значительное снижение эффективности базового редактирования с помощью SSB-BE3, при этом все семь C на четырех сайтах показали в среднем только 1,9 ± 0,5% преобразования C-to-T (рис. 3D). Эти данные предполагают, что хотя связанный фермент дезаминаза присутствует с повышенной эффективной молярностью, SSB защищает часть оцДНК R-петли от фермента дезаминазы, препятствуя редактированию основания.

Рис. 3 Влияние изменения архитектуры BE3 на эффективность редактирования C-to-T и чистоту продукта.

( A ) Архитектуры BE3, SSB-BE3, N-UGI-BE3 и BE3-2xUGI.( B ) Протоспейсеры и последовательности PAM (синий) исследуемых геномных локусов, при этом C-мишени на (C) показаны фиолетовым и красным, а целевые C на (B) показаны красным. ( C ) Клетки HEK293T обрабатывали BE3, SSB-BE3, N-UGI-BE3 и BE3-2xUGI, как описано в разделе «Материалы и методы». Распределение продукта среди отредактированных считываний секвенирования ДНК (считываний, в которых целевая C мутирована) показано для BE3, N-UGI-BE3 и BE3-2xUGI. ( D ) Эффективность редактирования базы C-to-T. Значения и планки ошибок отражают средние значения и стандартное отклонение трех независимых биологических повторов, выполненных в разные дни.нс, P ≥ 0,05; * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001; **** P <0,0001, по двустороннему тесту Стьюдента t .

Поскольку относительное расположение APOBEC, UGI и UNG на этапах, которые определяют исходные результаты редактирования, неизвестно, мы переместили UGI на N-конец BE3 (N-UGI-BE3), чтобы улучшить ингибирование UNG. Перемещение UGI на N-конец BE3 привело к среднему снижению процента редактирования C-to-T на 2.3 ± 0,6 раза для всех семи тестируемых целевых C по сравнению с BE3 (рис. 3D) и снижение общей чистоты продукта в среднем в 2,2 ± 0,5 раза на всех четырех участках по сравнению с BE3 (рис. 3C). Мы пришли к выводу, что архитектура N-UGI-BE3 неоптимальна для активности дезаминазы и может также препятствовать ингибированию UNG с помощью UGI. Напротив, добавление дополнительной копии UGI к С-концу BE3 (BE3-2xUGI) привело к значительному увеличению продукта. чистоты относительно BE3 и процент редактирования C-to-T сопоставимы с таковыми BE3.Продукты редактирования, не относящиеся к T, уменьшились в среднем в 2,2 ± 0,8 раза по четырем протестированным локусам (рис. 3C). Эти наблюдения предполагают, что добавление второй копии UGI существенно снижает доступ UNG к промежуточному продукту базового редактирования G: U, тем самым значительно улучшая чистоту продукта. Поскольку эти эксперименты показали чувствительность результатов базового редактирования к архитектуре компонентов, мы Затем оптимизировали линкеры между компонентами BE3 для дальнейшего повышения чистоты продукта и эффективности редактирования.Мы варьировали линкер rAPOBEC1-Cas9n (D10A) от 16 аминокислот (BE3) до 32 аминокислот (BE3C) и линкер Cas9n (D10A) -UGI от 4 (BE3) до 9 (BE3D) до 16 аминокислот (BE3E). (Рис. 4A). Образование не-Т-продуктов в среднем уменьшалось в 1,3 ± 0,1 раза, когда линкер Cas9n (D10A) -UGI имел длину девять аминокислотных остатков (BE3D) вместо четырех аминокислот (BE3) (рис. 4D) без видимых различий. в эффективности редактирования C-to-T (рис. 4C). Увеличение линкера rAPOBEC1-Cas9n (D10A) с 16 аминокислот (BE3) до 32 аминокислот (BE3C) повысило эффективность редактирования C-to-T в среднем на 1.2 ± 0,1 раза по локусу HEK2 (рис. 4C). Этот локус ранее был наиболее неравномерно редактируемым из протестированных мульти-C-сайтов (рис. S3), и расширение этого линкера привело к снижению предпочтительного редактирования C 6 по сравнению с C 4 (соотношение процента секвенирования считывает, что отредактированы в C 6 на C 4 ) с 2,6 ± 0,2 раза до 1,8 ± 0,1 раза. Мы предположили, что этот более длинный линкер может позволить дезаминазе лучший доступ к оцДНК в R-петле и привести к более равномерному дезаминированию, когда несколько целевых C присутствуют в окне редактирования основания.BE3C также продемонстрировал сопоставимую или улучшенную эффективность редактирования оснований и чистоту продукта в других протестированных локусах (фиг. 4, C и D).

Рис. 4 Влияние вариации длины линкера в BE3 на эффективность редактирования C-to-T и чистоту продукта.

( A ) Архитектура BE3, BE3C, BE3D и BE3E. ( B ) Последовательности протоспейсеров и PAM (синий) исследуемых геномных локусов, при этом C-мишени на (C) показаны пурпурным и красным, а целевые C на (D) показаны красным. ( C ) Клетки HEK293T обрабатывали BE3, BE3C, BE3D или BE3E, как описано в разделе «Материалы и методы».Показана эффективность редактирования базы C-to-T. ( D ) Распределение продукта среди отредактированных считываний секвенирования ДНК (считываний, в которых цель C мутирована) показано для BE3, BE3C, BE3D и BE3E. Значения и планки ошибок отражают средние значения и стандартное отклонение трех независимых биологических повторов, выполненных в разные дни. нс, P ≥ 0,05; * P <0,05; ** P <0,01, по двустороннему тесту Стьюдента t .

Генерация BE4, от C: G до T: редактор оснований с повышенной эффективностью и чистотой продукта

Мы объединили все три улучшения — увеличили линкер rAPOBEC1-Cas9n до 32 аминокислот, увеличив линкер Cas9n-UGI до 9 аминокислот и присоединение второй копии UGI к С-концу конструкции с другим 9-аминокислотным линкером в единую конструкцию редактора оснований, BE4.Мы также клонировали Target-AID, конструкцию альтернативного базового редактора, о которой сообщили Nishida et al . ( 8 ) в тот же остов плазмиды, что и BE4. Мы трансфицировали клетки HEK293T плазмидами, кодирующими BE3, BE4 или Target-AID, и sgRNAs, нацеленными на локус EMX1 , FANCF , HEK2 , HEK3 , HEK4 или RNF2 . Через три дня после трансфекции геномную ДНК экстрагировали, целевые локусы амплифицировали с помощью ПЦР и анализировали с помощью HTS.Мы наблюдали среднее увеличение эффективности редактирования C-to-T в 1,5 ± 0,3 раза по всем 12 отредактированным C для BE4 по сравнению с BE3 (рис. 5C). Хотя средняя эффективность редактирования C-to-T для Target-AID в тех же проанализированных позициях была в 1,5 ± 0,5 раза ниже, чем у BE3, и в 2,1 ± 0,5 раза ниже, чем у BE4, важно отметить, что Target -AID, который использует дезаминазу CDA1, по-видимому, имеет окно редактирования, смещенное относительно BE3 и BE4, с оптимальным редактированием около положений C 3 и C 4 (рис.5С). Это смещенное окно редактирования затрудняет сравнение эффективности и чистоты продукта между Target-AID и BE3 или BE4, поскольку данная цель C может находиться в более оптимальном или менее оптимальном положении в разных окнах редактирования, даже при использовании одной и той же направляющей РНК.

Рис. 5 BE4 повышает эффективность редактирования базы и чистоту продукта по сравнению с BE3.

( A ) Архитектуры BE3, BE4 и Target-AID. ( B ) Протоспейсеры и последовательности PAM (синий) исследуемых геномных локусов, при этом C-мишени на (C) показаны фиолетовым и красным, а целевые C на (D) показаны красным.( C ) Клетки HEK293T обрабатывали BE3, BE4 или Target-AID, как описано в разделе «Материалы и методы». Показана эффективность редактирования базы C-to-T. ( D ) Распределение продукта среди отредактированных считываний секвенирования ДНК (считываний, в которых мишень C мутирована) показано для BE3 и BE4. Значения и планки ошибок отражают средние значения и стандартное отклонение трех независимых биологических повторов, выполненных в разные дни. нс, P ≥ 0,05; * P <0,05; ** P <0.01 по двустороннему тесту Стьюдента t .

В дополнение к большей эффективности редактирования C-to-T, BE4 также продемонстрировал значительно улучшенную чистоту продукта по сравнению с BE3 во всех протестированных геномных локусах со средним снижением образования не-T-продуктов в 2,3 ± 0,3 раза (рис. 5D). . Как и ожидалось, из-за дальнейшего замедления BER, которое может приводить к инделениям ( 24 ), мы также наблюдали снижение скорости инделения в среднем в 2,3 ± 1,1 раза по всем шести локусам после обработки BE4 по сравнению с BE3 (рис.S6A). В совокупности эти результаты показывают, что BE4 предлагает более высокую эффективность редактирования C-to-T, более высокую чистоту продукта и более низкую скорость отступа, чем BE3, во всех протестированных локусах. Мы проверили, могут ли улучшения BE4 быть интегрированы с S. aureus Cas9 ( 25 ) для генерации SaBE4, который заменяет S. pyogenes Cas9n (D10A) на меньший S. aureus Cas9n (D10A) и может получать доступ к различным целям из-за его альтернативных требований PAM. Мы трансфицировали клетки HEK293T плазмидами, кодирующими SaBE3 ( 7 ) или SaBE4, и sgRNA, нацеленными на локус FANCF , HEK3 или HEK4 .В соответствии с результатами сравнения BE4 и BE3, мы наблюдали среднее увеличение эффективности редактирования C-to-T в 1,4 ± 0,2 раза по всем 10 отредактированным C для SaBE4 по сравнению с SaBE3 (рис. S7A), с 1,8 ± 0,5– кратное среднее уменьшение количества нежелательных продуктов редактирования, не относящихся к T (рис. S7C). Эти результаты показывают, что повышение эффективности базового редактирования и чистоты продукта, возникающее в результате усовершенствования BE4, также применимо к базовым редакторам, полученным из других гомологов Cas9.

Fusion with Gam дополнительно снижает частоту вставок и повышает чистоту продукта.

Для некоторых приложений редактирования генома образование вставок затрудняет исследования или создает угрозу безопасности.Поэтому мы стремились еще больше уменьшить частоту отступа, возникающую при базовом редактировании. Мы предположили, что большинство инделей, индуцированных редактированием оснований, происходит в результате ДНК- (апуриновый или апиримидиновый сайт) лиазы (AP-лиаза), фермента BER, который превращает абазические сайты в оцДНК-ники ( 24 ). Поскольку редакторы оснований разрывают цепь напротив U, расщепление гликозидной связи с помощью UNG с последующей обработкой полученного AP-сайта AP-лиазой приведет к DSB, что способствует образованию инделя.Эта модель согласуется с нашим наблюдением значительного снижения частоты инделя в нокаут-клетках UNG (Fig. 1D). Белок Gam бактериофага Mu связывается с концами DSB и защищает их от деградации ( 26 ) и был перепрофилирован для изображения DSB в живых клетках млекопитающих ( 27 ). Мы рассудили, что использование Gam для привязки свободных концов DSB может уменьшить образование отступов в процессе базового редактирования. Поэтому мы слили белок Gam из 174 остатков с N-концом BE3, SaBE3, BE4 и SaBE4 через линкер XTEN из 16 аминокислот для получения BE3-Gam, SaBE3-Gam, BE4-Gam и SaBE4-Gam, соответственно. .BE3-Gam и SaBE3-Gam снижали частоты инделей по сравнению с BE3 и SaBE3 во всех шести и четырех геномных локусах, протестированных в среднем в 1,7 ± 0,3 раза и 2,0 ± 1,0 раза, соответственно (рис. 6C и рис. S7D). Эффективность редактирования C-to-T для BE3-Gam и SaBE3-Gam была аналогична эффективности BE3 и SaBE3, соответственно (рис. 6B). Кроме того, BE3-Gam и SaBE3-Gam также показали повышенную чистоту продукта по сравнению с BE3 и SaBE3 во всех тестируемых геномных локусах со средним снижением образования не-Т-продуктов на 1.В 5 ± 0,1 раза и 2,3 ± 0,6 раза соответственно (рис. 6Г).

Рис. 6 Fusion с Gam из бактериофага Mu снижает частоту инделя.

( A ) Архитектуры BE3-Gam и BE4-Gam. ( B ) Клетки HEK293T обрабатывали BE3, BE3-Gam, BE4, BE4-Gam, SaBE3, SaBE3-Gam, SaBE4 или SaBE4-Gam, как описано в разделе «Материалы и методы». Показана эффективность редактирования базы C-to-T. ( C ) Частота образования инделя (см. Материалы и методы) после обработки в (B).( D ) Распределение продукта среди отредактированных считываний секвенирования ДНК (считываний, в которых мишень C мутирована). ( E ) Протоспейсеры и последовательности PAM (синие) геномных локусов изучены, при этом Cs-мишени на (B) показаны фиолетовым и красным цветом, а Cs-мишени на (D) показаны красным. Значения и планки ошибок BE3-Gam, SaBE3-Gam, BE4-Gam и SaBE4-Gam отражают средние значения и стандартное отклонение трех независимых биологических повторов, выполненных в разные дни. Значения и планки ошибок BE3, SaBE3, BE4 и SaBE4 отражают средние значения и стандартное отклонение шести независимых биологических повторов, выполненных в разные дни двумя разными исследователями.нс, P ≥ 0,05; * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001; **** P <0,0001, по двустороннему тесту Стьюдента t .

BE4-Gam показал значительно уменьшенные частоты инделя по сравнению с BE4, в среднем в 2,1 ± 0,9 раза (рис. 6C). В целом частота инделения после обработки BE4-Gam составляет менее 1,5%. По сравнению с SaBE4, SaBE4-Gam показал среднее снижение образования инделя в 1,5 ± 0,8 раза (рис. S7D).Мы не наблюдали явного снижения эффективности редактирования C-to-T для BE4-Gam или SaBE4-Gam по сравнению с BE4 и SaBE4, соответственно (рис. 6B), BE4-Gam предлагает общие отношения редактирования / отступа, которые увеличиваются в среднем на 2,0 ± 1,1 — кратность по всем шести сайтам относительно BE4 (рис. S6B). Чистота продукта BE4-Gam улучшена по сравнению с BE4, при этом среднее снижение образования не-Т-продуктов в 2,1 ± 0,7 раза (рис. 6D). Аналогичным образом, SaBE4-Gam продемонстрировал среднее снижение образования не-Т-продуктов 1.7 ± 0,5 раза по сравнению с SaBE4, без видимого снижения эффективности редактирования C-to-T (рис.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *